鸡抗HBs抗体的制备及在人HBsAg检测中的应用

对所制备的抗鸡蛋黄IgY单克隆抗体1G11和3A6进行鉴定,标记后建立了检测鸡蛋黄IgY的间接ELISA方法.用乙型肝炎疫苗免疫25周龄蛋鸡,血清及蛋黄中第8d出现特异性抗体,在第60d效价达1×10~(-5).利用鸡抗HBs抗体,建立了检测血清HBsAg的夹心ELISA方法.检测HBsAg的最低浓度达0.5ng/ml.且特异性较目前商业化试剂盒高     

两种方法检测乙肝HBsAg效果对比

目的 :考察胶体金联免疫吸附与酶联免疫吸附试验的灵敏度与特异性。方法 :用乙肝表面抗原胶体金联免疫吸附试剂 (GCISA)和酶联免疫试剂 (ELISA)检测各种肝炎病人血清 90 9份 ,正常人血清 173份及乙肝表面抗原质控标准品。结果 :GCISA和ELISA分别检出 773和 770份阳性样品 ,总符合率为97 0 %。检测乙肝表面抗原质控标准品 ,GCISA的灵敏度为 1ng/ml,ELISA为 1～ 2ng/ml,且两种方法都只与HBsAg有特异反应 ,与乙肝病毒核心抗原、e抗原无交叉反应。结论 :GCISA检测血清中的HBsAg特异性强 ,灵敏度与ELISA一致 ,在检测单份样品时较ELISA简单快速 ,观察结果直观 ,不需仪器设备。     

检测嗜肺军团菌胶体金免疫层析法的建立

目的:建立基于胶体金免疫层析法(immuno-chromatographic assay,ICA)的敏感、特异且使用方便的嗜肺军团菌抗原检测技术.方法:采用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒、标记抗嗜肺军团菌血清1型抗原的多克隆抗体,制成免疫层析检测试剂.结果:应用嗜肺军团菌ICA检测试剂可特异性地检测出嗜肺军团菌血清1型抗原,最低检出量为10 ng/ml,与其他血清型抗原不发生交叉反应,与美国Binax NOW ICT试剂盒的检测结果一致.结论:嗜肺军团菌ICA检测试剂具有特异性强、敏感性高、简便快速的特点,适合基层单位和现场使用.     

乙型肝炎的血清学标记及其意义

人感染了HBV(乙型肝炎病毒)后,血液中可出现各种相应的HBV感染标记。关于这些标记的临床及流行病学意义已有很多报道,但在同一人群中同时检测几种标记的资料尚少。1982年我们对613名医院工作人员进行了HBV感染的横断面调查,并观察随访了一年时间,结果报告如下。材料和方法研究对象及标本采集以北京某部队医院16个科室的全体人员为对象,1982年1月检查了613人,检查率86％;1983年6月复查了其中472人,复查率77％。472人中有46名HBV标记阴性者注射了HB疫苗因而除外,本文报告426人的HBV标记自然变化结果。参加者采静脉血3ml,分离血清,-20℃存放备检。检测方法 HBsAg和抗-HBs:SPRIA(固相放射免疫测定),夹心法,P/N值≥2.1为阳性。     

乙型肝炎病毒大蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立及应用

目的 建立定量检测患者血清HBV-大蛋白（LP）的TRFIA.方法 以抗人HBV-LP单克隆抗体和抗HBs多克隆抗体分别作为固相抗体和铕标记抗体,应用TRFIA和ELISA对标准品、66份慢性乙型肝炎患者血清、30份健康体格检查者血清中HBV-LP进行检测.分析TRFIA和ELISA的有效检测范围等,统计学比较采用χ^2检验和直线相关分析.结果 标准品TRFIA检测结果示该法剂量-反应曲线呈良好线性相关（r=0.999）.ELISA法测得的正常（30份健康者血清）95％参考范围为0～1.36 mg/L.TRFIA灵敏度（最小测定值）为0.10 mg/L,30份健康血清HBV-LP的检测结果均正常,特异性100％.66份患者血清TRFIA与ELISA检测结果的r为0.800 9（P＜0.001）,两者检测的阳性率差异有统计学意义[89.4％ （59/66）与77.3％（51/66）,χ^2=6.13,P＜0.01].TRFIA有效可测范围（CV＜ 10％）为1.35～2 764.00 mg/L,ELISA为10.80～691.00 mg/L.TRFIA回收率范围为95.93％ ～ 107.62％.结论 TRFIA法检测患者血清中的HBV-LP灵敏度和特异性高,检测范围宽,对早期筛选HBV患者及监测抗病毒治疗的疗效具有潜在的价值.     

