β淀粉样蛋白1～42促进U87细胞凋亡作用的研究

目的研究重组人β淀粉样蛋白(Aβ)1~42对人神经胶质瘤细胞U87毒性作用机制。方法用MTT检测代谢率,倒置显微镜、投射电镜以及流式细胞术技术研究Aβ1~42对U87细胞的损伤作用机制。结果用Aβ1~42处理U87细胞24 h后,Aβ1~42剂量依赖性地引起U87细胞的MTT代谢率减少。倒置显微镜及透射电镜观察发现经Aβ1~42处理的U87细胞表现出凋亡细胞的特征。流式细胞仪检测表明10、20、50μmol/L的Aβ1~42组U87细胞的凋亡率分别为35.6%,42.2%,58.1%。结论 Aβ1~42致U87细胞发生损伤主要是通过细胞凋亡的途径。     

LncRNA IGFBP7-AS1对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨LncRNA胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)7-AS1对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法qRT-PCR检测正常星形胶质细胞HA1800、脑胶质瘤细胞系U251、A172、U87中IGFBP7-AS1表达水平。转染IGFBP7-AS1的si-RNA(si-IGFBP7-AS1组)、si-RNA阴性对照(si-con组)、共转染si-IGFBP7-AS1与IGFBP7过表达载体(si-IGFBP7-AS1+pcDNA-IGFBP7组)、si-IGFBP7-AS1与空载体(si-IGFBP7-AS1+pcDNA-control组)至U87细胞,qRT-PCR检测IGFBP7-AS1、Western印迹检测IGFBP7蛋白水平验证转染效果,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果与HA1800细胞比较,脑胶质瘤细胞系U251、A172、U87中IGFBP7-AS1表达显著升高(P<0.05)。与si-con组比较,si-IGFBP7-AS1组U251细胞A值、迁移和侵袭数显著降低(P<0.05),U251细胞凋亡率和Bax蛋白表达显著升高(P<0.05),Bcl-2和IGFBP7蛋白表达显著降低(P<0.05)。与si-IGFBP7-AS1+pcDNA-control组比较,si-IGFBP7-AS1+pcDNA-IGFBP7组U251细胞A值、迁移和侵袭数显著升高(P<0.05),细胞凋亡率和Bax蛋白表达显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论敲减IGFBP7-AS1可抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡,作用机制可能与下调IGFBP7表达有关。     

aFGF对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的 探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对β淀粉样肽25-35(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞凋亡的保护作用.方法 采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst 332582-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法 检测PC12细胞Bax和Bcl-2基因mRNA的表达,Western印迹检测PC12细胞Bax和Bcl-2蛋白表达.结果 不同剂量(10、20、30 mg/L)aFGF预处理PC12细胞1 h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低Bax基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达.结论 aFGF可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因Bax和上调抗凋亡基因Bcl-2表达有关.     

氯化三乙基锡抑制C6胶质瘤细胞增殖及机制

目的探讨氯化三乙基锡(TETC)对C6胶质瘤细胞体外增殖抑制作用的机制。方法采用MTT法、荧光原位末端标记方法和Western印迹方法,分别检测不用浓度TETC作用C6胶质瘤细胞48 h后细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 TETC对C6胶质瘤细胞具有抑制增殖作用,增殖抑制率呈剂量依赖性;TETC可诱导C6胶质瘤细胞凋亡,细胞凋亡率呈剂量依赖性上升;TETC可下调Bcl-2和上调Bax蛋白表达水平。结论 TETC可抑制C6胶质瘤细胞体外增殖并诱导其凋亡,机制可能与其下调Bcl-2和上调Bax蛋白表达有关。     

aFGF对Aβ25-5诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）对β淀粉样肽25-35（AB25-35）诱导凋亡PC12细胞凋亡的保护作用。方法采用MTT比色法分析细胞存括率，Hoechst 332582-PI荧光染色法检测细胞凋亡，RT-PCR方法检测PCI2细胞Bax和Bcl-2基因mRNA的表达，Western印迹检测PC12细胞Bax和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量（10、20、30mg／L）aFGF预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗AB25-35引起的细胞凋亡，提高PC12细胞的存括率，减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂，降低Bax基因mRNA表达及蛋白表达，增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论aFGF可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用，其机制可能与下调凋亡基因Bax和上调抗凋亡基因Bcl-2表达有关。     

