左乙拉西坦对癫痫幼鼠海马组织中多药耐药基因表达的影响

目的观察左乙拉西坦(LEV)对癫痫幼鼠海马组织中多药耐药基因(mdr)表达的影响。方法选择出生后7 d的雄性Wistar大鼠70只,随机分两组。癫痫组(38只)给予海人酸腹腔注射致痫,对照组(32只)腹腔注射相同剂量生理盐水。待自发性癫痫模型建立后,癫痫组随机分为癫痫观察(EP)组、癫痫治疗(EP+LEV)组;对照组分为生理盐水观察(NS)组和生理盐水治疗(NS+LEV)组。EP+LEV组和NS+LEV组给予LEV 300 mg/kg灌胃,1次/d,共6周;EP组和NS组给予同等剂量生理盐水灌胃,1次/d,共6周。各组大鼠断头取海马,PT-PCR检测其mdr1a、mdr1b mRNA。结果与NS相比,EP组mdr1a、mdr1b mRNA的表达明显升高(P均<0.01);与EP组相比,EP+LEV组mdr1a、mdr1b mRNA表达降低(P均<0.05)。结论癫痫幼鼠的海马组织中mdr1a、mdr1b mR-NA表达增加,LEV灌胃可使癫痫幼鼠海马组织mdr1a、mdr1b mRNA表达降低,但对正常幼鼠海马组织mdr1a、mdr1b mRNA的表达无明显影响。     

丁苯酞对戊四氮致痫大鼠癫痫发作及海马内5-羟色胺及硫化氢含量的影响

目的探讨丁苯酞(NBP)对慢性点燃癫痫大鼠模型海马神经元的保护作用。方法将40只雄性成年SD大鼠随机分为正常对照组、戊四氮组和NBP低中高组,每组8只。NBP低中高组在腹腔注射PTZ前30 min分别给予10、20、40 mg/kg,正常对照组和戊四氮组给予1 ml/kg植物油灌胃,后在每日的15∶00以35 mg/kg剂量腹腔注射戊四氮。约16 d建成慢性癫痫模型后处死,分别取出海马测定海马内硫化氢(H2S),并行免疫组化检测海马内5-羟色胺(5-HT)含量变化。结果与正常对照组比较,其他各组海马内5-HT均低于正常组,差异有极显著性(P0.01)。与戊四氮组相比,NBP中剂量组和高剂量组能明显延长癫痫发作的潜伏期(均P0.05),升高海马内5-HT(均P0.01)。NBP高组与正常对照组相比,海马内H2S升高,差异有极显著性(P0.01);NBP中剂量组与正常对照组比较,海马内H2S升高,差异无显著性(P0.05);NBP中高剂量组与戊四氮组比较,海马内H2S明显升高,差异具有极显著性(P0.01);戊四氮组和NBP低剂量组与正常对照组比较,海马内H2S降低,差异无显著性(P0.05)。结论 NBP能减轻癫痫对海马神经元造成的损伤,其作用机制可能与丁苯酞升高海马内5-HT和H2S有关。     

5-HT1A受体对癫痫伴发抑郁的影响及神经保护研究

目的 通过建立氯化锂-匹罗卡品癫痫伴发抑郁的模型试验,评价5-HT1A受体激动剂8-OH-DPAT治疗癫痫伴发抑郁的疗效.方法 建立癫痫伴发抑郁大鼠模型,随机分为5组,生理盐水组、模型组、卡马西平组及卡马西加低、高剂量8-OH-DPAT组,分别给予相应药物,通过尼氏染色及胶质纤维酸性蛋白免疫组化的方法观察抗癫痫的疗效,通过强迫游泳,开放视野的行为学方法、荧光定量PCR方法测定5-HT1A受体表达量来评定抗抑郁的效果.结果 5-HT1A受体激动剂与卡马西平联合使用,且能明显的改善抑郁行为、可以增高5-HT1A受体mRNA的含量,同样也具有对抗神经元凋亡和胶质细胞活化的作用(P<0.05).结论 5-HT1A受体激动剂不仅具有抗癫痫和抑郁的作用,而且也具有神经保护的作用.     

