基于ROS/NLRP3/Caspase-1通路的鹿芪方对慢性心力衰竭小鼠心肌细胞焦亡的影响

目的观察鹿芪方对慢性心力衰竭小鼠心肌细胞焦亡的影响,从ROS/NLRP3/Caspase-1通路探讨其作用机制。方法 60只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、鹿芪方组、培哚普利组,采用冠状动脉前降支结扎法制备慢性心力衰竭小鼠模型。鹿芪方组和培哚普利组分别予相应药液灌胃,假手术组和模型组予等量生理盐水灌胃,连续6周。超声检测小鼠心功能,HE染色、Masson染色检测小鼠心肌组织病理变化和胶原纤维沉积,DHE荧光探针检测心肌组织活性氧(ROS)含量,Westernblot检测心肌组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达,免疫组化检测白细胞介素(IL)-1β表达,透射电镜观察心肌组织超微结构。结果与假手术组比较,模型组小鼠左室射血分数(LVEF)和左室收缩分数(LVFS)降低,左室舒张末期内径(LVIDd)与左室收缩末期内径(LVIDs)升高;心肌细胞明显增大,排列不规则,有较多炎性细胞聚集及胶原纤维沉积;心肌组织ROS含量增加,NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及IL-1β表达升高,差异均有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,鹿芪方组与培哚普利组小鼠LVEF和LVFS升高,LVIDd和LVIDs降低;心肌细胞损伤改善,胶原纤维沉积明显减少,心肌纤维化明显减轻;心肌组织ROS含量减少,NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及IL-1β表达降低,差异均有统计学意义(P0.01)。结论鹿芪方能有效减轻慢性心力衰竭小鼠心肌细胞焦亡,其机制可能与抑制ROS/NLRP3/Caspase-1通路活化,减轻心肌炎症反应相关。     

“柴胡三参胶囊”预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其与MLK3-p38 MAPK-NLRP3信号通路的关系

目的：探讨柴胡三参胶囊通过MLK3-p38MAPK-NLRP3信号通路减轻炎症反应对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠心脏的保护作用。方法：将72只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、地尔硫卓组（每日给药量：51 mg/kg）及柴胡三参胶囊低、中、高剂量组（每日给药量：216、432、864 mg/kg）,每组12只。各给药组灌胃给予相应药液,假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水,均每日1次,连续7 d。预处理结束后,除假手术组外,其余各组大鼠采用结扎冠状动脉左前降支并再灌注的方法建立MIRI模型,再灌注结束后立即取血、取全心,假手术组只穿线,不结扎。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测每组6只大鼠血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量,苏木素-伊红（HE）染色法观察每组3只大鼠心肌组织病理变化,2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法观察每组5只大鼠心肌梗死范围,蛋白质免疫印迹（Westernblot）法检测每组3只大鼠心肌组织中混合谱系酶3(MLK3)、p38丝裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、白...     

柴胡三参胶囊对缺血性心律失常大鼠心肌组织CaMKⅡ蛋白及CaMKⅡ-mRNA表达的影响

目的探讨柴胡三参胶囊抗缺血性心律失常的作用及分子学作用机制。方法将60只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为柴胡三参胶囊组、参松养心胶囊组、维拉帕米组、假手术组、模型组和空白组,每组10只。柴胡三参胶囊组、参松养心胶囊组、维拉帕米组预防性给予相应药物灌胃,假手术组、模型组和空白组灌胃等量的生理盐水,连续灌胃2周后,柴胡三参胶囊组、参松养心胶囊组、维拉帕米组大鼠均复制缺血性心律失常模型,假手术组大鼠只穿线不结扎,观察各组大鼠ECG变化, Western blot法检测心肌组织中CaMKⅡ蛋白表达水平,定量PCR法检测心肌组织中CaMKⅡmRNA表达水平。结果模型组大鼠房性早搏、室早、室速、室颤发生率及心律失常积分、心肌组织中CaMKⅡ蛋白及CaMKⅡmRNA表达水平均显著高于空白组(P均0.05);柴胡三参胶囊组、参松养心胶囊组、维拉帕米组室速、室颤发生率及心律失常积分、心肌组织中CaMKⅡ蛋白及CaMKⅡmRNA表达水平均显著低于模型组(P均0.05);柴胡三参胶囊组及参松养心胶囊组室速、室颤发生率心律失常积分、心肌组织CaMKⅡ蛋白及CaMKⅡmRNA表达水平均显著低于维拉帕米组(P均0.05)。结论柴胡三参胶囊能有效降低室速、室颤发生率,并可减轻心肌缺血性心律失常造成的心肌组织损伤,其可能通过抑制CaMKⅡ蛋白和CaMKⅡmRNA的表达而发挥心肌保护作用。     

