缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的研究

目的研究缺血再灌注诱导体外培养大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达.方法采用体外培养新生大鼠心肌细胞,随机分为正常对照组(Ⅰ组)、模拟缺血2h组(Ⅱ组)、缺血2h后再灌注1h组(Ⅲ组)以及持续缺血3h组(Ⅳ组).TUNEL法检测心肌细胞凋亡,荧光显微镜观察心肌细胞凋亡的形态学特征、免疫组织化学法检测Bcl-2/Bax基因表达.结果心肌细胞I/R后,TUNEL法检测到阳性凋亡细胞,且持续缺血3h组与再灌注组凋亡指数明显高于缺血2h组.荧光显微镜观察到典型的细胞凋亡超微结构;免疫组织化学检测发现Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调.结论缺血和缺血再灌注均能诱导心肌细胞凋亡,且心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因表达有密切关系.     

菟丝子黄酮对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察菟丝子黄酮对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min,再灌注2 h建立心肌缺血再灌注模型。将50只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组及菟丝子黄酮低、高剂量组和消心痛组。再灌注结束后检测血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶,DNA末端标记法计算凋亡指数,免疫组织化学法和Western Blotting法检测心肌Bcl-2和Bax蛋白表达,计算Bcl-2/Bax值。结果与假手术组比较,缺血再灌注组心肌酶肌酸激酶、乳酸脱氢酶和凋亡指数显著增高(P<0.01),Bcl-2和Bax蛋白表达增强(P<0.01);与缺血再灌注组比较,菟丝子黄酮低、高剂量组及消心痛组能降低血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶含量和凋亡指数(P<0.01),增加Bcl-2而减少Bax的表达(P<0.01)。结论菟丝子黄酮能够抑制缺血再灌注损伤大鼠的心肌细胞凋亡,与消心痛效果相近。     

大蒜素通过调节Bcl-2,Bax及NF-κB表达而抑制大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡(英文)

目的:探讨大蒜素预处理对在体大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用、对心肌细胞凋亡的影响及Bcl-2,Bax,NF-κB是否参与抗凋亡作用。方法:建立大鼠在体心肌I/R损伤模型,将48只大鼠随机分为正常对照(Con)组、I/R组和大蒜素预处理(AP)组;各组均测定心肌梗死范围[IS/AAR(%),TTC法]、再灌注后血清肌酸磷酸肌酶同工酶MB(CK-MB)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并应用DNA琼脂糖凝胶电泳及TUNEL法检测各组凋亡指数(AI)、Bcl-2,Bax表达及NF-κB核结合活性。结果:AP组较I/R组IS/AAR(%)[(21.8±1.5)%vs.(44.6±4.6)%,P0.01],CK-MB[(16.4±1.6)vs.(34.1±1.8)U/L,P0.01]明显降低,SOD[(2 337±215)vs.(1 219±187)U/mg pro,P0.01]明显增高。AP组AI较I/R组明显降低[(7.0±1.2)%vs.(4.0±3.0)%,P0.01]。Bcl-2表达明显增加,Bax表达明显减少,NF-κB核结合活性明显降低。结论:大蒜素有明显抗大鼠心肌I/R损伤作用能与抗心肌细胞凋亡有关,对Bcl-2,Bax及NF-κB表达的调控起重要作用。     

大鼠急性心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的实验研究

目的:观察心肌缺血再灌注(IR)损伤与心肌细胞凋亡关系及凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达情况。方法:选用健康雄性SD大鼠29只,随机分为:假手术组(n=8),缺血组(n=12),缺血再灌注组(n=9),分别取上述大鼠心肌组织。(1)观察心肌组织及线粒体的形态结构,并进行体视学分析。(2)采用缺口末端标记法(TUNEL)原位检测凋亡细胞。(3)用免疫组化SP法检测心肌细胞Bcl-2、Bax表达。结果:(1)假手术组心肌纤维排列整齐,细胞间质血管未见明显异常,细胞核膜完整,缺血组及缺血再灌注组可见心肌嗜酸性变、空泡变性、心肌纤维紊乱及收缩带形成,心肌纤维间出血及灶性心肌坏死。心肌细胞线粒体体视学分析,与假手术组比较,心肌缺血组形状因子显著降低(P<0.05),面密度显著增加(P<0.05),缺血再灌注组形状因子显著降低(P<0.01),面密度及周密度均显著增加(均P<0.05)。(2)与假手术组比较,缺血组细胞凋亡率明显升高(P<0.001),缺血再灌注组细胞凋亡率明显升高(P<0.001)。缺血再灌注组与缺血组比较细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。(3)与假手术组比较,缺血再灌注组凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达明显升高(P<0.01,P<0.001)。缺血再灌注组与缺血组比较凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达明显升高(均P<0.01)。结论:心肌缺血及再灌注在导致细胞形态、线粒体超微结构改变的同时,诱导心肌细胞的凋亡,Bcl-2、Bax蛋白表达在心肌细胞凋亡的发生中起重要作用,细胞凋亡加重了缺血再灌注损伤。     