重组腺相关病毒介导神经肽Y基因转染对红藻氨酸致痫大鼠海马P35表达的影响

目的观察重组腺相关病毒介导人源性神经肽Y基因(rAAV2/1-hNPY-EGFP)转染对红藻氨酸(KA)致痫大鼠海马组织中P35表达的影响,探讨其在癫痫发病机制中的作用以及NPY基因治疗慢性癫痫的可能机制。方法 Wistar健康老年雄性大鼠96只,随机分为四组,A组:海马CA3区间断注射KA 1.5μl(0.4μg/μl)5次制成慢性癫痫大鼠模型;B组:在A组模型基础上,脑室注射rAAV2/1-empty-EGFP 10μl,滴度为5×1011/ml;C组:在A组模型基础上,脑室注射rAAV2/1-hNPY-EGFP 10μl,滴度为5×1011/ml;D组:注射药物为生理盐水,方法同A组。将四组大鼠分别于基因导入后2 w和4 w,取大脑海马组织,荧光定量PCR技术检测大鼠海马中NPY和P35 mRNA的表达,免疫组织化学技术检测二者蛋白的表达。结果在注射后2 w,A、B、C组大鼠NPY和P35 mRNA及蛋白的表达水平均升高,与A组相比有明显差异(P<0.05);在注射后4 w,rAAV2/1-hNPY-EGFP在癫痫病理状态下的脑组织中实现有效表达,C组大鼠海马组织中NPY的表达明显升高,而P35的表达明显降低,与A组及B组大鼠相比有明显差异(P<0.05)。结论 rAAV2/1-hNPY-EGFP基因转染可以抑制KA致痫大鼠海马中P35的表达,进而发挥抗癫痫作用,为NPY基因治疗癫痫病提供了有力试验支持。     

隔药饼灸对功能性消化不良肝郁脾虚模型大鼠海马盐皮质激素受体、糖皮质激素受体、5-羟色胺1A受体表达的影响

目的:观察隔药饼灸对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)肝郁脾虚模型大鼠海马盐皮质激素受体(mineralocorticoid receptor,MR)、糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)、5-羟色胺1A受体(5-hydroxytryptamine receptor 1A,5-HTR1A)表达的影响.方法:将50只SD大鼠按随机数字表法随机分为空白组、模型组、隔药饼灸组、逍遥散组、多潘立酮组5组,每组10只,空白组正常喂养,其余4组采用复合病因造模法(慢性束缚应激+过度疲劳+饮食失节+夹尾+摇晃)造模,连续3 wk;再按被试因素予以隔药饼灸和逍遥散、多潘立酮灌胃,共治疗2 wk.实验结束后采用营养性半固体糊灌胃法测定大鼠胃排空率,用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-PCR)法检测大鼠海马MR、GR、5-HTR1A的表达.结果:(1)模型组大鼠胃排空率较空白组明显下降(P0.01),治疗后各治疗组大鼠胃排空率较模型组上升(均P0.01),但3组间比较差异无统计学意义(P0.05);(2)与空白组比较,模型组大鼠MR表达差异无统计意义(P0.05);而G R及5-H T R1A的表达下降且差异均有统计意义(均P0.05);与模型组比较,隔药饼灸组、逍遥散组、多潘立酮组大鼠海马MR的表达亦无统计意义(P0.05),而GR及5-HTR1A的表达上调且差异均有统计学意义(均P0.05),但3组间比较差异均无统计学意义(P0.05).结论:隔药饼灸同逍遥散及多潘立酮一样能调节海马GR、5-HTR1A的表达,从而调节边缘系统-下丘脑-垂体-肾上腺轴(limbic system-hypothalamic-pituitary-adrenal axis,LHPA/HPA轴),提高大鼠胃排空率,改善胃肠动力,最终起到治疗本病的作用.     

