黄连药材DNA提取及RAPD反应体系的优化

目的探索黄连药材DNA的提取并对其RAPD反应体系进行优化。方法采用目前较为流行的苯酚法、CTAB法、高盐低pH值法,通过电泳、紫外分光光度仪检测及RAPD扩增效果确定黄连药材基因组DNA提取的最佳方法。结果CTAB法为黄连药材基因组DNA提取的最佳方法,建立了适合黄连药材的RAPD反应体系:25μL体系中内含1×PCRbuffer、2mmol/LMg2 、100~150μmol/LdNTP、20ng引物、40ng模板、1UTaq酶。结论CTAB法及黄连药材的RAPD反应体系可以用于黄连药材的RAPD分析。     

三角叶黄连ISSR反应体系的建立与优化

目的 针对三角叶黄连ISSR的反应特点,建立稳定可靠的ISSR-PCR分子标记反应体系,为进一步研究三角叶黄连的种质资源遗传多样性奠定基础。方法 通过筛选引物并设定影响三角叶黄连ISSR-PCR反应诸因子的不同梯度,检测其不同反应体系的扩增效果,分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立三角叶黄连ISSR-PCR稳定可靠的反应体系。结果 建立了可用于三角叶黄连ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系：25 μL PCR反应体系中,内含10×PCR Buffer 2.5 μL,1.5 mmol/L Mg²⁺,200 μmol/L dNTP,0.3 μmol/L引物,40 ng模板,1.0 U Taq DNA聚合酶。扩增程序为94 ℃预变性5 min,然后进行35个循环：94 ℃变性30 s,(据不同引物的退火温度)复性60 s,72 ℃延伸90 s,循环结束后72 ℃延伸7 min,4 ℃保存。结论 所建立的三角叶黄连ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力强、重复性好等特点,可以较好地应用于三角叶黄连的种质资源遗传多样性及居群鉴别的研究。     

药用百合DNA提取和RAPD条件的优化

目的确定药用百合最佳随机扩增多态DNA(RAPD)分析方法。方法以药用百合新鲜鳞叶为材料,研究DNA的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行优化。结果药用百合RAPD反应体系及程序为:在40μL反应体系中,含40 ng模板DNA,0.3μmol/L随机引物,0.2 mmol/L dNTPs,1.7 mmol/L Mg2 ,3μL 10×PCRBuffer,1.5 U Taq酶;扩增程序为:第一步94℃预变性2 min,第二步94℃变性1 min,第三步36℃退火45 s,第四步72℃延伸90 s,返回至第二步重复40个循环,第六步72℃延伸10 min,最后4℃保存以备电泳。结论建立了药用百合RAPD的优化反应体系及程序。     

黄连提取工艺的研究

根据黄连中主要有效成分生物碱易溶于热水的性质，采用正交设计筛选出黄连水提取的最佳工艺条件，并分别以回流提取、连续回流提取方式，比较水和50％乙醇作溶剂的提取效果，结果显示二者基本相同。表明黄连水提取是完全可行的。     

正交设计优化四味黄连洗剂提取工艺

目的 采用正交设计试验优选四味黄连洗剂的最佳提取工艺。方法 对四味黄连洗剂采用醇提取法,采用L9（34）正交设计法进行试验,对提取次数、乙醇浓度、提取时间和乙醇倍数4个单因素进行试验,以黄芩苷、盐酸小檗碱、大黄素含量及干膏得率为指标,利用综合评分法对数据进行分析,优选出最佳提取工艺。结果 优选出四味黄连洗剂最佳醇提工艺为处方量药材加12倍80%乙醇提取3次,每次1.5 h。结论 试验得到的最佳提取方法稳定可行,可应用于四味黄连洗剂的生产制备。     

北美黄连有效成分的提取分离与含量测定

介绍了北美黄连的应用简况，用溶剂法提取其有效成分北美黄连碱和盐酸小檗碱，并用柱层析、重结晶法加以分离精制，同时建立了这两种成分的含量测定方法。     

峨眉产黄连水分灰分和浸出物的含量测定

目的：：测定峨眉产黄连药材的水分、灰分和浸出物,为建立峨眉产黄连药材质量标准提供依据。方法：按《中国药典》(2010版一部)对黄连中的水分、灰分及浸出物进行测定,并对浸出物的提取条件进行优化。结果：测得黄连药材水分11.68%~19.04%,总灰分2.51%~3.79%,酸不溶性灰分0.34%~1.48%,醇溶性浸出物量24.82%~36.14%。结论：峨眉产黄连药材水分不超过14%,总灰分不高于5%,酸不溶性灰分不高于1%,醇溶性浸出物量不低于15%。     

