颗粒细胞在未成熟卵体外培养时对未成熟卵母细胞发育的影响

目的研究颗粒细胞在未成熟卵母细胞体外培养时对卵母细胞的成熟有何影响。方法实验分实验组和对照组。将拆除颗粒细胞的未成熟卵母细胞作为对照组,不拆除颗粒细胞的未成熟卵母细胞为实验组,观察它们在卵母细胞成熟时间、核成熟率、卵细胞受精率和优质胚胎的生成率等方面是否存在差异。结果实验组在卵母细胞成熟时间和卵细胞受精率上和对照组无明显差别,但是在卵母细胞核成熟率、优质胚胎的生成率等方面与对照组相比有显著性差异。结论颗粒细胞对卵母细胞的核成熟、胞浆成熟和保护其发育潜能有重要的作用。     

卵丘颗粒细胞的端粒长度与体外受精-胚胎移植妊娠结局的关系

目的 颗粒细胞凋亡直接影响胚胎的质量,而端粒参与了细胞增殖的调控,因此,本文探究了卵丘颗粒细胞的端粒长度与体外受精-胚胎移植妊娠结局之间的关系,为胚胎和卵母细胞的评估提供思路。 方法 选择2015年6月—2016年12月间上午入住舟山市妇幼保健院的87例进行体外受精-胚胎移植的患者作为研究对象。所有患者根据年龄,共分为4组:20～25岁(21例);26～30岁(24例);31～35岁(23例);>35岁(19例)。依据卵母细胞成熟度,将患者分为未成熟卵泡颗粒细胞组(45例)和成熟卵泡颗粒细胞组(42例);依据胚胎移植后孕囊的阴道B超检查,分为妊娠组(43例)和非妊娠组(44例)。比较患者的年龄、卵母细胞的成熟度对卵丘颗粒细胞端粒长度,分析不同成熟度的卵母细胞卵泡液内抗苗勒管激素水平以及不同妊娠结局的卵巢颗粒细胞凋亡情况。所有数据的处理分析均使用SPSS 22.0统计软件。 结果 20～25岁组、31～35岁组和>35岁组的患者颗粒细胞端粒长度和卵泡成熟度之间有明显差异,随着年龄的增加,患者体内的成熟卵母细胞的颗粒细胞的端粒长度逐渐变短,端粒的长度与年龄呈负相关(P<0.05)。未妊娠患者与已妊娠的患者之间的颗粒细胞端粒长度比较,未妊娠的患者明显更小,差异具有统计学意义(P<0.05)。未成熟卵母细胞的卵泡液内的AMH水平明显高于成熟的卵母细胞,差异具有统计学意义(P=0.007)。比较非临床妊娠组和临床妊娠组的卵巢颗粒细胞凋亡率,差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论 端粒长度随着患者年龄的增大而缩短,未妊娠患者的端粒长度更短,卵丘颗粒细胞的端粒长度与卵母细胞的成熟度和妊娠结局密切相关,具有临床研究价值。      

卵丘颗粒细胞GOLPH3表达对单精子卵胞浆内注射助孕结局的影响

目的 探讨卵丘颗粒细胞高尔基磷酸化蛋白-3(GOLPH3)表达对单精子卵胞浆内注射(ICSI)助孕结局的影响.方法 收集2012年4月~2014年6月,因男性不育症行ICSI助孕的119例女性患者的卵丘颗粒细胞,采用细胞免疫化学,Western bloting方法检测颗粒细胞GOLPH3蛋白的表达,采用real-time荧光定量PCR方法检测GOLPH3基因表达.比较分析ICSI妊娠组与非妊娠组病例卵丘颗粒细胞GOLPH3表达率差异,并分析它们与ICSI实验室结局各项指标:穿卵泡数、获卵数、获卵率;受精数、受精率;卵裂数、卵裂率;优质胚胎数、囊胚形成数及囊胚冷冻数之间的相关关系.结果 对119份卵丘颗粒细胞涂片进行免疫细胞化学分析GOLPH3的表达,结果发现GOLPH3主要表达在细胞质中,妊娠组与未妊娠组卵丘颗粒细胞GOLPH3表达率与表达强度组间差异均有统计学意义(P均<0.05).卵丘颗粒细胞GOLPH3表达率与ICSI实验室结局指标:穿卵泡数,Ⅲ级OCCs数,ICSI卵子数,受精数,卵裂数,平均优质胚胎数,平均囊胚数,优质囊胚数,平均冷冻胚胎数等呈显著正相关关系(P均<0.01).Real-Time PCR,Western blot检测妊娠组与未妊娠组颗粒细胞GOLPH3蛋白与基因表达组间差异也均有统计学意义(P均<0.05).结论 GOLPH3在卵丘颗粒细胞的表达,可能影响卵母细胞的成熟,卵子的发育能力,进而与ICSI助孕结局有关.     

