FAT对K562/A02细胞内GSH含量的影响

目的：探讨FAT对K562/A02细胞内谷胱甘肽（GSH）含量的影响,及其对白血病细胞代谢解毒系统介导的多药耐药（MDR）的逆转效果。方法：采用生化DTNB法测定细胞内谷胱甘肽水平。结果：K562/A02细胞内GSH含量（231.54μmol/106细胞）高于K562细胞内GSH含量（58.03μmol/106细胞）,为K562细胞的3.99倍;VRP（10μmol/L）、FAT（0.01、0.02、0.04、0.08mg/ml）作用48h后,K562/A02细胞内GSH含量从231.54μmol/106细胞分别减少到96.95μmol/106细胞、212.89μmol/106细胞、161.00μmol/106细胞、122.35μmol/106细胞。结论：细胞内GSH含量增加是K562/A02细胞产生MDR的机制之一;FAT降低K562/A02细胞内GSH的含量是FAT逆转MDR的机制之一。     

青蒿琥酯抑制FOXP3基因对K562/ADR细胞增殖、 凋亡及多药耐药的影响

目的 探讨青蒿琥酯（Artesunate）抑制FOXP3基因表达对慢性髓系白血病（CML）耐阿霉素（ADR）细胞株 K562/ADR增殖、凋亡及多药耐药的影响,并探讨其作用机制。方法 实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测 FOXP3 mRNA在K562和K562/ADR细胞中的表达;蛋白印迹法（Western blot）检测FOXP3蛋白的表达;青蒿琥酯不同 质量浓度（2.5、5.0、7.5、10.0、12.5 mg/L）处理K562/ADR细胞24 h,利用CCK-8法检测不同浓度青蒿琥酯对K562/ADR 细胞的细胞毒性,筛选无细胞毒性浓度的青蒿琥酯完成后续实验;RT-PCR法、Western blot法检测无细胞毒性浓度青 蒿琥酯处理下FOXP3 mRNA、FOXP3蛋白表达变化;CCK-8法检测ADR对细胞毒性的变化;流式细胞术（FCM）检测 ADR平均荧光强度,即蓄积浓度变化。结果 FOXP3基因在CML耐药细胞株K562/ADR中表达升高;无毒剂量浓度 青蒿琥酯（2.5、5.0、7.5 mg/L）处理下K562/ADR细胞FOXP3 mRNA、蛋白表达受抑制（P＜0.05）;K562/ADR细胞胞内 ADR毒性增强,浓度升高（P＜0.05）。结论 FOXP3基因在CML K562/ADR耐药细胞株中高表达;青蒿琥酯可以通过 抑制FOXP3基因表达,增加K562/ADR胞内ADR浓度,逆转多药耐药,且呈一定的剂量依赖性。     

五味子甲素对K562/ADR、HL60/ADR、MCF-7/ADR多药耐药逆转机制的研究

目的探讨五味子甲素(schizandrin A or deoxyschizan-drin,schA)对白血病细胞K562/ADR、HL60/ADR、乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药的逆转作用,并初步探讨其逆转机制。方法 MTT法检测schA对耐药细胞的逆转作用;流式细胞仪检测schA对细胞内柔红霉素、罗丹明-123含量和细胞表面P-gp表达水平的变化;用Real-time PCR方法检测schA对细胞内mdr1 mRNA和mrp1 mRNA表达;生化检测法检测schA对细胞内GSH含量的变化。结果耐药逆转实验显示:不同浓度的schA对作用机制不同的化疗药物耐药产生不同的逆转效果;蓄积实验表明schA可增加柔红霉素、罗丹明123在耐药细胞内的蓄积,并且有良好的剂量依赖关系;schA处理K562/ADR、HL60/ADR细胞24 h后,能降低P-gp蛋白和mdr1、mrp1基因的表达;schA处理K562/ADR、HL60/ADR细胞4 h后,可降低细胞内谷胱甘肽含量。结论 schA对耐药机制不同的细胞株K562/ADR、HL60/ADR均有耐药逆转作用,推测可能是与抑制细胞表面的P-gp蛋白功能和表达,降低mdr1、mrp1耐药基因的表达和降低细胞内谷胱甘肽含量有关,schA通过影响上述机制,进而增加细胞内的药物浓度,达到有效杀灭肿瘤细胞的作用。     

