破骨细胞及其细胞组分对成骨细胞特异转录因子表达的影响

目的了解破骨细胞(Osteoclasts,OCs)及其细胞组分对成骨细胞(Osteoblasts,OBs)核结合因子α1(core-bindingfactorα1,Cbfα1)表达的影响。方法由C57小鼠脾干细胞诱导培养OCs。将OCs及其培养上清和OCs的细胞器与MC3T3-E1OBs系共培养,观察OBsCbfα1mRNA的表达情况。结果含10μmol/LNaF、骨片上和无骨片培养的OCs线粒体、细胞浆、培养基和含50%骨片培养的OCs细胞核组与含50%α-MEM培养基组比较,明显促进OBsCbfα1mRNA表达(P<0.05)。骨片上和无骨片培养的OCs细胞浆、50%骨片上培养的OCs培养基组对OBs中Cbfα1mRNA表达的促进作用显著大于10μmol/LNaF组(P<0.05);50%骨片上培养的OCs培养基组对OBsCbfα1mRNA表达的促进作用明显大于50%OCs培养基组(P<0.05);骨片上培养的OCs细胞核组对OBsCbfα1mRNA表达的促进作用明显大于非骨片上培养的OCs细胞核组(P<0.05)。结论无论是骨片还是非骨片上培养的OCs细胞浆以及OCs的培养基中均可能存在着促进OBsCbfα1mRNA表达的生物活性物质。     

氟对成纤维细胞和成骨细胞核心结合因子α1表达的影响

目的观察不同剂量氟化物在不同时间段对成纤维细胞和成骨细胞核心结合因子α1(cbfa1)表达的影响。方法采用细胞培养的方法,将细胞分为对照组和6个染氟组(0．1、1．0、100．0、1000．0、10 000．0、20 000．0μg／L),分别在5个染氟时间段(2、4、24、48、72 h)收集培养细胞培养上清液和细胞,应用酶联免疫吸附(ELISA)法和免疫组化方法检测cbfa1蛋白含量和表达,应用RT-PCR方法检测染氟48 h cbfa1 mRNA的表达。结果①与对照组比较(2．13±0．07),成纤维细胞染氟48 h时,cbfa1蛋白含量在0．1、1．0、100．0、1 000．0、20 000．0μg／L组[(2.35±0．08)、(2．28±0．09)、(2．32±0．09)、(2．25±0．08)、(2．28±0．09)]及染氟72 h的10 000．0μg／L组(2．48±0．22)明显升高;染氟48 h,cbfa1 mRNA表达呈升高趋势,其中10 000．0μg／L组(1．29±0．30)与对照组(1．02±0．12)比较,明显增强;免疫组化结果显示,染氟48 h的0．1μg／L组成纤维细胞内可见明显cbfa1阳性表达。②在成骨细胞,染氟组cbfa1蛋白含量较对照组有不同程度增加;染氟48 h时,0．1、1．0、100．0、1 000．0μg／L组cbfa1 mRNA表达较对照组(1．27±0．20)升高,其中0．1μgL组(1．34±0．19)明显升高。结论氟能提高成纤维细胞和成骨细胞cbfa1蛋白含量,促进cbfa1和cbfa1 mRNA表达,成纤维细胞可能在氟骨症骨周化骨的发生中起重要作用。     

仙灵骨葆含药血清对小鼠成骨-破骨细胞共培养系统的影响

目的 观察不同浓度仙灵骨葆含药血清在成骨细胞(OB)破骨细胞(OC)共同培养体系中对小鼠OB、OC功能的影响.方法 取小鼠OB系MC3T3-E1与小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7诱导成的破骨样细胞,建立细胞上清相通但细胞间不相互混杂的OB-OC共育体系,实验分为不同浓度(高、低)的仙灵骨葆含药血清组和空白对照组,光镜观察OB矿化结节及OC骨吸收陷窝数并计数,收集共育体系中1、3 d培养上清液,采用ELISA法测定OPG、RANKL的含量.结果 从形态和功能活性证实培养细胞为OB和破骨样细胞;三组细胞培养7 d后,可见仙灵骨葆高浓度组矿化结节计数值明显高于其余两组(P<0.01),低浓度组高于空白对照组(P<0.05).三组细胞培养7 d后,空白对照组骨吸收陷窝数明显多于其余两组(P<0.01),而仙灵骨葆高浓度组与低浓度组无显著性差异.三组培养液上清中OPG/RANKL比较,1 d后仙灵骨葆高浓度组与低浓度组比值显著高于空白对照组(P<0.05、P<0.01),3 d后仙灵骨葆高浓度组明显高于其余两组(P<0.05、P<0.01),且低浓度组明显高于空白对照组(P<0.05).结论 仙灵骨葆含药血清可促进共育系统中OB形成矿化结节的能力;减少破骨样细胞在骨磨片上形成吸收陷窝的能力;可影响体外培养OB-OC的功能调控信号系统,提高OPG/RANKL的比例,并呈现时间和剂量依赖性.     

