防感煎剂对H1N1病毒感染小鼠TNF-α、IL-6的影响

目的探讨防感煎剂对H1N1流感病毒感染小鼠TNF-α、IL-6的影响,进一步了解防感煎剂的疗效机理。方法选用清洁级ICR雄性小鼠96只,随机分为4组：正常对照组、模型对照组、防感煎剂组、达菲对照组。实验组予防感煎剂灌胃给药,达菲对照组予达菲灌胃给药,正常对照组和模型对照组则用生理盐水灌胃,在灌胃给药第3天开始用H1N1流感病毒液滴鼻造模,造模后的第1、5、9、13天每组随机处死6只小鼠,收集肺组织标本,用于H1N1病毒核酸提取,收集血清,用ELISA法检测肿瘤坏死因子a（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）含量。结果1、防感煎剂组小鼠一般状况优于模型组。2、防感煎剂组小鼠肺组织H1N1病毒含量低于模型组（P〈0．05）。3、防感煎剂组小鼠血清TNF-α、IL-6水平低于模型组（P〈0．01）。结论防感煎剂可抑制H1NI病毒复制,抑制细胞因子TNF-α、IL-6的表达,从而减轻由炎性介质过度释放引起的免疫病理损伤,由此推断防感煎剂可能通过调节免疫功能来控制感染、改善症状。     

酶联免疫斑点法检测甲型H1N1流感患者Th1/Th2细胞的变化

目的 通过酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测,探讨甲型H1N1流感患者Th1/Th2细胞的变化及其临床意义.方法 对40例H1N1患者、42例流感样患者及45例健康体检者采用ELISPOT技术检测Th1/Th2细胞,同时进行外周血中的白细胞、淋巴细胞及其亚群计数.结果 H1N1患者的白细胞、淋巴细胞、T细胞计数(包括T4、T8)与流感样患者及健康体检者比较明显偏低(P＜0.05);B细胞计数与健康体检者比较明显偏低(P＜0.05);而H1N1患者NK细胞与流感样患者、健康体检者比较,差异均无统计学意义(均P ＞0.05).H1N1组、流感样组和健康对照组中IFN-γ特异的ELISPOT检测SFC数量M值分别为23、36.5、43,H1N1组与流感样组、健康对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).H1N1组、流感样组和健康组中IL-4特异的ELISPOT检测SFC数量M值分别为36.5、27、23,H1N1组与健康对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);但与流感样组比较,差异无统计学意义(P ＞0.05).结论 H1N1感染可引起机体淋巴细胞及其亚群的数量发生异常改变,引起患者机体免疫系统的紊乱.通过ELISPOT技术可从单细胞水平明确CD4+T淋巴细胞亚群中的Th1和Th2细胞的异常改变.     

甲型H1N1流感患儿Th细胞亚群的动态变化及临床意义

目的检测甲型H1N1流感患儿Th细胞亚群的动态变化,探讨甲型H1N1流感的发病机制,并评价患儿的免疫状况及与疾病严重程度和预后的关系。方法总结19例甲型H1N1流感患儿Th细胞亚群动态变化,选择21例健康儿童作为健康对照组。采用流式细胞仪计数INF-γ＋细胞占CD3＋CD8-T细胞百分比（Th1%）和IL-4＋占CD3＋CD8-T细胞百分比（Th2%）,并计算Th1与Th2的比值。结果 19例甲型H1N1流感患儿中,存活15例（78.9%）,死亡4例（21.1%）。健康对照组、存活组和死亡组三组儿童性别、年龄无显著性差异;入院时,甲型H1N1流感患儿存活组和死亡组Th1%、Th2%和Th1/Th2分别为6.65%（0.62%～25.30%）vs.7.26%（4.66%～14.03%）、1.40%（0.31%～5.41%）vs.1.69%（1.52%～2.42%）、6.15%（2.0%～14.46%）和3.84%（3.03%～7.67%）,Th1%较健康对照组无明显改变,Th2%显著升高、Th1/Th2显著下降（P均〈0.01）;存活的甲型H1N1流感患儿Th1%逐渐升高,Th1/Th2比例有可逆性下降,最终升高;而同期死亡者Th1/Th2比例不可逆性下降,直至死亡,较存活组和健康组有显著性差异（P〈0.05）。结论甲型H1N1流感急性期为Th2细胞占优势型,存在免疫抑制;Th1/Th2的平衡可以影响机体的免疫状态,动态监测还可对疾病的程度和预后做出判断。     