颗粒细胞在玻璃化冷冻中对卵母细胞的影响

目的 采用开放式拉细麦管(open pulled straws，OPS)法玻璃化冷冻技术，探讨卵丘颗粒细胞对未成熟卵母细胞冻融后存活率及其发育能力的影响。方法 小鼠生殖泡期卵丘-卵母细胞复合物(COC)或完全去颗粒细胞后的裸卵(DO)用OPS法玻璃化冻存，复苏后行体外成熟培养(IVM)；COC直接行IVM作为对照组。结果 COC及裸卵冻融后存活率(分别为69．49％、77．90％)、成熟率(分别为56．10％、56．74％)无显著性差异，但成熟率均显著低于对照组(82．28％)。结论 在未成熟卵的玻璃化冷冻中颗粒细胞对卵母细胞冻存无保护作用。     

酪氨酸蛋白激酶受体B在人卵泡中的表达及意义

目的探讨酪氨酸蛋白激酶受体B(tyrosine kinase receptor B, TrkB)在人卵泡中的表达及意义。方法用免疫细胞化学方法检测TrkB在超促排卵妇女壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞、未受精或未成熟卵母细胞中的表达,并用Western免疫印迹方法检测TrkB在壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞中的表达水平。结果壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞、卵母细胞均有TrkB表达。壁层颗粒细胞表达量高于卵丘颗粒细胞。结论脑源性神经营养因子在人卵巢可能通过与TrkB结合,参与颗粒细胞功能的完成和卵母细胞发育的调控。     

酪氨酸蛋白激酶受体B在人卵泡中的表达及意义

目的 探讨酪氨酸蛋白激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)在人卵泡中的表达及意义。方法 用免疫细胞化学方法检测TrkB在超促排卵妇女壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞、未受精或未成熟卵母细胞中的表达，并用Western免疫印迹方法检测TrkB在壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞中的表达水平。结果 壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞、卵母细胞均有TrkB表达。壁层颗粒细胞表达量高于卵丘颗粒细胞。结论 脑源性神经营养因子在人卵巢可能通过与TrkB结合，参与颗粒细胞功能的完成和卵母细胞发育的调控。     

一种简易的促排卵周期挽救性卵子体外成熟培养技术

【目的】 探讨人类成熟卵丘细胞在未成熟卵母细胞体外成熟培养中的作用,并建立一种简易的实施技术&#65377;【方法】 在控制性促排卵周期有未成熟卵母细胞时,将同周期成熟卵丘复合体切出部分卵丘细胞,用1 mL注射器抽打分散细胞,贴壁培养&#65377;113个治疗周期中,298枚生发泡期卵母细胞经3种不同培养液(A&#65380;B&#65380;C)体外成熟培养(同一病人的生发泡期卵被随机分到某同一组中):第1组28个周期中73枚(A液):基础培养液+卵泡液;第2组40个周期中115枚(B液):A液 + 分散贴壁的卵丘细胞;第3组45个周期中110枚(C液):A液 + 分散贴壁的卵丘细胞 + 促卵泡生成激素 + 表皮生长因子&#65377;观察其成熟率&#65380;受精率及可用胚胎获得率等&#65377;【结果】 24 h成熟率:组间比较有显著性差异(A: 45.2%, B: 61.7%, C: 78.2%, P < 0.05); 25 ~ 48 h无显著意义&#65377;成熟卵的正常受精率在59% ~ 67%之间,组间比较无显著差异;与第1组(54.5%,11.0%)相比,第2组(83.3%,25.2%)&#65380;第3组(90.7%,37.3%)的卵裂率和挽救率均有显著性差异(P < 0.05),可用胚胎获得率组间比较依次呈现上升趋势(66.7%,82.9%,83.7%)&#65377; 【结论】 来自控制性促排卵周期的成熟卵丘细胞经简易吹打分散后贴壁培养,可能能协同卵泡液中或外加的生长因子,促进未成熟卵母细胞的体外成熟,而本研究技术简易有效,可用于挽救促排卵周期的未成熟卵&#65377;     