破骨细胞样细胞及其亚细胞成分对成骨细胞Cbfα1表达的影响

目的　探讨破骨样细胞(OLC)及其亚细胞成分对成骨细胞(OB)Cbfα1表达的影响。方法C57雌性小鼠,经尾静脉注射5 -FU后,取其脾脏细胞,在白介素(IL) 3、IL 6和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF)、1α, 25 (OH)2D3的诱导下获得大量OLC。OLC在骨片上培养即获得骨片上的OLC。NaF、两种OLC、离心去除OLC的培养基及其亚细胞结构—细胞核、线粒体与OB共培养5d后,分别使用半定量RT PCR和免疫组织化学的方法检测OBCbfα1mRNA和蛋白质的表达活性。结果　NaF、两种OLC的细胞核、线粒体、细胞浆和离心去除OLC后的培养基均可使OBCbfα1mRNA的表达明显加强(均P<0. 05);NaF,两种OLC的细胞浆和离心去除OLC后的50%培养基均可显著增加OBCbfα1蛋白质水平的表达(均P<0. 05)。结论　OLC的亚细胞成分和离心去除OLC后的培养基均对OBCbfα1表达具有促进作用,同时Cbfα1的表达存在多水平的调节机制。     

miR-187-3p调控FOXK1/NF-κB信号通路影响破骨细胞增殖、凋亡及分化的分子机制

目的 探讨miR-187-3p对破骨细胞增殖、凋亡、分化的影响及其对叉头框转录因子(FOX)K1/核因子(NF)-κB信号通路的调控作用。方法 选取49例骨质疏松(OP)患者为OP组,同时选取绝经后骨质疏松性无骨折患者49例为control组;18只SPF级雌性大鼠,分为正常组与模型组,每组9只;原代分离培养OP大鼠破骨细胞,miR-NC、miR-187-3p mimics、pcDNA-NC、pcDNA-FOXK1、miR-187-3p mimics与pcDNA-NC、miR-187-3p mimics与pcDNA FOXK1转染入破骨细胞;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western印迹分别检测OP患者血清与破骨细胞中miR-187-3p、FOXK1的表达量;采用qRT-PCR法检测破骨细胞中耐酒石酸酸性磷酸酶(Acp)-5、基质金属蛋白酶(MMP)9、组织蛋白酶(Cathepsin K)、整合素(Integrinαv)的表达量;采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测miR-187-3p与FOXK1的靶向关系;W...     

右归饮对类固醇激素性股骨头坏死大鼠成骨-破骨体外共育体系中破骨细胞分化的影响

目的 探讨右归饮对激素性股骨头坏死（SINFH）大鼠成骨-破骨体外共育体系中破骨细胞（osteoclast,OC）生长分化的影响.方法 雄性SD大鼠70只,体重（100±20）g,用随机数字表法取30只用醋酸泼尼松龙49 mg/kg·d肌内注射造模,1周后随机抽取2只造模大鼠进行组织病理观察确定造模成功.40只正常大鼠随机分为高、中、低右归饮给药组及蒸馏水组.从造模大鼠股骨、胫骨分离培养成骨细胞（osteoblast,OB）和OC诱导5 d,将OB以1×105/mL密度接种于成骨-破骨细胞共育体系中,分别以蒸馏水血清（对照组）、低（0.5 mL/100 g）、中（1.0 mL/100 g）、高（2.0 mL/100 g）浓度右归饮含药血清作用于OB-OC共育体系.用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）鉴定OC和阳性多核细胞计数,用RT-PCR方法测定RANKL mRNA表达水平变化.结果 与蒸馏水组比较,高、中浓度右归饮组TRAP染色阳性破骨细胞数量均显著减少（P＜0.01）;RANKL基因表达水平明显降低（P＜0.01）,高浓度右归饮组与低、中浓度组比较RANKL基因表达水平显著降低（P＜0.01、P＜0.05）.结论 一定浓度的右归饮对SINFH大鼠体外成骨-破骨共育体系破骨细胞形成、分化有抑制作用,以高浓度右归饮作用最强.     