健脾化湿颗粒对腹泻型肠易激综合征大鼠结肠5-羟色胺、5-羟色胺3受体的影响

目的探讨健脾化湿颗粒对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)模型大鼠结肠中5-羟色胺(5-HT)和5-羟色胺3受体(5-HT3R)水平的影响。方法选用60只SD雄性大鼠,按体重随机分成六组,分别为正常组,模型组,健脾化湿颗粒低、中、高剂量组,阳性对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠结肠黏膜中5-HT含量,采用免疫组化法检测结肠黏膜下5-HT3R阳性细胞的表达量,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结肠中5-HT3R mRNA的表达水平。结果与正常组相比,模型组结肠中5-HT水平显著升高(P0.05),结肠黏膜下层5-HT3R阳性细胞的含量明显升高(P0.05),结肠中5-HT3R mRNA的表达水平亦显著升高(P0.05);健脾化湿颗粒可以降低5-HT水平,5-HT3R水平及其mRNA表达量。结论健脾化湿颗粒可能通过降低结肠黏膜5-HT含量,减少结肠5-HT3R的表达量,减弱5-HT3R神经元兴奋性,从而改善内脏痛觉敏感状态,消除肠道反应。     

肺纤维化大鼠肺组织血小板源性生长因子和纤溶酶原激活物抑制剂1表达的研究

目的 观察肺纤维化大鼠肺组织中血小板源性生长因子(PDGF)和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)表达的变化,探讨其在肺纤维化中的作用机制.方法 30只 Wistar大鼠随机分为博莱霉素组(BLM组)和对照组(NS组):①BLM组,气管内灌注BLM(5 mg/kg)诱导肺纤维化;②NS组,气管内灌注NS(剂量与用法同上).于气管内灌注后第7、14和28天各分别处死5只大鼠,取右肺支气管肺泡灌洗液(BALF),进行细胞分类、计数;留取左肺组织匀浆测定羟脯氨酸含量;采用免疫组织化学法测定PDGF和PAI-l蛋白的表达.结果 ①BLM组肺组织中胶原含量在第7天开始升高,第14、28天进行性增高,明显高于NS组(P＜0.01);②BLM组肺组织中PDGF蛋白表达在第7天达高峰,之后下降,第28天时仍高于NS组(P ＜0.05),与BALF中的细胞总数密切相关;③BLM组肺组织中PAI-1的表达在第7天开始升高,第28天达到高峰,与肺组织中胶原的含量密切相关(r=0.952,P＜0.01).结论 PDGF和PAI-1可能通过影响细胞外基质的代谢及胶原的沉积促进肺纤维化的发生.     

甲状腺素对大鼠海马细胞凋亡和AMPA、NMDA受体的影响

目的观察甲状腺素对大鼠海马细胞凋亡和α-氨基-3-羧基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的影响。方法选取健康SD大鼠20只,随机分为对照组、甲状腺功能亢进症(甲亢)组各10只,腹腔注射L-甲状腺素35 d建立大鼠甲亢模型。检测两组大鼠血清三碘甲腺原氨酸(T3)、血清总甲状腺素(T4)水平;水迷宫检测大鼠学习记忆力;免疫组化检测两组大鼠海马细胞Bax、Bcl-2蛋白及AMPA及NMDA受体变化。结果与对照组比较,甲亢组血清T3、T4水平明显升高(P0.01),逃避潜伏期明显延长(P0.05);Bax蛋白表达明显升高(P0.01);Bcl-2蛋白及AMPA、NMDA受体表达均显著减少(P0.01)。结论甲状腺素可促进海马细胞Bax蛋白表达;降低Bcl-2蛋白、AMPA、NMDA受体的表达;这可能是甲亢大鼠学习记忆力降低的分子生物学机制之一。     