大肠杆菌合成HBcAg的制备及其在乙型肝炎诊断上的应用

以HBcAg的基因重组到能表达的大肠杆菌MM206株,制备了大肠菌HBcAg的粗提物。用酶联免疫吸附检测时只与抗-HBc发生特异的免疫学反应,与人肝HBcAg进行对比性平行检测78份血清标本,结果完全一致,与Abbott药盒检测抗-HBc的结果相比较,总符合率为97.3％。用于筛选献血员,阳性检出率较只测HBsAg高8.9％,对临床肝炎病人的阳性检出率也较只测HBsAg高16.5％。粗制HBcAg经亲和层析可一步纯化到电泳一条主带上。对该抗原应用情况和纯化问题进行了讨论。     

固相免疫酶法、反向血凝法、对流电泳法检测乙型肝炎表面抗原500例结果比较

近年来固相免疫吸附技术发展迅速,应用也日益广泛。应用固相免疫酶法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的方法在许多实验室已经采用。北京第二医学院微生物教研组介绍的固相免疫酶法(DASS)系采用双抗体夹心法,其原理是用酶标记抗     

扁平上皮癌相关抗原RIA的基础及临床研究

扁平上皮癌相关抗原(Squamous cell carcinomarelated antigen,SCC)由子宫颈扁平上皮癌患者的肝转移组织提取精制而成,分子量为45000的蛋白质,最近制成SCC RIA药盒。基础研究: 1.孵育时间以室温23℃ 24小时最适合。最低检出浓度为1.5ng/ml,最高为150ng/ml。 2.与CEA 0～500ng/ml及与AFP 0～700ng/ml均未发现有交叉反应。 3.批内的变异系数良好,为4.9～11.4％。批间低浓度变化较大,变异系数为17.7％,中高浓度较好,变异系数在10％以下。 4.三种不同浓度血清平均回收率110±16.3     

乙肝两对半乳胶层析检测试剂板试用评价

目的 评价乙肝两对半乳胶层析检测试剂板。方法 采用酶联免疫吸附法和乳胶层析试剂板对定值血清和88份临床标本作平行检测,结果作对比分析。结果 乳胶测试板对乙肝两对丰的检测限分别达到HBsAg 1ng/ml,HBsAb 30mIu/ml,HBeAg 1NCU/ml,HBeAb 4NCU/ml,HBeAb 2NCU/ml,特异性采用夹心法的三项达到100％,其余两项为94.9％和93.9％,与酶联法相当。溶血对乳酸层检析测无影响。结论 乳胶层析检测试剂板操作简便、快速,结果可靠,适用于单个或急诊病人的快速检测。     

乙型肝炎表面抗原室内质控血清的制备

乙型病毒性肝炎是我国发病率较高的疾病之一,约有10％的人群为乙肝病毒携带者,其临床诊断主要依赖于临床检验结果,而结果准确与否,又取决于试剂质量及操作等因素。由于乙型肝炎表面抗原(HBsAg)试剂各生产厂家之间存在质量差异,即使是同一厂家的试剂盒内也有批间差异存在,HBsAg 检测结果往往出现假阴性、假阳性给患者造成误诊,延误诊治时间。为避免上述情况的发生,卫生部临床检验中心将2ng/ml规定为ELISA法检测HBsAg 的临界值并有成品血清供应,不足之处是购买运输途中易渗漏,邮寄时间长效价易减低。鉴于以上状态,笔者以卫生部临检中心提供的HBsAg 临界值血清为模板,自制了HBsAg临界值血清,使其OD值在0.06左右,S/CO 值在1.1左右,接近卫生部临检中心提供的2ng/ml 质控血清,并用于常规条件下的室内质控,大大降低了假阴性、     

