益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠脊髓中星形胶质细胞过度增殖的影响

目的观察益肾养髓方对脊髓慢性压迫大鼠脊髓（C5~C7）中胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）mRNA 表达量及GFAP 蛋白表达和分布的影响,以探讨益肾养髓方对脊髓型颈椎病（Cervical Spondylotic Myelopathy,CSM）大鼠脊髓中星形胶质细胞过度增殖和胶质瘢痕形成的作用。方法将56 只健康 雌性SD 大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、阳性对照组及益肾养髓方低、中、高剂量组,每组8 只。 模型组、益肾养髓方各剂量组及阳性对照组大鼠采用吸水膨胀材料压迫脊髓建立脊髓型颈椎病大鼠模型,假手 术组仅手术暴露脊髓。手术后2 周,益肾养髓方不同剂量组采用中药水煎剂灌胃,阳性对照组采用单唾液酸四 己糖神经节甘脂钠肌注,其余组采用生理盐水灌胃,每日1 次,连续4 周。于给药后第1、3、7、14、21、 28 天进行大鼠运动功能评价（BBB 评分）。术后6 周时HE 染色观察脊髓组织结构,RT-qPCR 法检测大鼠脊髓 GFAP 的mRNA 表达,免疫荧光观察GFAP 蛋白表达。结果灌胃后益肾养髓方各组及阳性对照组大鼠BBB 评分明显高于模型组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,说明益肾养髓方对改善脊髓型颈椎病大鼠脊髓功能有 一定疗效。HE 染色益肾养髓方各组及阳性对照组可见脊髓组织中瘢痕、空洞变少,胞浆逐渐增多,神经细胞 形态接近假手术组。RT-qPCR 及免疫荧光结果提示模型组GFAP mRNA 及蛋白表达升高（P＜0.05）,益肾养髓 方各组及阳性对照组可降低其表达,与模型组比差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论益肾养髓方可降低脊 髓慢性压迫性损伤大鼠脊髓中GFAP 的表达,从而减少胶质瘢痕的形成,促进大鼠后肢运动功能恢复。     

益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠脊髓中细胞凋亡的影响

目的:观察益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠脊髓中细胞凋亡及Fas/FasL-Caspase-8/-3通路的影响。方法:将大鼠随机分配至假手术组、模型组及益肾养髓方高、中、低浓度组,采用吸水膨胀材料压迫脊髓的方法建立脊髓型颈椎病动物模型,术后2周分别给予生理盐水或相应中药水煎剂灌胃。采用Basso Beatie Bresmahan (BBB)评分法测量大鼠运动功能,TUNEL染色评估细胞凋亡,RT-qPCR和Western Blot检测Fas、FasL、Caspase-8及Caspase-3表达情况。结果:造模术后2周,益肾养髓方各组及模型组BBB评分显著低于假手术组(P<0.05)。术后6周,益肾养髓方中浓度组BBB评分均显著优于模型组(P<0.05)。TUNEL染色显示,益肾养髓方各组细胞凋亡率均显著低于模型组(P<0.05)。术后6周,RT-qPCR检测显示,益肾养髓方高、中、低浓度组Caspase-3 mRNA表达水平均低于模型组(P<0.05),中、低浓度组Caspase-8 mRNA表达水平均低于模型组(P<0.05),高、中浓度组Fas mRNA表...     

