大鼠视觉发育可塑性关键期终止前后视皮层AMPA受体电流的发育变化

目的为了探索视觉发育可塑性关键期终止机制,对可塑性关键期终止前后,正常大鼠视皮层α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionicacid,AMPA)受体介导的兴奋性突触后电流进行了研究。方法采用脑片膜片钳全细胞记录技术,记录生后3~8周正常大鼠视皮层AMPA受体介导的兴奋性突触后电流。结果在大鼠视皮层II-IV层,95例神经元形成全细胞记录,其中记录到AMPA受体电流43例;生后3~8周,视皮层神经元的输入阻抗、静息膜电位差异无统计学意义;生后3~8周,AMPA受体电流的潜伏期、上升时间、下降时间及半波宽差异无统计学意义;生后3~6周AMPA受体电流的幅值随发育逐渐增加,6~8周幅值变化不显著。结论视觉发育可塑性关键期高峰到成年阶段,大鼠视皮层神经元被动膜学特性无明显变化;AM-PA受体电流幅值随发育逐渐增加,关键期终止时达顶峰;突触后AMPA受体的功能变化可能参与了视觉发育可塑性关键期的终止过程。     

单眼形觉剥夺大鼠视皮层α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4-丙酸受体GluR2的表达及其变化对微小兴奋性突触后电流的影响

目的 观察单眼形觉剥夺大鼠视皮层中α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4-丙酸(alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic add,AMPA)受体的表达变化及其对突触后电流mEPSCs的影响,为研究其在视觉发育可塑性中的作用及机制做准备.方法 实验研究.取14 d龄健康Wistar大鼠40只,随机分为2组(Ⅰ、Ⅱ),每组20只,再随机分成A、B两组,每组10只.对实验组(Ⅰ组)行单眼形觉剥夺,正常饲养1周后对Ⅰ A组及ⅡA组常规心脏灌注、固定、切取视皮层,对组织切片行免疫组织化学法显色,显微镜观察AMPA受体GluR2的表达情况并进行图像分析,同时对Ⅰ B组及ⅡB组应用脑片膜片钳全细胞记录技术,获得大鼠视皮层神经元的细胞内微电极记录,记录突触后电流mEPSCs的变化.结果 AMPA受体GluR2在正常发育组视皮层中的表达较单眼形觉剥夺组视皮层中的表达水平高,差异有统计学意义(P<0.01).脑片膜片钳记录结果显示:AMPA受体介导的初级视皮层2/3层的锥体神经元的微小突触后兴奋性电流(mEPSCs)幅值增高.结论 大鼠出生后视皮层AMPA受体GluR2的水平受视觉刺激而发生变化,且其变化影响微小突触后兴奋性电流,提示其对出生后大鼠的视觉发育有着重要的生理作用.     

双眼形觉剥夺对成年大鼠视皮层兴奋性递质受体表达和分布的影响

目的 探索大鼠视皮层中兴奋性神经递质受体表达和分布的发育特征以及双眼形觉剥夺(binocular form deprivation,BFD)对成年大鼠视皮层内兴奋性递质受体亚型表达和分布的影响.方法 采用免疫组织化学染色和免疫印迹技术,分别对生后1～9周正常大鼠和自生后7周开始BFD 14 d后模型大鼠的视皮层中兴奋性递质受体亚型进行标记和检测.结果 N-甲基-D-天冬氨酸(N-mehyl-D-aspartate,NMDA)受体亚单位NR2A(NMDA-NR2A)在大鼠未睁眼时少量表达,可塑性关键期高峰时最明显;之后表达减少,至成年期维持一定水平,BFD 14 d可以造成成年大鼠视皮层NM-DA-NR2A阳性表达减弱.NMDA-NR2B在未睁眼时表达较明显,可塑性关键期高峰时表达最多;之后表达下降稳定在成年期低水平,BFD 14 d可造成其在成年大鼠视皮层中表达增强.α-氨基-3-羟基-5-甲基4-异唑丙酸受体GluR-1亚基平均分布在视皮层各层,在出生后少量表达,之后随年龄增长逐渐增强,其表达在可塑性关键期终止时达到高峰并在成年期维持较高水平,BFD14 d对其在成年大鼠视皮层表达没有影响.结论 由BFD诱导的NMDA-NR2A或NMDA-NR2B表达变化可能参与了成年大鼠视皮层可塑性再激活机制.     

