逆转录病毒介导诱导型一氧化氮合酶基因转移载体的构建

目的：构建逆转录病毒介导的诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因转移载体。方法：应用ＤＮＡ重组和ＰＣＲ扩增技术。结果：通过二步克隆，从质粒ｐＫＳｉＮＯＳ分离编码巨噬细胞ｉＮＯＳ的生长ｃＤＮＡ，亚克隆于中间载体ｐＳＰ７２，调整插入片段二端酶切位点；进而构建含ｉＮＯＳ基因、巨细胞病毒启动子和ｎｅｏ抗生基因的逆转录病毒载体ｐＬＮＣＸｉＮＯＳ。限制性酶切分析和ＰＣＲ鉴定证实，重组体ｉＮＯＳ插入片段的大小和方向     

弓形虫p30抗原基因体外扩增及其重组质粒构建

为构建弓形虫主要表面抗原ｐ３０基因重组质粒，根据已发表的弓形虫主要表面抗原ｐ３０基因序列，设计合成引物Ｐ１、Ｐ２。在两引物的５末端分别加上了ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ酶切位点，利用ＰＣＲ技术获取ｐ３０抗原基因整个开放阅读框架的碱基序列。ＰＣＲ产物经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切后，与经同样两种内切酶切割的质粒载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ连接构成重组质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ－ｐ３０，转化大肠肝菌ＤＨ５α。通过遗传标记筛选、ＰＣＲ扩增及酶切分析对重组子进行了鉴定证实构建了ｐ３０基因重组质粒。     

Construction of an inducible nitric-oxide synthase gene transferring vector mediated by retrovirus

目的：构建逆转录病毒介导的诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因转移载体．方法：应用ＤＮＡ重组和ＰＣＲ扩增技术．结果：通过二步克隆，从质粒ｐＫＳｉＮＯＳ分离编码巨噬细胞ｉＮＯＳ的全长ｃＤＮＡ，亚克隆于中间载体ｐＳＰ７２，调整插入片段二端酶切位点；进而构建含ｉＮＯＳ基因、巨细胞病毒启动子和ｎｅｏ抗性基因的逆转录病毒载体ｐＬＮＣＸｉＮＯＳ．限制性酶切分析和ＰＣＲ鉴定证实，重组体ｉＮＯＳ插入片段的大小和方向正确．结论：获得含ｉＮＯＳ基因逆转录病毒表达载体，为建立ｉＮＯＳ基因修饰的神经细胞模型，研究ＮＯ／ＮＯＳ在阿片耐受依赖中的作用奠定基础．     

血管紧张素转换酶基因插入／缺失多态性与冠心病关系的初步研究

目的：研究中国汉族人群血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因插入／缺失（Ｉ／Ｄ）多态性与冠心病的关系。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测４０例冠心病和５０例配伍对照组的血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因型，同时测血压、血脂、体重指数等指标。结果：冠心病组与对照组ＡＣＥ基因型分布无显著性差异；ＤＤ型对ＤＩ型和ＩＩ型优势比ＯＲ＝１．５２，９５％可信区间为０．５５～４．２２，Ｐ〉０．０５。结论：ＡＣＥ基因Ｉ／Ｄ多     

肝病患者红细胞CR1密度多态性分析

为探讨红细胞ＣＲ１密度多态性及活性在乙肝到肝癌的演变过程中可能的作用机制，采用ＰＣＲ ＲＦＬＰ和肿瘤细胞花环法，分别检测了４６例乙型肝炎、４９例乙型肝炎后肝硬变、９４例肝癌患者和８０例正常人红细胞ＣＲ１密度多态性及活性。结果红细胞ＣＲ１基因型，ＨＨ型正常人为８０％，与乙肝患者的７３９％无显著差别，但显著高于乙型肝炎后肝硬变和肝癌患者的６３３％和５６４％（Ｐ＜００５）；ＨＬ型正常人为２０％，分别低于乙型肝炎、乙型肝炎后肝硬变和肝癌患者的２６１％、３０６％和３１９％；ＬＬ型正常人与乙型肝炎患者为０，乙型肝炎后肝硬变和肝癌患者分别为６１％与１１７％。ＣＲ１活性肿瘤红细胞花环率，正常人为３１９±７５％，分别显著高于乙型肝炎、乙型肝炎后肝硬变和肝癌患者的２９４±６９１％（Ｐ＜００５）、２４２±６９１％和２２２±７６６％（Ｐ＜００１）。     