益脉颗粒对高脂合并心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞焦亡的影响

目的 观察高脂合并心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠使用中药益脉颗粒进行干预后,大鼠心肌细胞焦亡的变化情况,阐述细胞焦亡在益脉颗粒预防治疗MIRI中的调节效应以及分子机制。方法 将60只实验动物随机将其分成3个组别,即假手术组、模型组和益脉颗粒高剂量组。常规饲料喂养假手术组,高脂饲料喂养模型组和益脉颗粒高剂量组,均喂养2周。假手术组和模型组大鼠每天灌服2次10 mL/kg生理盐水,益脉颗粒组每日灌服2次10 mL/kg中药煎液,1周后进行缺血再灌注造模。MIRI造模完成后(缺血30 min再灌注2 h),大鼠腹主动脉进行取血,后分离血清备用。全自动生化分析仪检测3组大鼠血脂水平;HE染色观察各组大鼠心肌病理形态学变化;实时荧光定量PCR和Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测细胞焦亡相关蛋白GSDMD、Caspase1、IL-1β、NLRP3、TLR4 mRNA及蛋白表达。结果 相较于假手术组,模型组大鼠HDL-C含量显著降低(P<0.05),其余各指标血清含量(TC、TG、LDL-C)均显著升高(P<0.05);心肌组织存在间质水肿、炎性细胞的浸润,大鼠心肌GSDMD、C...     

灵宝护心丹对心肌梗死大鼠心肌NLRP3/Caspase-1细胞焦亡信号通路的影响

目的 探讨灵宝护心丹对心肌梗死大鼠心肌NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)细胞焦亡信号通路的影响。方法 将50只健康Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、倍他乐克组（0.9 mg/kg）、灵宝护心丹低剂量组（0.9 mg/kg）、灵宝护心丹高剂量组（1.8 mg/kg）,每组10只,连续灌胃3周,末次给药24 h后行急性心肌梗死造模手术,假手术组只穿线不结扎。造模24 h后取材检测相关指标。利用TTC染色测量大鼠心肌梗死面积,采用苏木精-伊红（HE）、铁-苏木素（Heidenhain）染色观察心肌组织病理改变,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠血清白介素（IL）-1β、IL-18水平,采用Western Blot检测大鼠心肌组织NLRP3、Caspase-1水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠均出现不同程度的心肌梗死范围（P<0.01）,心肌组织发生炎症反应、心肌缺血情况,大鼠血清IL-1β、IL-18水平升高（P<0.01）,心肌组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平升高（P<0.01）;...     

基于PKCβⅡ/NOX2/ROS信号通路探讨柴胡三参胶囊对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用

基于氧化应激介导的程序性细胞死亡探讨心肌缺血再灌注损伤的发病机制,及基于PKCβⅡ/NOX2/ROS信号通路探讨柴胡三参胶囊调节心肌缺血再灌注损伤的机制及作用靶点。结扎左前降支建立心肌缺血再灌注损伤大鼠模型,随机分为6组：假手术组,模型组,柴胡三参胶囊临床等效、高剂量组,N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine)组,蛋白激酶C抑制剂(CGP53353)组。柴胡三参胶囊各剂量组连续给药7 d后,检测各组大鼠心肌梗死面积;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理形态;TUNEL染色观察大鼠心脏组织凋亡情况;酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法检测大鼠心肌损伤指标和氧化应激相关指标;流式细胞仪检测心脏组织中活性氧(ROS)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测大鼠心脏组织相关蛋白及mRNA相对表达水平。结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积明显,心肌结构紊乱、间质水肿及出血,可见大量空泡,心肌损...     