低氧诱导大鼠肺动脉中5-HT_(1B)受体的过度表达

目的:观察低氧对大鼠肺动脉中5-羟色胺1B(5-HT1B)受体表达的影响,初步探讨了5-HT1B受体在低氧性肺动脉高压形成中的变化。方法:40只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、低氧3周组、低氧4周组和低氧6周组,每组10只。除正常组外,其余3组大鼠分别在低氧环境中饲养3周、4周和6周。测定各组大鼠的平均肺动脉压力(mPAP)、右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚度。应用免疫组化染色法检测大鼠肺动脉上5-HT1B的分布和表达;用Western blot法测定大鼠肺组织中5-HT1B受体蛋白的含量。结果:与正常组相比,低氧3周组大鼠的mPAP、RVSP和右心室肥厚度均显著升高(均P0.05),并且随着低氧时间的延长而持续升高(均P0.05)。免疫组化染色的结果显示,5-HT1B受体主要分布在正常大鼠肺动脉的内膜层,平滑肌肌层中仅有少量表达;与正常组相比,低氧3周组大鼠肺动脉平滑肌肌层中5-HT1B受体的表达显著增多(P0.05);随着低氧时间的延长,表达持续增多。Western blot的结果表明,大鼠肺组织中5-HT1B受体蛋白含量的变化与免疫组化染色法检测的结果相一致。结论:低氧可以诱导大鼠肺动脉中5-HT1B受体的过度表达,这可能是5-羟色胺系统参与低氧性肺动脉高压形成的机制之一。     

慢性应激性胃病大鼠中5-羟色胺水平及其与精神状态的相关性

目的探讨慢性应激性胃病大鼠中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)水平及其与精神症状的相关性。方法选取100只SD大鼠随机分为正常对照组及慢性应激性胃病组。记录给药后对大鼠胃运动的影响及大鼠建模后运动量的影响。结果与对照组相比,慢性应激性胃病组体质量下降,糖水消耗量降低,水平及垂直运动得分均降低,自我修饰得分降低,平均胃内压降低,差异有统计学意义(P0.05)。注射生理盐水组,胃内压明显降低,胃运动度减弱,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。注射5-HT组胃内压升高,胃运动加强,与注射生理盐水组比较,差异有统计学意义(P0.05),但与对照组相比,差异无统计学意义(P0.05)。注射5-HT 1A受体阻断剂+5-HT组平均胃内压及胃收缩幅度显著降低,与注射5-HT组比较,差异有统计学意义(P0.05)。注射5-HT 2A受体阻断剂+5-HT组平均胃内压显著降低,与注射5-HT组对比,差异有统计学意义(P0.05)。但阻断迷走神经注射5-HT组的平均胃内压及胃收缩幅度与其他组相比更加显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论采用5-HT 1A受体抑制剂可显著减弱胃肠反应,阻断迷走神经可切断慢性应激性胃病相关症状,使机体对5-HT不再应激。     

肠易激综合征模型大鼠5-羟色胺7受体的表达及作用

目的 观察5-羟色胺7受体在肠易激综合征(IBS)不同亚型模型大鼠大脑和消化道组织中表达和分布的差异,探讨其在IBS发病中的作用.方法 45只成年SD大鼠分均为对照组、腹泻型IBS(IBS-D)组和便秘型IBS(IB-C)组.乙酸加束缚应激法制备IBS-D模型,冰水灌胃法制备IBS-C模型.免疫组化法和实时定量PCR法检测各组大鼠大脑、空肠、回肠、近端结肠、远端结肠中5-HT7受体的分布及表达差异.放射免疫法测定以上各组织中环磷酸腺苷(cAMP)含量.结果 免疫组化结果 显示,IBS-C组和IBS-D组海马及下丘脑、IBS-C组回肠、近端结肠、远端结肠5-HT7受体表达强于对照组(P＜0.05).实时定量PCR结果 显示,IBS-C和IBS-D组海马和下丘脑、IBS-C组回肠、近端结肠及远端结肠5-HT7受体mRNA明显高于对照组(P＜0.05).IBS-C和IBS-D组海马和下丘脑、IBS-C组近端结肠和远端结肠cAMP含量显著高于对照组(P＜0.05).结论 两组大鼠脑组织及IBS-C大鼠结肠5-HT7受体表达及cAMP水平明显增高,可能与IBS-C胃肠动力障碍和内脏感觉异常有关.     

