人早孕期滋养细胞通过表达趋化因子SDF-1募集蜕膜免疫活性细胞(摘要)

目的研究人早孕期绒毛及滋养细胞趋化因子SDF-1的表达、分泌及其对蜕膜免疫活性细胞的募集作用.方法收集早孕期绒毛组织并检测SDF-1的定位表达;用ELISA分析早孕期滋养细胞培养上清液中SDF-1的浓度水平;分离早孕期蜕膜免疫活性细胞,以趋化试验研究SDF-1及滋养细胞培养上清液对蜕膜免疫活性细胞的趋化作用.结果人早孕期滋养细胞表达并分泌SDF-1;一定浓度范围的SDF-l对蜕膜免疫活性细胞具有趋化作用,最大趋化指数为3.27±0.89;滋养细胞培养上清液也明显趋化蜕膜免疫活性细胞,趋化指数为2.11±0.79.结论人早孕期滋养细胞表达的SDF-1对蜕膜免疫活性细胞具有趋化、募集作用,从而有助于形成蜕膜独特的淋巴细胞群体并维持母-胎免疫耐受.     

蜕膜自然杀伤细胞趋化因子受体的表达及募集机制的研究

目的　研究早孕期人蜕膜自然杀伤 (NK)细胞趋化因子受体谱的表达及其特异性募集的机制。方法　收集早孕期蜕膜组织 ,免疫磁珠分选CD5 6 brightCD16 -NK细胞 ;逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测CD5 6 brightCD16 -NK细胞中 18种趋化因子受体的转录水平 ,筛选出高表达的趋化因子受体 (即CXCR4及CXCR3)。原位杂交及免疫组织化学分析CXCR4特异性配体基质细胞衍生因子 (SDF 1)在早孕胎盘的定位表达 ;ELISA检测早孕滋养细胞培养上清液中SDF 1α的浓度水平。趋化试验研究重组人SDF 1α(rhSDF 1α)及滋养细胞培养上清液对蜕膜CD5 6 brightCD16 -NK细胞的趋化作用。结果　人蜕膜CD5 6 brightCD16 -NK细胞可转录多种趋化因子受体 ,其中CXCR4及CXCR3mRNA呈高水平表达。人早孕期滋养细胞表达趋化因子SDF 1;原代培养的滋养细胞可自发分泌SDF 1α,培养 6 0h后上清液中SDF 1α的浓度达 385ng/L± 91ng/L。rhSDF 1α及滋养细胞培养上清液对蜕膜CD5 6 brightCD16 -NK细胞具有显著趋化作用。当rhSDF 1α为 10 μg/L时趋化至Transwell下室中的细胞可达总细胞数的2 2 9%± 4 3%。结论　人早孕期蜕膜CD5 6 brightCD16 -NK细胞高水平转录CXCR4 ,而滋养细胞则表达并分泌CXCR4的配体SDF 1。SDF 1趋化、募集CD5 6 br     

米非司酮对LIF在人早孕期绒毛滋养细胞表达的影响

目的:通过对比观察米非司酮对白血病抑制因子(leukem ia inh ib itory factor,LIF)在人早孕期绒毛滋养细胞中表达的影响,探讨米非司酮对终孕的分子免疫机制。方法:采用免疫组化S-P法检测20例米非司酮药流终孕的早孕期绒毛滋养细胞中LIF的表达情况。20例人流终孕的正常早孕期绒毛为对照组。结果:米非司酮药流组滋养细胞中LIF的表达较人流对照组明显减少(P<0.01),其PU值(x-±s)分别为11.24±5.39,24.76±11.07。结论:米非司酮可明显降低LIF在人早孕期绒毛滋养细胞中的表达,进而不利于胚胎的生存。     