艾灸对原发性坐骨神经痛大鼠坐骨神经干及脊髓腹角GAP-43表达的影响及其神经修复作用

目的:观察艾灸"环跳"穴对原发性坐骨神经痛大鼠坐骨神经干和脊髓腹角(L₄~L₆)生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响,探讨艾灸改善原发性坐骨神经痛的作用机制。方法:将48只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和艾灸组,每组12只。模型组和艾灸组大鼠采用坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)术建立原发性坐骨神经痛大鼠模型。实验第8天,艾灸组大鼠于患侧"环跳"穴行温和灸5~10 min,每日1次,连续14 d。分别于实验第1、7、14、21天测定各组大鼠坐骨神经功能指数(SFI)。实验第21天,HE染色法观察大鼠脊髓腹角和坐骨神经干形态;免疫组织化学法和实时荧光定量PCR法检测大鼠脊髓和坐骨神经干GAP-43蛋白和mRNA的表达。结果:假手术组大鼠实验第7、14、21天SFI与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,模型组大鼠实验第7、14、21天SFI降低(P<0.01);与模型组比较,艾灸组大鼠实验第14、21天SFI升高(P<0.01)。正常组和假手术组大鼠脊髓腹角内神经元细胞排列整齐,尼氏体分布均匀,坐骨神经轴突髓鞘结构清晰可见;模型组大鼠脊髓腹角内可见神经元细胞变形和破溃,尼氏体数量少,坐骨神经轴突脱髓鞘改变;艾灸组大鼠脊髓腹角内可见神经元细胞排列较规则,尼氏体增多,坐骨神经轴突部分脱髓鞘改变。与正常组比较,假手术组大鼠坐骨神经干GAP-43 mRNA和蛋白表达、脊髓腹角GAP-43蛋白表达升高(P<0.01);与假手术组比较,模型组大鼠脊髓腹角和坐骨神经干GAP-43 mRNA和蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,艾灸组大鼠脊髓腹角和坐骨神经干中GAP-43 mRNA和GAP-43蛋白表达升高(P<0.01)。结论:艾灸"环跳"穴可改善原发性坐骨神经痛大鼠坐骨神经功能,可能与上调脊髓腹角和坐骨神经干GAP-43表达,增强坐骨神经的自我修复能力有关。     

益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠小胶质细胞极化的影响

目的:观察益肾养髓方对慢性脊髓压迫大鼠模型受压脊髓组织小胶质细胞极化的影响。方法:50只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为假手术组、模型组、益肾养髓方高、中、低剂量组，采用吸水膨胀材料压迫脊髓的方法进行造模，给药后分别通过斜板试验、苏木精-伊红(HE)染色、蛋白质印迹(Western Blot)法检测、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)评价大鼠的运动功能与CD86、CD206蛋白及IL-18、IL-1β mRNA的表达。结果:各时间节点的中药灌胃组、模型组斜板试验结果与假手术组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。中药中、高剂量组斜板试验结果均优于模型组，差异有统计学意义(P<0.05);HE染色可见假手术组神经元细胞形态基本正常，模型组大量神经元细胞受损，细胞肿胀坏死，给药组神经元空泡样改变减少，细胞形态及数量有一定恢复。Western Blot法检测结果显示：与假手术组比较，模型组、中药各给药组CD86蛋白表达均高于假手术组，差异有统计学意义(P<0.05);中药中、高剂量组CD206表达高于模型组，差异有统计学意义(P<0....     

左归丸与右归丸对EAE大鼠APP及GAP-43表达的影响

目的观察左归丸和右归丸对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）大鼠淀粉样前体蛋白（APP）及生长相关蛋白（GAP-43）表达的影响,探讨滋阴与温阳补肾法治疗EAE的可能机制。方法应用髓鞘碱性蛋白（MBP）68-86免疫诱导Lewis大鼠建立EAE模型。免疫后第7天、第14天、第28天取大鼠脑白质与脊髓,采用Western-blot和实时荧光定量RT-PCR技术检测APP及GAP-43蛋白及mRNA的表达。结果免疫后第7天,激素和左归丸均能升高EAE大鼠脊髓中APP和脑白质中APP mRNA的过低表达（P〈0.05或P〈0.01）,且在脊髓中二者对APP的调节优于右归丸（P〈0.05）;第14天,左归丸显著调节脑白质中APP mRNA的过高表达、脊髓中APP mRNA的过低表达（P〈0.05或P〈0.01）,作用优于右归丸（P〈0.05）。免疫后第7天,激素与左归丸显著上调EAE大鼠脑白质和脊髓中GAP-43水平（P〈0.05或P〈0.01）,在脊髓中二者作用优于右归丸（P〈0.01）,右归丸显著下调脑白质中GAP-43 mRNA的表达（P〈0.05）;第14天,激素与左归丸显著抑制脑白质中GAP-43的过高表达（P〈0.05）;第28天,激素组与左归丸组脑白质中GAP-43水平低于模型组与右归丸组（P〈0.01）。结论左右归丸对EAE大鼠脑白质和脊髓中APP和GAP-43蛋白与基因的表达均具有一定调节作用,且左归丸的作用明显优于右归丸。     