基于TXNIP/NLRP3/GSDMD信号通路探讨当归补血汤对糖尿病肾病大鼠足细胞焦亡的影响

目的:观察当归补血汤对糖尿病肾病(DKD)大鼠足细胞焦亡的影响,探讨其防治DKD及足细胞焦亡的可能作用机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为造模组42只和正常组8只,造模组大鼠高糖高脂饮食6周结合链脲佐菌素(STZ)35 mg·kg^-1一次性腹腔注射制备2型糖尿病模型。造模成功后随机分为模型组、当归补血汤低剂量(0.72 g·kg^-1)组、当归补血汤高剂量(1.44 g·kg^-1)组、厄贝沙坦(0.017 g·kg^-1)组进行灌胃,正常组及模型组给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续干预20周。给药期间定期检测各组大鼠空腹血糖(FBG),24 h尿蛋白(24 h-UTP);给药结束后采用过碘酸六胺银(PASM)染色观察肾组织病理形态学变化;透射电镜(TEM)观察足细胞超微结构变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-18(IL-18)水平;原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠肾组织细胞DNA损伤情况;免疫组化法(IHC)检测大鼠肾组织硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1),消皮素D(GSDMD)蛋白表达水平;免疫荧光(IF)三标法检测核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)及肿瘤蛋白-1(WT-1)在足细胞的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织TXNIP/NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路蛋白及足细胞突触足蛋白(Synaptopodin)表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,24 h-UTP显著升高,肾小球肥大,系膜增生,系膜外基质增加,基底膜增厚,出现K-W结节,肾小管上皮细胞空泡变性,足突融合或丢失,血清中IL-1β,IL-18含量明显升高,肾组织TUNEL阳性细胞明显增多,NLRP3在足细胞表达增多且WT-1在足细胞表达减少,Synaptopodin蛋白表达水平显著降低,TXNIP/NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,当归补血汤高剂量组明显降低FBG,24 h-UTP水平,明显改善肾组织病理学,改善足细胞的损伤和丢失,减少肾组织TUNEL阳性细胞数,NLRP3在足细胞表达减少且WT-1在足细胞表达增多,升高Synaptopodin蛋白表达水平,降低TXNIP/NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:当归补血汤可能通过调控TXNIP/NLRP3/GSDMD信号通路,抑制足细胞焦亡以减少蛋白尿,从而延缓DKD的发展进程。     

六味补气方对慢性阻塞性肺疾病细胞焦亡的 干预作用及机制研究

目的 研究六味补气方对慢性阻塞性肺疾病（COPD）细胞焦亡的影响。方法 按照随机数字表法将大鼠分为正常对照组、模型组、桂龙咳喘宁组和六味补气方低、中、高剂量组,每组10只。采用烟熏加脂多糖（LPS）气管滴入的方法建立COPD大鼠模型。药物干预后,检测大鼠肺功能;支气管肺组织形态学改变;同时检测肺组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）和Gasdermin D-N端（GSDMD-N）的改变;肺泡灌洗液（BALF）中炎症因子白介素18（IL-18）、白介素1β（IL-1β）水平;肺组织活性氧（ROS）水平;肺组织NLRP3、半胱天冬酶-1（Caspase-1）、Gasdermin D（GSDMD）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）蛋白表达以及mRNA水平。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠肺功能降低（P<0.01）,肺组织损伤,细胞膜破裂,IL-18、IL-1β和ROS水平升高（P<0.01）,肺组织 NLRP3、Caspase-1、GSDMD、和ASC蛋白表达和mRNA水平显著升高（P<0.01,P<0.05）。与模型组比较,各用药组肺功能改善,肺组织损伤和细胞焦亡减轻,IL-18、IL-1β和ROS水平下降（P<0.01）,肺组织 NLRP3、Caspase-1、GSDMD和ASC蛋白表达和mRNA水平降低（P<0.01）,其中以六味补气方高剂量组改变最为显著。结论 六味补气方可降低COPD大鼠IL-18、IL-1β和ROS水平,减轻气道炎症和氧化应激,阻抑肺组织损伤和细胞的焦亡,增加肺功能,其机制可能是通过调控ROS/NLRP3/Caspase-1信号通路实现的。     

大黄泄浊方调控ROS/TXNIP/NLRP3通路对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的影响