木犀草素抑制白血病耐药株K562/A02的GST-π表达

目的探讨木犀草素（luteolin）对白血病耐药株K562/A02细胞谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）的影响。方法木犀草素30 mmol/L预处理K562/A02细胞第1、35、d后,MTT法测定阿霉素IC50,采用722分光光度计测定细胞内GSH含量及Western Blot法测定木犀草素处理后GST-π蛋白表达。结果木犀草素对K562/A02的耐药性具有明显的逆转作用,用木犀草素处理后,对阿霉素药物敏感性的相对逆转效率第1、3、5 d分别为10.7%4、2.7%和15.8%;木犀草素显著降低K562/A02细胞内GSH含量,GST-π蛋白的表达于用药后第1、35、d分别下降22%5、6%和34%。结论木犀草素具有较强的逆转K562/A02细胞多药耐药的作用,其逆转机制可能与降低细胞内GSH含量,下调K562/A02细胞GST-π蛋白的表达相关。     

透明质酸寡糖逆转白血病细胞系K562/ADR多药耐药的研究

目的研究透明质酸寡糖(o-HAs)的体外逆转白血病多药耐药细胞(K562/A02)的耐药性,并对其逆转机制进行探讨。方法以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测o-HAs对K562/A02细胞的多药耐药逆转活性;以流式细胞术检测o-HAs对K562/A02细胞内抗癌药物盐酸多柔比星(ADR)累积的影响。结果在100μg.mL-1浓度时o-HA4、o-HA6、o-HA8、o-HA10使ADR对K562/A02的半数抑制浓度(IC50)由61.6μg.mL-1分别降低至30.17、30.04、32.29、33.33μg.mL-1。细胞中ADR的累积量增加至原来的3.90、3.92、3.76、3.39倍。结论 o-HAs在体外具有较强的逆转K562/A02细胞多药耐药的活性。     

环氧化酶-2选择性抑制剂逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药的实验研究

目的 研究环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂Celecoxib对人乳腺癌细胞系MCF-7/ADR的多药耐药(MDR)逆转作用.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定Celecoxib对MCF-7/ADR细胞的无毒剂量,并检测在此剂量下的耐药细胞逆转倍数;荧光分光光度法测定Celecoxib对细胞内阿霉素(ADM)荧光强度的影响.结果 无毒剂量的Celecoxib(1×10-3 μmol/L)可显著降低ADM对MCF-7/ADR的半数抑制浓度(IC50),逆转耐药倍数为1.91倍.Celecoxib能够提高MDR细胞内ADM荧光强度.结论 Celecoxib具有逆转人乳腺癌MCF-7/ADR多药耐药性的作用,可能与增加MDR细胞内化疗药物聚集量有关.     

孤啡肽逆转人白血病K562/ADM细胞耐药性的研究

目的 探讨孤啡肽对人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用.方法 测定孤啡肽的细胞毒性及其对K562/ADM细胞药物敏感性的影响,计算耐药逆转倍数.瑞士染色观察药物作用后K562/ADM细胞形态的改变;流式细胞仪检测阿霉素单用或与孤啡肽联用K562/ADM细胞凋亡百分率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察孤啡肽与阿霉素联用后K562/ADM细胞内DNA的损伤程度.结果 非细胞毒性剂量的孤啡肽(10-7mol/L)作用于K562/ADM细胞时,对阿霉素耐药起到了部分逆转作用,使K562/ADM细胞的IC50由原来的(46.99±0.25)μg/ml降低至(23.11±0.29)μg/ml,其逆转倍数为2.03倍;孤啡肽(10-7mol/L)和阿霉素(20μg/ml)联合处理K562/ADM细胞48h,K562/ADM细胞呈典型的凋亡形态改变;细胞的凋亡率达到(18.73±3.90)%,明显高于两种药物在相同条件下单独作用的效果,P＜0.01;结论 孤啡肽能诱导K562/ADM细胞凋亡,从而能逆转K562/ADM细胞的耐药性,提高阿霉素的敏感性.     