补骨脂汤对痴呆大鼠海马神经元保护及GAP-43基因表达的影响

目的探讨补骨脂汤对血管痴呆海马内神经元的保护作用及生长相关蛋白-43基因表达(GAP-43)基因表达的影响。方法将60只SD大鼠分成假手术组、模型组、补骨脂汤低剂量组(以下简称补低组)、补骨脂汤高剂量组(以下简称补低组)及银杏叶片组,每组12只,制备血管性痴呆大鼠模型,手术后第3天开始给药,时间1个月,采用HE染色及RT-PCR的方法,分析海马CA1区的神经元的数量和mRNA的表达量。结果补高組、补低组大鼠海马神经元的数量明显高于模型组(P<0.05),GAP-43基因表达的mRNA量明显高于模型组(P<0.05)。结论补骨脂汤可能通过提高GAP-43基因的表达水平,使血管性痴呆海马内的神经元得到很好的保护。     

陇中消肿止痛合剂对脊髓损伤后大鼠脊髓中水通道蛋白4表达的影响

目的 探索陇中消肿止痛合剂对脊髓损伤后大鼠脊髓中水通道蛋白4(AQP-4)的表达情况及其作用机制。方法 选取成年雄性清洁级SD大鼠175只，按照Allen’s法建立脊髓损伤大鼠模型。造模成功后将其随机分为7组，分别为对照组、假损伤组、模型组、七叶皂苷钠组及陇中消肿止痛合剂高、中、低剂量组（简称陇中高、中、低剂量组），每组各25只。采取灌胃给药的方式，根据巴索、比蒂和布雷斯纳汉运动评级（BBB）法评分标准，每隔3天观察评分并记录，总计观察15天。在上述7组随机分别选取SD大鼠15只，提取损伤脊髓样本，分别采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western Blot）及免疫组织化学染色检测AQP-4蛋白及基因表达，并进行统计分析。结果模型组大鼠BBB评分各时间段均低于对照组和假损伤组（P<0.05）；第3、6、9、12、15天于七叶皂苷钠组及陇中高、中、低剂量组BBB评分均高于模型组（P<0.05）；第6、9、12、15天陇中高剂量组BBB评分高于七叶皂苷钠组及陇中低剂量组（P<0.05,P<0.01）；且第15天陇中低剂量组BBB评分低于七叶...     

羟基红花黄色素A抗缺氧/复氧所致神经元损伤的作用及机制研究

[目的] 考察羟基红花黄色素A（HSYA）抗缺氧/复氧（H/R）损伤神经元的作用及机制。[方法] 原代培养Wistar大鼠胎鼠皮层神经元，将神经元随机分为正常对照组、H/R组、羟基红花黄色素A低（5 μg/mL）、中（20 μg/mL）、高（80 μg/mL）剂量组，考察HSYA对神经元活力和乳酸脱氢酶（LDH）释放的影响；采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测脑源性神经生长因子（BDNF）、生长相关蛋白43（GAP-43）及Nogo-A等与神经元突触重塑相关指标的mRNA和蛋白表达。[结果] 与正常对照组比较，H/R组细胞活力明显降低，LDH释放明显增加（P<0.01），BDNF及GAP-43 mRNA和蛋白表达均显著降低（P<0.05），Nogo-A mRNA和蛋白表达显著增加（P<0.01）；与H/R组比较，HSYA低、中、高3个剂量组细胞活力均显著增强，LDH释放明显减少（P<0.01），BDNF及GAP-43 mRNA及蛋白表达明显增加，Nogo-A mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.05或P<0.01）。[结论] HSYA能够提高神经元活力，减少LDH释放，具有抗H/R所致神经元损伤的作用，该作用与促进BDNF表达有关；此外，HSYA还能促进GAP-43 mRNA和蛋白表达、抑制Nogo-A mRNA和蛋白表达，从而增加神经元突触可塑性。     