哮喘病人免疫球蛋白E高亲和受体β链基因多态性的初步研究

目的 研究哮喘病人免疫球蛋白Ｅ高亲和受体β链基因多态性。方法 提取４０例哮喘和３６名健康人外周血ＤＮＡ，ＰＣＲ扩增免疫球蛋白Ｅ高亲和受体β链基因，分析第二个内含子内限制性内切酶Ｒｓａ１酶切位点的多态性。结果 免疫球蛋白Ｅ高亲和受体β链等位基因Ａ纯合子、等位基因Ｂ纯合子和杂合子的顷哮喘组和且间无显著性差别。结论 基因的多疫球蛋白Ｅ高亲和受体β链基因的多态性与哮喘的发生无相关关系。     

原发性高血压患者血管紧张素转换酶基因多态性及危险因素的关？…

目的 研究中国人群中原发性高血压患血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因多态性及其危险因素的关系。方法 对社区人群调查中确诊的１１２例原发性高血压患，和相同数量，性别、年龄相的健康人询问与原发性高血压有关的因素，测量空腹血脂及坐位血压，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＡＣＥＩ／Ｄ基因多态性。结果 两组ＡＣＥ基因Ｉ／Ｄ多态性构成有显性差异（Ｐ〈０．０５）。病例组ＤＤ基因型高于对照组（３０．４％ｖｓ１８．     

用PCR-RFLP方法检测天津地区汉族人群HLA-DQA1等位基因多态性

目的：应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对天津地区９６名汉族人进行ＨＬＡ－ＤＱＡ１等位基因的分型研究，以了解天津地区汉族人群ＨＬＡ－ＤＱＡ１多态性的分析。方法：通过ＰＣＲ反应扩增ＨＬＡ－ＤＱＡ１第二外显子多态性片段，以限制性内切酶Ｄｄｅ，Ⅰ，Ｈａｅ，Ｒｓａ，Ⅰ，ＦｏｋⅠ及ＭｎｌⅠ，ＭｂｏⅡ进行酶切反应，对ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因进行分型。结果；在天津地区汉族人群中共检出８种ＤＱＡ１等位基因，其中ＨＬＡ－ＤＱＡ１     

精神分裂症与5—HT2A受体基因相关联

目的 探讨中国汉族人群中精神分裂症与５－ＨＴ２Ａ受体基因Ｔ１０２Ｃ多态性之间的关系。方法 选择病期≤２ａ，首次住院的精神分裂症患者７０例，并以７０例正常人作对照进行研究。采用ＰＣＲ扩增及ＭＳＰＩ内切酶酶切技术检测各组研究对象的５－ＨＴ２Ａ受体基因的基因型和等位基因的频率分布。结果 精神分裂症患者５－ＨＴ２Ａ受体基因Ａ２／Ａ２型频率显著高于对照组。经关联分析，其ＯＲ值为２．６２。结论 提示中国汉族人     