穴位埋线对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及血清白介素-1β、肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的观察穴位埋线对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆能力和血清白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量的影响。方法将大鼠随机分成假手术组、VD模型组、穴位埋线组、尼莫地平组,采用改良Pulsinelli四血管闭塞法(4-VO)建立VD大鼠模型,两个治疗组分别施行穴位埋线和尼莫地平治疗,连续15 d。Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,酶联免疫吸附法测定血清IL-1β、TNF-α含量,制作海马组织病理切片并进行HE染色,观察并比较各组大鼠学习能力、血清IL-1β、TNF-α含量及海马神经元损伤的变化。结果模型组表现出明显的学习记忆障碍,定位航行试验、空间探索试验与假手术组相比有显著差异(P<0.01);与VD模型组比较,穴位埋线治疗后VD大鼠学习记忆能力显著提高(P<0.05,P<0.01),血清IL-1β、TNF-α含量降低(P<0.05)。结论穴位埋线可改善VD大鼠学习记忆能力,其机制可能与埋线后降低血清IL-1β、TNF-α含量,缓解脑缺血后炎症反应,减轻神经元的损伤有关。     

17β-雌二醇对人破骨样细胞RANK、CK mRNA表达的作用

目的　观察 17β 雌二醇 (17β E2 )对破骨样细胞破骨细胞分化因子受体 (RANK)和组织蛋白酶K (CK)mRNA表达的影响。方法　人巨细胞瘤组织经过滤、培养、洗涤、胰酶消化后再经孔径 2 5 μm微过滤网过滤 ,得到纯化的破骨样细胞 ,用RT PCR观察 17β E2 对人破骨样细胞CK及RANKmRNA表达的影响。结果　 (1)破骨样细胞具有成熟破骨细胞的表型特征 ,如抗酒石酸酸性磷酸酶和酸性磷酸酶染色阳性、具有溶骨作用 ,可表达CK和RANK ;(2 ) 17β E2 对人破骨样细胞RANKmRNA表达无明显影响 ,但下调CKmRNA表达 (P <0 .0 5 )。结论　破骨样细胞是进行破骨细胞研究的较好细胞来源 ;17β E2 可下调破骨样细胞CKmRNA表达。下调CK基因表达是绝经后雌激素补充治疗的药理机制之一。     

复元胶囊对膝骨关节炎大鼠IL-1β、OPG和OPGL mRNA表达的影响

目的观察复元胶囊对膝骨关节炎(OA)大鼠关节软骨中白细胞介素(IL)1β、骨保护素(OPG)及其配体(OPGL)的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为6组:①正常组10只,不给予任何处理;②模型组10只,Hulth法造模后用生理盐水10 ml/d灌胃;③抗骨增生胶囊组10只,Hulth法造模后每日给予抗骨增生胶囊灌胃;④复元胶囊高、中、低组各10只,Hulth法造模后用不同浓度复元胶囊灌胃。于给药第12周处死大鼠,取各组大鼠膝关节内踝关节软骨标本,观察大体结构并分级;HE染色,观察其镜下结构;反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测膝关节软骨中IL-1β、OPG及OPGL mRNA的表达含量。结果动物模型造模成功,HE染色评分中,复元胶囊高、中剂量组及抗骨增生胶囊组软骨退变程度较模型组明显减轻(P<0.01),复元胶囊组高剂量组OPG mRNA的表达量显著高于模型组(P<0.01),IL-1βmRNA及OPGL mRNA的表达显著低于模型组(P<0.05),OPG与OPGL比率显著高于模型组(P<0.01)和正常组(P<0.01)。结论复元胶囊能够上调软骨中OPG mRNA的表达,下调IL-1βmRNA及OPGL mRNA的表达,使OPG与OPGL的比率上升,表明对软骨退变及软骨下骨的破坏有一定的预防作用。     