绞股蓝皂苷对嗅球损毁大鼠学习记忆能力减退的影响

目的观察绞股蓝皂苷对嗅球（oB）损毁AD模型大鼠学习记忆能力减退的影响。方法SD健康大鼠150只,随机分为5组：OB损毁组,绞股蓝皂苷高、中、低剂量干预组,正常对照组,每组30只。通过双侧OB损毁、复制AD大鼠模型。采用绞股蓝皂苷连续灌胃,观察各组大鼠行为学、海马GAP-43蛋白和GAP-43mRNA表达以及隔区胆碱乙酰转移酶（CHAT）免疫阳性神经元数的变化。结果与OB损毁组比较,绞股蓝皂苷中、高剂量组潜伏期明显缩短、穿过平台次数明显增加（P〈0．05）;海马GAP-43蛋白和GAP-43mRNA表达明显增多（P〈0．05）;内侧隔核和斜角带垂直支中ChAT免疫阳性神经元数也明显增多（P〈0．05）,且胞体变大、突起变长。绞股蓝皂苷低剂量组与OB损毁组比较,上述各指标均无明显差异（P〉0．05）。绞股蓝皂苷中、高剂量组之间比较,上述各指标均有明显差异（P〈0．05）。结论绞股蓝皂苷可能通过提高海马GAP-43蛋白和GAP-43mRNA表达以及保护隔区胆碱能神经元,改善OB损毁AD大鼠学习记忆功能。     

槲皮素对脊髓损伤大鼠神经元自噬及PI3K/Akt通路的影响

目的探讨槲皮素对脊髓损伤大鼠神经元自噬及PI3K/Akt通路的影响。方法 SD大鼠100只随机分成5组:对照组、模型组、米诺环素组(90 mg/kg)、槲皮素低剂量组(50 mg/kg)、槲皮素高剂量组(100 mg/kg)。模型组、米诺环素组和槲皮素低、高剂量组建立脊髓损伤模型。建模成功后,米诺环素组和槲皮素低、高剂量组给予相应药物灌胃,对照组、模型组给予等体积的生理盐水,持续4周。给药结束后,进行脊髓损伤的行为学评分(BBB)、机械痛阈(PWT)、热刺激潜伏期(PWTL)的测定。吖啶橙染色观察大鼠海马神经元自噬水平;RTPCR法及免疫组织化学法测定大鼠海马组织中PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平,酶联免疫吸附法测定大鼠海马组织IL-4、IL-6、TNF-α蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组PWT、PWTL、BBB评分水平、神经元自噬小体水平、PI3K、Akt m RNA和蛋白表达水平明显降低(P 0.05),IL-4、IL-6、TNF-α蛋白表达水平明显升高(P 0.05)。与模型组比较,米诺环素组和槲皮素低、高剂量组PWT、PWTL、BBB评分水平、神经元自噬小体水平、PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平明显升高(P 0.05),IL-4、IL-6、TNF-α蛋白表达水平明显降低(P 0.05)。与米诺环素组比较,槲皮素低剂量组PWT、PWTL、BBB评分水平、神经元自噬小体水平、PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平明显降低(P 0.05),IL-4、IL-6、TNF-α蛋白表达水平明显升高(P 0.05);槲皮素高剂量组PWT、PWTL、BBB评分水平、神经元自噬小体水平、PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平、IL-4、IL-6、TNF-α蛋白表达水平相近(P 0.05)。结论槲皮素能明显增加脊髓损伤大鼠神经元自噬水平进而减轻脊髓神经元损伤程度,其机制可能与槲皮素通过激活PI3K/Akt信号通路诱导的大鼠神经元自噬来减弱脊髓损伤有关。     