盐酸千金藤碱逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制

研究盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochloride,CH)逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制。采用MTT法检测多柔比星(adriamycin,ADR)单用及分别与CH、维拉帕米(verapamil,VER)合用的细胞毒作用;采用流式细胞仪,测定CH对细胞内ADR蓄积、罗丹明123(Rho123)蓄积和泵出及P糖蛋白(P-gp)表达的影响。结果表明,CH(4μmol.L1)使K562/ADR细胞对ADR的敏感性增加7.43倍,逆转活性是VER的3.19倍,但对K562敏感株基本无影响。同时CH浓度依赖性地增加K562/ADR细胞内ADR和Rho123的蓄积,减少Rho123的泵出,抑制P糖蛋白的表达,但对K562细胞均无明显影响。CH在体外逆转肿瘤细胞多药耐药性的作用可能与其抑制P糖蛋白的功能和表达有关。     

多药耐药白血病细胞中GCS基因高表达及其意义

目的 探讨葡萄糖神经酰胺合酶(GCS)基因在细胞株K562/AO2和K562中的表达与白血病多药耐药(MDR)的关系.方法 RT-PCR技术检测K562/AO2及K562细胞株的GKS和Bcl-2基因的表达;ELISA法检测两细胞株中Bcl-2及Caspase-3的表达;Alamar BlueTM细胞染色法分析K562/AO2细胞经苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(PPMP)处理后多药耐药件的变化.结果 K562/AO2细胞的GCS基因、Bel-2基因和Bel-2蛋白表达明显强于K562细胞(P<0.01),Caspase-3则相反(P<0.05).K562/AO2细胞经25μmol/L PPMP处理后,GCS基因表达抑制,阿霉素(ADR)对其半数抑制浓度(IC50)明显降低.结论 GCS基因可能在白血病MDR形成过程中起着重要作用,其机制可能为细胞凋亡相关基因的表达异常.PPMP通过抑制GCS活性有效逆转K562/AO2细胞的多药耐药性.     

屈洛苷芬对K562耐阿霉素细胞株耐药性的逆转作用

目的：研究屈洛昔芬（DRO）对耐阿霉素（ADR）K562细胞株（K562／A02)多药耐药性（MDR）的逆转作用及逆转机制。方法：用DRO分别处理K562／A02和K562敏感株。MTT法观察DRO影响K562／A02对ADR化学敏感性的变化。DRO 10μmol/L处理K562／A02前后,通过RT－PCR和免疫细胞化学染色,分析MDR1、GSTπ基因表达的变化,采用流式细胞技术测定细胞内ADR浓度的变化。结果：DRO显著逆转K562／A02的MDR,在20,10和5μmol/L浓度时,对ADR的化学敏感性分别增加到14、13和4倍,逆转活性与维拉帕米相当。MDR1和GSTπ的mRNA和蛋白表达在DRO 10μmol/L处理后第2天开始下降,第5天明显降低。用20、10和5μmol/L浓度的DRO处理两株细胞,K562／A02细胞内ADR积累分别增加到2．9、2．3和1．5倍。但DRO不能明显增加K562细胞内的ADR的浓度。结论：DRO对K562／A02的MDR有较强的逆转活性,逆转强度与维拉帕米相当,其逆转机制有多种不同的途径。     