多囊卵巢综合征患者血清中脑源性神经营养因子水平与体外受精-胚胎移植结局相关性研究

目的探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者脑源性神经营养因子（BDNF）与卵母细胞成熟之间的相关性。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测60例PCOS患者和45例排卵正常不孕患者中的血清BDNF水平,分析血清BDNF水平与获卵数、成熟卵数、卵母细胞成熟率、卵裂率和优质胚胎率之间的相关性。结果①P—COS组血清BDNF水平高于对照组（P〈0．01）;②PCOS组在获卵数和成熟卵数方面显著高于对照组（P〈0．01）,而受精率、优质胚胎率和卵母细胞成熟率显著低于对照组（P〈0．01）;③BDNF水平与获卵数、成熟卵数和卵母细胞成熟率成呈正相关（P〈0．05）。结论PCOS患者血清中BDNF水平升高,高水平BDNF能促进卵母细胞成熟和早期胚胎的发育。     

卵丘细胞线粒体移植对年老小鼠早期胚胎发育的影响

目的探讨线粒体对早期胚胎发育的影响。方法采用昆明小鼠为动物模型,以其卵丘颗粒细胞、卵母细胞、受精卵为试验材料,提取年老小鼠卵丘细胞线粒体,将其注入年老小鼠卵母细胞和体内冲出的受精卵中。结果与结论通过卵丘细胞线粒体移植,给卵子补充了一定量的线粒体,可以部分弥补卵母细胞因变异引起的功能不足。为第2次减数分裂、受精卵和胚胎发育提供足够的能量,明显改善了胚胎的质量。     

人卵母细胞成熟过程中卵丘细胞与卵母细胞关系的研究进展

人卵母细胞和卵丘细胞（cumulus cell, CC）之间存在双向通讯,在卵泡内,卵母细胞的发育高度依赖于与卵丘细胞的联系。卵母细胞通过分泌有效的生长因子（oocyte-secreted factors, OSFs）介导卵丘细胞分化,卵丘细胞则通过缝隙连接传递信号并在卵泡发育的后期阶段支持卵母细胞的生长,进一步促进卵母细胞成熟和受精。本文将综述人卵母细胞成熟中卵丘细胞与卵母细胞之间的重要关系及有关作用机制,为提高体外成熟（IVM）技术中卵母细胞的质量提供新的帮助。     

生长激素在体外授精-胚胎移植卵巢低反应患者中的应用

目的 探讨生长激素(GH)对体外授精-胚胎移植(IVF-ET)卵巢低反应患者的作用.方法 选择2010年1月至2010年12月在昆明医科大学第二附属医院生殖中心接受体外授精-胚胎移植的108例卵巢低反应患者.均用长方案促排卵,其中54例加用生长激素,作为研究组,其余54例作为对照组.观察促性腺激素(Gn)用量,MⅡ获卵数,受精率,卵裂率,临床妊娠率.结果 研究组Gn用量,用药时间明显低于对照组,MⅡ获卵数,受精率,妊娠率明显增加.结论 生长激素在IVF超排卵中有辅助作用,可减少Gn用量,改善卵子质量,提高临床妊娠率.     