大剂量当归预适应抗心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡的机制

目的观察大剂量当归水煎液预适应对缺血再灌注(IR)大鼠心肌细胞凋亡及心肌组织Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。方法应用离体灌流大鼠心脏,复制大鼠心肌IR与缺血预适应(IPC)模型,并以不同大剂量当归水煎液灌胃6 w后,取大鼠心脏进行离体灌注,复制当归IPC模型,以TTC法测定心肌梗死面积,以Tunel法检测细胞凋亡,Western印迹法检测Bcl-2及Bax蛋白表达。结果大剂量当归水煎液预适应能有效降低IR大鼠心肌梗死面积,降低心肌细胞的凋亡率,并增加心肌组织Bcl-2的表达而抑制Bax的表达,且呈现明显剂量-效应关系(P0.05,P0.01)。结论大剂量当归水煎液预适应可增加心肌组织Bcl-2的表达而抑制Bax的表达,从而减少IR大鼠心肌细胞的凋亡,对IR大鼠心肌具有明显保护作用。     

三羟异黄酮对家兔缺血/再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的研究三羟异黄酮(genistein,GST)对家兔缺血/再灌注损伤(I/R)心肌细胞凋亡的影响.方法阻断家兔心脏左冠状动脉前降支45 min,再灌注180 min引起心肌I/R损伤,在心肌缺血后5 min耳缘静脉注射GST(1.0 mg/kg),应用DNA片段原位末端标记法(TUNEL染色),DNA凝胶电泳和流式细胞仪(FCM)观测心肌细胞凋亡.结果琼脂糖凝胶电泳显示I/R组心肌DNA呈云梯状改变,而GST I/R组无此改变.与I/R组比较,GST I/R组缺血心肌凋亡细胞明显减少(TUNEL染色).流式细胞仪测定I/R组及GST I/R组缺血心肌凋亡率分别为(19.36±1.85)%和(5.46±1.12)%.I/R组的缺血心肌Fas和Bax蛋白表达较非缺血心肌高(P＜0.01),Bcl-2/Bax比例较非缺血心肌低(P＜0.01);而在GST I/R组,Fas和Bax蛋白表达较I/R组的低(P＜0.01),Bcl-2/Bax比例较I/R组高(P＜0.01).结论 GST可减少家兔心肌细胞凋亡,其机制与调控凋亡相关基因Fas、Bax和Bcl-2的蛋白表达有关.     

心肌缺血/再灌注中心肌细胞凋亡的研究进展

本文综述了心肌缺血 /再灌注中心肌细胞凋亡的证据、诱发因素、相关调控基因、病理生理作用和临床意义。     

大鼠心肌延迟缺血再灌注损伤模型的建立及其心功能和心肌细胞凋亡情况观察

目的 构建大鼠心肌延迟缺血再灌注损伤模型,并通过观察其心肌细胞凋亡情况及心功能变化加以验证.方法 取SD大鼠42只,结扎心脏前降支血管制作心肌缺血模型,分别于结扎后1、4、6、12、24 h后打开线结观察5 min内再灌注情况以确定及时和延迟再灌注时间.将SD大鼠分为假手术组、及时再灌组和延迟再灌组,及时再灌组和延迟再...     