防感颗粒治疗甲型H1N1流行性感冒的临床研究

[目的]探讨防感颗粒治疗甲型H1N1流感的临床疗效。[方法]95例甲型H1N1流感轻症患者随机分为中药治疗组和对照组,中药治疗组口服防感颗粒,对照组单纯西药治疗。[结果]中药治疗组总有效率为89.6%,对照组总有效率为85.1%。中药治疗组能缩短退热时间,减少咳嗽病程,头痛鼻塞肌肉酸痛等流感样症状缓解时间也明显减少。[结论]防感颗粒对甲型H1N1流感轻症治疗有良好效果,可以作为浙江省甲型H1N1流感轻症患者的治疗方案之一。     

防感颗粒治疗甲型H1N1流行性感冒的临床研究

[目的]探讨防感颗粒治疗甲型H1N1流感的临床疗效。[方法]95例甲型H1N1流感轻症患者随机分为中药治疗组和对照组,中药治疗组口服防感颗粒,对照组单纯西药治疗。[结果]中药治疗组总有效率为89.6%,对照组总有效率为85.1%。中药治疗组能缩短退热时间,减少咳嗽病程,头痛鼻塞肌肉酸痛等流感样症状缓解时间也明显减少。[结论]防感颗粒对甲型H1N1流感轻症治疗有良好效果,可以作为浙江省甲型H1N1流感轻症患者的治疗方案之一。     

Th1型/Th2型细胞因子对蜕膜细胞活性及其泌乳素分泌的影响

目的：研究Th1型／Th2型细胞因子对人孕早期蜕膜细胞活性及泌乳素（PRL）分泌的影响。方法：蜕膜细胞活性采用MTT法进行检测，蜕膜组织分泌PRL的活性采用放免法（RIA）进行分析测定。结果：Th1型细胞因子IFNγ低浓度时（1－10ng/ml)对蜕膜细胞活性及PRL分泌有促进作用（P＜0．05），高浓度时（100－1000ng/ml) 则有抑制作用（P＜0．01）。而Th2型细胞因子IL－4在一定浓蔗人（1－10ng/ml) 可明显促进蜕膜的上述功能（P＜0．01）。结论：Th1型／Th2型细胞因子可能是通过影响蜕膜细胞活性及PRL分泌而在早期妊娠中起重要的免疫调节作用。     

1型糖尿病患者Th1/Th2细胞亚群的研究

目的研究Th1/Th2细胞亚群分泌的不同细胞因子,探讨1型糖尿病患者体内Th1/Th2细胞亚群的变化。方法用放射免疫法(RIA)检测了48例1型糖尿病患者(7例合并有下肢血管病变)血清中Th1型细胞亚群分泌的细胞因子IFN-γ、TNF-α和Th2型细胞亚群分泌的细胞因子IL-4、IL-10的水平变化,19例健康志愿者做为对照。结果1型糖尿病患者血清中Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α的水平分别(63.30±14.3)ng/L和(65.03±24.98)Fmol/ml,显著高于正常对照组(29.48±11.98)ng/L和(23.66±13.51)Fmol/ml(P<0.01);Th2型细胞因子IL-4、IL-10的水平分别为(2.21±0.96)ng/L和(24.98±7.31)ng/L,明显低于正常对照组(5.37±1.10)ng/L和(62.87±5.97)ng/L(P<0.01);糖尿病并发下肢血管病患者Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α和Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平分别为(90.03±5.20)ng/L、(109.28±26.74)Fmol/ml和(0.55±0.22)ng/L、(12.12±2.39)ng/L,单纯糖尿病患者组四种细胞因子水平分别为(58.76±9.57)ng/L、(56.98±15.43)Fmol/ml和(2.49±0.72)ng/L、(27.18±5.30)ng/L,两组相比,四种细胞因子水平差异均有显著性(P<0.01)。结论1型糖尿病患者体内Th1/Th2细胞亚群发生了Th2→Th1的漂移改变,并与病情相关,为探讨该病的发病机制及病情监测提供了理论依据。     

咳喘颗粒剂对热型哮喘患儿外周血Th1/Th2细胞的影响

目的: 探讨咳喘颗粒剂对热型哮喘患儿外周血Th1/Th2细胞的作用。方法: 48例热型哮喘患儿随机分为颗粒组和常规组,各24例;常规组口服中药咳喘颗粒剂,3次/d,3 d为1个疗程,治疗2个疗程;常规组采用常规西药治疗,布地奈德粉吸入剂（100 μg/吸)和硫酸特布他林气雾剂(0.25 mg/喷),2次/d,治疗1周;另取20名健康儿童作为对照组。实时定量PCR检测各组外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中T细胞表达的T盒(T-box expressed in T cells,T-bet) mRNA和GATA连接蛋白3(GATA binding-3,GATA-3)mRNA的表达;ELISA法检测各组血浆IFN-γ和IL-4水平。结果： 颗粒组和常规组总有效率分别为95.83%、91.67%,差异无统计学意义(χ2=0.559,P>0.05)。治疗前,颗粒组和常规组GATA-3 mRNA和IL-4水平明显高于对照组(P 0.05),而T-bet mRNA/GATA-3 mRNA和 IFN-γ/IL-4明显低于对照组(P0.05);但与治疗前相比,颗粒组和常规组GATA-3 mRNA和IL 4水平明显降低(P0.05)。结论： 咳喘颗粒剂通过抑制Th2细胞,纠正Th1/Th2细胞平衡治疗患儿热型哮喘。     