中药髓复康促进脊髓内神经纤维修复与再生的实验研究

目的 探讨实验性脊髓损伤后神经生长相关蛋白（GAP-43）和神经丝蛋白（NF）表达以及中药髓复康对GAP-43和NF表达的调节作用.方法 选用54只雄性成年SD大鼠,其中48只在无菌手术下造成第12胸髓右侧半横断损伤模型.术后随机分成髓复康组（S）和模型对照组（B）.每组随机分成3、7、15、30天共4个时间点.S组术后灌喂髓复康颗粒剂溶液（SFK）,B组灌喂等量生理盐水,另6只为正常对照组（N）不做任何处理.在相应的时间点处死大鼠取材,制备石蜡切片,GAP-43和NF免疫组化染色,显微观察和半定量图像分析GAP-43和NF阳性表达物的光密度值（OD）.结果 （1）脊髓损伤后7天,B组的NF阳性表达物OD值明显的下调,与N组比较,差异有显著性（P＜0.05）,且以后维持在低水平.S组NF阳性表达物OD值明显的上调,与N组和S组比较,差异有显著性（P＜0.05）,15天达高峰,30天时下降,与N组接近;（2）脊髓损伤后3天,B组GAP-43阳性表达物的OD值降低,明显低于N组（P＜0.05）,S组GAP-43阳性表达物的OD值升高,明显高于N组和B组,组间差异有显著性（P＜0.05）.7天后,B组GAP-43阳性表达物的OD值略回升,接近N组的,而S组的GAP-43阳性表达物的OD值仍然维持在高于N组和B组的水平,组间差异有显著性（P＜0.05）.结论 髓复康通过上调神经元GAP-43和NF阳性表达物的OD值促进损伤神经纤维的修复与再生.     

复健片对大脑中动脉闭塞模型大鼠cAMP/PKA信号通路mRNA及神经营养因子表达的影响

目的:研究复健片对大脑中动脉模闭塞型大鼠cAMP/PKA信号通路mRNA及神经营养因子生长相关蛋白43、脑源性神经营养因子表达的影响,探讨其治疗脑梗死的作用机制。方法:50只SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、复健片高剂量组、复健片低剂量组、丁苯酞组,每组10只,除对照组外,其余各组制备大脑中动脉闭塞模型,采用Zea Longa 5分制进行评分,1～3分为模型成功。各组采用相应干预措施14d,采用HE染色观察大鼠梗死区神经元损伤情况,RT-PCR法检测梗死区脑组织BDNF、GAP-43、PKA、cAMP mRNA表达情况,Western Blot法检测梗死区脑组织BDNF、GAP-43的含量。结果:与对照组比较,模型组梗死区脑组织神经元损伤明显,GAP-43mRNA表达量降低(P0.05),BDNF、PKA、cAMP mRNA表达量明显降低(P0.01),BDNF、GAP-43蛋白表达量降低(P0.05);与模型组相比,复健片高、低剂量组梗死区脑组织神经元损伤均减轻,BDNF、GAP-43、PKA、cAMP mRNA的表达均明显升高(P0.01),复健片高剂量组BDNF、GAP-43蛋白表达量明显升高(P0.01),低剂量组二者的表达也升高(P0.05)。结论:复健片可激活cAMP/PKA信号通路,调控梗死区脑组织中神经营养因子BDNF、GAP-43的表达,促进大脑中动脉闭塞模型大鼠的神经再生。     

酸枣仁汤对PCPA失眠大鼠焦虑样行为的影响

目的 研究酸枣仁汤对PCPA失眠大鼠焦虑样行为的影响。方法 腹腔注射PCPA建立失眠大鼠模型，72只大鼠随机分为对照组，模型组，酸枣仁汤低、中、高剂量组，舒乐安定组。采用行为学实验观察入睡潜伏期、睡眠持续时间、开放臂进入次数、开放臂停留时间，HE染色观察病理变化，RT-qPCR法、Western blot法、免疫组化法检测BDNF、GAP-43、PSD-95 mRNA和蛋白表达及GFAP蛋白表达。结果 与对照组比较，模型组大鼠入睡潜伏期延长(P<0.01),睡眠时间缩短(P<0.01),并出现焦虑样行为，前额叶出现病理损伤，BDNF、GAP-43、PSD-95 mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),GFAP蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较，酸枣仁汤各剂量组大鼠入睡潜伏期缩短(P<0.05,P<0.01),睡眠时间延长(P<0.05,P<0.01),焦虑缓解，前额叶病理损伤改善，BDNF、GAP-43、PSD-95 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),GFAP蛋白表达降低(P<0.05,P&l...     