目的 通过观察大黄泄浊方对5/6肾切除大鼠肾脏病理变化，肾组织活性氧（ROS）/硫氧还蛋白互作蛋白（TXNIP）/NOD样受体蛋白3（NLRP3）通路表达的变化，研究其保护肾功能，延缓肾间质纤维化的作用机制及可能性。方法 90只健康SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄泄浊方低、中、高剂量（6.825、13.65、27.30 g·kg^-1）组和尿毒清颗粒（2.60 g·kg^-1）组。除假手术组外其余5组均采用5/6肾切除术复制CRF大鼠模型。造模成功后，各给药组分别给予相应剂量的药物混悬液灌胃，每日1次，连续8周。给药结束后，检测大鼠血清中肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）水平和24 h尿蛋白定量（UTP）水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测硫氧还蛋白（TRX）、TXNIP和NLRP3蛋白的表达情况；免疫组化法检测NLRP3、TRX、TXNIP、接头蛋白凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、转化生长因子-β（TGF-β）、Ⅳ型胶原蛋白（Collagen Ⅳ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和调纤连蛋白（FN）的表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠血SCr、BUN、24 h UTP水平明显增高（P<0.05），TRX、TXNIP、NLRP3、ASC、TGF-β、Collagen Ⅳ、α-SMA和FN蛋白显著增高（P<0.01），肾间质发生显著纤维化；与模型组比较，大黄泄浊方各剂量组和尿毒清颗粒组血SCr、BUN、24 h UTP水平均有不同程度降低（P<0.05），TRX、TXNIP、NLRP3、ASC、TGF-β、Collagen Ⅳ、α-SMA和FN蛋白显著降低（P<0.01），肾间质纤维化不同程度改善。结论 大黄泄浊方可保护慢性肾衰竭大鼠肾功能、延缓肾间质纤维化。     

清热化痰解毒方对脑缺血再灌注大鼠肺组织TXNIP/NLRP3炎性通路的影响

目的:探究清热化痰解毒方对脑缺血再灌注大鼠肺组织的影响,并初步探讨相关分子机制。方法:将SD大鼠分为假手术组、模型组、阳性药组(灌胃尼莫地平200 mg·kg~(-1))、清热化痰解毒方低、高剂量组(100,200 mg·kg~(-1)),每组10只,除假手术组外,采用改良4动脉阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,造模后,给药3 d。肺湿/干重(W/D)分析,采用苏木素-伊红(HE)染色进行组织病理学分析;酶联免疫吸附法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-18水平;肺髓过氧化物酶试剂盒检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性;免疫组化分析核苷酸结合域样受体蛋白3(nucleotide-binding domain-like receptor 3,NLRP3)阳性细胞数;半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)比色测定试剂盒检测Caspase-1活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3,ASC,Caspase-1mRNA和蛋白表达,免疫共沉淀检测硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)-NLRP3蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组肺损伤评分,肺W/D,BALF中IL-1β和IL-18水平、总细胞和多形核白细胞数量,MPO活性均明显增加(P0.05);与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺损伤评分,肺W/D,BALF中IL-1β和IL-18水平、总细胞和多形核白细胞数量及MPO活性均明显降低(P0.05)。与假手术组比较,模型组肺组织中NLRP3阳性细胞数,Caspase-1活性,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白和mRNA相对表达明显增加(P0.05);与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺组织中NLRP3阳性细胞数,Caspase-1活性,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白和mRNA相对表达均明显降低(P0.05)。与假手术组比较,模型组肺组织中ROS产生,TXNIP蛋白表达均明显增加(P0.05);与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺组织中ROS产生,TXNIP蛋白表达均明显降低(P0.05)。与假手术组比较,模型组肺组织中TXNIP-NLRP3蛋白共沉淀增加。与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺组织中TXNIP-NLRP3蛋白共沉淀减少。结论:清热化痰解毒方对全脑缺血再灌注大鼠的炎症性肺损伤具有保护作用,且这种作用可能通过抑制ROS产生,从而抑制TXNIP-NLRP3炎症通路介导的促炎介质IL-1β和IL-18的分泌,最终抑制肺组织中炎性细胞浸润,缓解肺组织损伤。     