USP22基因在人早孕期母-胎界面的表达及意义

目的:检测早孕期绒毛及蜕膜组织中泛素特异性水解酶22(USP22)基因和蛋白水平表达,以探讨USP22在母-胎界面的生理性调节作用。方法:分别采用免疫组织化学方法、荧光实时定量PCR法、Western blot检测20例早孕期正常妊娠妇女及15例不明原因复发性流产患者绒毛、蜕膜组织中USP22的定位、mRNA及蛋白表达水平。结果:USP22在早孕期绒毛和蜕膜组织中均呈阳性表达。在蜕膜基质细胞,USP22主要定位于胞质,少部分定位于胞核;在绒毛滋养细胞,USP22主要表达于绒毛细胞滋养细胞的胞质和胞膜。实时荧光定量PCR及Western blot检测显示绒毛及蜕膜组织中均可见USP22mRNA及蛋白的表达;与正常妊娠组比较,复发性流产组绒毛USP22mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),蜕膜组织中USP22mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:USP22在人早孕期母-胎界面表达,并参与了正常早孕期绒毛滋养细胞侵袭的调控和正常妊娠的维持。母-胎界面USP22表达下降可能是导致自然流产发生的原因之一。     

绒毛滋养细胞染色体分析及临床应用

目的建立绒毛滋养细胞染色体核型分析方法,用于探讨早孕期自然流产的病因。方法通过体外细胞培养获取较多的绒毛滋养细胞中期分裂相,制备染色体片进行核型分析,观察早孕期流产绒毛滋养细胞染色体畸形的发生率。结果成功建立了滋养细胞染色体核型分析方法,58．3％（21／36）的早孕期自然流产患者滋养细胞染色体异常。结论开展流产绒毛滋养细胞染色体核型分析,对于明确早孕期自然流产病因具有重要的临床价值。     

MMP-25在早孕绒毛和蜕膜中的表达及意义的研究

目的研究基质金属蛋白酶-25 (matrix metalloproteinase-25，MMP-25)在正常早期妊娠和自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达特点，探讨其在胚胎植入中的作用及其与自然流产的关系。方法采用半定量RT-PCR和免疫组化法检测60例正常早期妊娠和40例自然流产患者绒毛及蜕膜组织中MMP-25mRNA及蛋白的表达。结果① MMP-25mRNA在正常早期妊娠的绒毛及蜕膜组织中均有表达，且绒毛组织中MMP-25mRNA表达水平随妊娠周数的增加逐渐上升，各孕周组间相比差异有统计学意义(P＜0.05)。自然流产组绒毛及蜕膜组织中MMP-25mRNA的表达明显低于正常妊娠组(P＜0.05)。② 正常妊娠组的绒毛组织中，MMP-25主要定位于细胞滋养细胞和合体滋养细胞，并且随妊娠周数增加表达逐渐增强，与RT-PCR结果吻合；自然流产组仅在合体滋养细胞中有表达，两组平均光密度分别为0.21±0.02和0.13±0.04，差异有统计学意义(P＜0.05)。蜕膜组织中MMP-25主要在腺上皮细胞表达，自然流产组的表达微弱，两组平均光密度分别为0.25±0.13和0.21±0.12，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论MMP-25表达变化与滋养细胞浸润能力相吻合，且蜕膜组织中呈阳性表达，推测其参与胚胎植入及胎盘形成过程中滋养细胞浸润活性调控及子宫内膜组织重构；自然流产患者MMP-25表达水平降低，造成滋养细胞浸润能力下降，可能与自然流产的发生有关。     

早孕母胎界面固有模式识别受体NOD1/NOD2的表达

【目的】 明确早期妊娠母胎界面中固有模式识别受体NOD1/NOD2的表达情况?【方法】 分别用免疫组织化学法及Real-Time PCR法检测12例早孕期绒毛及蜕膜组织中NOD1/NOD2表达?【结果】免疫组织化学结果显示绒毛组织中NOD1/NOD2主要定位于绒毛滋养细胞胞质中,蜕膜组织也检测到NOD1/NOD2分子的表达?在mRNA水平上,绒毛组织中NOD1/NOD2的表达量高于蜕膜基质细胞(DSC),分别为P = 0.03和P = 0.009;DSC中NOD1的表达量高于NOD2,P = 0.029,差异具有显著性?绒毛组织中NOD2的表达高于NOD1,差异无统计学意义(P > 0.05)?【结论】 NOD1/NOD2在早孕期母胎界面中绒毛组织有表达,可能参与胚泡的着床?     