补阳还五汤与六味地黄丸合方对脑缺血大鼠APP蛋白及突触重构的影响

目的:探讨补阳还五汤、六味地黄丸及合方对脑缺血大鼠学习记忆及海马轴突淀粉样前体蛋白(APP)、生长相关蛋白(GAP-43)和突触素(SYP)表达的影响。方法:采用大脑中动脉永久性缺血模型,雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、补阳还五汤组、六味地黄丸组及合方组。造模后48 h开始灌胃给药,每天1次,补阳还五汤组每天灌胃13 g.kg-1,六味地黄丸组每天灌胃9.1 g.kg-1,合方组每天灌胃22.1 g.kg-1,模型组和假手术组每天灌胃等剂量的生理盐水。每组动物连续给药30 d后进行行为学检测。治疗30 d后,利用Morris水迷宫检测学习记忆功能;Western blot检测轴突淀粉样前体蛋白(APP)及突触分子标志SYN、GAP-43蛋白的表达。结果:脑中动脉永久性缺血30 d后,空间参考记忆明显受损;补阳还五汤、六味地黄丸及合方均能不同程度提高大鼠空间参考记忆,特别是合方组大鼠在定位航行实验第2天的逃避潜伏期较模型组明显减少(P<0.05),补阳还五汤组和合方组大鼠穿环次数较模型组显著性增加(P<0.05);合方组大鼠首次穿越原平台所在位置时间也较模型组明显缩短(P<0.01)。脑缺血大鼠海马APP蛋白表达明显上调,GAP-43、SYN蛋白明显减少,与假手术组差异显著(P<0.01或P<0.05);合方及补阳还五汤治疗可明显下调海马APP蛋白表达,上调海马GAP-43、SYN蛋白,较模型组有统计学差异(P<0.05);六味地黄丸组大鼠海马APP蛋白较模型组没有明显差异,海马GAP-43、SYN蛋白明显上调,差异显著(P<0.05)。结论:补阳还五汤与六味地黄丸合方治疗在减轻缺血脑区轴索损害,降低海马APP蛋白异常积聚的同时,可诱导GAP-43、SYN的合成而促进神经元突起再生,促进学习记忆功能的康复。     

电针督脉对脊髓损伤大鼠脊髓组织线粒体融合及神经干细胞增殖分化的影响

目的：观察电针督脉对脊髓损伤（SCI）大鼠损伤区脊髓组织中线粒体融合及神经干细胞增殖分化的影响,探讨电针促进SCI神经修复的机制。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组各15只。采用精密打击器打击法构建胸10节段SCI模型。电针组大鼠予以电针“大椎”“脊中”,30 min/次,1次/d,共14 d。用Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)运动功能评分法评估大鼠后肢的运动功能;HE染色法、尼氏染色法观察大鼠损伤区脊髓组织病理变化及神经元数量;免疫荧光染色法检测大鼠损伤区脊髓组织中神经干细胞增殖标记物巢蛋白（Nestin）、线粒体融合相关蛋白视神经萎缩蛋白1(OPA1)及神经干细胞转录因子性别决定区Y框蛋白2(SOX2)的阳性表达;实时荧光定量PCR法、Western blot法检测大鼠脊髓组织中Nestin mRNA及蛋白的表达。结果：与同时点假手术组比较,模型组大鼠造模后BBB评分降低（P<0.001）;脊髓组织中神经元肿胀、破裂、坏死严重,尼氏小体溶解严重,神经元数量减少（P<0.001）;Nestin、OPA1、SOX2阳性表达及Nes...     