沉默人趋化因子受体1基因对小鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的利用慢病毒构建人趋化因子受体1(chemokine receptor-like 1,CMKLR1)基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株,观察沉默CMKLR1基因后血管平滑肌细胞的增殖情况。方法将正常血管平滑肌细胞、CMKLR1基因干扰对照血管平滑肌细胞株、CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞株分成正常组、增殖组、对照组和CMKLR1沉默组,增殖组、对照组、CMKLR1沉默组加入血小板源性生长因子-BB促进增殖,采用细胞计数和细胞增殖实验(Brdu法)检测血管平滑肌细胞增殖。结果增殖组血管平滑肌细胞的细胞数目和Brd U A值显著高于正常组(P均<0.05);与正常组相比,CMKLR1沉默组的血管平滑肌细胞数目和Brd U A值显著降低(P均<0.05);与此同时,对照组与正常组之间的血管平滑肌细胞增殖情况差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默CMKLR1受体可以抑制小鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

甲型H1N1流感患者T细胞亚群的变化特点(附67例报告)

目的探讨甲型H1N1流感患者发病期和恢复期T细胞亚群变化特点。方法采用美国BD公司生产的Fascalibur流式细胞仪检测甲型H1N1流感患者发病期及恢复期外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞,并与对照组进行比较。结果研究组发病期、恢复期和对照组CD4^＋T、CD8^＋T淋巴细胞绝对数比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。其中研究组发病期CD4^＋T、CD8^＋T淋巴细胞绝对数明显低于恢复期和对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;恢复期与对照组CD4^＋T淋巴细胞绝对数间差异无统计学意义（P〉0．05）,但恢复期CD8^＋T淋巴细胞绝对数多于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。不同治疗方法的患者治疗前后CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞绝对数的差值间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论甲型H1N1流感患者发病期细胞免疫功能显著下降,4种治疗方法对T细胞亚群的影响没有差异,临床工作中要注意危重并发症的防治。     

H5N1亚型禽流感病毒对小鼠致病性的研究

目的用一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠,观察其对小鼠的致病性及在小鼠间的传染性。方法将小鼠分为正常组、攻毒组、同居组,攻毒组乙醚麻醉后滴鼻感染AIV,观察各组食欲、反应、呼吸及有无皱毛、弓背、死亡等,测量体温及体重;检测相应抗体水平、小鼠排毒情况及小鼠各器官带毒情况,并观察病理组织学变化。结果攻毒组出现食欲反应下降,呼吸急促,皱毛,死亡;体重、体温下降。同居组未出现感染。攻毒组攻毒后12 h至第9天可从肺组织分离出病毒,第10天始出现相应抗体;感染小鼠的肺、心肌、肝、脾、肾和脑组织都有不同程度的病理改变。结论 AIV对小鼠具有致病性,AIV能跨越种系障碍直接感染哺乳动物, 但在小鼠间无传染性。     

人流感病毒H1N1与禽流感病毒H5N1感染人神经胶质细胞的实验研究

目的：研究人流感病毒（H1N1）及禽流感病毒（H5N1）感染人神经胶质细胞后,促炎症因子的分泌特点。方法：分离培养人胶质细胞,用H1N1及H5N1分别感染刺激人胶质细胞;用RT-PCR技术探求白细胞介素（IL）-1β、-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α变化。结果：与阴性对照比,H1N1和H5N1感染人神经胶质细胞IL-1β、-6和TNF-α的表达量均增高,且H5N1的表达量多于H1N1。结论：H1N1与H5N1可体外感染人神经胶质细胞,并诱导其分泌大量促炎症因子,提示此与流感病毒感染中枢神经系统所致的功能紊乱及免疫病理损伤有关。     