自然流产病例的绒毛与蜕膜细胞增殖和细胞凋亡的研究

目的　从细胞增殖与细胞凋亡的角度探讨自然流产的发生机制。方法　对 30例正常早孕吸宫流产病例和 30例自然流产病例的绒毛与蜕膜组织进行研究。常规光镜观察细胞形态学变化 ;免疫组织化学S P法检测增殖细胞核抗原 (PCNA)在细胞中的表达 ;用DNA缺口原位未端标记技术 (TUNEL)检测细胞凋亡 ;免疫组化S P法检测bcl 2 bax基因蛋白表达率比值。结果　自然流产绒毛组织形态学结构均出现程度不同的退行性改变 ,绒毛的细胞滋养细胞及蜕膜中增殖指数 (PI)较正常早孕时明显减少 (P <0 0 1) ,而合体滋养细胞中从未发生过增殖 ,PI为 0 ;与此相反自然流产绒毛的细胞滋养细胞、合体滋养细胞及蜕膜中凋亡指数 (AI)较正常早孕时明显增多 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,同时 ,早孕流产的绒毛及蜕膜中促 /抑凋亡基因bcl 2 bax表达率的比值也较正常早孕时下降 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,结果与细胞凋亡的发生一致。结论　细胞增殖和凋亡可能在孕卵发育过程中起着重要作用 ,绒毛和蜕膜组织中大量的细胞凋亡是其形态学退变的根本 ,并进而阻碍了孕卵的发育。     

骨桥蛋白在母胎界面中表达的研究

目的 通过检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在正常早、中、晚孕期绒毛及蜕膜组织中的定位及表达情况来探讨其在妊娠期的可能作用.方法 分别采用免疫组化染色法(SP法)及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测早、中、晚孕期绒毛及蜕膜中OPN的表达.结果 OPN在正常早、中、晚孕期绒毛及蜕膜中均有表达,其主要定位于细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞及蜕膜细胞的胞膜和胞质中,此外在绒毛间质及血管中亦呈阳性表达.OPN mRNA及其蛋白表达水平的比较,在绒毛组织中,早孕期低于中孕期(P<0.05),中孕期低于晚孕期(P<0.05);蜕膜组织中,早孕期的表达量最高,与中、晚孕期比较差异均有统计学意义(均P<0.05),而在中、晚孕期组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 在胚胎发育进程中.绒毛中OPN的表达量随孕周增加而增加,而蜕膜中以早孕期表达最强,推测它在孕早期可能更多是参与调节侵袭作用,而在中晚孕期可能更多的是维持免疫调节作用.     

米非司酮对人早孕期绒毛间质Hofbauer细胞数的影响

摘要]目的：通过对比观察米非司酮对人早孕期绒毛间质中Hofbauer细胞数的影响,探讨米非司酮终孕的分子免疫机制。方法：采用免疫组化法检测20例米非司酮药流终孕的早孕期绒毛间质中的Hofbauer细胞数量。20例人流终孕的正常早孕期绒毛为对照组。结果：米非司酮药流组绒毛间质中的Hofbauer细胞数量较人流对照组明显减少（P<0.01）,其单位面积下Hofbauer细胞数（ ±S）分别为(4.08±1.99, 11.03±4.74)。结论：米非司酮可明显降低人早孕期绒毛间质中Hofbauer细胞数,并可能抑制了Hofbauer细胞的免疫调节功能,进而不利于胚胎的存活。 [关键词] 米非司酮 绒毛间质 Hofbauer细胞     