川芎嗪抗β淀粉样蛋白25～35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡作用的机制

目的探讨川芎嗪是否作用PI3K/Akt通路抗β淀粉样蛋白(Aβ)25~35诱导的细胞凋亡。方法 Aβ25~35作用SH-SY5Y细胞建立AD细胞模型,MTT法检测细胞的生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western印迹检测p-Akt、Akt、Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表达。结果川芎嗪能够抑制Aβ25~35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡和促进其存活;川芎嗪可抑制Aβ25~35引起的p-Akt/Akt、Bcl-2表达降低和Bax、caspase-3的表达增加。PI3K/Akt通路抑制剂LY294002能够抑制川芎嗪对Aβ25~35诱导的细胞凋亡的保护作用,抑制川芎嗪诱导的p-Akt/Akt、Bcl-2表达上调及Bax、caspase-3表达下调。结论川芎嗪拮抗Aβ25~35诱导的细胞凋亡与作用PI3K/Akt通路,调节Bcl-2、Bax、caspase-3的表达有关。     

汉防己甲素对胶质瘤细胞的抑制作用

目的探讨汉防己甲素(Tet)对胶质瘤的作用及其机制。方法 MTT实验与接种肿瘤鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检测Tet对U87人胶质瘤细胞增殖的影响;流式分析汉防己甲素对U87人胶质瘤细胞凋亡、周期的影响;苏木素-伊红(HE)染色分析汉防己甲素对血管新生的影响;免疫组织化学实验检测Tet对增殖细胞核抗原(PCNA)与信号传导及转录激活因子(p-STAT3)分布表达影响;Western印迹实验分析Tet对U87人胶质瘤细胞STAT3蛋白及与凋亡相关蛋白表达的影响。结果增殖细胞核抗原能够抑制U87人胶质瘤细胞增殖,呈时间、剂量依赖性;Tet能够诱导U87细胞凋亡呈剂量依赖性;Tet抑制血管新生;Western印迹结果表明Tet降低STAT3磷酸化,STAT3下游基因包括Bcl-2,Cyclin D1,HIF-α和VEGFA在Tet处理之后表达减少;PARP、caspase-3、酶切caspase-9蛋白表达增加,促凋亡蛋白Bax表达上调。结论 Tet抑制胶质瘤细胞增殖,诱导胶质瘤细胞凋亡,抑制血管新生可能与降低STAT3磷酸化有关。     

β淀粉样蛋白_(25～35)对PC12细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨β淀粉样蛋白(Aβ)_(25~35)对PC12细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用不同浓度的Aβ_(25~35)与PC12细胞共孵育48 h后,用MTT法检测细胞生长活性,Hoechst33258核染色检测细胞凋亡,通过免疫细胞化学检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达。结果MTT检测显示Aβ_(25~35)抑制PC12细胞生长活性呈浓度依赖性,抑制作用随Aβ_(25~35)浓度的增大而加强;Hoechst33258染色显示Aβ_(25~35)与PC12细胞凋亡呈浓度依赖性关系;免疫细胞化学检测结果显示Bcl-2蛋白表达量随Aβ_(25~35)浓度的增大呈下降趋势,Bax、Caspase-3蛋白表达量随Aβ_(25~35)浓度的增大呈上升趋势。结论 Aβ_(25~35)可剂量依赖性诱导PC12细胞凋亡,使抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax,Caspase-3表达上调。     