脑出血患者血清中一氧化氮、胰岛素样生长因子-1和巨噬细胞转移抑制因子的表达水平及意义

目的观察脑出血患者血清中血管内皮舒张因子一氧化氮(NO)、胰岛素样生长因子(IGF)-1和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达,分析其关系及临床意义。方法 97例脑出血患者作为观察组,选取经体检证实为健康的成年人70例作为对照组,检测两组血清中NO、IGF-1和MIF的表达。结果观察组血清中NO、IGF-1的表达明显低于对照组,而MIF的表达明显高于对照组,观察组不同病变程度和不同预后患者血清中NO、IGF-1和MIF的表达差异有统计学意义。线性相关分析显示观察组中IGF-1和MIF的表达具有负相关性。结论脑出血患者血清中NO、IGF-1低表达,MIF高表达,IGF-1和MIF具有协同负向作用,共同促进病变的发生和进展。     

淫羊藿甙对去卵巢大鼠骨组织核心结合因子α1表达的影响

目的 观察淫羊藿甙对去卵巢大鼠骨组织Cbfa1表达的影响.方法 54只雌性SD大鼠随机分成6组9只/组:假手术组、模型组、尼尔雌醇组、淫羊藿甙低剂量组、淫羊藿甙中剂量组和淫羊藿甙高剂量组.对尼尔雌醇组和淫羊藿甙低、中、高剂量组分别给予尼尔雌醇(0.1mg/kg)和淫羊藿甙(40,80和160mg/kg)治疗12周.12周后,以DXA法测定大鼠全身的骨密度;放射免疫法测定各组大鼠血清中骨钙素及雌二醇的浓度;处死各组大鼠,直接从头盖骨中提取总.RNA,采用荧光定量PCR技术检测Cbfa1 mRNA的相对表达量.结果 12周后,模型组大鼠的骨密度和血清雌二醇水平明显降低,与假手术组相比,差异有显著性(P<0.05).与模型组相比高剂量组的全身骨密度和血清骨钙素含量增加(P<0.05),但是血清雌二醇的水平无变化(P>0.05).12周后,与假手术组相比,模型组大鼠骨组织中Cbfal mRNA表达明显降低,差异有显著性(P<0.01).与模型组相比高剂量组骨组织中Cbfal mRNA的表达,显著升高(P<0.01).结论 淫羊藿甙对去卵巢大鼠骨质疏松症具有防治作用,其部分机制可能为淫羊藿甙促进骨组织中Cbfa1表达,从而调节骨形成.     

氟对小鼠成纤维细胞和成骨细胞c-fos表达的影响

目的 观察氟对小鼠成纤维细胞(FB)和成骨细胞(OB)c-fos mRNA和蛋白表达的影响,探讨c-fos表达改变在FB成骨功能方面的作用.方法 将小鼠FB和OB分为对照组和6个染氟组,染氟(F-)质量浓度分别为0、0.0001、0.0010、0.1000、1.0000、10.0000、20.0000 mg/L,培养时间为2、4、24、48、72 h.应用酶联免疫吸附法(ELISA)和RT-PCR法分别检测各时间段培养细胞上清液c-fos蛋白和染氟48 h细胞中c-fos mRNA的表达.结果 ELISA结果表明,各染氟组FB在各时间段c-fos蛋白水平均较相应对照组明显升高(P<0.01);OB c-fos蛋白水平在氟作用48 h的0.0001、0.0010 mg/L组(0.73±0.04、0.64±0.14)、氟作用72 h的0.0001mg/L组(0.70±0.17)较对照组(0.32±0.04、0.27±0.05)明显升高(P<0.01).RT-PCR结果表明,染氟48 h各剂量组FB c-fos mRNA表达(1.06±0.16、1.06±0.12、1.12±0.16、1.04±0.15、1.04±0.10、1.15±0.29)呈上升趋势,但与对照组(0.95±0.11)比较,差异无统计学意义(P>0.05);OB在染氟20.0000 mg/L组c-fos mRNA表达(1.40±0.17)较对照组(1.06±0.06)明显升高(P<0.01).结论 氟对FB和OB c-fos mRNA和蛋白表达具有明显的刺激增强作用,可能在促进FB成骨表型表达和成骨活动增强方面发挥重要作用.     