吖啶酯标记抗体应用于结核病人抗体水平的测定

本文采用吖啶酯标记羊抗人 IgG 抗体,建立了人血清中 IgG 的测定方法。该标记方法条件温和,简便易行,其标准曲线范围为7.5～125ng IgG/ml。批内及批间变异系数分别为7.1%及9.9%。应用于结核病人血清中抗体水平的测定结果良好。15名正常献血人员及20名结核病患者血清中抗体水平分别为57±24.7及165±129μg/ml。统计学处理指出两组差别非常显著。     

应用BA-ELISA检测甲型肝炎IgM抗体

本文报告应用生物素-亲和素酶联免疫吸附试验(BA-ELISA)检测甲型肝炎IgM抗体(抗-HAVIgM)的结果。该试验的程序为: 羊抗人IgM(8μg/ml)包被固相(?)洗3次→待检血清(1∶1000稀释)(?)洗3次→HAAg(4个SPRIA单位)(?)洗3次→生物素标记的抗-HAVIgG(2μg/ml)(?)洗3次→酶标记的亲和素蛋白(0.5μg/ml)(?)洗4次→     

三种方法检测乙型肝炎核心抗体的比较

应用三种方法检测了118名HBsAg阴性的正常人和269例乙型肝炎病人血清,比较了抗-HBc的检出率。证明免疫粘连血凝试验(IAHA)、微量固相放射免疫测定(SPRIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测正常人血清抗-HBc的阳性率分别是16.1％,30.5％和26.3％。急性乙型肝炎病人血清的检出率SPRIA和ELISA比IAHA高。然而,这三种方法检测慢性乙型肝炎病人血清阳性率没有明显差别。我们还发现:检出的抗-HBc几何平均滴度IAHA最低,ELISA其次,SPRIA最高。     

聚合人血清白蛋白受体试剂研制与临床应用

本文应用ELISA技术研制建立成套试剂,检测病人血清中聚合人血清白蛋白受体(PHSAR)。对试剂的精密度、特异性、稳定性、敏感性及准确性进行了研究;并与放射免疫(RIA)固相法进行比较,其符合率为92.6%。经临床检测411例病人,结果乙肝病人PHSAR检出率为49.5%(35/71),门诊可疑乙肝病人阳性率为27.4%(93/340),健康体检者检出率10.5%(13/124),HBsAg(一)供血员80例阳性率为0%。另对PHSAR与HBsAg、HBeAg的关系进行了探讨。     

石头鱼毒素胶体金检测试纸条的研制

目的：研制石头鱼毒素（neoverrucotoxin,stonefish toxin,neoVTX）的胶体金检测试纸条,建立一种该毒素的快速检测方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,以neoVTX马血清抗体用于胶体金标记,并将该抗体固定于硝酸纤维素膜作为捕获抗体,利用双抗体夹心法原理制备胶体金检测试纸条。结果制备的检测试纸条对该毒素检测灵敏度为50 ng／ml,该试纸与牛血清白蛋白、卵清蛋白及水母毒素等蛋白无反应,具有较好的特异性。结论成功研制了石头鱼毒素胶体金检测试纸,该试纸条灵敏度高,特异性好,可用于该毒素的快速检测。     

乙型肝炎病毒感染标记家庭分布规律的探讨(摘要)

用固相放射免疫分析法(SPRIA)检测了99个家庭424人血清标本的乙型肝炎病毒(HBV)感染标记,并用二项分布理论分析了HBsAg携带者、抗-HBs和     

应用A_(549)细胞分离到1株致细胞病变的甲型肝炎病毒

应用A_(540)细胞系从1例甲型肝炎(甲肝)患儿粪便标本中分离到1株致细胞病变(CPE)的甲型肝炎病毒(HAV),称BJ-1。用免疫荧光(IF)试验证明,约有50％细胞的胞浆内有甲型肝炎病毒抗原(HAAg)。用抗-HAV单克隆抗体和美国NIH的黑猩猩免疫血清鉴定,证明其抗原性与HAV相同。超薄切片电镜观察,证实病毒在胞浆内复制,呈晶格状排列,有空心和实心两种,为典型小RNA病毒。免疫电镜(IEM)检查,大量的27～30nm的病毒颗粒和甲肝患者恢复期血清及黑猩猩抗-HAV血清凝集成抗原抗体复合物。BJ-1HAAg最初检出时间为34天,随着传代次数的增加,感染滴度逐渐增高,繁殖周期逐渐缩短至2～3天。现已稳定地传至第19代,感染滴度TCID_(50)为10~-5/0.1ml。将含有BJ-1HAAg的A_(540)细胞片和羊抗人IgM(μ链)荧光抗体组合成IF(间接法)药盒,检测抗-HAV IgM抗体,与AbbottEIA HAVAB-M药盒比较,符合率为98.4％(246/250)。     