冠心康对大鼠缺血再灌注损伤心肌氯通道ClC-2、ClC-3、CFTR表达的影响

目的观察中药复方冠心康对大鼠缺血再灌注损伤（MIRI）心肌细胞氯通道ClC-2、ClC-3、CFTR表达的影响.方法 40只SD雄性大鼠随机分为4组：假手术组、MIRI模型组、冠心康组、盐酸地尔硫卓组.冠心康按生药13 g/（kg·d）灌胃给药,盐酸地尔硫卓按30 mg/（kg·d）灌胃给药,假手术组和MIRI模型组分别于相同时间给予等容积的生理盐水灌胃,术前灌胃7 d,每日1次.采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h复制大鼠MIRI模型,造模成功后,在MIRI结扎线以下区域至心尖取材,运用RT-PCR法检测ClC-2、ClC-3、CFTR mRNA表达水平和蛋白质印迹法检测ClC-2、ClC-3、CFTR蛋白的表达.结果氯通道相关基因ClC-2、ClC-3、CFTR mRNA相对表达量在MIRI模型组明显升高,冠心康组和盐酸地尔硫卓治疗组mRNA相对表达量则明显下降,差异均有统计学意义（P＜0.01）;氯通道相关基因ClC-2、ClC-3和CFTR蛋白相对表达量在MIRI模型组明显升高,冠心康组和盐酸地尔硫卓治疗组蛋白表达量则明显下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论冠心康对大鼠MIRI心肌组织具有明显的保护作用,其作用机制可能与调控心肌细胞氯通道相关蛋白的表达有关.     

金香丹抑制NLRP3/IL-1β/Caspase-1信号通路缓解大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 观察金香丹预处理对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠模型心肌组织NOD样受体热蛋白结构域3（NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）/白细胞介素-1β（IL-1β）信号通路的影响,探讨金香丹对MIRI的保护作用及其机制。方法 50只雄性SD大鼠随机分成假手术组,模型组,金香丹高、低剂量组及地奥心血康组,每组10只。造模前7 d开始,金香丹组给予金香丹片高、低剂量（0.72,0.18 g·kg^-1）灌胃;假手术组和模型组每天给予等体积生理盐水灌胃;地奥心血康组给予地奥心血康（1.29 g·kg^-1）灌胃。末次灌胃12 h后,结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注60 min的方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。心电图检测ST段升高评价模型;比色法检测心脏组织肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）水平,苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织损伤情况,DNA断裂的原位末端标记（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌组织NLRP3,Caspase-1和IL-1β蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测心肌组织中NLRP3,Caspase-1和IL-1β mRNA的表达。结果 与假手术组比较,模型组心电图ST段显著升高（P<0.01）,心肌组织CK和LDH活性显著增加（P<0.01）,心肌组织凋亡细胞显著增加（P<0.01）,NLRP3,IL-1β,Caspase-1蛋白和mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,金香丹高、低剂量组及地奥心血康组心电图ST明显降低（P<0.05,P<0.01）,心肌组织CK和LDH活性明显降低（P<0.05,P<0.01）,心肌细胞凋亡明显改善（P<0.05,P<0.01）,降低NLRP3,IL-1β,Caspase-1蛋白和mRNA表达水平（P<0.05,P<0.01）;与地奥心血康组比较,金香丹低剂量组心电图ST段明显升高（P<0.05）,金香丹高剂量组明显降低（P<0.05）,金香丹高、低剂量组和地奥心血康组心肌组织绿色荧光强度明显降低（P<0.05,P<0.01）,金香丹高剂量NLRP3,IL-1β,Caspase-1蛋白和mRNA表达均明显降低（P<0.05）。结论 金香丹可以降低心肌缺血再灌注损伤,其可能机制为抑制炎症小体NLRP3,降低IL-1β表达,抑制心肌细胞凋亡,缓解心肌缺血再灌注损伤。     

丹参通络解毒汤对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织Atg5、Beclin-1及LC3表达的影响

目的 观察丹参通络解毒汤对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠心肌组织Atg5、Beclin-1及LC3表达的影响,探讨其治疗MIRI的作用机制。方法 将大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、丹参通络解毒汤组和自噬抑制剂组,除空白组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法建立MIRI大鼠模型,假手术组只穿线不结扎。造模结束后,丹参通络解毒汤组每日予丹参通络解毒汤（15.66g/kg）灌胃,其余各组大鼠均灌胃等体积生理盐水,连续7 d。自噬抑制剂组术后腹腔注射3-甲基腺嘌呤溶液（15 mg/kg）,透射电镜观察大鼠心肌组织超微结构;生化分析仪检测血清乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)水平;ELISA检测大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平;免疫组化检测大鼠心肌组织LC3蛋白表达;RT-PCR检测心肌组织Beclin-1 mRNA表达;Western blot检测大鼠心肌组织Atg5、Beclin-1和LC3蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维排列不整齐,结构破裂,有自噬小体形成;血清LDH、CK-MB和MDA水平显著升高,SOD水平显著降低...     