心肌细胞凋亡与缺血/再灌注损伤

细胞凋亡（apoptosis）是细胞死亡的一种重要形式，即程序性细胞死亡，一般认为它是由基因控制的、有序化的主动死亡过程。自1972年Kerr等首次以形态学概念提出细胞凋亡这一术语以来，凋亡一直是医学界的研究热点。近年来，随着分子生物学技术的不断丰富及分子心血管病学的研究发展，已证实细胞凋亡现象存在于心血管系统的许多生理和病理变化中，与许多心血管疾病的发生发展密切相关。本文就心肌细胞凋亡与缺血再灌注损伤的关系综述如下。     

中药复方冠心康对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察中药复方冠心康对大鼠缺血再灌注损伤(MIRI)心肌细胞相关凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响。方法 40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、MIRI模型组、冠心康组、盐酸地尔硫卓组。采用结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注2h复制大鼠MIRI模型,分别以HE染色、TUNEL法及免疫组织化学法检测心肌组织病理学、心肌细胞凋亡指数、心肌细胞Bcl-2、Bax的阳性表达。结果 MIRI组与假手术组比较心肌细胞凋亡指数值显著升高(P<0.01),而冠心康组明显降低(P<0.01);抑凋亡因子Bcl-2在MIRI后表达明显降低,而促凋亡因子Bax表达则明显升高,冠心康可明显升高Bcl-2的表达,同时降低Bax的表达(P<0.01)。结论中药复方冠心康对大鼠MIRI心肌细胞具有明显的保护作用,其作用机制与调控心肌细胞的凋亡因子Bcl-2、Bax的表达有关。     

芹菜素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2/Bax的影响

目的 探讨芹菜素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达的影响.方法 心肌缺血45 min,再灌注2 h制备缺血再灌注模型.随机分为正常组、假手术组、生理盐水缺血再灌注组、溶剂对照组、美托洛尔阳性对照组及芹菜素低、中、高剂量组,每组8只.除假手术组外,余各组在缺血前10 min分别股静脉给药.再灌注2 h后迅速取出心脏,用RT-PCR测Bcl-2及Bax基因的mRNA表达;实验时记录心率(HR)、平均动脉压(MAP)、心电图S-T段并计算心律失常Lambeth评分.结果 芹菜素组与生理盐水缺血再灌注组比较,Bcl-2 mRNA表达量增加,Bax mRNA表达量减少,均呈剂量依赖性(P＜0.05);心律失常Lambeth评分芹菜素组低于假手术组 (P<0.05);芹菜素能缩短再灌注心律失常持续时间(P<0.05).结论 芹菜素对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有良好的保护作用;芹菜素抗心肌凋亡作用的机制可能与其上调Bcl-2基因表达和下调Bax基因表达有关.     

缺血后适应对活性氧及心肌细胞凋亡的影响

目的观察后适应和远程后适应对大鼠缺血再灌注模型活性氧生成及心肌细胞凋亡的影响,探讨活性氧在后适应和远程后适应中的作用。方法大鼠随机分为6组：①假手术组：只穿线,不结扎;②模型组：前降支缺血30min后再灌注2h：③后适应组：前降支缺血30min后进行3个循环后适应（缺血10s,再灌注10s,然后再灌注2h;④远程后适应组：前降支缺血24min时结扎右股动脉5min,在再灌注前1min开通股动脉,前降支再灌注2h;⑤2-巯基丙酰基甘氨酸组l;⑥2-巯基丙酰基甘氨酸组2：在缺血20min时尾静脉注射2一巯基丙酰基甘氨酸20mg／kg,余处理分别同组③和（或）④。实验结束后检测血丙二醛,心肌标本行HE染色、TUNEL检测和测定Bcl-2、BaxmRNA。结果①血丙二醛活性：后适应组、远程后适应组、2-巯基丙酰基甘氨酸组1和组2分别为（14．6±1．4）、（15．6±1．5）、（14．4±1．6）、（15．0±1．4）μmol／L,低于模型组（18．3±1．9）μmol／L,（P〈0．05）;②后适应组和远程后适应组Bcl-2表达高于模型组,而Bax表达低于模型组（P〈0．05）;2-巯基丙酰基甘氨酸处理有对抗作用;④细胞凋亡率：后适应组（25．3±2．3）％和远程后适应组（26．7±2．2）％低于模型组（50．0±7．9）％（P〈0．05）,2-巯基丙酰基甘氨酸处理有对抗作用。结论后适应和远程后适应均能减少活性氧的产生：后适应和远程后适应都有减少细胞凋亡作用,其心肌保护作用与减少活性氧的产生有关：提示活性氧可能在后适应和远程后适应中发挥重要作用。     