人参皂甙Rh2对人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的影响及机制探讨

目的观察人参皂甙Rh2（GS-Rh2）对人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的影响,并探讨其机制。方法人脑胶质瘤细胞株U251经GS-Rh2处理后,采用MTT法测算细胞抑制率,用流式细胞术测算细胞凋亡率,用RT-PCR检测U251中Bcl-2、Caspase-3 mRNA,用Western blot法检测U251中Bcl-2、Caspase-3蛋白。结果 GS-Rh2对U251具有抑制作用,并呈剂量依赖性;根据细胞增殖抑制曲线计算出GS-Rh2作用于细胞的抑制浓度（IC）,求得IC30、IC50、IC70值分别为10.6、22.3、70.2μg/ml;GS-Rh2可诱导U251凋亡,并呈剂量依赖性。在GS-Rh2作用下,U251中Bcl-2 mRNA、蛋白呈明显低表达,随着GS-Rh2作用时间延长,Caspase-3 mRNA、蛋白表达逐渐增高。结论 GS-Rh2可明显抑制U251增殖,诱导其凋亡,其机制与GS-Rh2下调U251中Bcl-2 mRNA及蛋白表达、上调Caspase-3 mRNA及蛋白表达有关。     

原花青素对β-淀粉样肽（25—35）诱导PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素（Procyanidins，PC）对β-淀粉样肽（25-35）（hi325弗）诱导凋亡PCI2细胞bax和bcl-2基因表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变，RT—PCR检测bax和bcl-2基因mRNA表达，Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量PC预处理PC12细胞1h，可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡，增加细胞存活率，减少Aβ25-35引起的细胞核固缩、核碎裂，降低baxmRNA及Bax蛋白表达，增加bcl-2mRNA及Bcl-2蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35诱导的PCI2细胞凋亡，其机制可能与下调凋亡基因bax和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。     

远志皂苷元对Aβ1-42诱导PC12细胞凋亡和自噬的影响

目的:观察远志皂苷元(TEN)对阿尔茨海默病体外模型β-淀粉样蛋白1-42(Aβ_1-42)诱导PC12细胞凋亡和自噬的影响。方法:体外培养PC12细胞,并随机分为对照组(正常生长PC12细胞)、模型组(Aβ_1-42诱导PC12细胞损伤)以及TEN低、中、高剂量组(Aβ_1-42诱导PC12细胞损伤+TEN低、中、高剂量)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白和自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)和Beclin-1以及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。结果:与对照组比较,模型组细胞活力明显下降(P<0.01),p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.01),Caspase-3、Bax、LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,TEN各剂量组神经元存活率升高,p-...     

白藜芦醇诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制

目的探讨白藜芦醇(Res)诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制。方法用不同浓度Res处理A549细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态学变化,4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)细胞核染色后荧光显微镜观察细胞凋亡特征,噻唑蓝(MTT)检测对于A549细胞的抑制生长作用,Western印迹法检测Res作用A549细胞后P53、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase3蛋白的表达变化。结果 Res处理A549细胞后,细胞间隙变大,细胞核分裂,随着药物浓度的增加上述形态变化明显。25²00μmol/L浓度的Res可明显抑制A549细胞的增殖,具有剂量依赖性,24 h的IC50为100μmol/L,而且细胞内的P53、Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白被抑制,Bcl-2/Bax比值下降。结论 Res抑制A549细胞增殖,并通过P53途径诱导A549细胞凋亡,Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase3参与了凋亡过程。     

β-淀粉样蛋白对幼鼠骨髓干细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)对幼鼠骨髓干细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法培养新生小鼠骨髓干细胞,将其分为对照组和Aβ处理组。利用Brd U方法检测两组阳性细胞数;检测Aβ蛋白对幼鼠骨髓干细胞迁移的影响;流式细胞仪检测对照组和Aβ处理组细胞凋亡情况;Western印迹检测Cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 Aβ处理组的细胞生长速度明显低于对照组,对照组Brd U阳性率显著高于Aβ处理组(P<0.05);Aβ处理组的细胞迁移距离及凋亡率显著高于对照组(P<0.05,P<0.01);经Aβ蛋白处理的骨髓干细胞中Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达量明显升高,而Bcl-2蛋白表达量与对照组相比明显减少(P<0.01)。结论 Aβ能抑制骨髓干细胞的增殖,加速骨髓干细胞的迁移和凋亡。     