藁本内酯对阿霉素所致心肌损伤的保护作用

目的探讨藁本内酯对阿霉素所致心肌损伤的作用及机制。方法采用MTT 法检测藁本内酯对阿霉素 诱导的大鼠心肌细胞H9c2 细胞存活率的影响。通过流式细胞术分析藁本内酯对阿霉素诱导的活性氧（ROS）水 平及H9c2 细胞焦亡的影响。采用免疫印迹法检测H9c2 细胞NLRP3、Caspase-1 蛋白表达情况。通过加入过氧 化氢,探究藁本内酯对阿霉素所致H9c2 细胞焦亡是否由ROS 所介导。将小鼠随机分成4 组,每组5 只,即正 常组、藁本内酯组、模型组（阿霉素）、治疗组（阿霉素+藁本内酯）。以阿霉素（5 mg·kg-1）腹腔注射,每周1 次, 共注射3 周,累积量为15 mg·kg-1。3 周后,以藁本内酯（20 mg·kg-1）腹腔注射,每天1 次,连续给药3 周。记 录心脏质量与体质量比值及心脏超声检查,结合HE 和Masson 染色观测心脏病理变化,探究藁本内酯对阿霉 素小鼠心脏功能和心肌损伤的影响。采用免疫印迹法检测藁本内酯对阿霉素小鼠心肌NLRP3、Caspase-1 蛋白 表达的影响情况。结果与正常组比较,模型组H9c2 细胞存活率明显降低（P＜0.05）;细胞内ROS 含量、 NLRP3 蛋白表达、Caspase-1 水解切割和Caspase-1/7-AAD 双阳性心肌细胞率明显升高（P＜0.05）。与模型组 比较,治疗组细胞存活率增加（P＜0.05）;细胞内ROS 含量、NLRP3 蛋白表达、Caspase-1 水解切割和 Caspase-1/7-AAD 双阳性心肌细胞率减少（P＜0.05）。而藁本内酯对Caspase-1/7-AAD 双阳性心肌细胞率的作 用可被过氧化氢所拮抗（P＜0.05）。与正常组比较,模型组小鼠心肌纤维排列紊乱,心肌纤维化明显;左心室 收缩末期内径和左心室舒张末期内径明显增大（P＜0.05）,心脏射血分数和短轴缩短率、心脏质量与体质量比 值明显减少（P＜0.05）;心肌组织NLRP3 蛋白表达和Caspase-1 水解切割明显增多（P＜0.05）。与模型组比较, 治疗组小鼠心功能和心肌损伤检测指标均得到有效改善（P＜0.05）;心肌组织NLRP3 蛋白表达、Caspase-1 水 解切割明显减少（P＜0.05）。结论藁本内酯可改善阿霉素所致心肌细胞损伤。     

宽心合剂对大鼠心脏急性缺血再灌注损伤心肌保护作用的研究

目的探讨宽心合剂对大鼠心脏急性缺血再灌注损伤的心肌保护作用及其可能机制。方法将32只雄性健康SD大鼠,随机分为4组,即假手术组、急性缺血再灌注损伤模型组、宽心合剂组和曲美他嗪组,各8只。除假手术组只穿线不结扎外,其余3组均采用开胸结扎左冠状动脉前降支60min后松解30min的方法制作大鼠急性缺血再灌注损伤模型。术后12h开始,宽心合剂组给予宽心合剂14mL/（kg·d）灌胃,曲美他嗪组给予曲美他嗪20mg/（kg·d）灌胃,其余2组在相应时间点给予清水10mL/（kg·d）灌胃。各组大鼠分别于术后7d于尾静脉取血3mL,测定血清肌酸激酶（CPK）、血清丙二醛（MDA）、血清总超氧化物歧化酶（T-SOD）及血清游离脂肪酸（FFA）。术后4周各组大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉后开胸摘除心脏,分别用光镜和电镜观察各组大鼠心肌细胞结构改变情况。结果术后7d急性缺血再灌注损伤模型组大鼠血清CPK、MDA及FFA较假手术组均显著升高（P〈0.01,P〈0.05）,血清T-SOD显著降低（P〈0.01） 宽心合剂组和曲美他嗪组血清CPK、MDA较急性缺血再灌注损伤模型组降低（P〈0.05）,血清T-SOD升高（P〈0.05）,曲美他嗪组FFA较急性缺血再灌注损伤模型组显著降低（P〈0.05）。光镜HE染色和电镜结果显示：急性缺血再灌注损伤模型组心肌及线粒体破坏最严重,其他组破坏严重程度依次递减为宽心合剂组、曲美他嗪组,假手术组细胞结构基本正常。结论宽心合剂能够减轻心肌细胞急性缺血再灌注损伤后氧化应激反应,清除氧自由基,保护线粒体结构,从而发挥细胞保护作用,但并不能优化心肌细胞代谢。     

