白细胞介素2及血清胸腺因子可使自体花环形成T细胞产生辅助和细胞毒功能

近来,人体外周血液T细胞可用小鼠单克隆抗体进行鉴定。大部分T细胞与单克隆抗体OKT3有反应。诱导T细胞则属OKT4~ ,这些OKT4~ 细胞在美洲商陆丝裂原(PWM)刺激的培养物中可以辅助B淋巴细胞分化为浆细胞,且可产生T细胞生长因子白细胞介素2(interleukin-2,IL-2。抑制/细胞毒T细胞与单克降抗体     

自身免疫病与淋巴细胞、单核细胞亚型

正常人末梢血中T细胞用单克隆抗体分为二个亚型:一是有辅助功能的亚群,称OKT4或Leu3a;二是有杀伤和抑制活性的亚群,称Leu2a或OKT8T细胞.OKT4细胞可对破伤风外毒素和链球菌"O"溶血毒素、簇抗原Ⅱ(ClassⅡ抗原)以及PHA刺激发生反应.OKT8T细胞对PHA刺激无反应,能识别簇抗原Ⅰ(ClassⅠ抗原),     

人类疾病中T细胞亚类的失调

人T细胞亚类可以直接用OKT单克隆抗体测定。本文用OKT3(测定总T细胞)、OKT4(测定辅助—诱导性T细胞)、OK-TS(测定抑制一杀伤性T细胞)三种单克隆抗体,使用间接免疫荧光法,检查了     

人T细胞亚群研究进展

根据分化抗原不同,通常可以将人外周血淋巴细胞分成OKT4~+和OKT8~+两个亚群(简称T4~+和T8~+)。一般认为T4~+亚群具有辅助和诱导功能(T_H/T_i),T8~+亚群具有抑制和细胞毒功能(T_S/TC)。近年来,由于单克隆抗体技术的发展,已获得了一些新的人T细胞单克隆抗体(下称     

由单克隆抗体确定的人类T淋巴细胞—新亚类的分离及其部分特征

作者采用单克隆抗体(McAB)标记等方法发现人类T淋巴细胞的新亚类,它们约占正常外周血T细胞的2%,称之为OKT3~ 4~-8~-细胞。作者首先用密度梯度离心法分离出比重最大的细胞(d>1.069g/cm~3),约占总T细胞20%。然后再用各种McAB进行标记,发现一类能与总T细胞McAB相结合[如OKT3、Hu Lyt 3[9.6)和Leu 1],能形成E花结,但不能与T细胞亚类Mc AB(如OKT 4,OKT8,Leu 2A和Leu 3A)相结合的新亚类。在荧光激活分类器上进行分离的这些细胞比重大,偏向阴极端,不结合OKT4或OKT8抗体,能结合OKT3抗体,     

抗人T细胞单克隆抗体的应用及应注意的几个问题

1979年,龚忠恕(P.C.kung)和Golds-tein等首次报道抗人T细胞单克隆抗体(McAb)OKT系列制备成功。其中,OKT3与大约70％正常人外周血单个核细胞(PBM)反应,识别全部T细胞;OKT4与40％～50％正常人PBM反应,识别诱导和辅助T细胞亚群(Ti/h);OKT8与20％～30％正常人PBM反应,识别杀伤抑制性T细胞亚群(Tc,s)。     

FITC-直标单抗及应用

随着单克隆抗体技术的发展,目前出现了许多抗人T细胞表面抗原的单克隆抗体,对这些表面抗原的检测,国内学者大多利用间接免疫荧光技术。我室用异硫氰酸荧光素(FITC)成功地标记了多种抗人体T细胞亚群的单克隆抗体,这对研究T细胞亚群在感染性疾病、自身免疫性疾病、免疫缺陷性疾病中的变化,以及检测免疫抑制治疗等提供了有力工具。 OKT系列单克隆抗体为从美国ATCC公司引进的细胞株,由本室制备。抗-CD3(OKT3)、抗-CD4(OKT4)、抗-CD8(OKT8)、抗-CD2(OKT11)、抗-CD1(OKT6)、抗-CD38(OKT10)、抗-CD11b(OKM1),还有抗HLA—Ⅰ类抗原及HLA—Ⅱ类抗原的单抗。各种单抗腹水用硫酸铵粗提丙球和经SPA-     

