血浆游离DNA IgH和TCRγ基因重排在非霍奇金淋巴瘤患者微小残留病中的应用及临床意义

目的检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链(IgH)基因和T细胞受体γ(TCRγ)基因克隆性重排,并探讨其在监测微小残留病变(MRD)中的临床意义。方法提取63例NHL患者血浆游离DNA并以Globin基因确定其存在,通过PCR方法检测IgH(VH FR3-JH)和TCRγ(Vγ-Jγ)克隆性基因重排,与病理组织学检查进行比较。并随访患者以监测和检测MRD。结果 63例中有49例[30例B细胞NHL(B-NHL)和19例T细胞NHL(T-NHL)]初诊、难治或复发的患者血浆游离DNA提取成功。30例确诊的B-NHL患者中IgH基因单克隆重排阳性27例(90%),19例确诊的T-NHL患者中TCRγ基因单克隆重排阳性14例(74%);其病理活检标本基因重排结果分别为87%和74%(P0.05)。另14例(9例B-NHL,5例T-NHL)临床缓解患者中,仅1例(B-NHL)提取出血浆游离DNA并检测到IgH基因单克隆重排。随访治疗缓解的患者共56例,其中24例患者血浆游离DNA基因重排持续阴性,2年存活率达83%;27例患者血浆游离DNA基因重排缓解时呈阴性随后转阳,5例患者缓解后始终能检测到血浆游离DNA基因重排,其2年存活率分别为26%和20%(P0.05)。结论 NHL患者血浆中可以检测出肿瘤源性的血浆游离DNA;NHL患者血浆游离DNA IgH、TCRγ基因重排的检测简单、方便,与病理活检标本检测具有相同的临床意义。在MRD的监测中,利用血浆游离DNA检测单克隆性重排具有一定的早期预测复发的作用。     

非霍奇金淋巴瘤患者血浆游离DNA IgH和TCRγ基因重排的检测及临床意义

目的 检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链(IgH)基因和T细胞受体γ(TCRγ)基因克隆性重排并探讨其临床意义.方法 提取74例NHL患者血浆游离DNA并以Globin基因确定其存在,通过PCR方法 检测IgH(FR3A/VLJH)和TCRγ(TVG/TJX)克隆性基因重排,并分别与外周血单个核细胞DNA、病理组织学检查进行比较.结果 74例患者中有58例(35例B-NHL和23例T-NHL)初诊、难治或复发的患者血浆游离DNA提取成功,另16例临床缓解患者未提取出血浆游离DNA.35例确诊的B-NHL患者中IgH基因单克隆重排阳性31例(88.6%),无一例出现TCRγ基因单克隆重排,23例确诊的T-NHL患者中TCRγ基因单克隆重排阳性8例(34.8%),其中2例同时出现IgH基因单克隆重排.在50例同时获得病理活检标本基因重排结果 的病例中,30例B-NHL患者血浆DNA IgH基因重排阳性26例(86.7%),病理活检标本阳性24例(80.0%)(P＞0.05);20例T-NHL患者血浆DNA TCRγ基因重排阳性7例(35%),病理活检标本阳性6例(30%)(P＞0.05).结论 NHL患者血浆中可以检测出肿瘤源性的血浆游离DNA;NHL患者血浆游离DNA IgH、TCRγ基因重排的检测简单、方便、相对无创,与病理活检标本的检测具有相同的临床意义.     

自身免疫性甲状腺炎患者血浆中Th1/Th2细胞及甲状腺自身抗体水平变化及临床意义

目的探讨辅助性T淋巴细胞分化平衡比(Th1/Th2)及血浆抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)检测应用于自身免疫性甲状腺炎(AIT)诊断及病情评估的临床价值。方法回顾性分析96例AIT患者临床资料,根据其血浆免疫球蛋白G4(Ig G4)检测情况分为阳性组(Ig G41. 35 g/L,n=34)与阴性组(Ig G4≤1. 35 g/L,n=62),并将同期确诊的47例非炎症性甲亢患者纳入对照。比较AIT患者与非炎症性甲亢患者、阳性组与阴性组患者Th1/Th2及血浆TGAb、TPOAb、TRAb水平差异,以受试者工作特征(ROC)曲线,评估上述指标分别或联合诊断AIT效能,分析上述指标与Ig G4的相关性。结果 AIT患者Th1/Th2及血浆TGAb、TPOAb水平高于非炎症性甲亢患者,血浆TRAb水平低于非炎症性甲亢患者(P 0. 05)。Th1/Th2、TGAb、TPOAb、TRAb诊断AIT的cut-off值分别为12. 83、228. 13 U/ml、503. 63 U/ml、33. 45 U/L,ROC曲线下面积(AUC)均小于联合诊断(P 0. 05),联合诊断灵敏度90. 62%,特异度97. 87%。两组Th1/Th2、TRAb水平比较差异无统计学意义(P 0. 05),阳性组TGAb、TPOAb水平高于阴性组(P 0. 05)。AIT患者Th1/Th2、TRAb水平与Ig G4水平未见相关性(P 0. 05),TGAb、TPOAb水平与Ig G4水平呈正相关(P 0. 05)。结论 Th1/Th2及血浆TGAb、TPOAb、TRAb水平应用于诊断AIT效能较为理想,其中TGAb、TPOAb水平与患者病情进展密切相关,具有较高临床检测价值。     