木犀草素抑制白血病耐药株K562/A02的GST-π表达

目的 探讨木犀草素(luteolin)对白血病耐药株K562/A02细胞谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)的影响.方法 木犀草素30 mmol/L预处理K562/A02细胞第1、3、5d后,MTT法测定阿霉素IC50,采用722分光光度计测定细胞内GSH含量及Western Blot法测定木犀草素处理后GST-π蛋白表达.结果 木犀草素对K562/A02的耐药性具有明显的逆转作用,用木犀草素处理后,对阿霉素药物敏感性的相对逆转效率第1、3、5d分别为10.7％、42.7％和15.8％;木犀草素显著降低K562/A02细胞内GSH含量,GST-π蛋白的表达于用药后第1、3、5d分别下降22％、56％和34％.结论 木犀草素具有较强的逆转K562/A02细胞多药耐药的作用,其逆转机制可能与降低细胞内GSH含量,下调K562/A02细胞GST-π蛋白的表达相关.     

阿霉素纳米粒对白血病多药耐药细胞株K562/ADR耐药性的逆转作用

目的:研究阿霉素纳米粒对人白血病多药耐药细胞株K562/ADR耐药性的逆转作用.方法:采用MTT法测定药物的体外杀伤作用,应用流式细胞术测定细胞内药物浓度.结果:阿霉素纳米粒和阿霉素对K562细胞细胞毒作用相似,K562/ADR对阿霉素纳米粒较阿霉素敏感2.63倍,细胞内阿霉素浓度显著增加可能是关键因素.结论:阿霉素纳米粒通过增加耐药细胞内阿霉素浓度有效逆转多药耐药.     

米非司酮联合三氧化二砷对K562/ADM的逆转作用及其机制

目的:探讨米非司酮(mifepristone)联合三氧化二砷(As2O3)对K562/ADM的逆转作用及机制研究。方法:不同浓度米非司酮、As2O3处理细胞72h,采用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度法检测细胞谷胱甘肽(GSH)含量。结果:10μmol.L-1的米非司酮对K562/ADM细胞无明显杀伤,可有效逆转K562/ADM细胞耐药性,此浓度米非司酮联合As2O3(2.0μmol.L-1)作用于K562/ADM细胞后,逆转倍数明显增高(P<0.01),GSH含量明显低于同浓度单用药组(P<0.05)。对细胞增殖抑制及其诱导凋亡的效果均明显高于同浓度单用药组(P<0.05)。结论:米非司酮联合As2O3逆转作用增强,机制可能与凋亡加强及GSH含量改变有关。     

苦瓜蛋白逆转K562／AO2细胞多药耐药性的研究

目的：研究非细胞毒性质量浓度苦瓜蛋白对耐阿霉素的人红白血病细胞株K562／AO2多药耐药性的逆转作用和促凋亡作用。方法：采用CCK-8法测定苦瓜蛋白的细胞毒性及其对K562／AO2细胞敏感性的影响,用流式细胞仪检测K562／AO2细胞经不同药物处理后细胞的凋亡情况。结果：苦瓜蛋白对K562／AO2细胞有一定的细胞毒作用,其非细胞毒性质量浓度为5μg／mL,非细胞毒性质量浓度苦瓜蛋白对K562／AO2细胞对阿霉素、长春新碱（VCR）和柔红霉素的耐药性都有部分逆转作用（分别为5．4、6．5和4．0倍）;5μg／mL苦瓜蛋白联合VCR诱导K562／AO2细胞凋亡,凋亡率为（19．38±1．06）％,而对照组为（1．64±0．27）％,单一苦瓜蛋白组为（3．79±0．82）％,单一VCR组为（9．83±0．98）％。结论：苦瓜蛋白能部分逆转人红白血病K562／AO2细胞对阿霉素、VCR和柔红霉素的耐药,一定剂量的苦瓜蛋白与VCR联合应用可增加肿瘤细胞凋亡率。     