抗人T细胞单克隆抗体的应用及应注意的几个问题

<正> 1979年,龚忠恕(P.C.Kung)和Golds-tein等首次报道抗人T细胞单克隆抗体(Mc~-Ab)OKT系列制备成功。其中,OKT3与大约70％正常人外周血单个核细胞(PBM)反应,识别全部T细胞;OKT4与40％～50％正常人PBM反应,识别诱导和辅助T细胞亚群(Ti/h);OKT8与20％～30％正常人PBM反应,识别杀伤和抑制性T细胞亚群(T_(C/S)。此后,又有许多其它抗人T细胞     

整合素α2对神经母细胞瘤细胞粘附于胶原蛋白的调节作用

目的：探讨两价阳离子和针对整合素α2的 特异性阻断性单克隆抗体对神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞粘附于胶原蛋白（Col）的影响，探讨整合素α2β1对该细胞粘附反应的调节作用。方法:将含有不同M g2+、Ca2+浓度和有或无抗α2单克隆抗体6F1的SK-N-SH细胞混悬液。加入96孔 平底非细胞培养板，此反应板已包被Ⅰ型大鼠尾Col（4 μg/well），所粘附的细胞用BCA方 法测定，以吸光度（A570）代表粘附细胞的数量。结果:Mg 2+能明显增加SK-N-SH细胞Ⅰ型Col的粘附反应；Mg2+浓度为1 mmol/L时，细胞 粘附的反应已接近高峰,与对照组相比A570分别为0.59±0.03和0.2 5±0.0 1 (P＜0.01），而Ca2+对细胞的粘附无明显影响；抗α2单克隆抗体6F1（10 mL /L）能显著阻断SK-N-SH细胞粘附于胶原蛋白(A=0.27±0.01)，其粘附水平接近无Mg 2+的粘附反应水平（A=0.32±0.01）。 结论:整合素α2介导 SK-N-SH细胞对胶原蛋白粘附反应，提示整合素α2可能参与调节神经母细胞瘤的转移。     

抗磺胺嘧啶单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的建立

目的 :制备抗磺胺嘧啶 (SD)的单克隆抗体 (mAb) ,并研制SD快速检测试剂盒。方法 :以SD BSA的偶联物作为抗原免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗SD的mAb。并用抗SDmAb和SD HRP酶标抗原 ,建立一种可检测样品中的游离SD分子的竞争法ELISA。结果 :获得 5株可分泌抗SDmAb的杂交瘤细胞 1A1、1B8、1E4、2C1和 3D9。其中 1A1、1B8和 1E4为IgG1,2C1和 3D9为IgG2。试剂盒的半数抑制率 (I5 0 )为 9.3μg/L ,理论最低检出量达到 0 .6μg/L ,对于不同样品中SD的回收率均高于 60 %。除与SD反应以外 ,该试剂盒对其他磺胺类药物检测的交叉反应均小于 3 %。结论 :成功地制备了抗SD的mAb ,并建立了一种可快速检测各种样品中SD的竞争ELISA试剂盒     

调节性T细胞能有效降低抗CD3单克隆抗体OKT3引起的人外周血单个核细胞细胞因子的释放

目的 探索细胞因子风暴因子体外模型的构建方法及调节性T细胞(Treg)的调节作用。方法 培养健康成人外周血单核细胞(PBMC),随机分为PBMC组、对照组(PBS处理)、 CD3单克隆抗体OKT3处理组、 OKT3联合Treg处理组。处理48 h后，收集上清液，采用ELISA检测血清转化生长因子β(TGF-β)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)、 γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)、 IL-2、 IL-7和IL-6水平。结果 与对照组相比，OKT3能明显增加PBMC的TGF-β、 CTLA4、 IL-10、 IL-2、 IL-7、 IFN-γ和IL-6水平。Treg能有效减少OKT3引起的上述细胞因子释放。结论 成功构建了细胞因子风暴细胞模型，Treg能降低PBMC的细胞因子释放。     

人类小肠中的淋巴细胞亚群——在正常人及成年腹腔病患者肠粘膜中的发现

用多克隆或单克隆抗体的双标记免疫荧光技术已经发现,正常人小肠粘膜中存在着不同亚群的淋巴细胞。据报道这些淋巴细胞均能与抗T细胞抗体反应,多数为HuTLA~+,OKT8~+。固有层中的HuTLA~+细胞则多为OKT8~-。为作进一步研究,作者采用了单克隆抗体的免疫荧光技术,以正常人及腹部疾病患者的小肠组织切片为实验材料,检测并比较了各淋巴细胞亚群的分布。     