γ-氨基丁酸A受体α1亚单位在正常发育大鼠视皮层中的表达

目的观察大鼠视皮层γ-氨基丁酸A受体（GABAAR）功能亚单位GABAARα1的表达随发育发生的量的变化。方法将45只健康纯系新生Wistar大鼠按出生后年龄以随机数字表法分为9组,每组5只,分别于出生后第0、7、14、21、28、35、45、60、90天用质量分数4%多聚甲醛经左心室穿刺至升主动脉灌注固定后处死。应用免疫组织化学染色和图像分析技术分析GABAARα1在出生后不同天龄Wistar大鼠视皮层的表达情况。结果苏木精-伊红染色显示,Wistar大鼠视皮层神经元分6层,各层神经元排列整齐。免疫组织化学染色结果显示,GABAARα1阳性反应产物呈棕黄色颗粒状,染色部位主要在神经元细胞膜、树突或轴突,其中视皮层第Ⅱ/Ⅲ层细胞染色最密集。图像分析结果提示,GABAARα1在出生时的大鼠视皮层中即已存在,但表达量很少,大鼠睁眼前表达量上升缓慢,睁眼后迅速上升,在出生时GABAARα1的吸光度（A）值为4.79±1.51,至35d峰值达231.52±21.65,差异有统计学意义（P〈0.01）,此后维持高水平至出生后90d,为231.52±21.65,与出生时比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论大鼠视皮层中GABAARα1表达量的发育性变化与视觉发育可塑性关键期的起始和终止在时间上具有一定的同步性,提示GABAARα1表达的发育性变化可能是视觉可塑性调节的一个重要分子基础。     

视觉发育可塑性关键期终止前后大鼠视皮层NR2A/NR2B比率的表达

目的在视觉发育可塑性关键期终止前后,观察大鼠视皮层内NR2A/NR2B比率的发育性变化。方法健康SPF级LongEvans大鼠15只,雌雄不限,采用Western blot法观察出生后3、4、5、6、7周正常大鼠视皮层中NR2A和NR2B的蛋白表达量,分析NR2A/NR2B随着大鼠视皮层发育表达的变化。结果 Western blot检测显示,生后3～7周正常大鼠视皮层中NR2A蛋白的表达量逐渐增加,差异有统计学意义（F=156.263,P=0.008）,生后4、5、6、7周组大鼠视皮层中NR2A的积分光密度（IOD）值明显高于生后3周组大鼠,差异均有统计学意义（P〈0.05）。可塑性关键期终止前后,正常大鼠视皮层中NR2B蛋白的表达量逐渐降低（F=73.340,P=0.007）,生后6～7周趋于稳定。可塑性关键期终止前后,大鼠视皮层中NR2A/NR2B比率随着大鼠视皮层的发育逐渐增加,差异有统计学意义（F=113.031,P=0.003）。结论在可塑性关键期终止前后,NR2A/NR2B比率的变化参与了视皮层可塑性终止的过程。     

发育对大鼠视皮层第2和3层锥体神经元AMPA受体介导的自发兴奋性突触后电流影响的研究

目的 研究发育过程中大鼠视皮层第2、3层锥体神经元的自发兴奋性突触后电流(sEPSC)变化,探讨生后早期自发性突触活动情况,以及视觉经验在视皮层发育过程中对神经元突触的修饰作用.方法 实验研究.应用红外微分干涉相差显微镜(IR-DIC)结合电耦合式摄像机(CCDCamera)可视法膜片钳全细胞记录生后2～7 d、8～14 d、15～21 d、22～28 d各组sEPSC变化,同时于电极内液中加入0.3%荧光黄对所记录细胞进行染色观察形态学改变.计量资料以均数±标准误表示,经方差齐性检验后,多组样本比较采用单因素方差分析,并进行样本均数间的多重比较.结果 4个组视皮层神经元sEPSC幅值分别为(14.13±0.73)、(15.01±0.62)、(19.87±0.75)、(22.09±1.14)pA,随发育逐渐升高(F=20.69,P＜0.01),但2～7 d组与8～14 d组差异无统计学意义(P＞0.05),而睁眼前8～14 d组较睁眼后15～21 d组幅值比较差异有统计学意义(P＜0.01).4个组视皮层神经元sEPSC频率分别为(1.35±0.05)、(1.33±0.12)、(2.26±0.15)、(2.85±0.12)Hz,随发育逐渐提高(F=87.46,P＜0.01),同样睁眼前8～14 d组较睁眼后15～21 d组频率比较差异有统计学意义(P＜0.01).视皮层第2、3层神经元胞体及突起以及生物电学特性随发育逐渐成熟.结论 视觉经验对于视皮层第2、3层神经元及突触发育成熟起了关键性作用.发育早期视皮层第2、3层有一定的α-氨基-3-羟基-5甲基-4-异号声(噁)唑丙酸(AMPA)受体功能表达,突触并非完全处于静息状态.     