妊娠高血压综合征胎盘细胞凋亡的研究

目的:观察妊娠高血压综合征(PIH)患者胎盘细胞凋亡的情况。方法:采用DNA缺口原位标记Tunels’技术,测定30例PIH患者和24例正常妊娠胎盘不同部位细胞凋亡指数,并以电镜的超微结构来证实。结果:PIH组胎盘绒毛滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜细胞凋亡指数分别为(5.46±2.60)%(、7.48±3.90)%(、5.73±2.89)%,对照组分别为(3.95±1.75)%(、5.42±1.96)%(、4.08±1.99)%,两组相比差异均有统计学意义(P<0.01);电镜显示PIH患者胎盘绒毛滋养细胞与合体滋养细胞均有不同程度的异常形态变化。结论:细胞凋亡是PIH形成的重要因素之一,是影响胎盘功能的直接原因。     

早期自然流产患者绒毛滋养细胞中CXCL14的表达及其临床意义

目的研究正常早孕妇女和早期自然流产妇女之间绒毛滋养细胞中CXCL14的表达情况,探讨其表达的临床意义。方法选取33例正常早孕妇女绒毛组织和37例早期自然流产妇女绒毛组织,HE染色后光镜下观察两组绒毛组织的形态学变化;采用免疫组化SP三步法检测两组绒毛滋养细胞中CXCL14的表达。结果HE染色下两组绒毛滋养细胞形态对比,见早期自然流产组绒毛组织滋养细胞层变薄、滋养细胞变性甚至坏死、滋养细胞嗜酸性增强、绒毛间质水肿坏死;免疫组化示正常早孕组绒毛滋养细胞CXCL14的表达量为0.07±0.05,自然流产组绒毛滋养细胞CXCL14的表达量为0.12±0.02,两组比较差异具有统计学意义（P＜0.01）;首次流产组CXCL14表达量0.116±0.067,多次流产组CXCL14表达量0.086±0.127,两组比较差异无统计学意义（P＞0.01）。结论早期自然流产绒毛滋养细胞中CXCL14表达升高,可能在自然流产的发生中起着重要作用。     

妊娠滋养细胞疾病组织中端粒酶逆转录酶表达的研究

目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)在妊娠滋养细胞疾病中的表达及其临床意义。方法采用兔抗人端粒酶逆转录酶抗体,利用免疫组织化学方法检测29例妊娠滋养细胞肿瘤、18例葡萄胎和20例正常早孕绒毛组织中hTERT的表达,结合Leica Qwin图像分析系统对hTERT阳性细胞进行灰度分析。结果hTERT表达定位于细胞质。hTERT阳性细胞平均灰度值在妊娠滋养细胞肿瘤、葡萄胎和正常早孕绒毛组织中分别为123.31±11.93、99.00±11.21和102.55±16.35。hTERT在妊娠滋养细胞肿瘤中的表达明显高于葡萄胎和早孕绒毛组织,差异有显著性(P<0.01)。结论端粒酶的活化在妊娠滋养细胞肿瘤形成中可能起重要作用,端粒酶活性的检测可能是预测葡萄胎预后的重要指标。     

环孢素A对正常人早孕滋养层细胞IL-10和IFN-γ分泌的影响

目的探讨环孢素A(CsA)在体外对早孕期滋养细胞产生白细胞介素10(IL-10)和干扰素Y(IFN-γ)的影响。方法采用酶消化法分离绒毛滋养细胞，加入不同浓度的CsA进行体外培养。计算机图像分析系统及半定量逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测滋养细胞上IL-10和IFN-γ蛋白及mRNA的表达。结果CsA在0．1umol／L、1umol／L时较对照组对滋养细胞的IL-10的蛋白分泌和mRNA表达均有明显促进作用(P＜0．05)；不同浓度的CsA对IFN-γ蛋白分泌和mRNA表达均无明显作用(P＞0．05)。结论CsA在合适浓度范围内对滋养细胞的IL-10、IFN-γ分泌有良性调控作用。     