黄芩苷在胶原蛋白诱发性关节炎小鼠中抑制BLyS介导的Th17细胞分化和炎症反应

目的:探讨黄芩苷对胶原蛋白诱发性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠的辅助性T细胞17(T helper 17 cells,Th17细胞)分化和炎症反应的调控作用及机制。方法:在第1天,SPF级雄性DBA/1小鼠经背部皮下注射鸡源II型胶原蛋白(chick collagen type II,CII)+完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)致敏;在第21天,经尾根部皮下注射CII+不完全弗氏佐剂(incomplete Freund's adjuvant,IFA)强化免疫;在第28~42天分别灌胃50、100和200 mg·kg-1·d-1黄芩苷。关节炎指数(arthritis index,AI)积分评估关节炎的严重程度;HE染色观察膝关节病理学改变;ELISA法检测血清中IL-1β、TNF-α、IgG、IgG2a和IL-17A的水平以及关节组织中IL-17A的水平;流式细胞术分析脾脏和肠系膜淋巴结(mesenteric lymph nodes,MLN)中CD4+IL-17A+T细胞比例;Western blot检测关节、脾脏和MLN中B淋巴细胞刺激物(B-lymphocyte stimulator,BLyS)的表达。另外,用2μg/L BLyS和20μmol/L黄芩苷处理CD4+T细胞群48 h后,流式细胞术分析CD4+IL-17A+T细胞比例,ELISA法检测上清液中IL-1β和TNF-α的水平。结果:黄芩苷能剂量依赖性地减轻CIA(P0. 05)。黄芩苷能剂量依赖性地降低CIA小鼠血清中IL-1β、TNF-α、IgG、IgG2a和IL-17A水平和关节组织中IL-17A水平,减少脾脏和MLN中Th17细胞的比例,抑制关节、脾脏和MLN中BLyS的表达(P0. 05)。另外,黄芩苷能抑制BLyS诱导的CD4+T细胞群中Th17细胞的分化及IL-1β和TNF-α的分泌(P0. 05)。结论:黄芩苷能通过降低BLyS介导的Th17细胞分化和炎症反应来发挥抗CIA效应。     

人外周血CD4~+ IL-21~+记忆T细胞的特征

目的:探讨人外周血中白细胞介素21(IL-21)的产生细胞及其特征。方法:分离人外周血单个核细胞(PBMC),分为不刺激或anti-CD3(OKT3)、OKT3+anti-CD28、PMA+ionomycin刺激四个组,流式细胞术(FCM)检测产生IL-21的细胞亚群。PMA+ionomycin刺激PBMC、纯化CD4+、CD4+CD45RA-、CD4+CD45RA+细胞、脐带血单个核细胞(CB-MC),FCM分析产生IL-21细胞的表型特征和IL-21与Th1、Th2、Th17和Th22细胞因子之间的关系。结果:与OKT3、OKT3+anti-CD28相比,PMA+ionomycin能诱导最高量的IL-21产生。产生IL-21的主要细胞为CD4+T细胞,少数CD8+T细胞。CD4+IL-21+T细胞表达CD45RO,不表达CD45RA,其中部分细胞表达CCR6、CCR7或CXCR5。CD4+CD45RA-细胞表达IL-21远高于CD4+CD45RA+细胞。进一步研究表明,PBMC产生IL-21,而CBMC不产生。此外,大约24%的CD4+IL-21+细胞表达IFN-γ,小于10%CD4+IL-21+细胞表达IL-4、IL-17或IL-22。结论:人PBMC在多克隆刺激的条件下,可以诱导IL-21的产生。产生IL-21的主要细胞亚群具有记忆CD4+T细胞的表型。其中一部分CD4+IL-21+T细胞的表型独立于Th1、Th2、Th17和Th22细胞亚群。     

IL_2,IL—4和IL—6对T细胞活化增殖的影响途径比较

单一的 PHA/PMA/OKT3不能诱导纯化的静止 T 细胞发生增殖反应,这为我们比较外加 IL—2/IL—4/IL—6对 T 细胞活化增殖的影响途径提供了条件.PHA 诱发了静止 T 细胞对 IL—2/IL—4/IL—6的增殖反应,而 anti—Tac 单抗只能抑制由 IL-2介导的增殖反应.PMA 能够诱导静止 T 细胞对 IL—2/IL—4发生增殖反应,而不对 IL—6发生增殖反应.OKT3单抗只能诱导静止 T 细胞对 IL—2发生增殖反应.免疫抑制剂环孢霉素 A(C_(?)A)均能抑制 PHA 联合 IL—2/IL—4/IL—6所诱发的 T 细胞增殖反应,但其抑制作用的动力学观察却得到三种完全不同形式的抑制结果.这些结果表明,这三种淋巴因子各有其独自的途径使T 细胞活化增殖.     