Effects of dihydrotestrone on osteoblast gene expression in osteopenic ovariectomized rats

Androgens stimulate bone formation, however, the precise mechanism of androgen action on osteoblasts remains to be elucidated. In this study, we defined the expression profile of osteoblast genes in ovariectomized rats with established osteopenia and their response to treatment with dihydrotestosterone (DHT). Twenty-four, 8-month-old female Sprague-Dawley rats were ovariectomized (ovx) and were administered vehicle, 40 mg, 80 mg, or 160 mg/kg body weight DHT at 15-weeks post-ovariectomy for 14 weeks. Alkaline phosphatase (ALP) messenger ribonucleic acid (mRNA) levels were increased at 29-weeks post-ovariectomy compared with preoperative rats (P < 0.05). In contrast, osteopontin and osteocalcin mRNA levels were unchanged. Treatment of osteopenic ovx rats with DHT for 14 weeks suppressed the ovariectomy-induced increase in ALP (P < 0.05) mRNA levels, independent of dose. These data suggest that androgens may act to inhibit the stimulation of the early stages of osteoblast development that occurs in the absence of estrogen and in states of low bone turnover.     

蠕形螨对共培养 HaCaT 细胞的 TLR2 以及炎症相关基因表达的影响

目的 通过建立毛囊蠕形螨与 HaCaT 细胞共培养体系,探讨毛囊蠕形螨与细胞表达 TLR2 以及炎症相 关基因之间的关联性。 方法 用 10 只、30 只、50 只毛囊蠕形螨和空白对照分别与 HaCaT 细胞共培养 24 h,提取细胞 RNA,反转录成 cDNA;设计特异性引物,对 TLR2 以及相关的 KLK5、IL-1β、IL-6、IL-8 和 CCL2 等炎性因子进行常 规 PCR 扩增、克隆和测序;采用 qRT-PCR 检测表达量,比较与螨虫数之间的关联性。 结果 琼脂糖凝胶电泳显示 PCR 产物为单一清晰条带,序列大小与模板一致,表明引物特异性好。 qRT-PCR 检测显示,除 10 只螨虫组与空白 组差异均无统计学意义外(t = 0. 00~ 2. 25,P>0. 05),TLR2 和 IL-6 在 30 只和 50 只螨虫组与空白组差异有统计学意 义(TLR2:t = 6. 54 和 10. 85;IL-6:t = 14. 35 和 17. 52,P<0. 001),且 50 只螨虫组上调明显大于 30 只螨虫组;IL-8、 CCL2 和 KLK5 在 30 只和 50 只螨虫组与空白组的差异也有统计学意义( IL-8:t = 5. 34 和 6. 98;CCL2:t = 3. 12 和 4. 03;KLK5:t = 3. 31 和 4. 05,P<0. 05),但 30 只与 50 只螨虫组的差异无统计学意义;而 IL-1β 只在 50 只螨虫组与 空白组的差异有统计学意义(t = 2. 60,P<0. 05),30 只螨虫组与空白组的差异无统计学意义。 HaCaT 细胞 TLR2 的 表达与蠕形螨虫数呈正相关 (r = 0. 984),与 TLR2 调控的炎性因子 IL-6、IL-8、CCL2、KLK5 和 IL-1β 的表达也呈正 相关(r= 0. 970、0. 984、0. 985、0. 974 和 0. 938),尤其是 TLR2 和 IL-6 表达量变化最明显。 结论 本研究成功构建了 毛囊蠕形螨与 HaCaT 细胞共培养体系,首次从细胞水平揭示皮肤免疫反应与蠕形螨感染数量有关,这一探索性研究 结果对于揭示蠕形螨寄生诱发面部皮肤损害的分子机制具有重要的科学意义。     