血浆DNA定量用于监测成人急性淋巴细胞白血病患者化疗疗效

目的监测成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者化疗过程中的血浆DNA水平,初步探讨其与ALL化疗疗效的关系。方法采集55例成人ALL患者化疗前及其中45例患者化疗一疗程后的静脉血,根据骨髓象、血象及临床体征进行疗效分组。以80名体检健康者作为对照。用磁珠法提取血浆DNA和内参照质粒DNA,双重荧光定量PCR技术进行DNA定量检测。结果 ALL患者化疗前血浆DNA含量[M(P25,P75)]为248.1(97.1,448.7)ng/mL,显著高于健康对照组19.1(12.7,25.8)ng/mL(Z=8.916,P<0.01);化疗一疗程后血浆DNA含量为35.5(17.7,83.0)ng/mL,显著低于化疗前水平(Z=6.322,P<0.01);不同疗效化疗前组血浆DNA水平有显著性差异(χ2=6.960,P<0.05),不同疗效组化疗后血浆DNA水平有显著性差异(χ2=11.145,P<0.01)。完全缓解组化疗前、后血浆DNA水平有显著性差异(Z=3.92,P<0.01),部分缓解组、未缓解组化疗前、后无显著性差异。生存曲线分析显示,化疗一疗程后血浆DNA水平<50 ng/mL的ALL患者生存率高于血浆DNA水平≥50 ng/mL的患者(χ2=3.860,P<0.05)。结论血浆DNA定量检测对ALL的化疗疗效评价及预后评估有重要意义。血浆DNA水平降低提示预后良好。     

血浆DNA定量检测在晚期肺癌患者个体化治疗中的应用

目的通过监测晚期肺癌患者化疗过程中血浆DNA水平的变化,探讨其在疗效预测以及个体化治疗中的应用。方法采集35名晚期肺癌患者化疗前、后静脉血,用磁珠法提取血浆循环DNA和内参照质粒DNA,双重荧光定量PCR技术进行DNA定量检测,以100名体检健康者为对照。结果晚期肺癌患者化疗前血浆DNA平均含量为66.4(33.1~105.0)ng/ml,显著高于健康对照组血浆DNA平均含量22.4(16.2~30.0)ng/ml(P<0.01)。一线药物化疗后,部分缓解组肺癌患者血浆DNA值较化疗前显著下降(P<0.01),且与病情稳定组、病情进展组患者血浆DNA值有显著差异(P均<0.05),而与健康对照组已无差异。生存曲线分析显示,化疗后血浆DNA<50 ng/ml的患者生存率高于血浆DNA≥50 ng/ml的患者(P<0.01)。结论血浆DNA的变化可敏感地反映晚期肺癌患者化疗疗效,在肿瘤个体化治疗中发挥重要作用。     

非小细胞肺癌患者血浆游离DNA含量和完整性检测的临床意义

目的评估血浆游离DNA含量和完整性(DNA integrity)在非小细胞肺癌(NSCLC)诊疗中的应用价值。方法收集102例NSCLC患者、30例肺良性疾病患者及30例体检健康者的外周血标本,并对其中44例NSCLC手术患者进行随访。提取血浆游离DNA,用SYBR Green染料实时荧光定量PCR检测血浆游离DNA中长度分别为100 bp及241 bp的人端粒酶逆转录酶(h TERT)目的基因的含量,计算血浆游离DNA完整性,并分析其与临床病理参数的关系。结果 100 bp、241 bp血浆游离DNA含量及DNA完整性在NSCLC、肺良性疾病组及健康对照组中差异有统计学意义(H分别为21.947、52.825、27.110,P均0.01),NSCLC患者手术前后100 bp、241 bp血浆游离DNA含量和术前游离DNA完整性差异有统计学意义(H分别为3.259,5.149,2.609,P均0.01)。血浆游离DNA完整性与NSCLC患者的年龄、性别、吸烟状况、临床分期、病理类型、肿瘤细胞分化程度、有无转移及肿瘤大小均无明显相关性。结论血浆游离DNA含量和完整性检测在NSCLC诊疗中有一定的临床价值,可成为NSCLC早期诊断及预后监测的指标。     