人MⅡ期卵母细胞极体及原核期形态分级对预测胚胎发育潜能的研究

目的对人MⅡ期卯母细胞的第一微体和D1双原核期的原核、核仁及胞浆进行形态分级,以预测胚胎发育潜能。方法以2009年6月-2012年6月在广西医科大学第一附属医院生殖医学研究中心接受卵胞浆内单精子硅微注射（ICS1）助孕治疗的269对不育夫妇（共269个移植周期）为研究对象。对所有获得的MⅡ期卵母细胞第一极体进行形态观察和分级,同时将D1双原核期的受精卵进行形态分级,分别比较其受精率、卵裂率、优质胚胎率、胚胎种植率及临床妊娠率。结果根据所移植的胚胎来自不同级别第一极体的MⅡ期卵和不同原核等级分为B组和C组,分别为102例和98例,其余为A组（69例）。移植来源于1～2级第一极体的MⅡ期卵母细胞且D1双原核期为Z1～Z2级的胚胎其受精牢、卵裂牢、种植率、优胚率及临床妊娠率均较高。结论人MⅡ期卵母细胞第一极体和D1双原核期受精卵的等级越高,胚胎发育的潜能就越好。从而提高ICSI的胚胎种植率及临床妊娠率。     

人类卵子体外成熟及其胚胎冷冻复苏研究

目的:探讨取卵周期准备、卵泡发育状态、培养液成分对未成熟卵的获取率、体外成熟率、受精率、胚胎质量、胚胎移植后成功率及其胚胎冷冻复苏移植的影响。方法:19例进行卵子体外成熟的不孕不育患者为研究对象。其中1例为自然周期,14例为促性腺激素(Gn)诱导排卵周期,4例常规控制性促排卵(COS)周期;分别以TCM 199或人输卵管液(HTF)为基础培养液,进行卵子体外成熟培养。结果:当取卵时卵泡大小不均一且最大卵泡直径≥12 mm时,获卵率、受精率和胚胎质量下降;TCM 199组优质胚胎的形成率显著高于HTF组(P<0.01)。IVM胚胎经冷冻复苏、胚胎移植能获得与常规IVF周期相似的妊娠成功,出生后代健康、无畸形。结论:在IVM周期取卵时卵泡大小不均一且最大卵泡直径≥12 mm时,将影响胚胎着床率和累积妊娠率。TCM 199优于HTF培养液,能提高未成熟卵体外成熟后受精卵所形成胚胎的发育能力。IVM胚胎经冷冻复苏-胚胎移植能获得与常规IVF周期相似的妊娠成功,出生后代健康、无畸形。     

小鼠体外发育卵母细胞生长分化因子-9基因表达

目的体外培养小鼠窦前卵泡得到MⅡ期卵母细胞,比较发育过程中体外与体内卵母细胞生长分化因子-9(GDF-9)的基因表达量,初步探讨GDF-9的表达对卵母细胞体外发育成熟的影响。方法出生D10雌性昆明小鼠50只,机械方法分离窦前卵泡,体外培养12d。分别于体外培养D2、D4、D6、D8、D10、D12分离卵母细胞作为体外发育组;同窝雌性小鼠出生后D12、D14、D16、D18、D20、D22卵母细胞作为体内发育组;使用半定量逆转录多聚酶链反应技术分别检测两组单个卵母细胞GDF-9基因表达量。应用计算机全自动图像分析仪测量PCR产物电泳条带的几何平均光密度,基因表达量用相对光密度表示:检测基因光密度/管家基因(β-actin)光密度。结果培养第12天观察306个卵泡,274个卵泡成活(89.5%),143个窦腔形成(51.8%);第13天观察,155个卵母细胞成熟(56.6%)。体外发育D2、D4、D6、D8、D10、D12卵母细胞GDF-9基因表达相对光密度分别是0.83±0.08、0.52±0.09、0.45±0.13、0.49±0.09、0.49±0.09、0.68±0.08;体内发育D12、D14、D16、D18、D20、D22卵母细胞GDF-9基因表达相对光密度分别是0.64±0.35、0.48±0.10、0.52±0.10、0.66±0.08、0.72±0.09、0.91±0.11;体外发育D8￣12卵母细胞GDF-9表达量明显低于同期体内发育卵母细胞(P<0.05)。结论小鼠窦前卵泡体外培养后可以生长发育,部分得到成熟的卵母细胞。小鼠卵母细胞GDF-9基因表达量随发育时间的改变发生变化;体外发育D8￣12卵母细胞GDF-9基因表达量低于同期体内发育的卵母细胞可能是其发育潜能较低的原因之一。     