4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用

目的比较4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素(GP-7)对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞(K562/ADM细胞)的抑制作用是否优于依托泊苷。方法以依托泊苷和K562细胞为对照,用不同浓度GP-7处理K562/ADM细胞不同时间,MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率,普通光学显微镜观察细胞凋亡形态,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果8~128mol.L-1GP-7处理48h或64μmol.L-1GP-7处理24~72h,GP-7对K562/ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性(r=0.947,P<0.05)和时间依赖性(r=0.999,P<0.01)。GP-7及依托泊苷对K562/ADM的IC50分别为(45.9±1.8)及(68.7±4.6)μmol.L-1;64μmol.L-1GP-7作用48h可使G2/M期细胞明显增多,相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞凋亡,但其引起的K562/ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解,但GP-7引起的K562/ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞;128及256μmol.L-1GP-7或依托泊苷处理K562/ADM和K562细胞48h,GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷,但32和64μmol.L-1时作用则相反。结论GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的增殖,诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的作用优于依托泊苷。     

钙调素拮抗剂小檗胺逆转K562／ADR细胞株多药耐药的研究

目的:研究钙调素拮抗剂小檗胺(BBM)抑制白血病细胞增殖并逆转细胞多药耐药的作用。方法:以四唑氮蓝(MTT)法测定小檗胺对K562细胞、耐阿霉素K562细胞(K562/ADR)的增殖抑制作用并求得其IC_(50);测定联合应用阿霉素和BBM后K562/ADR细胞对阿霉素的IC_(50)值及其增敏倍数。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小檗胺作用前后K562/ADR细胞多药耐药基因(MDR)在mRNA水平的表达,应用免疫组织化学方法测定P170表达量。结果:小檗胺能显著抑制K562及K562/ADR细胞增殖,其IC_(50)值分别为5.32 μg·mL~(-1)和 10.97μg·mL~(-1)。联合应用阿霉素和1 μg·mL~(-1)小檗胺使K562/ADR细胞对阿霉素的IC_(50)由5.94 μg·mL~(-1)降低至2.93μg·mL~(-1),其增敏倍数为2.03倍。8 μg·mL~(-1)小檗胺作用K562/ADR细胞24 h后P170的表达量由85.45％降低至63.86％,72 h后MDR1mRNA的表达以β-actin为内参照的半定量比值也由处理前的1.625降至0.877。结论:小檗胺对K562、K562/ADR有显著的增殖抑制作用,小檗胺能部分逆转K562/ADR细胞对阿霉素的耐药,其作用是通过抑制MDR1在mRNA和P170水平的表达而实现的。     

蛇床子素对耐阿霉素人乳腺癌细胞耐药的逆转作用

目的:研究蛇床子素(Ost)对人乳腺癌细胞阿霉素耐药株多药耐药(MDR)的逆转作用及其机制。方法:采用MTT比色法测定药物的细胞毒性,高效液相-紫外检测法检测细胞内ADR浓度。结果:Ost对MCF-7及MCF-7/ADR细胞均有增殖抑制作用,IC50值分别为(58.1±2.3)μmol.L-1和(59±5)μmol.L-1;在5~15μmol.L-1范围内,Ost可以不同程度地增强ADR对MCF-7细胞杀伤作用,与ADR联合用药降低ADR对MCF-7/ADR的IC50值,显著增加MCF-7/ADR细胞内ADR的积累。结论:Ost对人乳腺癌细胞株MCF-7及其阿霉素耐药株MCF-7/ADR细胞均有增殖抑制作用,而且Ost通过明显增加MCF-7/ADR细胞内ADR的浓度,逆转其阿霉素耐药性。     

屈洛昔芬对K562耐阿霉素细胞株耐药性的逆转作用(英文)