米非司酮药物流产阴道出血原因探讨

目的:探讨米非司酮药物流产阴道出血原因。方法:对30例米非司酮药物流产(米非司酮组)及30例正常早孕吸宫流产(正常对照组)的早孕绒毛及蜕膜组织应用流式细胞定性定量分析技术进行DNA分析,应用光镜对组织细胞形态学进行观察,并随机抽取6例米非司酮药物流产及2例人工吸宫流产的绒毛及蜕膜组织应用透射电镜进行细胞超微结构观察。结果:米非司酮组绒毛蜕膜细胞形态学显示凋亡改变,且绒毛形态学上的改变重于蜕膜。DNA直方图上均有亚二倍体峰(凋亡峰)出现,米非司酮组和对照组绒毛凋亡水平分别为9.38±1.84%、4.64±0.86%(P<0.01),蜕膜凋亡水平分别为7.64±1.81%、4.06±1.49%(P<0.01)。绒毛滋养细胞增殖指数分别为30.84±7.19%、31.02±5.82%(P>0.05),蜕膜增殖指数分别为23.87±2.50%、21.02±2.57%(P>0.05)。米非司酮组绒毛凋亡水平高于蜕膜,差异有显著性(P<0.05)。结论:米非司酮可诱导和促使早孕绒毛蜕膜组织发生细胞凋亡,且米非司酮对绒毛细胞凋亡的影响大于蜕膜,而蜕膜凋亡的低水平且不彻底性正是米非司酮药物流产不全及药流后阴道出血时间长的原因所在。     

TGF-β/Smads信号通路与滋养细胞的恶性侵袭

在人类胚胎植入过程中,滋养细胞对子宫内膜组织的有限侵袭是受严格精细调控的,其过度的侵入与绒癌的形成有关[1].研究表明,体内多种细胞因子对滋养细胞的侵入具有调节作用.如自分泌和旁分泌的TGF、TNF-α、IGF、EGF以及丝裂原等均能通过细胞内某些信号通路调控滋养细胞MMP、uPA等侵袭相关蛋白酶的表达,从而调节滋养细胞的侵袭作用[2-4].转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)是目前研究最多的参与滋养细胞侵入调节的细胞因子.研究发现,胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞、细胞滋养细胞及绒毛的间质滋养细胞、蜕膜腺体细胞和间质细胞有TGF-β1表达,说明TGF-β1可能主要由以上几种细胞合成并分泌[5,6].     

米非司酮促进早孕绒毛及蜕膜细胞凋亡的研究

目的探讨绒毛及蜕膜细胞凋亡及细胞周期动力学的变化与药物终止早孕的关系.方法对米非司酮配伍米索前列醇终止早孕16例(米非司酮组)、负压吸引终止早孕16例(对照组)的绒毛与蜕膜,采用流式细胞技术进行DNA和细胞周期动力学分析.结果米非司酮组和对照组绒毛凋亡水平分别为(8.52±4.12)%、(4.24±3.93)%(P＜0.05),蜕膜凋亡水平分别为(14.83±8.70)%、(6.27±5.80)%(P＜0.01).米非司酮组绒毛滋养层G0、G1期细胞明显增加(P＜0.01),G2、M期细胞明显减少(P＜0.01),细胞增生指数明显降低(P＜0.01).结论米非司酮通过诱导绒毛和蜕膜细胞凋亡终止早孕,可能机制为阻止滋养层细胞从G0、G1期向S期转化,从而使其增生与凋亡失衡.     