荭草苷调节微管稳定以促进脊髓损伤后轴突再生

目的探究荭草苷对脊髓损伤的作用及潜在机制。方法建立氧糖剥夺模型及脊髓损伤大鼠模型,通过CCK-8检测荭草苷对原代神经元是否具有细胞毒性。在氧糖剥夺模型中,采用了实时荧光定量PCR、蛋白印迹、免疫荧光染色,并对脊髓损伤大鼠的脊髓切片进行免疫荧光实验,共同探究荭草苷对轴突再生以及微管稳定的影响。最后,通过BBB量表评分、斜板实验评分验证其促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复的作用。结果 CCK-8检测表明,荭草苷在0～50μmol/L浓度之间对原代神经元无细胞毒性作用(P0.05)。体外实验发现,荭草苷可显著上调Nefh、GAP43等轴突再生关键蛋白的mRNA和(或)蛋白表达,并使轴突长度增加,而且在上调乙酰化微管蛋白表达的同时降低酪氨酸化微管蛋白的表达,增加A/T比值(P0.05,P0.01)。脊髓切片的免疫荧光结果与体外实验相符。在脊髓损伤大鼠中,荭草苷亦明显增加了BBB与斜板实验评分(P0.05,P0.01)。结论荭草苷可调节微管稳定以激活轴突内源性生长潜力,并改善脊髓损伤大鼠运动功能,为脊髓损伤治疗提供了新策略。     

电针调控大鼠脊髓损伤后灰质中BDNF、NGF和NT3的表达

目的观察电针对脊髓损伤后灰质中BDNF、NGF和NT3表达的影响,探讨电针治疗脊髓损伤的相关作用机制。方法将36只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组12只。假手术组仅行椎板切除术,模型组和电针组采用脊髓打击器制备脊髓损伤模型。术后电针组给予电针干预,其余各组给予同等条件抓取。术后每日对大鼠进行BBB评分。术后7 d取材。采用尼氏染色法观察神经元形态,采用免疫荧光法检测灰质中BDNF、NGF和NT3的表达情况,采用Western blot检测BDNF蛋白、NGF蛋白和NT3蛋白表达情况,采用实时定量PCR检测BDNF mRNA、NGF mRNA和NT3 mRNA的表达量。结果与假手术组比较,模型组和电针组BBB评分显著下降(P0.05),模型组和电针组灰质中BDNF、NGF和NT3阳性细胞数均显著升高(P0.05),模型组和电针组BDNF蛋白、NGF蛋白和NT3蛋白表达均显著增加(P0.05),模型组和电针组BDNF mRNA、NGF mRNA和NT3 mRNA表达均显著增加(P0.05);与模型组比较,电针组BBB评分于干预后5 d起显著提高(P0.05),电针组神经元形态较模型组明显改善,电针组灰质中BDNF、NGF和NT3阳性细胞数均显著升高(P0.05),电针组BDNF蛋白、NGF蛋白和NT3蛋白表达均显著增加(P0.05),电针组BDNF mRNA、NGF mRNA和NT3 mRNA表达均显著增加(P0.05)。结论电针能促进大鼠脊髓损伤后灰质中BDNF、NGF和NT3表达,从而有利于神经元修复和大鼠肢体运动功能恢复。     