Aβ25～35诱导阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元HSP70的表达

目的利用β-淀粉样蛋白(Aβ25～35)毒性作用诱导大鼠阿尔茨海默病(AD)模型,研究热休克蛋白70(HSP70)在海马神经元损伤中的表达.方法将大鼠随机分为2组:AD模型组、溶媒体组,在双侧海马分别注射2 μl(10 μg)Aβ25～35 、2 μl生理盐水;于海马注射第1,7,14,21天采用免疫组织化学、积分光密度分析等手段对各组大鼠脑HSP70的表达进行观察.结果 AD模型组手术第7天大鼠记忆明显减退(P<0.05),且HSP70在海马神经元内表达第1天时最高,第1～21天呈递减趋势,其中第14天锐减.结论 Aβ25～35通过氧化应激和损伤海马神经元等过程使HSP70的表达明显降低,HSP70表达是AD大鼠脑内神经元存活的重要标志.     

左乙拉西坦对外伤性癫痫预防作用的实验研究

目的建立外伤性癫痫模型,观察左乙拉西坦(LEV)干预对大鼠行为学以及海马苔藓纤维出芽的影响,探讨LEV对外伤性癫痫的预防作用。方法 (1)外伤性癫痫模型建立:除正常对照组外,其余大鼠均立体定向注射5μl浓度为0.2 mol/L的氯化铁于右侧运动皮层,癫痫发作分级采用Racine(1972)评分标准,除死亡外发作至4级以及4级以上的随机分为3组,每组7只。(2)实验分组:正常对照组,等体积生理盐水连续灌胃7 d;模型对照组,右侧运动皮层注射氯化铁,而后给予等体积生理盐水连续灌胃7 d;低剂量预防组,右侧运动皮层注射氯化铁,造模清醒后立即给予LEV150 mg/kg,1次/d,连续灌胃7 d;高剂量预防组,右侧运动皮层注射氯化铁,造模清醒后立即给予LEV300 mg/kg,1次/d,连续灌胃7 d。(3)行为学观察:视频监控24 h大鼠行为学变化,采用Racine(1972)评分标准对癫痫发作进行观测和记录,记录大鼠造模后7 d内癫痫发作次数。(4)海马苔藓纤维出芽Timm染色:大鼠造模后15 d,海马冰冻切片做Timm染色,观察右侧海马CA3区苔藓纤维出芽情况,并选用Cavazos的标准对其进行评分。(5)统计学分析:用SPSS 17.0统计软件进行单因素方差分析及LSD-t组间比较,评价LEV对外伤性癫痫的预防作用。以P0.05为差异有统计学意义。结果 LEV低、高剂量预防组与模型组相比明显减少癫痫发作次数及苔藓纤维出芽程度,差异有统计学意义(t值分别为11.36、5.88、18.39、8.12,均P0.05),低剂量预防组与高剂量预防组相比,差异有统计学意义(t值分别为8.22、3.58,均P0.05)。结论 LEV在外伤性癫痫模型中可以减少癫痫发作次数,抑制苔藓纤维出芽,提示LEV有预防外伤性癫痫的作用。     

