大鼠主动脉钙化过程中骨保护素/NF-κB配体的受体变化及意义

目的:研究大鼠主动脉钙化过程中骨保护素(OPG)/NF-κB配体的受体(RANKL)变化及意义。方法:60只SD大鼠随机分为钙化组、他汀组和对照组,每组再分早、晚期两个亚组。钙化组给予华法林灌胃,他汀组给予华法林和阿托伐他汀灌胃。早期亚组在第17天、晚期亚组在第34天取大鼠主动脉,用Von Kossa染色,以碱性磷酸酶(ALP)活性检测与骨钙素Western Blot检测来判定钙化情况,用实时定量PCR检测OPG和RANKL的表达情况。结果:对照组无论早晚期都有大量的OPG表达,但没有RANKL表达。钙化组和他汀组早期OPG表达上升,晚期下降,而RANKL表达在钙化过程中一直呈升高趋势;对照组、他汀组、钙化组随着钙化程度的加重,OPG/RANKL比值呈逐步下降趋势(均P<0.05);同一组中,晚期亚组随着钙化的加重,OPG/RANKL比值也较早期明显下降(均P<0.05)。结论:OPG/RANKL的比值与主动脉钙化程度呈负相关,且阿托伐他汀具有抑制钙化的作用。     

破骨细胞和骨保护素/细胞核因子-κB受体活化因子配体系统在银屑病关节炎骨质破坏中的作用

目的 探讨银屑病关节炎( PsA)患者体内破骨细胞和骨保护素/细胞核因子-κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)系统的水平与骨质破坏的关系.方法 分离41例PsA患者、20例骨关节炎患者及24名健康对照者的外周血单个核细胞诱导生成破骨细胞,采用耐酒石酸酸性磷酸酶染色法进行鉴定.运用酶联免疫吸附试验( ELISA)法测定3组患者血清中的骨保护素和RANKL的水平,同时收集PsA患者的临床实验室资料.采用单因素方差分析和直线回归分析进行统计学处理.结果 PsA组的破骨细胞数目[(17.7±4.8)个,视野]明显多于骨关节炎组[(6.5±1.6)个,视野]和健康对照组[(6.4±1.6)个,视野],差异有统计学意义(P＜0.05).PsA组的RANKL水平[(178±38) pg/ml]明显高于骨关节炎组[( 32±4) pg/ml]和健康对照组[(67±17) pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.05).与无骨质破坏的PsA组相比较,破骨细胞和RANKL的水平在有骨质破坏的PsA组中明显增高[(17.6±0.9)个／视野与(7.9±1.3)个／视野和(199±72) pg/ml与(128±44) pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.01).PsA患者的影像学评分和破骨细胞、RANKL的水平呈正相关(r=0.83,0.76;P＜0.05).结论 PsA患者外周血中的破骨细胞数目和RANKL水平显著升高,PsA患者体内的破骨细胞和RANKL水平升高与骨质破坏相关密切,提示破骨细胞及RANKL水平的变化可以反映骨质破坏的严重程度.     

补骨脂素对成骨细胞核因子-κB受体激活配体和骨保护素表达的影响

目的研究补骨脂素(psoralen,PSO)对体外培养的小鼠成骨细胞(OB)分化及核因子-κB受体激活配体(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法取第1代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,将PSO以0.1、1、10μmol/L3种浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,MTT法观察各组药物对成骨细胞的增殖作用并绘制细胞生长曲线;用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;RT-PCR法检测成骨细胞OPG和RANKL的转录水平。结果细胞生长曲线显示各组成骨细胞数量均随时间延长而增加,中、高浓度PSO能显著提高成骨细胞的ALP活性,促进OPG、RANKL的表达(P<0.05),OPG/RANKL升高(P<0.05)。结论低浓度PSO(0.1μmol/L)对骨更新作用不明显,而中、高浓度PSO(1、10μmol/L)能通过上调OPG、RANKL mRNA表达及OPG/RANKL比例,促进成骨细胞的生成功能,增强骨更新。     

血清骨保护素和可溶性核因子κB受体活化因子配体水平与急性冠状动脉综合征的相关性研究

目的:探讨血清骨保护素(OPG)、可溶性核因子κB受体活化因子配体(sRANKL)水平与急性冠状动脉综合征(ACS)的关系。方法:选择稳定型心绞痛(SAP)组17例,不稳定型心绞痛(UAP)组36例,急性心肌梗死(AMI)组8例,对照组27例,所有患者均行冠状动脉造影。采用酶联免疫吸附法(ELLSA)检测患者血清OPG、sRANKL水平。结果:AMI组和UAP组的血清OPG、sRANKL水平比较差异无统计学意义(P0.05),但这2组患者血清OPG水平较SAP组和对照组明显增高,血清sRANKL水平较SAP组和对照组明显降低,差异均有统计学意义(P0.05),SAP组和对照组差异有统计学意义(P0.05)。结论:血清OPG水平的升高、sRANKL水平的降低提示缺血心肌发生了急性炎症反应,可能与粥样斑块的不稳定性有关。     