丙泊酚对大鼠离体缺血/再灌注心肌细胞凋亡和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的研究丙泊酚对大鼠离体缺血/再灌注心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 SD大鼠30只,随机分为丙泊酚组与对照组,制备大鼠离体心肌缺血/再灌注(MI/R)模型,在再灌注开始时分别给以丙泊酚(25μmol/L,以950 mL/L乙醇为溶剂)或950 ml/L乙醇(3μL/h)。再灌注结束后,将缺血区剪下,制备石蜡切片,采用TUNEL技术检测心肌凋亡,免疫组化技术检测心肌组织的Bcl-2和Bax水平。结果丙泊酚组与对照组相比,心肌细胞凋亡明显增多,分别为(3 5.2±6.7)%(、5.2±0.8)%(t=28.1,P<0.01);Bcl-2表达降低,分别为5.7±1.3、1.8±0.8(t=11.9,P<0.01);Bax增高,分别为9.1±1.3、5.9±1.3,(t=11.9,P<0.01)。结论大剂量丙泊酚促进大鼠离体缺血/再灌注心肌细胞凋亡,提高Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达。丙泊酚对Bcl-2/bax的调节可能是其促凋亡的主要机制之一。     

模拟缺血/再灌注诱导小鼠心肌细胞凋亡模型的构建及其生化特征

目的建立稳定的缺血/再灌注（I/R）诱导小鼠心肌细胞凋亡模型并观察其生化特征。方法原代培养的小鼠心肌细胞在模拟I/R条件下,观察细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）水平,半胱天冬蛋白酶（Caspase）-3水平、DNA-Ladder现象。结果①不同的缺血和再灌注时间,均能够造成心肌细胞的损伤,随着缺血时间的延长细胞损伤以坏死性死亡为主要方式,而再灌注损伤主要方式是细胞凋亡。②在缺血6h再灌注96h过程中发现:心肌细胞出现明显的皱缩、胞核染色质断裂、聚集、固缩等典型的凋亡形态学变化;I/R组的细胞存活率是52.2%,与正常对照组100%之间有显著性差异（n=20,P<0.01）;在缺血期Caspase-3活性和LDH释放水平呈现线形增加,而活性氧（ROS）变化不大;在再灌注期Caspase-3活性和ROS于24h达峰值,96h后逐步恢复接近正常水平;LDH释放水平缓慢增加,96h后仅为3.5%。96h后可见明显的DNA-Ladder现象。结论模拟缺血6h和再灌注96h构建了稳定的小鼠心肌细胞凋亡模型,再灌注损伤是形成凋亡性死亡的主要因素。     

卡维地洛对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及基因表达的影响

目的 :研究卡维地洛对缺血再灌注心肌细胞凋亡及bcl 2、bax基因表达的影响 ,探讨卡维地洛抑制缺血再灌注心肌细胞凋亡的可能分子机制。方法 :结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支 (LAD) ,建立大鼠缺血再灌注动物模型。 30只大鼠分 3组 (每组 10只 ) :卡维地洛组 (卡维地洛治疗 )、缺血再灌注组和假手术组。用Tunnel法检测心肌细胞凋亡 ,并用光学显微镜进行细胞计数 ,免疫组化和原位杂交法检测bcl 2、bax基因表达 ,并利用图像分析系统检测二者的平均光密度值 (A值 ) ,进行定量分析。结果 :心肌细胞凋亡数在缺血再灌注组、假手术组和卡维地洛组分别为 36 .8± 9.0、0 .2± 0 .1和 9.5± 3.0 ,各组间差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。缺血再灌注组、假手术组和卡维地洛组的bcl 2mRNAA值分别为 0 .0 6± 0 .0 1、0 .0 8± 0 .0 1和 0 .0 9± 0 .0 1,bcl 2蛋白平均A值分别为0 .0 8± 0 .0 2、0 .14± 0 .0 1和 0 .15± 0 .0 3,卡维地洛组与缺血再灌注组相比差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;缺血再灌注组bax蛋白的平均A值为 0 .13± 0 .0 2 ,假手术组为 0 .0 7± 0 .0 1,卡维地洛组为 0 .0 6± 0 .0 1,卡维地洛组与缺血再灌注组相比差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ,bcl 2 /bax蛋白比值在缺血再灌注组、假手术组和卡     