循环肿瘤DNA在弥漫大B细胞淋巴瘤中的临床应用

弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)作为一种侵袭性淋巴瘤,目前尚未有较好的分子标志物检测方法用于评估其疗效及预后。本文通过与传统检测方法相比较,发现循环肿瘤DNA(ct DNA)可以作为一种非侵入性的、能动态反映淋巴瘤信息的特异性生物标志物;DLBCL细胞中的ct DNA可以通过二代测序结合PCR技术获取,从而进行基因标记,淋巴瘤相关基因的靶向测序,淋巴瘤体细胞突变的d PCR及异常甲基化检测;ct DNA与DLBCL的诊断、疗效以及预后息息相关,可以应用于DLBCL的早期检测、中期监测、预后监测等方面,使得ct DNA在DLBCL的使用中具有广阔的应用前景。     

高通量测序技术筛查单基因隐性遗传病

目的探讨用高通量测序技术筛查新生儿单基因隐性遗传病,评估其用于孕前筛查或产前诊断的可行性。方法用目标基因筛选和高通量测序分析法分别对非孕妇的血液基因组DNA和孕妇的血浆游离DNA样本进行400多种遗传病相关基因的全面筛查分析。结果用高通量测序技术成功地在非孕妇的血液中检测出相关的致病基因,并在疑似地中海贫血患者的基因组中发现了导致地中海贫血症的致病突变基因HBB(chr11:5246595 C/G);成功地从孕妇血浆游离DNA检测出来自胎儿的遗传病相关致病基因突变,平均每个样本中有1~4个突变,基因型为杂合型。结论高通量测序技术可用于隐性基因携带者的孕前筛查及产前诊断。     

血浆BNP检测在冠心病患者诊断中的应用

目的探讨血浆BNP水平检测对冠心病患者的诊断及疾病评估的临床意义。方法选择153例确诊的冠心病患者为观察组,选择疑似冠心病的患者56例为对照组,所有患者均进行血浆BNP水平检测,并将各组之间的BNP水平及Gensini评分进行对比分析。结果观察组各组的BNP水平及Gensini评分均显著高于对照组(P0.05);观察组中各组之间的BNP水平及Gensini评分也均有显著差异(P0.05),BNP水平随着冠脉的严重程度逐渐升高。结论血浆BNP与冠心病患者冠脉的严重程度呈正相关,对患者的早期诊断,病情评估及指导治疗均有较高的临床价值。     

非霍奇金淋巴瘤患者免疫球蛋白及T细胞受体基因重排研究

目的 研究非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓或外周血免疫球蛋白(Ig)/T细胞受体(TCR)基因单克隆重排特点及其临床意义.方法 以BIOMED-2引物系统及多重PCR方法对139例NHL患者骨髓或外周血标本进行Ig及TCR基因重排检测.结果 在B系NHL(B-NHL)中,82例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中有70例(85.4％)检出Ig基因单克隆重排,其中IgH、IgK、IgL单克隆重排阳性率分别为46.3％(38例)、62.2％(51例)和1.2％(1例).其他类型的B-NHL患者有39.4％(33例中有13例)检出Ig基因单克隆重排,其中IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为33.3％(11例)和39.4％(13例),未检测到IgL基因单克隆重排.T系NHL(T-NHL)患者中有50.0％(24例中有12例)检出TCR基因单克隆重排,其中TCRB和TCRG单克隆重排阳性率分别为8.3％(2例)和45.8％(11例),TCRB和TCRG双重基因重排阳性率为4.2％(1例),未检测到TCRD单克隆重排.11例早期(Ann Arbor Ⅰ、Ⅱ期)与46例晚期(Ⅲ、Ⅳ期)患者的Ig/TCR基因单克隆重排阳性率分别为36.4％和45.6％;10例惰性患者和47例侵袭性患者的Ig/TCR基因单克隆重排阳性率分别为40.0％和44.7％,差异均无统计学意义(P值均＞0.05).除外CLL的57例NHL患者骨髓涂片检测骨髓侵犯阳性率为12.3％,明显低于骨髓基因重排检测阳性率(43.9％),两者差异有统计学意义(P＜0.05).敏感性试验表明多重PCR检测恶性克隆的敏感性为3.12％～6.25％.结论 NHL的临床分期和恶性程度不同,其Ig/TCR基因单克隆重排阳性率有差异,但未能证实其相关性.联合应用BIOMED-2多重引物可提高PCR检测骨髓和(或)外周血Ig/TCR基因单克隆重排的敏感性.多重PCR对NHL患者骨髓侵犯检测的敏感性优于骨髓涂片检查,有助于早期发现骨髓侵犯及预防复发.