Toll样受体，NF-κB与炎症性肠病

Toll样受体(Toll like receptor TLRs)是先天性免疫系统中的细胞跨膜受体及病原模式识别受体之一，主要参与病原微生物产物的识别及炎症信号传导。TLRS／核因子(NF-κB)通路已部分阐明，成为联系先天性免疫与后天性免疫的纽带。最近研究发现这一通路与炎症性肠病(inflammatory bowel disease IBD)关系密切。本主要介绍TLRs介导NF-κB在IBD的起因、发展及治疗方面的研究进展，为深入探讨IBD提供新的思路。     

巴戟天多糖对去卵巢大鼠核因子-κB受体激活因子配体和骨保护素表达的影响

目的观察巴戟天多糖对去卵巢大鼠骨组织核因子-κB受体激活因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)mRNA表达的影响。方法成年雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、巴戟天多糖组,采用摘取双侧卵巢法建立骨质疏松模型,造模2 w后开始给药,给药3个月后观察各组大鼠骨密度(BMD),骨钙、骨磷含量,RANKL、OPG mRNA的表达水平。结果给药3个月后巴戟天多糖组能显著提高去卵巢大鼠的BMD和骨钙、磷的含量,上调OPG mRNA表达,下调RANKL mRNA表达,使RANKL/OPG值下降。结论巴戟天多糖对去卵巢所致的大鼠骨质疏松具有良好的防治作用,其机制可能与调控RANKL和OPG mRNA的表达,降低RANKL/OPG值有关。     

脂联素对人成骨细胞护骨素和核因子κB受体活化素配体表达的调节

目的 探讨脂联素对人成骨细胞护骨素(OPG)和核因子κB受体活化素配体(RANKL)表达的作用.方法 RT-PCR及Western印迹检测体外培养的人成骨细胞的脂联素受体(Adipo R)mRNA及Adipo R蛋白表达.分别用0、3、10 μg/ml和30 μg/ml脂联素干预人成骨细胞48 h以观察剂量效应和分别用0、30μg/ml脂联素干预人成骨细胞0、12、24 h和48 h以观察时间效应,干预前后OPG、RANKL的mRNA及蛋白表达分别用实时聚合酶链反应(real-time PCR)和ELISA检测.结果 (1)人成骨细胞可表达Adiop R1 mRNA、Adiop R1蛋白和Adiop R2 mRNA.(2)30μg/ml脂联素干预人成骨细胞12、24 h或48 h后,OPG的mRNA表达分别为0 h的(69±6)%、(51±7)%和(26±8)%(P＜0.05),OPG蛋白表达分别为0 h的(66±5)%、(32±8)%和(14±6)%(P＜0.05);RANKL的mRNA表达分别为0 h的(1 80±12)%、(220±19)%和(316±14)%(P＜0.05),可溶性RANKL(sRANKL)蛋白的表达分别为0 h的(236±12)%、(272±9)%和(308±14)%(P＜0.05).(3)3、10 μg/ml或30μg/ml脂联素干预人成骨细胞48 h时,OPG的mRNA表达分别为对照组的(66±9)%、(44±10)%和(29±7)%(P＜0.05),OPG蛋白的表达分别为对照组的(52土9)%、(38±4)%和(17±4)%(P＜0.05);RANKL的mRNA表达分别为对照组的(168±6)%、(214±7)%和(314±11)%(P＜0.05),sRANKL蛋白的表达分别为对照组的(156±6)%、(196±8)%和(212±7)%(P＜0.05).结论 脂联素呈时间和剂量依赖性调节人成骨细胞OPG和RANKL的表达,可能是新的骨代谢调节因子.     

金雀异黄素对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞骨保护素／细胞核因子κB受体活化因子／细胞核因子κB受体活化因子配体通路的影响