黄连生物碱的提取纯化及降脂作用

目的：提取纯化黄连主要生物碱并研究其降脂作用。方法：采用乙醇浸泡、加酸加碱及大孔吸附树脂提取总生物碱,用萃取、柱层析及重结晶分离黄连生物碱。以高脂饲料喂养鹌鹑建立高脂模型,观察各用药组对鹌鹑血清TC、TG、LDL-C及HDL-C影响。结果：小檗碱、黄连碱及巴马汀有明显降低TC、LDL-C水平的作用。结论：小檗碱、黄连碱及巴马汀有明显降脂作用。     

黄连须根有效成分提取工艺研究

目的 对黄连须根中黄连有效生物碱的提取工艺进行研究,为其大规模工业生产奠定基础.方法 以黄连须根中的药根碱、小檗碱及巴马汀的提取含量为指标,对纤维素酶预处理法、酸水浸提法、微波预处理法进行了研究,确定了酸水提取法的最佳工艺条件.结果 酸水浸提法的最佳工艺条件:0.3%硫酸浸泡48h后在40～60℃时回流提取,药根碱的提取率可到0.58%,小檗碱和巴马汀之和达到2.25%.     

金钗石斛及其相似种RAPD优化和DNA多态性分析

目的:以金钗石斛为材料,建立石斛的RAPD优化条件,应用于石斛相似种的DNA多态性分析.方法:分别设置模板DNA,Mg2 ,Taq DNA聚合酶,dNTPs,引物的浓度梯度,优化RAPD反应体系.结果:在25 μl总反应体系中,以上反应物的用量分别为100 ng,3.0 mmol/L,1.0 U,0.2 mmol/L,0.4 μmol/L时所获得的石斛属DNA指纹图谱谱带型清晰、重复性好.其中用S48 扩增的DNA指纹图谱具有更大的相似性,适合于石斛真伪鉴别;而S90 扩增的片段具有明显的多态性,适合于石斛遗传分化研究.结论:优化后的RAPD方法可作为研究石斛属植物的遗传多样性及真伪鉴别的有效方法.     

RAPD技术在肠炎沙门氏菌同源性分析中的应用

目的 研究2004年广州市3起肠炎沙门氏菌食源性疾病分离的20株菌株和来源于从业人员健康体检的18株肠炎沙门氏菌的分子特征,为肠炎沙门氏菌食源性疾病的流行病学溯源和疫情控制提供有效手段。方法 采用随机引物扩增多态性DNA分析（randomly amplified polymorphic DNA analysis,RAPD）对38株肠炎沙门氏菌进行分子分型,结合SPSS软件构建以上菌株的带型关系系统树状图,对菌株进行基因多态性分析。结果 38株肠炎沙门氏菌的RAPD结果经聚类分析可分为3个聚类群,分属3个不同的克隆。结论 RAPD技术可用于肠炎沙门氏菌食源性疾病的流行病学调查和溯源。     

利用RAPD技术分析实验用比格犬的遗传背景

目的　运用RAPD技术对实验用比格犬 (Beagle)进行遗传背景分析。方法　筛选的 16个RAPD引物对 4 0个样品的分析 ,共得到 93个扩增条带。结果　所有样品的相似系数 80 4 %到 10 0 %间变动 ,平均相似系数为93 2 8% ,聚类分析得到了这些个体的同源树资料。结论　本遗传背景资料可以为以后的比格犬繁育生产和生物医药学的研究应用提供技术指导     

国外实验动物信息资源网站

目的建立实验兔随机扩增多态DNA（RAPD）的最优反应体系,并对RAPD引物进行筛选优化。方法以白毛黑眼（WHBE）兔,日本大耳白（JW）兔,新西兰（NZW）兔为实验材料,对影响RAPD反应的各因素进行优化,摸索出最佳的Mg^2＋,dNTP,Taq酶,引物和DNA模板的浓度,并从60个随机引物中筛选出适合实验兔RAPD反应的引物。结果最优RAPD—PCR反应体系为：在20山的反应体系中,Mg^2＋1．5mmol／L,dNTP0．25mmol／L,Taq酶1．25U,引物5μmol／L,模板DNA40ng。60个RAPD引物中剔除了重复性差,条带模糊的引物后,有25个引物稳定,扩增出来的条带清晰、多态性高。结论本研究筛选出的25个引物和建立的PCR体系可应用于实验兔的RAPD反应。     