TGF-β1及TGF-β3在妊娠期高血压疾病中的作用

目的探讨转化生长因子-β1,β3(TGF-β1,TGF-β3)在妊娠期高血压疾病发生和发展中的作用。方法60例为妊娠期高血压疾病患者(妊娠期高血压患者20例,轻度子痫前期患者20例,重度子痫前期患者20例),采用免疫组织化学方法检测分娩后胎盘滋养细胞及蜕膜细胞TGF-β3和TGF-β1的表达,20例正常妊娠孕妇为对照组。取重度子痫前期患者剖宫产后分娩胎盘绒毛体外培养24h,然后分别收集培养后1,4,12,24h上清液,采用ELISA法检测胎盘滋养细胞TGF-β1和TGF-β3的分泌。结果妊娠期高血压疾病组绒毛滋养层细胞和蜕膜细胞TGF-β3阳性表达率和表达程度明显高于对照组,TGF-β1阳性表达率和表达程度明显高于对照组,差异均有显著性(P<0.05)。重度子痫前期组分娩后胎盘绒毛体外培养24h后,于1,4,12,24h分别收集上清液中TGF-β1和TGF-β3的分泌均显著高于正常孕妇组,差异有显著性(P<0.05)。结论妊娠期高血压疾病患者胎盘绒毛滋养层细胞的TGF-β3,TGF-β1表达异常在妊娠期高血压疾病的发生发展过程中起重要作用。     

米非司酮对早孕后期蜕膜及绒毛孕激素受体及细胞凋亡的影响

目的　探讨米非司酮对早孕后期蜕膜及绒毛孕激素受体 (PR)及细胞凋亡的影响。方法　取孕 7～12周人工流产 (对照组 )、顿服米非司酮 2 0 0mg后 2 4h流产及服药 4 8h后流产各 2 0例患者的蜕膜及绒毛 ,应用免疫组织化学方法 (ABC法 )测定PR含量 ;应用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法测定比较细胞凋亡比率。结果　蜕膜组织PRH 积分对照组为 170 .33± 4 5 .71,服药 2 4h组为 16 3.5 5± 2 7.36 ,服药 4 8h组为 2 0 5 .2 9±34.0 4 ,后二组与对照组比较有显著性差异。对照组绒毛组织PR全部为阴性 ,服药 2 4h组 1例弱阳性 ,服药 4 8h组3例阳性 ;蜕膜细胞凋亡率对照组为 (0 .2 0 6± 0 .175 ) ,服药 2 4h组为 (0 .2 35± 0 .189) ,服药 4 8h组为 (0 .391± 0 .2 0 3) ,后者与对照组比较有显著性差异。绒毛细胞凋亡率对照组为 (0 .0 5 2± 0 .0 34) ,服药 2 4h组为 (0 .0 94± 0 .110 ) ,服药 4 8h组为 (0 .10 2± 0 .12 5 ) ,三组间差异无统计学意义。结论　米非司酮可以使蜕膜及绒毛中PR及细胞凋亡率升高 ,服药 4 8h比 2 4h作用更显著 ,其流产机制也可能作用于绒毛。     

AOPP对ECV304细胞表达SDF-1α的影响及其可能的机制

目的　观察晚期氧化蛋白产物（advanced oxidation protein product,AOPP）对内皮细胞表达基质细胞衍生因子-1α（stromal cell derived factor-1 α,SDF-1α）的影响,并探讨其作用机制。 　方法　　ECV304细胞分别经0, 50, 100, 200 μmol/L AOPP处理后,用RT-PCR法检测其SDF-1α mRNA的表达,观察AOPP对ECV304细胞的SDF-1α表达的影响。ECV304细胞先经NF-κB通路特异性阻断剂BAY11-7082处理,再经AOPP处理,用RT-PCR法检测其SDF-1α mRNA的表达,观察BAY11-7082对AOPP促ECV304 细胞SDF-1α mRNA 表达作用的影响。　结果　　AOPP促进ECV304 细胞SDF-1α mRNA 表达,并且随AOPP浓度的升高,SDF-1α mRNA 的表达增加。对照组、AOPP 50 μmol/L组、AOPP 100 μmol/L组及AOPP 200 μmol/L组SDF-1α mRNA/GAPDH mRNA值分别为0.034±0.005、0.109±0.019、0.226±0.037及0.322±0.043,组间比较差异均有显著性意义,P<0.05。BAY11-7082抑制AOPP促ECV304细胞 SDF-1α mRNA 表达,两组细胞SDF-1α mRNA/GAPDH mRNA值分别为0.256±0.035和0.322±0.043,P<0.05。　结论　　AOPP可上调ECV304细胞表达SDF-1α,NF-κB通路可能是介导这一作用的重要途径之一。