目的研究金雀异黄素（genistein,Gen）对人类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）成纤维样滑膜细胞（fibroblast—like synoviocytes,FLS）骨保护素（osteoprotegerin,OPG）／细胞核因子KB受体活化因子（receptor—activator of nuclear factor kappa bata,RANK）／细胞核因子KB受体活化因子配体（receptor—activator of nuclear factor kappa bata ligand,RANKL）通路的影响及机制。方法培养人RA—FLS,并分为对照组（RA—FLS细胞）、TNF—α组（RA—FLS细胞＋TNF-α 10ng／ml）、TNF—α＋Gen组（RA—FLS细胞＋TNF—α 10ng／ml＋Gen 50μM）、Gen组（RA—FLS细胞＋Gen 50μM）。应用免疫印迹检测Gen作用RA—FLS的RANK、RANKL、OPG、雌激素受体（estrogen receptora,ERa）表达情况,免疫荧光检测ERα细胞内分布情况。结果Gen组、TNF-α组及TNF—α＋Gen组细胞内RANK蛋白表达量较对照组无明显差异（P〉0．05）,但OPG及RANKL蛋白表达明显高于对照组（均P〈0．05）。Gen组OPG／RANKL较对照组增高（P〈0．05）。Gen组、TNF-α组及TNF-α＋Gen组细胞内ERa蛋白表达量与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫荧光结果显示核内ERα表达量增加。结论Gen可能通过与雌激素受体结合,转入核内发挥免疫调节作用,从而调节0PG／RANKI／RANK通路,发挥抑制骨破坏的作用。Gen可以上调人RA—FLS中OPG及RANKL,且对OPG的上调作用更强。     

肿瘤坏死因子α对人成骨样细胞NF-κB和护骨素表达的调节

用肿瘤坏死因子α(TNF -α)干预培养的MG 63细胞(人成骨肉瘤来源)。结果显示:TNF -α上调MG 63细胞核蛋白p65表达,下调护骨素(OPG)mRNA和蛋白质表达。吡咯二硫氨基甲酸酯不能阻止TNF -α下调MG 63细胞OPG的作用。     

护骨素与骨质疏松症

护骨素是近年发现的肿瘤坏死因子家族的新成员,具有抑制破骨细胞分化及骨吸收活性的一种分泌型糖蛋白。护骨素与NF-κB受体活化因子配体和NF-κB受体活化因子之间竞争性结合机制是调控破骨细胞分化、增殖、凋亡及发挥作用过程中最重要的信号通路。护骨素是偶联成骨细胞、基质细胞和破骨细胞分化、活化与生物活性的主要细胞因子,对骨形成和骨吸收起重要调节作用,对骨质疏松的发病机制和治疗有着重要影响。     

核因子κB受体活化因子配体/骨保护素在儿童系统性红斑狼疮合并骨质疏松的研究进展

SLE是一种累及多系统的自身免疫病,主要特征为慢性炎症和各种器官损伤。随着糖皮质激素（GC）及免疫抑制剂的应用,使SLE患者的长期生存率大幅提高,生存时间也明显延长,但慢性并发症骨质疏松的发生率和致残率也明显升高。骨重塑是成骨细胞（OB）和破骨细胞（OC）相互作用而达到动态平衡的生物学过程,骨细胞凋亡、Wnt信号通路、...     

前列腺素E2对人成骨样细胞白介素-6,骨保护素配体/骨保护素mRNA表达的影响

目的研究前列腺素E2（PGE2）对人成骨瘤细胞MG-63分泌的细胞因子白介素-6（IL-6）、骨保护素（Osteoprotegerin，OPG）、骨保护索配体（Ligand of receptor activator of NF-κB，RANKL）表达的调节，探讨PGE引发骨吸收的机制。方法体外培养成骨瘤细胞株（MG-63），分别给予不同剂量的PGE2进行干预试验，用钙估法显示成骨细胞碱性磷酸酶的表达；用MTT法测定PGE2对MG-63细胞刺激增殖作用；提取总RNA进行半定量逆转录PCR分析，检测IL-6，OPG，RANKL基因表达水平的改变。结果PGE2减少碱性磷酸酶的表达，抑制MG-63细胞的增殖，并呈剂量依赖性的上调IL-6mRNA，RANKL／OPGmRNA水平。结论PGE2可以通过IL-6，RANKL／OPGmRNA基因水平的上调，促进骨吸收，此可能为PGE2导致溶骨性病变的重要发病机制。     

肾上腺皮质肿瘤中NF-κB的表达及意义

目的探讨NF-κB在肾上腺皮质肿瘤中的表达及其临床意义。方法用免疫组化法检测肾上腺疾病标本(肾上腺皮质癌15例,肾上腺皮质瘤30例,肾上腺皮质增生11例,正常肾上腺皮质组织7例)中NF-κB的表达。结果 NF-κB在肾上腺皮质癌组中阳性表达为9/15例,其中2例(+++),4例(++),3例(+),6例(-);在肾上腺皮质瘤组中,NF-κB阳性表达8/30例,其中0例(+++),2例(++),6例(+),22例(-);增生组有2例阳性,均为(+);在正常组中未检测出阳性。在肾上腺皮质癌组中的表达明显高于在其他组中的表达,肾上腺皮质癌组与肾上腺皮质瘤组相比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论 NF-κB对肾上腺皮质癌的诊断具有重要意义。     