应用RAPD标记技术对树鼩遗传多样性的分析

目的建立树鼩RAPD(random amplified polymorphic DNA)遗传标记分析方法,了解中缅树鼩种群的遗传多样性。方法采用PCR技术对40条随机引物进行优化,筛选出能有效用于树鼩群体遗传分析的RAPD位点,对48只树鼩个体的基因组DNA进行PCR扩增,并应用Popgene 1.32与RAPDistance Package Version 1.04等软件进行数据处理,分析树鼩的群体遗传特性。结果20个RAPD引物共检测到113个位点,平均每个引物可扩增出5.65个位点,其中多态位点数为69个(占61.1%)。个体间的遗传相似系数平均为0.8307,个体间遗传距离在0.09~0.27之间,平均遗传距离为0.1693。雄性群体的遗传多态度(H0)(0.1864)略高于雌性群体(0.1470),平均遗传多态度(Hpop)为0.1667;树鼩遗传多态度所占的比例在群体内为48.29%,而雌、雄群体间为51.71%。NJ法进行聚类分析得出T15、T33和T47号树鼩个体聚类成一大类,其余45只树鼩个体聚成另一大类,雌、雄个体呈相互交叉现象。结论实验所筛选的随机引物可有效用于中缅树鼩种群的遗传结构分析。本树鼩群体具有较好的遗传多样性。     

ICU机械通气性鲍曼氏不动杆菌感染的同源性分析

目的:了解鲍曼氏不动杆菌引起机械通气性肺炎主要克隆株及流行状况。方法:运用随机引物扩增PCR(RAPD)技术对32株鲍曼氏不动杆菌进行指纹图谱与聚类分析。结果:32株鲍曼氏不动杆菌经RAPD分为5个基因型,Ⅰ至Ⅴ型分别占16株、1株、2株、4株和9株。结论:鲍曼氏不动杆菌在医院内存在克隆传播,Ⅰ型与Ⅴ型鲍曼氏不动杆菌是我院ICU病房机械通气性肺炎的主要基因型,临床应加强对这2型鲍曼氏不动杆菌的监控,以防止院内感染与爆发流行。     

黄花蒿种质资源的RAPD分析

目的研究青蒿素高产的黄花蒿植株的遗传多样性特征。方法结合青蒿素量的测定,应用RAPD技术对10个产地黄花蒿进行遗传多样性分析。结果发现RAPD多态位点为53.6%,证明在黄花蒿野生群体中存在较丰富的遗传多样性。UPGMA分析表明:在黄花蒿中可能至少存在具有遗传分化的4个分支,黄花蒿遗传分化与青蒿素量的变化及地理分布有一定的相关性。结论黄花蒿具有明显的遗传分化,这些遗传分化是黄花蒿种质资源筛选的关键,是青蒿素“高量育种”和生物技术开发的基础。     

对约氏疟原虫不同易感性的大劣按蚊和斯氏按蚊基因组RAPD序列比较

目的分析对约氏疟原虫不易感的大劣按蚊和易感的斯氏按蚊基因组RAPD谱带并测序,探讨媒介按蚊基因型与疟原虫基因型间的相互关系。方法用已筛选的一条随机引物,随机扩增大劣按蚊和斯氏按蚊成蚊的基因组DNA,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,对相同迁移率的DNA条带克隆、测序,并采用相关在线程序及软件进行序列比较分析。结果大劣按蚊和斯氏按蚊RAPD谱带具有明显的种间差异,但有4对相同迁移率的条带。序列分析显示4对DNA条带在序列长度和组成上呈现多态性,序列的GC含量和简单重复序列存在差异,序列相似性介于48％～52％之间。结论大劣按蚊和斯氏按蚊之间存在不同的遗传背景,其基因多态性可能与产生对约氏疟原虫的易感性不同有关,为进一步研究按蚊与疟原虫之间的相互作用奠定了基础。