大鼠肝脏缺血再灌注时肝细胞凋亡与Bcl-2蛋白表达的关系

目的 探讨肝脏缺血再灌注时肝细胞凋亡与Bcl—2蛋白表达的关系。方法 建立大鼠局部肝脏缺血再灌注模型，将72只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组和缺血再灌注组，采用免疫组织化学法测定再灌注后不同时相中肝组织Bcl—2蛋白含量，用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿苷(dUTP)缺口末端标记(TUNEL)法和透射电镜观察肝细胞凋亡状态。结果 再灌注后1、3、6、24h肝组织Bcl—2蛋白含量明显低于正常组及假手术组，并于3～6h达到其最低值；再灌注后1、3、6、24h肝细胞凋亡指数(HAI)则明显高于正常组和假手术组，并于3～6h达到高峰。再灌注后各时相中Bcl—2蛋白水平与HAI呈明显负相关。结论 在肝脏缺血再灌注时，Bcl—2蛋白表达水平异常下调，其抑制细胞凋亡的效能减弱，促使肝实质细胞凋亡增加，加重肝脏缺血再灌注损伤。     

新型缺血再灌注模式诱导小鼠心肌细胞凋亡

目的 探讨联用垂体后叶素(以下简称Pit)及硝酸甘油(NG)造成缺血再灌注损伤,诱导小鼠心肌细胞凋亡的实验条件及有关机制.方法 以昆明种小鼠为实验对象,单纯经腹腔注入20μ/kg的Pit者为Pit组:30min后再注入10mg/kg的NG者为Pit和NG联用组,记录两组0,5,20,33,60min的心电图(以下简称ECG).80min取出小鼠心脏,用透射电镜及DNA琼脂糖胶电泳观察心肌凋亡的发生.结果 ECG表明在5min及33min前后,t波高度发生显著变化(P<0.05),电泳出现凋亡特征性梯带,电镜下可观察到染色体浓集、边聚等心肌细胞凋亡的特征性变化.结论Pit和NG联用能有效地诱导小鼠心肌凋亡,其机制可能与缺血再灌注损伤有关.     

肿瘤坏死因子、缺血再灌注损伤和心肌细胞凋亡

肿瘤坏死因子在心脏疾病中的作用一直是研究热点。本文综述了肿瘤坏死因子在缺血再灌注损伤、心肌细胞凋亡方面的最新研究进展。     

氧化应激与总肺缺血再灌注细胞凋亡的相关性及川芎嗪干扰的影响

目的探讨氧化应激在兔肺组织细胞凋亡中的作用及川芎嗪的影响。方法制备兔在体原位肺缺血再灌注(IR)损伤模型(PIRI),于IR 1、3、5 h分别测各组血浆MDA及SOD活力。应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL),检测IR损伤引起的肺细胞凋亡的变化;进行氧化应激指标与细胞凋亡的相关性分析。结果 IR组1、3、5 h各组血浆SOD活力较假手术组比较显著降低(均P<0.05),TMP组在缺血1 h再灌注1、3、5 h SOD与IR组比较SOD活力明显升高(P<0.05,P<0.01)。在缺血1 h再灌注1、3、5 h IR组与假手术组比较MDA含量显著增高(P<0.01),TMP组在再灌注1、3、5 h的MDA含量显著高于假手术组(P<0.05,P<0.01),但低于IR组(P<0.05,P<0.01)。肺IR后IR组1、3、5 h发生明显的肺细胞凋亡(均P<0.01),而TMP组细胞凋亡指数与同一时相IR组比较显著降低(P<0.05,P<0.01);SOD与细胞凋亡指数呈负相关(r=-0.665,P<0.05),MDA与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.764,P<0.05)。结论氧化应激导致的细胞凋亡在肺IR损伤机制中可能发挥着重要作用,川芎嗪可抑制氧化应激反应从而减轻细胞凋亡的发生,此机制可能是川芎嗪减轻肺IR损伤的机制之一。     

缺血后适应——缺血再灌注心肌保护的新策略

缺血后适应是近几年新提出的心肌缺血再灌注保护策略,在减轻缺血/再灌注损伤,抗心肌细胞凋亡,减少心肌梗死面积等方面有着确切的心脏保护作用。缺血后适应与预适应的保护作用相似,但缺血后适应有着更强的可控性,且操作简单、安全有效,具有良好的临床实用价值和应用前景。