双眼形觉剥夺对大鼠视皮层神经元γ-氨基丁酸电流的影响

目的探讨双眼形觉剥夺对大鼠视觉发育可塑性关键期内视皮层神经元γ氨基丁酸电流的影响。方法采用脑片膜片钳全细胞记录技术,记录出生后14、21和28d正常、双眼形觉剥夺和去除剥夺大鼠视皮层神经元兴奋性突触后电流。然后在人工脑脊液中同时加入D,L2氨基5磷酸基戊酸50μmol/L和氰基7硝基喹啉2,3二酮20μmol/L,分离出γ氨基丁酸受体介导的成分电流,分析其电学特性。结果随着周龄增加,正常组大鼠视皮层神经元的抑制性突触后电流的下降时间和峰值显著变长和增大(P<005);而双眼形觉剥夺组内无明显变化(P>005);去除剥夺后1周,大鼠视皮层神经元抑制性突触后电流的下降时间和峰值增大(与双眼形觉剥夺组生后4周比较,P<005)。各组内,上升时间无明显变化(P>005)。结论随着视觉发育,正常大鼠视皮层神经元的γ氨基丁酸受体介导的抑制性突触传递增强,双眼形觉剥夺抑制这一变化,恢复视觉输入后可以逆转。(中华眼科杂志,2005,413740)     

大鼠视觉可塑性关键期终止相关基因的筛选

目的筛选视觉可塑性关键期终止相关基因,探讨视觉可塑性关键期终止的分子机制。方法采用暗饲养及暗饲养后加光照刺激动物模型,应用抑制性消减杂交技术构建大鼠视皮层与视觉可塑性关键期终止相关的cDNA文库。并通过PCR筛选、反向Northem杂交验证、测序及同源性检索对差异表达基因进行分析。结果成功构建了高消减效率的大鼠视皮层与视觉可塑性关键期终止相关的cDNA文库,经筛选、测序及同源性分析,得到14个视觉可塑性关键期终止时视皮层上调表达基因的片段。其中13个为已知基因,除B—Tubulin、Mbp、Cyclophilin基因有文献报道跟可塑性有关外,其余基因与视觉可塑性的关系以往少有报道。结论通过大鼠视皮层与视觉可塑性关键期终止相关的cDNA文库的建立,筛选出一批与视觉可塑性关键期终止相关的候选基因,为进一步阐明视觉可塑性关键期终止的分子机制提供了重要的基础。     

Long Evans大鼠视觉可塑性关键期终止前后视皮层tPA表达及活性的研究

目的研究Long Evans大鼠出生后视皮层组织型纤溶酶原激活剂（tPA）分布、表达、活性的变化及与视皮层可塑性关键期终止的关系。方法Long Evans大鼠131只按出生后周龄分为1、3、5、7、14周共5组，免疫荧光组织化学法定位检测tPA的分布，免疫印迹定量法检测视皮层总蛋白中tPA的表达，发色底物酶活性分析法测定视皮层tPA的活性。结果除1周组外，各组视皮层Ⅱ-Ⅲ层、Ⅳ层tPA免疫荧光呈阳性，主要分布在Ⅱ-Ⅲ层（P〈0．01）。Ⅱ-Ⅲ层以5周组tPA阳性细胞密度最高（P〈0．01），14周组最低（P〈0．01）；Ⅳ层以3周组tPA阳性细胞密度最高，14周组最低（P〈0．01）。除1周组外，各组视皮层总蛋白中tPA均有表达，5周组最高（P〈0．05），14周组最低（P〈0．05）。视皮层tPA活性3周组最低（P〈0．01），5周组最高（P〈0．01）。结论tPA参与视皮层可塑性关键期的“终止”，可能是Ⅱ-Ⅲ层、Ⅳ层之间突触可塑性存在异质性的结构基础之一。     