健脾化湿颗粒对D-IBS模型大鼠脑中5-HT及5-HTR3,5-HTR4表达的影响

目的:从前额叶皮质、海马及下丘脑中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)和5-羟色胺受体3(5-hydroxytryptamine receptor3,5-HTR3),5-羟色胺受体4(5-HTR4)角度探讨健脾化湿颗粒改善腹泻型肠易激综合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,D-IBS)模型大鼠结肠运动和内脏敏感性的作用机制.方法:采用番泻叶灌胃结合束缚应激法建立D-IBS大鼠模型,应用健脾化湿颗粒进行干预,采用酶联免疫法(ELISA)检测大鼠海马中5-HT含量,采用免疫组织化学法检测前额叶皮质、海马及下丘脑中5-HT、5-HTR3、5-HTR4阳性表达,采用逆转录-聚合酶链反应法检测海马中5-H T R3 m R N A和5-H T R4m RNA的表达水平.结果:与正常组相比,模型组海马中5-HT含量(327.30±22.35 vs 265.33±13.60),前额叶皮质、海马、下丘脑中5-HT阳性表达(0.16±0.02 vs 0.08±0.01,0.19±0.02 vs 0.09±0.01,0.17±0.02 vs 0.08±0.01)明显升高(P0.01);前额叶皮质、海马、下丘脑中5-HTR3阳性表达(0.29±0.02 vs 0.10±0.01,0.23±0.02 vs 0.09±0.01,0.22±0.02 vs 0.09±0.02)及5-HTR4阳性表达(0.25±0.02 vs0.11±0.01,0.28±0.02 vs 0.10±0.02,0.27±0.02 vs 0.11±0.02)明显升高(P0.01);海马中5-H T R3 m R N A和5-H T R4 m R N A的表达(0.54±0.01 vs 0.17±0.05,0.73±0.08 vs 0.10±0.02)显著升高(P0.01).与模型组相比,阳性对照组、中、高剂量组海马中5-H T含量(298.92±12.16、286.29±24.43、279.86±20.05 vs 327.30±22.35)显著下降(P0.05,P0.01),中、高剂量组前额叶皮质中5-HT表达(0.12±0.01、0.11±0.01 vs 0.16±0.02)显著下降(P0.01),阳性对照组、中、高剂量组海马、下丘脑中5-H T表达显著下降(P0.05,P0.01);各治疗组前额叶皮质、海马、下丘脑中5-H T R3表达及5-H T R4表达下降显著(P0.05,P0.01);各治疗组海马中5-H T R3 m R N A表达及5-H T R4 m R N A表达显著降低(P0.05,P0.01).结论:健脾化湿颗粒可能通过下调脑中5-HT、5-HTR3、5-HTR4表达来改善D-IBS模型大鼠结肠运动和内脏敏感性.     

丁苯酞对慢性酒精中毒大鼠海马硫化氢及CA1、CA3区五羟色胺的影响

目的探讨丁苯酞(NBP)对慢性酒精中毒大鼠学习记忆能力、海马硫化氢及CA1、CA3区五羟色胺(5-HT)含量的影响。方法将90只SD雄性大鼠随机平均分为五组,除对照组外,各组饮含6%(V/V)酒精水溶液42 d,酒精溶液每日9∶00配制,置换。42 d后,NBP低、中、高剂量组灌胃不同剂量NBP(大约14 d),于饮酒结束后采用Y型电迷宫测试酒精中毒大鼠的学习记忆能力,随后检测海马组织H_2S的含量及CA1、CA3区5-HT的表达情况。结果与空白对照组相比,模型组学习记忆和H_2S含量均显著升高,5-HT受体阳性表达显著降低(P0.01)。与模型组相比,NBP中、高剂量组学习记忆成绩和H2S含量均显著降低,5-HT受体阳性表达显著升高(P0.01)。结论 NBP能够减轻慢性酒精中毒大鼠的症状,改善大鼠学习记忆能力,可能与NBP影响H_2S和5-HT的含量有关。     