与病毒侵入无关的CD4分子CDR3样区参与了HIV诱导的细胞融合

通常认为在gp_(120)-CD4的反应中,gp_(120)上的特定位点与CD4分子上的特定位点CDR_2样区相互作用,CDR_2样区在病毒结合和细胞融合中是必需的.CDR_3样区参与了gp_(120)-CD4的反应,但CDR_3样区的功能尚不清楚.在实验中用分别针对CDR_2样区、CDR_3样区的单抗OKT4A、13B8-2及对照单抗OKT4作对照研究,发现13B8-2与OKT4A作用相似,均阻断了sgp_(120)-sCD4     

胎儿胸腺细胞对OKT3反应性的研究

<正>OKT3对成熟T细胞有很强的促增殖作用,其对T细胞作用有赖于CD3分子的存在.据报道17周龄后胎儿胸腺细胞(FT)中CD3~+细胞已达60%以上,但关于FT对OKT3的反应性少有报道,本文对此进行了研究,旨在进一步了解FT的功能特性.1 材料和方法1.1 FT和胎儿脾单个核细胞(FSMC)制备 取18～28周龄胎儿胸腺,经200目铜同研磨,Hanks液洗涤后,用含10%小牛血清的1640培液制成FT悬液;胎脾制成单细胞悬液后,经淋巴细胞分离液分出FSMC,洗涤,制成FSMC悬液.1.2 细胞增殖测定 采用~3H-TdRn掺入法.FT和FSMC培养浓度为1×10~6/ml;OKT3(北医大提供小鼠腹水)和IL-2(中科院上海生化所产品)最终浓度分别为10~(-4)稀释和10U/ml;设立OKT3单独和OKT3+IL-2联合刺激两种培养条件,并设相应对照,每组为3个复孔.1.3 免疫荧光技术和流式细胞仪分析 采用间接免疫荧光染色法.抗CD25单抗和FITC标记的羊抗鼠IgG均为DAKO产品.用FACS420进行表型分析.2 结果     

FDA首次批准治疗用单克隆抗体

<正> 美国食品和药物管理局(FDA)首次准批药物Ortho公司生产的治疗用单克隆抗体OKT3,后者能与T细胞受体附近的T-3抗原结合,从而抑制T细胞的功能。OKT3能抑制肾脏移植时T细胞引起的急性排斥反应,但不抑制免疫系统的其它部分。 FDA主要是根据去年的几项临床研究结果而批准使用。其中一项试验表明,OKT3能逆转94％患者的急性肾脏排斥反应,而常规类固醇治疗的成功率仅75％。另一项试验表明,用OKT3给94例急性肾脏排斥反应     

用抗独特型单克隆抗体治疗具有同型转换变异抗体的小鼠B细胞淋巴瘤

在以前的研究中,应用同系抗独特型单克隆抗体对38C13鼠B细胞淋巴瘤进行了体内治疗,果结表明,IgG2a同型抗体抑制C3H小鼠肿瘤生长的作用(70％长期存活)较两种IgG_1型抗体(10％和20％存活)以及另一种IgG_1型抗体(0％存活更为有效)。人为了单独测定抗体型别在这些抗肿瘤作用的地位,应用有限稀释法从分泌低效力IgG_1和IgG_2抗体的杂交瘤培养物中分离两族同型变异体。一族由IgG_1(亲)、lgG_2a和IgG2b组成,另一族由IgG2b     

抗人IgG单克隆抗体的研究 Ⅲ.8株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特性分析和初步应用

本文报道8株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体的血清学特性,其中4种属抗全IgG,3种是对IgG_4无反应的抗IgG,1种是对IgG_3无反应的抗IgG。各单克隆抗体之间的效价和结合抗原的能力有所差异。根据组合试验,选出A_2与B_1二种单克隆抗体进行组合,用以检测正常人血清中IgG含量,与常规抗血清相比较呈良好的相关性(r=0.90)。用以制备亲和层析柱,纯化人IgG,得率比常规抗血清高7.3倍。据此认为,研制这类单克隆抗体将为临床免疫检测提供有效的试剂。