电针预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌Gasdermin D、半胱氨酸蛋白酶-1及白细胞介素-1β表达的影响

目的:观察电针预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞焦亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Gasdermin D(GSDMD)、白细胞介素-1β(IL-1β)的影响,探讨电针预处理减轻MIRI损伤的可能机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、电针组,每组10只。电针组电针大鼠双侧“内关”,每次20 min,每日1次,连续3 d。采用冠状动脉左前降支结扎法复制MIRI大鼠模型。采用超声心动图观察造模4 h后大鼠左心室射血分数(LVEF)以评估心功能;TTC染色法观察大鼠心肌梗死面积;免疫组织化学法观察大鼠心肌组织中GSDMD表达情况;Western blot法检测心肌组织GSDMD、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平。结果:与空白组相比,假手术组心肌组织GSDMD表达升高(P<0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠术后4 h时LVEF明显下降(P<0.000 1),梗死面积增大(P<0.000 1),心肌组织GSDMD表达显著升高(P<0.000 1),心肌GSDMD、Caspase-1、IL-1β蛋白表达升高(P...     

益心泰对慢性心力衰竭大鼠线粒体分裂蛋白Fis1、Mff的影响

目的 研究益心泰对慢性心力衰竭大鼠线粒体分裂蛋白的干预作用及其机制。方法 60只SD大鼠随机抽取10只作为假手术组，剩余50只采用结扎左冠状动脉前降支法制备心肌梗死后心力衰竭大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、益心泰低、中、高剂量组（1.4、2.8、5.6 g·kg^-1）、曲美他嗪组（10 mg·kg^-1），各给药组予相应剂量药物灌胃，模型组和假手术组给予等体积的生理盐水灌胃，连续给药28 d。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清氨基末端B型利钠肽（NT-pro BNP）、B型利钠肽（BNP）、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）含量；彩色多普勒超声成像仪检测心功能指标；苏木素-伊红（HE）染色、马松（Masson）染色法观察心脏病理形态学改变，使用Image J软件计算胶原容积分数（CVF）；透射电镜观察心肌细胞超微结构变化；原位末端标记法（TUNEL）染色检测心肌组织细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌组织线粒体外膜线粒体分裂蛋白1（Fis1）、线粒体分裂因子（Mff）表达。结果 与假手术组比较，模型组血清NT-pro BNP、BNP含量显著升高（P<0.01），ATP含量显著降低（P<0.01），左心室射血分数（LVEF）及左心室短轴缩短率（LVFS）下降（P<0.01），左室舒张末期内径（LVIDd）、左室收缩末期内径（LVIDs）升高（P<0.01），心肌细胞排列紊乱、炎性细胞浸润、胶原纤维增多、CVF上升（P<0.01），心肌及线粒体出现损伤，心肌细胞凋亡指数升高（P<0.01），心肌组织线粒体分裂蛋白Fis1、Mff表达上调（P<0.01）；与模型组比较，益心泰低、中、高剂量组及曲美他嗪组血清NT-pro BNP、BNP含量降低（P<0.05），ATP含量升高（P<0.05），益心泰低、中、高剂量组及曲美他嗪组LVEF、LVFS升高（P<0.01），LVIDd、LVIDs均降低（P<0.01），各剂量益心泰治疗组及曲美他嗪组心肌炎症损伤减轻、纤维化得到改善，CVF降低（P<0.01），各剂量益心泰治疗组及曲美他嗪组心肌线粒体结构得到改善，各剂量益心泰治疗组及曲美他嗪组心肌细胞凋亡指数下降（P<0.01）；益心泰中、高剂量组及曲美他嗪组心肌组织Fis1、Mff蛋白表达下调（P<0.05）。结论 益心泰可改善线粒体结构、减轻心肌细胞凋亡、提升心功能，其作用机制可能与抑制心肌组织线粒体分裂蛋白Fis1、Mff表达有关。     