内皮素-1在红藻氨酸致癫痫大鼠海马区的表达及依达拉奉的干预作用

目的观察内皮素(ET)-1在红藻氨酸(KA)致癫痫大鼠海马的表达及依达拉奉对其影响。方法 50只雄性Wistar大鼠被随机分成5组,每组10只。正常组、磷酸盐缓冲液(PBS)组、癫痫组,治疗组1(地西泮治疗),治疗组2(地西泮+依达拉奉治疗)。癫痫组在大鼠右侧海马以每公斤体重注射1.5μg/μl KA,PBS组采取同样的方法在相同部位注入等量PBS,治疗组1在癫痫模型成立后给予10 mg/kg地西泮终止癫痫,治疗组2在治疗组1的基础上1 h后再给予依达拉奉30 mg,1次/12 h,正常组不注射任何药物。结果激光共聚焦显微镜观察,癫痫组ET-1的表达密度显著高于PBS组及正常组(P<0.05),治疗组较正常组、PBS组及癫痫组表达显著下降(P<0.05),治疗组1较治疗组2表达显著增高(P<0.05)。十二烷基硫酸钠、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示ET-1的相对分子质量为2 492 D,其在癫痫组的表达较正常组及PBS组显著增加,治疗组较癫痫组显著降低(均P<0.05),与激光共聚焦的结果相一致。结论 ET-1表达增加对癫痫后大鼠海马的神经元损伤具有细胞保护作用。     

细胞外信号调节激酶抑制剂对间歇低氧大鼠认知功能的影响

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂对间歇低氧大鼠海马CA1区神经细胞自噬相关蛋白表达及认知功能的影响。方法成年雄性Wistar大鼠96只,采用随机数字法分为正常对照组(UC组)、5%间歇低氧组(5%IH组)、ERK抑制剂组(U0126组),每组又分为7、14、21、28 d 4个时间点,每个时间点8只大鼠。应用透射电镜观察大鼠海马CA1区神经细胞线粒体、自噬体等超微结构的改变;免疫组织化学法检测海马CA1区ERK1/2、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达;TUNEL检测海马CA1区神经细胞凋亡情况;Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆功能。结果与UC组比较,5%IH组7、14、21、28 d海马CAl区神经细胞ERK1/2蛋白表达明显增加(P0.05);与5%IH组比较,U0126组7、14、21、28 d海马CAl区神经细胞ERK1/2蛋白表达明显降低(15.48±2.00 vs 27.91±2.15,15.51±1.93 vs 35.86±2.58,15.57±2.09 vs 47.04±3.96,15.43±1.97 vs 59.03±4.09,P0.05)。与UC组比较,5%IH组和U0126组7、14、21、28 d海马CAl区神经细胞Beclin-1和LC3蛋白表达及神经元凋亡指数明显增加(P0.05);与5%IH组比较,U0126组7、14、21、28 d海马CAl区神经细胞Beclin-1和LC3蛋白表达及神经元凋亡指数明显降低(P0.05)。与UC组比较,5%IH组和U0126组大鼠7、14、21、28 d逃避潜伏期明显延长,跨越目标象限时间明显缩短(P0.05);与5%IH组比较,U0126组大鼠7、14、21、28 d逃避潜伏期明显缩短,跨越目标象限时间明显延长(P0.05)。结论 ERK抑制剂U0126通过阻断ERK信号通路抑制大鼠海马神经细胞自噬的激活,进而减轻神经细胞损伤,改善认知功能。     

脑卒中后抑郁大鼠海马小胶质细胞脑源性神经营养因子及酪氨酸激酶受体B蛋白的表达

目的研究脑卒中后抑郁(PSD)大鼠海马小胶质细胞脑源性神经营养因子(BDNF)及其高亲和力受体酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)蛋白的表达情况。方法将40只健康成年SD大鼠随机分为正常组、抑郁组、脑卒中组及PSD组,每组10只。用线栓法建立局灶性脑缺血模型;用慢性不可预见的中等应激刺激结合孤养法建立大鼠慢性应激抑郁模型。各组造模后第29和57天用免疫荧光双标染色法测大鼠海马OX42标记的小胶质细胞BDNF及TrkB表达情况。结果造模后第29天PSD组海马BDNF和TrkB阳性细胞吸光度(A)值分别为83.35±5.74和82.35±5.74,显著低于正常组、抑郁组和脑卒中组(P0.05);抑郁组A值较脑卒中组增多(141.23±9.16 vs133.31±7.89;141.23±8.07 vs 128.62±6.92,P0.05)。造模后第57天PSD组海马BDNF和TrkB阳性细胞A值分别为81.63±7.19,74.43±7.42,显著低于正常组、抑郁组和脑卒中组(P0.05);脑卒中组A值较正常组及抑郁组低(93.36±7.56 vs 124.11±11.39、116.65±10.55,87.14±6.56 vs 112.58±10.99、108.05±10.57,P0.05)。结论海马小胶质细胞在PSD发病过程中有重要意义,可能通过减少BDNF及TrkB的表达发挥作用。     