小儿清解防感颗粒防治甲流的作用机制研究

目的研究小儿清解防感颗粒抗流感病毒的作用机制。方法采用亚洲甲型鼠肺适应株（A／PR8／H1N1）滴鼻感染小鼠制作小鼠甲流模型,观察小儿清解防感颗粒延长病鼠生命的作用;光学显微镜下观察小鼠肺组织的病变程度并评分,同时计算小鼠肺指数,比较各组间肺指数的变化趋势及小鼠肺病变评分差异。采用环磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型,观察各组小鼠的淋巴细胞转化情况。结果小儿清解防感颗粒可显著延长病鼠生命,降低死亡率和肺指数、肺病变评分,升高淋巴母细胞、过渡型细胞百分率及淋巴细胞转化率。结论小儿清解防感颗粒对感染流感病毒A／PR8／HIN1小鼠有一定的死亡保护及肺脏保护作用,并具有增强免疫低下小鼠淋巴细胞转化的作用。     

Cross-neutralizing Anti-hemagglutinin Antibodies Isolated from Patients Infected with Avian Influenza A(H5N1) Virus

Objective To recover broad-neutralizing monoclonal antibodies(Bn Abs) from avian influenza A(H5N1)virus infection cases and investigate their genetic and functional features.Methods We screened the Abs repertoires of expanded B cells circulating in the peripheral blood of H5N1 patients.The genetic basis,biological functions,and epitopes of the obtained Bn Abs were assessed and modeled.Results Two Bn Abs,2-12 D5,and 3-37 G7.1,were respectively obtained from two human H5N1 cases on days 12 and 21 after disease onset.Both Abs demonstrated cross-neutralizing and Ab-dependent cellular cytotoxicity(ADCC) activity.Albeit derived from distinct Ab lineages,i.e.,V_H1-69-D2-15-J_H4(2-12D5) and V_H1-2-D3-9-J_H5(3-32 G7.1),the Bn Abs were directed toward CR6261-like epitopes in the HA stem,and HA_2 I45 in the hydrophobic pocket was the critical residue for their binding.Signature motifs for binding with the HA stem,namely,IFY in V_H1-69-encoded Abs and LXYFXW in D3-9-encoded Abs,were also observed in 2-12D5 and 3-32 G7.1,respectively.Conclusions Cross-reactive B cells of different germline origins could be activated and re-circulated by avian influenza virus.The HA stem epitopes targeted by the Bn Abs,and the two Ab-encoding genes usage implied the V_H1-69 and D3-9 are the ideal candidates triggered by influenza virus for vaccine development.     

不同品系小鼠感染甲型流感病毒肺小血管内血栓形成

目的本实验旨在观察不同品系小鼠感染甲型流感病毒后肺组织内血栓形成的情况。方法使用H1N1病毒A/California/7/2009(CA7)株和H3N2病毒A/Brisbane/10/07株,对BALB/C小鼠、Scid小鼠、NOD/LTJ小鼠、BALB/C-nu小鼠、NOD-Scid小鼠和icosl-KO小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒。检测小鼠感染后肺组织病毒拷贝数并观察肺组织病理学改变。结果 H1N1和H3N2滴鼻攻毒的各组小鼠均染毒,病理表现为程度略有差异的间质性肺炎。13只H1N1病毒感染小鼠和6只H3N2感染小鼠在肺组织中观察到多个小血管内有血栓形成,血栓成分主要为纤维素和血小板。结论各品系小鼠感染H1N1和H3N2流感病毒后均可能出现肺组织内血栓形成。     

20例儿童甲型H1N1流感危重症的病例分析

目的分析甲型H1N1流感危重症的临床特点,总结治疗经验。方法回顾性分析20例甲型H1N1流感危重症的临床表现、实验室检查、影像表现。结果甲型H1N1流感危重症不仅见于婴幼儿和有原发基础病的儿童,也可见于体健的年长儿;常合并细菌、真菌、支原体、或其他病毒的感染;均伴有多脏器功能不全;好转后短期内随诊未留有后遗症。结论对甲型H1N1流感患儿早期作出正确的判断、及时积极的治疗有利于阻断和延缓病情进展、降低病死率、改善预后。     

禽流感H5N1型病毒对沙鼠致病性的初步研究

目的 观察禽流感H5N1型病毒对沙鼠的致病性。方法 在生物安全三级实验室，将禽流感H5N1型病毒通过滴鼻接种乙醚麻醉后沙鼠，观察14d，记录沙鼠的体温、体重、临床体征、病理学变化、病毒分离情况及抗体变化。结果 沙鼠感染后发病主要表现在第2～6天，攻毒组沙鼠出现反应迟钝、皱毛、弓背、食欲下降、呼吸急促、打堆等体征，攻毒组沙鼠的体温降低和体重减轻，死亡率为44％，在攻毒后8d检出抗体，主要病理学变化表现为肺出现严重淤血、水肿、出血，镜下可见肺间质充血，血管周围炎性细胞浸润，肝和胸腺淤血，肾出血，肾小管变形。结论 禽流感H5N1型病毒对沙鼠有较强致病性。