结核分枝杆菌katG和inhA基因突变的研究

为了解结核分枝杆菌耐异烟肼（ＩＮＨ）分离株ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列的突变情况，探讨其在ＩＮＨ耐药性中的可能作用。应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）方法对６２株结核分枝杆菌临床分离株的ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列进行分析。ＰＣＲ分析结果显示：ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列的敏感性为１～１０ｐｇＤＮＡ；其引物ＰＣＲ扩增都具有较高的特异性。以Ｈ３７Ｒｖ标准株为对照，１３株敏感株中，１２株ｋａｔＧ基因扩增产物ＳＳＣＰ泳动正常，１株ｋａｔＧ异常；２４株耐非ＩＮＨ抗结核药物株中，８株ｋａｔＧＳＳＣＰ异常；上述２７株的ｉｎｈＡ调节序列ＳＳＣＰ均泳动正常。２５株耐ＩＮＨ株中，３株ｋａｔＧ基因ＰＣＲ扩增阴性，２２株ｋａｔＧ扩增阳性，其中１６株ＳＳＣＰ泳动异常；４株ｉｎｈＡ调节序列ＳＳＣＰ泳动异常，其ｋａｔＧ基因ＳＳＣＰ也异常。结果表明，某些结核分枝杆菌ＩＮＨ耐药性可能是由于其ｋａｔＧ基因完全缺失、ｋａｔＧ基因或ｉｎｈＡ调节序列突变所致，但某些菌株也可能与其无关，是其它耐药基因所致或存在多种机制，尚需进一步探讨。     

宫颈癌组织中myc基因扩增与人乳头瘤病毒感染状况的关系

为了解宫颈癌组织中ｍｙｃ基因与人乳头瘤病毒感染 况与临床分期关系，采用聚合酶链反应－单链构象多态性检测（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ），对５１例宫颈癌ｍｙｃ基因及乳头瘤病毒进行扩增。结果表明，３１例ｍｙｃ基因扩增，阳性占６０％。这３１例标本中１９例ＨＰＶ１６、１８公共型引物扩增，阳性占６１％。阳性率与临床分期和分化程度之间均未发现明确的关系。结论：ＨＰＶ在整合到突主细胞级的过程中伴有较大区段的基因缺失，并能激     

PCR在小鼠Ect病毒基因检测中的应用

应用一对特异的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增Ｅｃｔ病毒基因的引物，建立了Ｅｃｔ病毒感染的ＰＣＲ基因扩增检测法，实验结果表明，ＰＣＲ方法可检出０．１ｐｇ水平的Ｅｃｔ病毒基因，长度为８４６ｂｐ，扩增产物经限制性内切酶分析证实为Ｅｃｔ病毒，在此基础上对不同来源的可疑鼠血清样本进行ＰＣＲ检测，检出率为９０％与预期结果相符。     

多巴胺D3受体基因多态性与帕金森病

目的：探讨多巴胺Ｄ３受体（ＤＲ Ｄ３）基因多态性与帕金森病（ｐａｒｋｉｎｓｏｎ ｄｉｓｅａｅ，ＰＤ）遗传易感性的关系。方法：采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术分析比较了１３０例ＰＤ病人和１２０名正常对照者的ＤＲＤ３基因第１号外显子ＢａｌＩ多态性和第５号内含子ＭｓｐＩ多态性。结果：ＤＲ Ｄ３基因ＢａｌＩ多态位点和ＭｓｐＩ多态位点各基因型的分布和等位基因频率在ＰＤ组和对照     

载脂蛋白A—I基因启动子区域G→A置换对血浆HDL水平的影响

采用ＰＣＲ扩增法和限制性片段长度多态性分析法，对１１５例正常人和１１８例冠心病患者的载脂蛋白Ａ－Ｉ基因启动子区域－７８ｂｐ位点腺嘌呤与鸟嘌呤置换进行检测，并观察此位点基因变异对血浆ＨＤＬ－ｃｈ和ａｐｏＡ－Ｉ含量的影响。结果显示，血浆ＨＤＬ－ｃｈ和ａｐｏＡ－Ｉ含量在三种基因型中无显著性差异（Ｐ〉０．０５），基因型在正常ＨＤＬ－ｃｈ和低ＨＤＬ－ｃｈ水平中的分布差异亦无显著性（Ｐ〉０．０５）。结论：ａｐ     