目的:研究屈洛昔芬(DRO)对耐阿霉素(ADR)K562细胞株(K562/A02)多药耐药性(MDR)的逆转作用及逆转机制。方法:用DRO分别处理K562/A02和K562敏感株。MTT法观察DRO影响K562/A02对ADR化学敏感性的变化。DRO 10μmol/L处理K562/A02前后,通过RT-PCR和免疫细胞化学染色,分析MDR1、GSTπ基因表达的变化,采用流式细胞技术测定细胞内ADR浓度的变化。结果:DRO显著逆转K562/A02的MDR,在20、10和5μmol/L浓度时,对ADR的化学敏感性分别增加到14、13和4倍,逆转活性与维拉帕米相当。MDR1和GSTπ的mRNA和蛋白表达在DRO 10μmol/L处理后第2天开始下降,第5天明显降低。用20、10和5μmol/L浓度的DRO处理两株细胞,K562/A02细胞内ADR积累分别增加到2.9、2.3和1.5倍。但DRO不能明显增加K562细胞内的ADR的浓度。结论:DRO对K562/A02的MDR有较强的逆转活性,逆转强度与维拉帕米相当,其逆转机制有多种不同的途径。     

木犀草素对K562细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的　探讨木犀草素对K562细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期K562细胞分别加入0、10、25、50、100 μmol/L木犀草素培养24 h、48 h、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;K562细胞分别加入0、25、50 μmol/L木犀草素培养48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;K562细胞分别加入0、10、50、100 μmol/L木犀草素培养48 h,采用Westem blot检测B细胞淋巴瘤2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、多聚ADP核糖聚合酶（PARP）、Cleaved-PARP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）、Cleaved-Caspase3、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）、断裂点簇集区蛋白（BCR）、c-abl癌基因1（c-ABL）BCR-ABL蛋白表达。结果　CCK-8检测结果显示,随木犀草素浓度增加及作用时间的延长,K562细胞增殖抑制率均呈增长趋势（P＜0.05）。流式细胞仪检测结果显示,木犀草素0、25、50 μmol/L组K562细胞的凋亡率依次升高（分别为8.21%±0.55%、23.43%±1.50%和40.47%±2.97%）。Western blot结果显示,Bax、Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase3表达水平随木犀草素浓度的增加而升高（P＜0.05）。木犀草素0、10、50 μmol/L组PARP蛋白表达水平依次升高（P＜0.05）,100 μmol/L组与50 μmol/L组差异无统计学意义。100 μmol/L组Caspase3、Bcl-2蛋白表达水平均低于其余组（P＜0.05）。50、100 μmol/L组p-AKT蛋白表达水平低于0、10 μmol/L组,100 μmol/L组低于50 μmol/L组。50 μmol/L组BCR-ABL融合蛋白表达水平高于0 μmol/L组,100 μmol/L组低于0、50 μmol/L组（P＜0.05）。结论　木犀草素可抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与调控BCR-ABL蛋白表达及PI3K/AKT信号通路有关。     

姜黄素逆转人白血病多药耐药细胞株HL—60／ADR的多药耐药性

目的 研究姜黄素与阿霉素联合应用对人白血病多药耐药细胞系HL-60／ADR耐药性的逆转作用。方法 采用MTT法测定药物的体外杀伤作用，应用金氏公式进行联合用药效果分析。应用流式细胞术分析细胞周期和测定细胞内药物浓度。结果 姜黄素2．00μmol／L～16．001μmol／L，阿霉素0．801μmol／L～6．401μmol／L同时给药对HL-60／ADR细胞可产生单纯相加至增强的协同杀伤效果，对HL-60／ADR细胞周期的影响也有协同作用，HL-60／ADR细胞内ADR积聚增加是其原因之一。序贯给药法中先给姜黄素后给阿霉素结果为协同作用，先给阿霉素后给姜黄素为拮抗作用。结论 姜黄素与阿霉素同时联合用药可产生协同作用，有效逆转多药耐药。序贯联合用药仅产生单向协同作用。