温阳振衰颗粒对肾间质纤维化模型大鼠细胞焦亡及肾间质纤维化的影响

目的 观察温阳振衰颗粒对肾间质纤维化大鼠细胞焦亡及肾间质纤维化的影响,从NLRP3/Caspase-1通路探讨其干预机制。方法 50只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、抑制剂组和温阳振衰颗粒组,每组10只。以结扎并剪断左侧输尿管建立肾间质纤维化大鼠模型,分别予相应药物干预,连续14 d。试剂盒检测血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）含量,HE和Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组化检测肾组织转化生子因子（TGF）-β1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）表达,Western blot和RT-PCR检测肾组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素（IL）-18、IL-1β蛋白和mRNA表达,免疫荧光双染法检测细胞焦亡。结果 与假手术组比较,模型组大鼠SCr、BUN含量显著增加（P<0.01）,肾小管扩张,炎性细胞浸润,间质纤维化明显,肾组织TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ蛋白表达显著升高（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1β蛋白和mRNA表达显著升高（...     

冠心康对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞形态结构和Caspase-3活性的影响

目的观察冠心康对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞形态结构和Caspase-3活性的影响。方法将40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型组、冠心康组、盐酸地尔硫卓组,每组10只。冠心康组灌胃给予冠心康,盐酸地尔硫卓组灌胃给予盐酸地尔硫卓,假手术组和MIRI模型组于相同时间分别灌胃给予等容积的0.9%NaCl溶液,各组术前灌胃均每天1次,连续7天。灌胃7天后,采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支30 min、再灌注2 h复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。造模后,在MIRI结扎线以下区域至心尖取材,运用常规苏木素-伊红(HE)染色,光镜下用图形分析系统定量观察单位视野全部心肌细胞核染色部分的面积、积分光密度,采用生化法检测Caspase-3活性。结果 MIRI模型组大鼠心肌细胞结构破坏,冠心康组大鼠心肌细胞保持完好。与假手术组比较,MIRI模型组大鼠单位视野全部心肌细胞核染色部分的面积和积分光密度显著降低(P0.01);冠心康组和盐酸地尔硫卓组则显著升高,与MIRI模型组比较差异有统计学意义(P0.01);MIRI模型组大鼠心肌组织Caspase-3活性较假手术组明显升高(P0.01),冠心康组和盐酸地尔硫卓组Caspase-3活性则较MIRI模型组明显降低(P0.01)。结论冠心康对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织具有保护作用,其机制与冠心康抑制心肌组织Caspase-3活性有关。     

氧化苦参碱通过抑制心肌细胞焦亡改善脂多糖诱导的心肌损伤北大核心

目的:探讨氧化苦参碱对脂多糖(LPS)诱导心肌损伤的保护作用及对心肌细胞焦亡的影响。方法:将50只雄性昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、阿司匹林(25 mg/kg)阳性对照组及氧化苦参碱低(25 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组,每组10只。各给药组予相应剂量药物灌胃,正常对照组和模型组予相应体积生理盐水灌胃,1次/d,共8 d。第8天给药1 h后腹腔注射LPS建立小鼠心肌损伤模型。采用心脏超声监测小鼠心功能;HE染色观察小鼠心脏组织病理学变化;免疫组织化学染色观察Cleaved Caspase-1表达;ELISA检测小鼠血清IL-18、TNF-α含量;Western Blot检测小鼠心脏组织中焦亡通路关键蛋白(NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、IL-18、IL-1β)表达。体外实验采用LPS作用原代大鼠心肌细胞12 h,给药组以相应药物预保护1 h,MTT法检测细胞活力;Calcein-AM/PI染色观察心肌细胞焦亡;Western Blot检测焦亡相关蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,体内实验中模型组小鼠出现心功能障碍,心脏组织出现炎性细胞浸润,血清炎症因子含量及焦亡相关蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);体外实验中,模型组心肌细胞活力显著降低,焦亡相关蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,体内实验中氧化苦参碱能改善心肌损伤小鼠心功能,减少心脏组织炎性细胞浸润,降低血清炎症因子含量及焦亡关键蛋白表达(P<0.05或P<0.01);体外实验中,氧化苦参碱能提高心肌细胞活力,降低焦亡相关蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:氧化苦参碱可改善LPS诱导的心肌损伤,其作用机制可能与抑制心肌细胞焦亡有关。