S1通过线粒体途径诱导人卵巢癌细胞凋亡

目的探讨小分子化合物S1对人卵巢癌(SKOV3)细胞线粒体凋亡的影响。方法通过倒置显微镜观察S1作用卵巢癌细胞的形态学改变;不同剂量S1作用8 h,JC-1染色检测线粒体膜电势变化;Western印迹检测线粒体凋亡相关蛋白细胞色素(Cyto)c、Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果与对照组相比S1作用24 h能明显诱导SKOV3凋亡;流式细胞术结果显示,S1引起SKOV3细胞线粒体膜电势降低(P<0.05,n=3);蛋白水平检测S1作用8 h能明显抑制SKOV3细胞Bcl-2蛋白表达,胞浆Cyto c和Bax蛋白表达增高(P<0.05,n=3)。结论 S1可能通过抑制Bcl-2蛋白诱导人卵巢癌细胞线粒体凋亡。     

银杏叶内酯N对PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨银杏内酯N对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法用H2O2诱导PC12细胞损伤,刺激其凋亡,给予不同剂量的受试药物干预。用MTT法检测细胞存活率;用吖啶橙染色检测银杏内酯N对PC12细胞凋亡的作用;用流式细胞术检测银杏内酯N对PC12细胞活性氧(ROS)的影响,荧光定量RT-PCR法、Western印迹法分别检测Bcl-2、Bax mRNA和相应蛋白的表达。结果银杏内酯N可对抗H2O2诱导的PC12损伤,提高存活率和抑制凋亡,降低PC12细胞ROS水平,与模型组比较均有显著差异(P<0.05);Bcl-2蛋白及mRNA表达量升高,而Bax mRNA和Bax蛋白及表达量降低,与模型组比较均有显著差异(P<0.05),且呈一定的量效关系。结论银杏内酯N可对抗H2O2的神经毒性,其机制与调节凋亡相关基因及蛋白的表达有关。     

Aβ_(1-42)诱导皮层神经元细胞凋亡的机制及通心络的干预作用

目的 探讨Aβ诱导皮层神经元凋亡的机制及通心络的干预作用.方法 原代培养的小鼠皮层神经,经Aβ1-42处理后,MTT判断神经元存活率,Hoechst33342染色、流式细胞仪检测检测神经元凋亡,Western印迹法检测caspase凋亡蛋白的表达.结果 神经元经Aβ_(1-42)处理后,活细胞数减少,染色质浓缩、核碎裂,染色阳性神经元增多,细胞凋亡率上升,caspase-3表达增强.通心络可明显改善上述变化.结论 Aβ通过caspase-3途径引起神经元凋亡从而导致神经元细胞死亡.通心络可抑制Aβ诱导的神经元凋亡来保护神经元,从而起到治疗AD的作用.     

微波对人肺癌A549细胞凋亡的非热效应

目的了解微波对人肺癌A549细胞的非热作用。方法在冰浴排除热效应条件下用不同剂量微波(12 mV/cm2、18 mV/cm2和21mV/cm2)照射A549细胞10 min,24 h光镜观察照相后收集细胞,用超声裂解法提取蛋白,Western印迹检测凋亡相关蛋白表达变化;Rh123染色行流式分析细胞线粒体膜电势;间接免疫荧光法检测凋亡蛋白活化的caspase3变化;Hoechst荧光染色检测细胞凋亡。结果①光镜下所见:与对照组相比,照射强度越大细胞数减少越明显,细胞质越致密;②Rh123染色流式分析:随着微波照射强度的增加,线粒体膜电势降低,高荧光密度群百分率减少,荧光密度平均群百分率减少下降、低荧光密度群百分率增加(2.9%vs 5.4%、7.6%、9.9%;各照射组均高于对照组,P<0.01);③Hoechst荧光染色检测到微波辐射导致A549细胞凋亡,照射强度越大,细胞凋亡越多;④间接免疫荧光法检测到微波辐射导致A549细胞凋亡蛋白Caspase3活化增多,随照射强度升高表达明显增加;⑤Western印迹:各照射组凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2、Caspase3均高于对照组(P<0.01),照射强度越大此值越高。结论微波对人肺癌A549细胞存在明显的促凋亡非热效应,且与照射强度呈正相关。     