夹脊电针结合BWSTT干预脊髓损伤大鼠髓鞘超微结构及p-MLC的研究

目的探讨夹脊电针结合减重步行训练(BWSTT)对脊髓损伤大鼠髓鞘超微结构及磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)的影响。方法将60只大鼠随机分为正常组、模型组、电针(EA)组、药物组和EA+运动组,每组再分连续治疗7 d和14 d的2个亚组。除正常组外,其余4组运用改良的Allen法制备脊髓损伤模型,造模成功后,正常组和模型组均不予治疗,EA组采取针刺夹脊穴进行电针治疗,药物组采用腹腔注射法舒地尔(Fasudil)进行治疗,EA+运动组采用夹脊穴电针联合部分重量支撑平板训练进行治疗。各组分别连续治疗7 d和14 d,治疗结束后,通过脊髓损伤行为学评分(BBB评分)评估大鼠的后肢运动功能恢复情况,运用Western blot法检测p-MLC和中枢髓鞘来源的神经生长抑制受体(NGR)蛋白的表达,采用髓鞘染色(LFB染色)观察髓鞘的超微结构。结果BBB评分显示,脊髓损伤后大鼠后肢运动功能显著下降,治疗7 d、14 d后,EA+运动组与模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),治疗14 d后,EA+运动组BBB评分较前升高,与EA组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,脊髓损伤后p-MLC、NGR明显增多,治疗7 d、14 d后,EA+运动组p-MLC和NGR表达与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗14 d后EA+运动组p-MLC和NGR表达下降,与EA组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。LFB染色显示,脊髓损伤后,轴突髓鞘结构遭到破坏,脊髓白质纤维紊乱,髓鞘缺失,有髓神经纤维较少,髓鞘染色平均IOD值下降明显,治疗7 d、14 d后,EA+运动组与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),治疗14 d后,EA+运动组平均IOD值较前升高,与EA组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论夹脊电针结合BWSTT可通过抑制脊髓损伤后MLC的磷酸化及NGR的表达,保护髓鞘结构,促进运动功能恢复。     

电针通过调控胞质型磷脂酶A2表达减少脊髓损伤大鼠脊髓神经细胞凋亡

目的：观察电针对脊髓损伤（SCI）大鼠胞质型磷脂酶A2 (cPLA2)的表达和神经细胞凋亡的影响，探讨电针治疗SCI的部分机制。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、阻断剂组和电针+阻断剂组，每组18只。采用改良Allen重物打击法制备SCI模型。电针组取“大椎”“腰阳关”及双侧“次髎”“足三里”进行电针治疗，每次20 min，每日1次，共14次；阻断剂组予以花生甙三氟甲基酮隔日1次腹腔注射。治疗结束对各组大鼠进行BBB评分；Western blot法检测各组大鼠脊髓组织cPLA2、磷酸化（p）-cPLA2、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的表达；荧光定量PCR法检测各组大鼠脊髓组织cPLA2、Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA的表达；尼氏染色观察脊髓组织形态变化。结果：与假手术组比较，模型组大鼠BBB评分明显降低（P<0.01），脊髓组织形态明显受损；与模型组比较，各治疗组大鼠BBB评分升高（P<0.01），脊髓组织形态都有所改善；电针+阻断剂组BBB评分高于电针组、...     

益肾活血止痛方对骨癌痛大鼠脊髓星形胶质细胞活化及p38 MAPK的影响

目的：探讨益肾活血止痛方的镇痛作用及对骨癌痛大鼠热缩足潜伏期（PWTL）、骨质破坏程度、骨密度及脊髓星形胶质细胞神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）表达的影响。方法：将40只大鼠随机分为中药组（1.92 g/ml）、唑来膦酸组（30 μg/kg）、假手术组、模型组,每组各10只。于大鼠左后肢体注射Walker-256细胞建立骨癌痛模型,于造模后第5天开始给药,连续21 d。并于造模后第7、14、21天检测PWTL,于造模后第22天采用X线检查各组大鼠骨质破坏程度及骨密度,并提取大鼠脊髓腰膨大处,采用荧光定量PCR及Western blot分别检测GFAP和p38 MAPK在mRNA及蛋白的表达情况。结果：行为学评估提示,造模后7、14、21天,中药组及唑来膦酸组PWTL值均高于模型组（P<0.05）。中药组、唑来膦酸组及模型组大鼠胫骨出现不同程度骨质破坏,且大鼠胫骨骨密度及骨矿物质水平均较模型组高（P<0.05）。中药组和唑来膦酸组GFAP mRNA、p-p38 MAPK mRNA及相应的蛋白含量均低于模型组（P<0.05）。结论：益肾活血止痛方的止痛机制可能与抑制脊髓星形胶质细胞活化,阻断中枢痛觉敏化MAPK通路有关。