金荞麦提取物对IBS大鼠脊髓镇痛的干预机制

目的:观察金荞麦(Fagopyrumcymosum,Fag)提取物对肠易激综合征(irritablebowelsyndrome,IBS)样结肠刺激(colonirritation,CI)模型内脏高敏感性的改善作用以及对动物脊髓背角内5-HT及其受体的影响.方法:采用结肠刺激新生期乳大鼠来制作IBS样CI模型.CI大鼠成年后给予口服Fag2wk,并用腹壁撤退反射(AWR)评分来评价给药后CI大鼠内脏高敏感性的变化,取大鼠脊髓用免疫组织化学法观察5-HT免疫染色,用蛋白印迹法检测5-HT1A受体(5-HT1AR)、5-HT3A受体(5-HT3AR)表达.结果:和对照组比,CI组大鼠AWR评分明显增高(20mmHg:0.625±0.518vs1.333±0.778;30mmHg:0.750±0.463vs1.667±0.888;40mmHg:1.125±0.641vs2.000±0.739;50mmHg:1.500±0.926vs2.583±0.793;60mmHg:2.125±0.991vs3.083±0.669;均P<0.05);且脊髓内5-HT染色度增加(11.250±4.833vs21.125±7.827,P<0.01),5-HT3A受体表达升高(179.038±29.786,P<0.01),5-HT1A受体则表达降低(64.523±16.873,P<0.01);高剂量Fag可降低CI大鼠AWR评分(20mmHg:0.250±0.002;30mmHg:0.875±0.044;40mmHg:1.250±0.036;50mmHg:1.875±0.050;60mmHg:2.625±0.037;均P<0.05),并下调脊髓内5-HT(13.375±5.579,P<0.05)和5-HT3AR的表达(114.200±20.983,P<0.05),上调5-HT1AR的表达(93.008±13.523,P<0.05);低剂量Fag则对CI大鼠的影响不明显.结论:Fag对IBS样CI大鼠有镇痛作用,并通过调节其脊髓内5-HT及其受体来改善痛觉过敏.     

盐酸美金刚对血管性痴呆大鼠N-甲基-D天冬氨酸受体的影响

目的观察盐酸美金刚对血管性痴呆(vascular dementia,VaD)大鼠学习记忆能力及对N-甲基-D天冬氨酸受体3个亚基(NR1、NR2A、NR2B)的影响。方法将30只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和美金刚组,每组10只,后2组采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制作VaD大鼠模型。美金刚组于术后1周给予美金刚10mg/(kg·d)灌胃治疗4周,模型组给予等量生理盐水。于术后5周采用Morris水迷宫测试各组大鼠的学习记忆水平,用Western blot方法测定各组大鼠海马区NR1、NR2A和NR2B蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠术后水迷宫实验逃避潜伏期显著延长(P=0.001),跨越目标象限百分率明显减少(P=0.002),海马区NR1、NR2A、NR2B蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。与模型组比较,美金刚组学习记忆水平明显改善(P<0.05);NR1、NR2A、NR2B蛋白的表达显著增加(P<0.05),但仍低于假手术组(P<0.05)。结论美金刚对VaD大鼠海马区NR1、NR2A和NR2B蛋白表达均具有上调作用,从而改善其学习记忆能力。