狼毒大戟石油醚提取物对小鼠肝脏细胞凋亡及p-ERK、Bcl-2、Bax、半胱氨酸蛋白酶-3的影响

目的探讨狼毒大戟石油醚提取物对小鼠肝脏细胞凋亡及磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、Bcl-2、Bax、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达的影响。方法 80只昆明种小白鼠随机分为低剂量组、中剂量组、高剂量组和植物油对照组,每组20只。采用腹腔注射法给药,1次/d(0.39、0.78、1.55 mg·kg~(~(-1))·d~(~(-1)))。于实验第14天分别进行体重测量,对小鼠肝脏组织进行HE染色,TUNEL法原位标记凋亡细胞,采用免疫组织化学染色检测Bcl-2、Bax蛋白表达,Western印迹法检测p-ERK、Caspase-3蛋白表达。实时定量PCR对Bcl-2、Bax、Caspase-3进行定量分析。结果与植物油对照组比较,高剂量组小鼠体重明显下降,肝脏细胞发生明显凋亡,p-ERK、Bcl-2表达下调,Bax表达上调(P0.05),Caspase-3产生活化形式的Cleaved-Caspase-3。结论狼毒大戟石油醚提取物可使小鼠肝脏细胞发生凋亡,其机制可能与降低p-ERK、Bcl-2,增强Bax蛋白表达,并使Caspase-3产生活化形式的Cleaved-Caspase-3有关。     

丁苯酞对MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用及机制

目的探讨丁苯酞对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP~+)诱导的人体神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞凋亡途径的保护作用及其机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡模型。应用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同剂量丁苯酞对MPP~+诱导的SHSY5Y细胞存活率的影响;筛选出丁苯酞的最佳作用浓度;Annexin-V/PI流式细胞分析术检测细胞凋亡率;倒置相差显微镜观察细胞形态的变化;Western印迹法检测线粒体相关凋亡蛋白P53、Bcl-2、Bax的表达。结果丁苯酞预处理的细胞比单纯MPP~+处理的细胞存活率增加(P<0.05),且呈一定的剂量依赖性;丁苯酞可以降低MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡率(P<0.05)。丁苯酞下调P53、Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。结论丁苯酞对MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能是调节P53、Bcl-2、Bax的表达,抑制细胞凋亡的发生。     

知母总皂苷对Aβ_(25~35)诱导的PC12细胞Bax表达的影响

目的观察知母总皂苷对Aβ25³5诱导PC12细胞凋亡及凋亡相关基因Bax表达的影响。方法培养PC12细胞,实验分为6组:正常组、模型组、知母低剂量组、知母中剂量组、知母高剂量组、西药组。20μmol/L Aβ2535诱导PC12细胞凋亡及凋亡相关基因Bax表达的影响。方法培养PC12细胞,实验分为6组:正常组、模型组、知母低剂量组、知母中剂量组、知母高剂量组、西药组。20μmol/L Aβ25³5作用PC12细胞48 h,诱导其凋亡。采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率的变化;采用RT-PCR检测各组细胞中Bax mRNA表达水平的变化;采用Western印迹技术检测各组细胞中Bax蛋白的表达水平的变化。结果和模型组比较,知母总皂苷能显著降低Aβ2535作用PC12细胞48 h,诱导其凋亡。采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率的变化;采用RT-PCR检测各组细胞中Bax mRNA表达水平的变化;采用Western印迹技术检测各组细胞中Bax蛋白的表达水平的变化。结果和模型组比较,知母总皂苷能显著降低Aβ25³5诱导的凋亡(P<0.05),能显著性降低凋亡基因Bax mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05)。结论知母总皂苷能降低Aβ2535诱导的凋亡(P<0.05),能显著性降低凋亡基因Bax mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05)。结论知母总皂苷能降低Aβ25³5诱导的PC12细胞凋亡率,其机制可能是降Bax mRNA及蛋白表达水平。