成年及幼年Long-evans大鼠视皮层HSP8基因的表达差异

目的:观察热休克蛋白8(heat shock protein 8,HSP8)基因在幼年和成年Long-evans大鼠视皮层中的表达水平,探讨其在视觉可塑性关键期中的作用。方法:采用半定量RT-PCR方法,分析处于视觉可塑性关键期内的幼年Long-evans大鼠和处于视觉可塑性关键期后的成年Long-evans大鼠视皮层中HSP8基因的表达水平。结果:幼年大鼠和成年大鼠视皮层间HSP8mRNA表达量有显著性差异,成年大鼠视皮层中HSP8/G3PDH为0.68±0.03,幼年大鼠视皮层中HSP8/G3PDH为0.14±0.06,HSP8mRNA在成年大鼠视皮层中表达水平显著高于幼年大鼠(P<0.05)。结论:HSP8基因在视觉可塑性关键期后的成年大鼠视皮层中呈高水平表达,是视觉可塑性关键期终止相关的候选基因。     

Changes in organ of vision in proliferative diseases of hematopoietic system in children

Leukemias and lymphomas are the most common neoplasms of hematopoietic system in children. The aim of the study was to determine ophthalmological signs in these disaeses referring to available literature.     

巨噬细胞内的炎症小体在眼内炎发生中的作用机制探讨

眼内炎是一种非常严重的致盲性疾病,一旦发生将造成急性视力下降甚至眼球萎缩.巨噬细胞是炎症反应的中心环节,炎症小体(inflammasome)是巨噬细胞中参与免疫反应的重要组成部分.鉴于巨噬细胞在非特异性免疫反应的诱发调节中起关键作用,如果明确眼内炎发生早期的巨噬细胞相关的抗感染免疫机制,可能为眼内炎的诊治开辟一条新的途径.     

近十年国内眼科领域获得专利项目的分析

目的汇总分析近十年国内眼科领域发明型和实用新型专利的亚领域、申请人及地域分布等特点。 方法在IncoPat科技创新情报平台(简称"ncoPat"，http：//www.incopat.com)，分别以国际专利分类表中A61B3、A61B5/0496、A61B8/10、A61F9、A61H5/00、A61H35/02及A61P27/02-A61P27/14为检索分类号，以眼科亚领域涉及眼科检查或色觉异常、眼睑或眼表、屈光或斜弱视、白内障、青光眼、眼底病及神经眼科或葡萄膜炎或眼眶病方面的关键词作为检索关键词，检索2010年1月1日至2020年7月22日眼科领域的发明型和实用新型专利。逐项记录近十年眼科领域发明型和实用新型专利各年度的数量、各眼科亚领域的数量及占比、发明型专利数量排名前十位申请人及其发明型和实用新型专利的数量以及中国各区域发明型和实用新型专利的数量等指标。将眼科领域各年度的发明型和实用新型专利的数量，以文字、柱形图及折线图的形式进行描述。将各眼科亚领域发明型和实用新型专利数量占眼科领域的发明型和实用新型专利数量的百分比，以文字和饼图的形式进行描述。将眼科领域申请人按发明数量以降序方式排列，取排名前十位的申请人及其发明型和实用新型专利的数量，采用文字和柱形图的形式进行描述。将发明型和实用新型专利的申请人地域分布采用文字和表格的形式进行描述。 结果十年间，国内眼科领域的发明型和实用新型专利共有36 540件。其中，发明型专利24 488件(已授权专利7058件)，实用新型专利12 052件。2010年至2014年间，发明型和实用新型专利数量平稳增长；2014年至2019年间，发明型和实用新型专利数量快速增长，特别是2019年较2018年的增长速度尤为明显。排名前三位的亚领域分别为眼科检查或色觉异常占31%、眼睑或眼表占19%及眼底病占15%。从申请人看，发明数量排名前十位的均为企业，其中8家企业为国际企业，2家为国内企业。其中，排名前3位的企业分别为美国的直观外科手术操作公司有346件发明型专利，美国的诺华股份有限公司有255件发明型专利，而日本的佳能株式会社则有237件发明型专利和2件实用新型专利；2家国内企业分别为深圳市精锋医疗科技有限公司有116件发明型专利和14件实用新型专利，成都博恩思医学机器人有限公司则有109件发明型专利和67件实用新型专利。从申请人地域分布来看，首先华东地区申请的数量最多为13 576件，大幅领先于其他地区；其次为华南地区有4321件；再次为华北地区有3697件；西北地区有953件。 结论需提升专利申请质量；关注眼科热点领域和技术空白点；加强专利保护意识，完善知识产权管理制度；西北地区有待加大投入、提高科研人员的积极性和创新性。     