淫羊藿甙促成骨细胞中Cbfa1表达的信号通路机制

目的 观察淫羊藿甙对成骨细胞中核心结合因子α1(cbfa1)蛋白和活性表达的调节,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是否参与此过程.方法 用酶消化法分离24 h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养,经鉴定后用于实验.设立对照组、淫羊藿甙组(10 ng/ml)以及雌二醇组(10-8mol/L),分别用药物干预24 h,抽提核蛋白.利用转录因子活性ELISA法检测成骨细胞cbfa1与DNA结合的活性,Western印迹法检测成骨细胞中cbfa1蛋白的表达.将MAPK信号转导通路抑制剂U0126和SB203580分别与淫羊藿甙或雌二醇共同加入培养液中,培养24 h,同上法检测Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的变化.结果 淫羊藿甙和雌二醇均可以促进成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的提高(P<0.05).加入细胞外信号调节激酶(ERK)途径的抑制剂UO126后,可以下调淫羊藿甙和雌二醇对成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的上调作用(P<0.05).加入p38MAPK途径的抑制剂SB203580后,也可以下调淫羊藿甙和雌二醇对成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的上调作用(P<0.05).结论 淫羊藿甙和雌激素均可上调体外培养大鼠成骨细胞转录因子Cbh1的蛋白表达和结合活性.MAPK信号转导通路抑制剂可以部分阻断淫羊藿甙和雌激素对成骨细胞转录因子Cbh1蛋白表达和活性的上调作用,说明MAPK可能是淫羊藿甙发挥抗骨质疏松作用的信号转导通路之一.     

淫羊藿甙促成骨细胞中Cbfa1表达的信号通路机制

目的 观察淫羊藿甙对成骨细胞中核心结合因子α1(cbfa1)蛋白和活性表达的调节,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是否参与此过程.方法 用酶消化法分离24 h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养,经鉴定后用于实验.设立对照组、淫羊藿甙组(10 ng/ml)以及雌二醇组(10-8mol/L),分别用药物干预24 h,抽提核蛋白.利用转录因子活性ELISA法检测成骨细胞cbfa1与DNA结合的活性,Western印迹法检测成骨细胞中cbfa1蛋白的表达.将MAPK信号转导通路抑制剂U0126和SB203580分别与淫羊藿甙或雌二醇共同加入培养液中,培养24 h,同上法检测Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的变化.结果 淫羊藿甙和雌二醇均可以促进成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的提高(P<0.05).加入细胞外信号调节激酶(ERK)途径的抑制剂UO126后,可以下调淫羊藿甙和雌二醇对成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的上调作用(P<0.05).加入p38MAPK途径的抑制剂SB203580后,也可以下调淫羊藿甙和雌二醇对成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的上调作用(P<0.05).结论 淫羊藿甙和雌激素均可上调体外培养大鼠成骨细胞转录因子Cbh1的蛋白表达和结合活性.MAPK信号转导通路抑制剂可以部分阻断淫羊藿甙和雌激素对成骨细胞转录因子Cbh1蛋白表达和活性的上调作用,说明MAPK可能是淫羊藿甙发挥抗骨质疏松作用的信号转导通路之一.     

淫羊藿甙促成骨细胞中Cbfa1表达的信号通路机制

目的 观察淫羊藿甙对成骨细胞中核心结合因子α1(cbfa1)蛋白和活性表达的调节,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是否参与此过程.方法 用酶消化法分离24 h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养,经鉴定后用于实验.设立对照组、淫羊藿甙组(10 ng/ml)以及雌二醇组(10-8mol/L),分别用药物干预24 h,抽提核蛋白.利用转录因子活性ELISA法检测成骨细胞cbfa1与DNA结合的活性,Western印迹法检测成骨细胞中cbfa1蛋白的表达.将MAPK信号转导通路抑制剂U0126和SB203580分别与淫羊藿甙或雌二醇共同加入培养液中,培养24 h,同上法检测Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的变化.结果 淫羊藿甙和雌二醇均可以促进成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的提高(P<0.05).加入细胞外信号调节激酶(ERK)途径的抑制剂UO126后,可以下调淫羊藿甙和雌二醇对成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的上调作用(P<0.05).加入p38MAPK途径的抑制剂SB203580后,也可以下调淫羊藿甙和雌二醇对成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的上调作用(P<0.05).结论 淫羊藿甙和雌激素均可上调体外培养大鼠成骨细胞转录因子Cbh1的蛋白表达和结合活性.MAPK信号转导通路抑制剂可以部分阻断淫羊藿甙和雌激素对成骨细胞转录因子Cbh1蛋白表达和活性的上调作用,说明MAPK可能是淫羊藿甙发挥抗骨质疏松作用的信号转导通路之一.