半重叠PCR扩增IgH和TCR基因重排检测微小残留病

利用ＩｇＨ、ＴＣＲ克隆性基因重排原理用半重叠ＰＣＲ和单轮ＰＣＲ技术分别对２５例急性淋巴细胞白血病患儿的骨髓标本进行检测。结果表明，半重叠ＰＣＲ双轮扩增ＩｇＨ、ＴＣＲｒ基因重排对微小残留的检测，起到增敏效果，可减少非特异性产物的生成，大大提高了微小残留的阳性检出率，并与单轮ＰＣＲ同样具有简便、快速以及ＮＮＡ用量少，对ＤＮＡ模板质量要求低，无放射性污染等优点。     

人α1—干扰素基因真核表达载体的构建及其活性

选用与ＨｕＩＦＮ－α１基因及其信号肽相应的引物，采用ＰＣＲ技术，从中国人血白细胞染色体中分离带有信号肽ＩＦＮ－α１基因片段，分别克隆到质粒Ｍ１３ｍｐ１９和Ｍ１３ｍｐ１８中通过序列分析进行鉴定。然后克隆家蚕多角体病毒（ＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ，ＢｍＮＰＶ）载体ＰＢＦ５的ＥｃｏＲＩ和ＸｂａＩ之间，用合成的相应寡核苷酸片段为引物进行双链测序，鉴定为阳性重组转移     

人血管生长因子基因片段的体外重组

目的：以互为模板的ＰＣＲ合成技术及克隆技术体外重组人血管生长因子基因片段并获得ｐＢｌｕｅｓｅｒｉｐｔ－ｈＡｎｇｆ重组体。方法：设计目的基因ｈＡｎｇｆ的上、下游引物。二引物以１８ｂｐ区段互补,二引物的５－端分别具有加入的或利用简并密码设计的酶切位点,以ＰＣＲ合成目的基因前体,经ＥｃｏＲＩ作用,获目的基因。以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ为克隆载体,目的基因插入该载体ＥｃｏＲＩ及ＥｃｏＲＶ之间。克隆后经Ｋｐｍ     

血管紧张素Ⅰ转换酶基因多态性与2型糖尿病肾病的关系

研究血管紧张素Ⅰ转换酶基因多态性是否与２型糖尿病肾病相关。方法用聚合酶链反应扩增ＡＣＥ基因第１６内含子的一个２８７ｂｐ的插入／缺失基因片段，１．５％琼脂糖凝胶电泳，紫外线灯下观察结果。结果各组间ＡＣＥ Ｉ／Ｄ基因型和等位基因频率分布无明显差异。     

单克隆抗体的基因工程

本文介绍了抗体基因工程的最新进展，其中包括用聚合酶链反应（ＰＣＲ）从杂交瘤或非免疫细胞基因库快速克隆抗体可变区（Ｖ区）基因，互补决定区（ＣＤＲ）移植Ｖ区基因的设计和构建，Ｆｖ和单链Ｆｖ片段的构建等方法，以及载体扩增在哺乳动物细胞或大肠杆菌中高效表达抗体及其片段的技术等。     

评价微生物抗生素耐药性的遗传学方法

与常规的测定微生物敏感性的方法（平板扩散法、肉汤稀释法、琼脂稀释法和梯度扩散法）相比较，分析了评价微生物抗生素耐药性的遗传学方法的优缺点。详细介绍了从抗生素耐药基因和抗生素耐药性相关基因突变两方面检测微生物抗生素耐药性的遗传学方法，前者包括：（１）多聚酶链式反应（ＰＣＲ）扩增目标ＤＮＡ，用琼脂糖电泳、探针杂交技术或ＤＮＡ序列测定以确定扩增子；（２）分枝ＤＮＡ分析；（３）ＰＣＲ一限制性片段多态性（Ｃ