深圳早产儿视网膜病变筛查结果分析

目的 了解深圳地区三间医院早产儿视网膜病变（ROP）发病情况。方法 2004年 1月至2007年1月，对深圳市人民医院、深圳市妇幼保健院和深圳市眼科医院三间医院出生体重<2000g的早产儿或根据儿科医生的要求超过以上标准但患有严重疾病的早产儿共1372例2744只眼采用双目间接检眼镜和（或）广角数码儿童视网膜成像系统（RetCamII）进行 ROP筛查，发现阈值或阈值前期Ⅰ型ROP及时进行冷冻或激光 光 凝治疗。所有患儿随访至视网膜完全血管化或病变退化。结果 所有早产儿中218例436只眼发生ROP，发病率15.9％，其中阈值或阈值前期Ⅰ型ROP190只眼，发病率6.9％；4~5期ROP 16只眼，发病率0.6%；未到阈值或阈值前期Ⅰ型ROP 230只眼，发病率8.4 %。出生体重≤1500 g者435例870只眼，占所有筛查对象的31.7％；236只眼发生ROP，发病 率27.1%：其中阈值或阈值前期Ⅰ型ROP 126只眼，发病率14.5％；4~5期ROP10只眼，发病 率1.1%，未到阈值或阈值前期Ⅰ型ROP 100只眼，发病率11.5%。出生体重≤1250 g者274 只眼，占所有筛查对象的10％；108只眼发生ROP，发病率39.4%：其中阈值或阈值前期Ⅰ型 RO P 60只眼，发病率21.9%；4~5期ROP 4只眼，发病率1.4%；未到阈值或阈值前期Ⅰ型ROP 4 4 只眼，发病率16％。所有早产儿、出生体重≤1500g者和出生体重≤1250g者的RO P发病率（χ²=60.43，P<0.001）、阈值或阈 值前期Ⅰ型ROP发病率（χ²=46.82，P<0001）和未到阈值或阈值前期Ⅰ型ROP发病 率 （χ²=10.71，P=0.005）比较，差异均有统计学意义。结论 深圳地区三间医院早产儿ROP的总体发生率较 低，但需要治疗的阈值或阈值前期Ⅰ型重症ROP发病率高。出生体重是影响ROP发病 率的重要因素。     

Diagnosis of toxocariasis in uveitis in children

Seventeen children aged 2 to 13, suffering from uveitis of unknown etiology, were screened for chronic infections, toxocariasis included. Antibodies to Toxocara canis were detected in the blood of two children with negative results of tests for toxoplasmosis, tuberculosis, herpetic and cytomegaloviral infections. One of these two suffered from panuveitis, the other from granulomatous chorioretinitis. Both the clinical forms are characteristic of ocular toxocariasis.     

Calibration of measurements in vivo of fluorescein in the cornea

Quenching of fluorescence of fluorescein is not observed with broad field fluorophotometers. Fluorophotometric equipment which measures the fluorescence in a tiny spot has, however, been reported to underestimate the molarity of fluorescein in the rabbit corneal stroma by as much as a factor of two. In this experiment, quenching was measured in the rabbit cornea with two scanning fluorophotometers. The quenching was measured by four different techniques: (1) by elution of fluorescein, (2) by elution of albumin, (3) by polarization of fluorescence, and (4) by spectrofluorophotometry. It was estimated by all four methods that quenching in the living rabbit cornea with these instruments is approximately 20%. Taken together, the four experiments suggest that the quenching of fluorescence of fluorescein can be explained entirely on the basis of the interaction of fluorescein and albumin in the stroma.     

正视眼人群角膜不同范围的非球面性评价

目的初步探索正视眼人群角膜Q值的分布。方法对来我院健康体检的正视眼192人（384眼）进行裸眼远视力、电脑验光、裂隙灯、直接检眼镜和角膜地形图检测，并对结果进行统计学分析。结果本组人群角膜前表面曲率半径R为（7.80±0．23）mm。Q10值为=-0．083±0.098．Q15值为-0.119±0.097．Q20值为-0．149±0.104．Q25值为-0.200±0、107，Q30值为-0．262±0．104；角膜前表面Q值越近中央部越接近0，越靠近周边越向负值增加的方向变化。不同性别角膜不同范围平均Q值无明显差异性（P〉0．05）。Q25与Q30在不同年龄组之间差异有显著性（P〈0．05）．45岁以上组的Q25和Q30值与其他年龄组相比偏大，差别有显著性（P〈0．05）。Q30与角膜前表面曲率半径呈负相关（r=-0.115，P〈0．05）。各范围Q值均与年龄无明显相关性（P〉0．05）。结论正视眼人群角膜前表面中央接近于球形，越到周边越趋于平坦。