肿瘤标志物—神经元特异性烯醇化酶在肺小细胞癌中的临床意义

报告采用ABC酶联免疫法检测治疗前肺癌病人血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)的活性水平结果。其中肺小细胞癌(SCLC)85例,非肺小细胞癌(NSCLG)194例,良性肺病60例;健康对照(73名)总体均值为9.2±5.0ng/ml。如将NSE>20ng/ml定为正常上限值,SCLC的阳性检出率为91.8％,NSCL)和良性肺部疾病的阳性检出率则分别是12.4％和3.3％,其他非肺部的恶性肿瘤的阳性检出率也很低。因此,NSE是SCIC和NSCLC鉴别诊断的特异性标志物。更有意义地是,NSE可用来监测临床治疗反应,并能预报复发。     

招飞体检乙型肝炎病毒筛查方法及其意义

目的 调查招飞学生HBV血清标志物模式及分布特点,探讨聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)荧光探针法与酶联免疫吸咐测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)在招飞体检HBV筛查中的应用价值. 方法 对象为参加本区招飞体检的学生(包括应届高中生、大学生)3843名.按出生年分为1992年前和1992年后(包括1992年)两个年龄组;根据户籍种类分为农村和城市学生.乙肝血清标志物采用ELISA法进行HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb及HBcAb共5项定性检测,按随机数字法随机抽取不同模式(除单项HBsAb阳性外)标本365例,采用PCR荧光探针法进行HBV-DNA定量检测. 结果 ①共检出13种HBV血清标志物模式,主要为HBsAb(+)模式;其次为5项全阴模式,HBsAb(+)、HBcAb(+)模式,HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式,HBcAb(+)模式;HBsAg阳性以HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)及HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式为主,分别占HBsAg阳性总数的38.75％和46.25％.②两个年龄组HBsAb(+)模式,HBsAb(+)、HBeAb(+)模式和HBcAb(+)模式检出率差异有统计学意义(x2 =9.350、8.563,P＜0.01);其他模式检出率差异无统计学意义(P＞0.05).③农村与城市学生相比,除HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式和HBcAb(+)模式外,其他5种常见模式检出率差异有统计学意义(x2=4.592～34.838,P＜0.01或P＜0.05).④HBV-DNA定量检测病毒载量＞1000 copies/ml者62例,其中HBsAg阳性者占77.42％,其他模式占22.58％.HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)者HBV-DNA检出率为95.45％(21/22),病毒载量为9.16×106～9.81×107copies/ml.HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)者HBV-DNA检出率为45.71％(16/35),病毒载量为1.24×104～7.95×105 copies/ml.HBsAg(+)、HBeAg(+)者均检出HBV-DNA,病毒载量为(2.39～5.34)×107 copies/ml. 结论 ELISA法检测HBV血清标志物与PCR定量检测HBV-DNA相结合,有助于解决招飞体检HBV携带者误诊和漏检问题.     

乙肝两对半乳胶层析检测试剂板试用评价

目的 评价乙肝两对半乳胶层析检测试剂板。方法 采用酶联免疫吸附法和乳胶层析试剂板对定值血清和88份临床标本作平行检测，结果作对比分析。结果 乳胶测试板对乙肝两对半的检测限分别达到HBsAg 1ng／ml，HBsAb 30mIu／ml，HBeAg 1NCU／ml，HBeAb 4NCU／ml，HBcAb 2NCU／ml，特异性采用夹心法的三项达到100％，其余两项为94．9％和93．9％，与酶联法相当。溶血对乳酸层栓析测无影响。结论 乳胶层析检测试剂板操作简便、快速，结果可靠，适用于单个或急诊病人的快速检测。