昆明小鼠成熟卵母细胞体外受精及受精卵体外培养的研究

目的通过比较获能受精液成分及成熟卵母细胞的处理方法，观察对昆明小鼠体外受精(IVF)效果的影响和用于早期胚胎培养的三种发育培养液培养效果，探讨并建立起适合于昆明小鼠卵子体外受精与受精卵体外发育的实验体系。方法用T6或FM两种获能受精液对采自昆明雄鼠附睾尾的精子与成熟卵母细胞进行体外受精(IVF)，受精前对成熟卵母细胞选用透明质酸酶去除卵丘细胞和不去卵丘细胞(对照组)两种方法进行处理，受精卵分别用M16、改良的CZB液(mCZB)和改良的M16液(mM16)三种发育培养液对体外受精胚进行培养。结果选用FM获能受精液的受精率极显著高于T6液(92．3％对64．7％)，且体外受精前先用透明质酸酶处理的成熟卵母细胞比对照组成熟卵母细胞受精率要低(59．2％对64．7％)，但差异不显著；用mM16培养液进行培养时桑胚率及囊胚率(55．3％和35．6％)显著高于mCZB(13．3％和8．1％)和M16培养液(17．3％和14．7％)，后两者差异不显著。结论昆明小鼠卵子体外受精时宜选用FM受精获能液，不宜用透明质酸酶去除卵丘细胞，且宜选用mM16培养液对昆明小鼠体外受精卵进行早期培养，其中的亚硫磺酸钠可有效的克服2-细胞胚后的体外发育阻滞现象。     

In vitro maturation of immature oocytes and IVF/ICSI in PCOS patients

In vitro maturation (IVM) programme has developed a culture technique for supporting the growth and maturation of immature oocytes since late of 1980s and has become important in ART methods. The establishment of an IVM programme can yield many advantages. Patients suffering from congenital or postnatal reproductive disorders, such as premature ovarian failure (POF) or polycystic ovarian syndrome (PCOS), can achieve pregnancies by transfer of viable embryos derived from IVM and in vitro fertilisation (IVF) systems. However, the pregnancy rate of IVM-IVF programme for PCO patients was still low. This disadvantage was caused by poor maturation of human immature oocytes and no synchronisation with implantation windows. Recently, application of FSH/hCG priming or optimal maturation medium for proper cytoplasmic maturation improves the success rate of IVM procedures. Indeed, increasing oocyte viability by employing optimised IVM system would also reduce ethical concerns about the disposal of retrieved oocytes with low developmental competence, and concerns about the abuse of the manipulation of human embryos.     

Female Fertility: Is it Safe to “Freeze?”

Objective:To evaluate the safety and risk of cryopreservation in female fertility preservation.Data sources:The data analyzed in this review were the English articles from 1980 to 2013 from journal dat...     

温肾养血方提高高龄雌鼠卵母细胞质量和胚胎发育潜能的研究

目的 探讨温肾养血方提高高龄雌鼠卵母细胞质量和胚胎发育潜能的作用机制。方法 按随机数字表法将8月龄ICR小鼠分为对照组、血清促性腺激素（pregnant mare serum gonadotropin,PMSG）组、温肾养血组、温肾组、养血组,观察用药后各组受精率和卵裂率,卵母细胞和受精卵线粒体的表达情况。结果 温肾养血组、温肾组、养血组的受精率和卵裂率明显高于对照组和PMSG组（P<0.05）,温肾养血组的受精率和卵裂率最高（P<0.05）。2细胞率、4细胞率、8细胞率、桑葚胚率和囊胚率,温肾养血组均比PMSG组高且差异有统计学意义（P<0.05）。卵母细胞和受精卵中的线粒体DNA拷贝数温肾养血组最高,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 温肾养血方可能通过调控卵母细胞线粒体DNA拷贝数提高卵母细胞质量和胚胎发育潜能。