外周血护骨素和核因子κB受体活化因子配体水平在女性类风湿关节炎中的变化及其与骨质疏松的关系

目的探讨女性类风湿关节炎（RA）患者外周血核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）和护骨素（OPG）水平的变化及其与女性RA骨质疏松的相关性。方法采用ELISA法测定55例女性RA患者和53例正常女性外周血中RANKL和OPG水平,采用双能X线骨密度吸收仪测定骨密度。结果（1）和正常女性相比,女性RA患者RANKL水平明显升高,OPG水平明显降低（P〈0．001）。（2）女性RA组中骨质疏松发生率38．2％（21／55）明显高于正常女性组[11．3％（6／53）];这种改变不但体现在已绝经的女性RA患者和已绝经的正常女性,同样体现在未绝经的女性RA患者和未绝经的正常女性（Neck部位骨密度除外）。（3）女性RA患者OPG水平与骨密度呈正直线相关;RANKL与之相反（P〈0．05）。（4）Logistic分析显示：OPG／RANKL比值为女性RA患者中骨质疏松发生的保护因素（OR=0．027,P=0．014,95％CI：0．001～0．478）。结论女性RA患者外周血OPG水平、RANKL水平的变化与骨代谢状态的变化密切相关;外周血OPG／RANKL比为女性RA患者中骨质疏松发生的保护因素。     

RNA干扰基因敲低雌激素受体β对雌激素诱导人成骨样细胞护骨素表达的影响

RNA干扰敲低人成骨样细胞株MG63中雌激素受体β后，RT-PCR法发现不同浓度的17β-雌二醇均能上调MG63细胞中的护骨素mRNA表达水平，其中以10^-7mol／L的作用最强。而这种作用不能被G蛋白抑制剂suramin所抑制。提示雌激素受体β可能不涉及雌激素上调MG63细胞护骨素表达的调控作用。     

NF-κB抑制剂对胰岛素抵抗大鼠抵抗素、脂联素和脂联素受体表达的影响

高脂喂养大鼠脂肪组织抵抗素、脂联素的表达均明显下降，加入N-乙酰半胱氨酸后脂联素表达增高，脂联素受体1表达无改变。抵抗素和脂联素水平的降低是高脂饲养大鼠体重增加、血糖升高、脂质代谢紊乱和胰岛素抵抗的重要原因。NF-κB通路介导了脂联素对胰岛素敏感性的调节作用，但不影响脂联素受体1的表达。     

NF-κB与细胞凋亡

NF-kB家族及其介导的细胞信号转导通路在细胞凋亡中的作用是国内外研究的热点.研究发现,NF-kB信号转导途径可以通过多种途径抑制细胞凋亡,与IAPs家族、Bcl-2家族、TRAF家族、JNK、FLIP、A20、Gadd45β、MnSOD等有很大关系,但其具体机制尚未完全清楚.通过抑制NF-kB信号转导途径的激活,促进细胞凋亡,可能成为治疗免疫、炎症、肿瘤等疾病的新途径.此外,近年的研究证明NF-kB尚具有促细胞凋亡的作用,并发现NF-kB亚单位的种类及数量在细胞凋亡中起着决定性的作用,为疾病的治疗提供了新的策略.本文就NF-kB与细胞凋亡关系的研究进展作一综述.     

前列腺素E_2对人成骨样细胞白介素-6,骨保护素配体/骨保护素mRNA表达的影响

目的研究前列腺素E2(PGE2)对人成骨瘤细胞MG-63分泌的细胞因子白介素-6(IL-6)、骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、骨保护素配体(L igand of receptor activator ofNF-κB,RANKL)表达的调节,探讨PGE引发骨吸收的机制。方法体外培养成骨瘤细胞株(MG-63),分别给予不同剂量的PGE2进行干预试验,用钙估法显示成骨细胞碱性磷酸酶的表达;用MTT法测定PGE2对MG-63细胞刺激增殖作用;提取总RNA进行半定量逆转录PCR分析,检测IL-6,OPG,RANKL基因表达水平的改变。结果PGE2减少碱性磷酸酶的表达,抑制MG-63细胞的增殖,并呈剂量依赖性的上调IL-6mRNA,RANKL/OPG mRNA水平。结论PGE2可以通过IL-6,RANKL/OPG mRNA基因水平的上调,促进骨吸收,此可能为PGE2导致溶骨性病变的重要发病机制。     

血液透析患者骨保护素细胞核因子кB受体活化因子配体与动脉僵硬度的关系

目的探讨血液透析患者颈-股脉搏波速度(CFPWV)和颈-桡脉搏波速度(CRPWV)的变化及与骨保护素(OPG)、细胞核因子кB受体活化因子配体(sRANKL)系统的关系。方法对北京大学人民医院血液净化中心2006年6—10月40例血液透析患者采用酶联免疫吸附法测定血清OPG、sRANKL,PWV测定仪测定外周动脉僵硬度,X线平片检测腹主动脉、股动脉及桡动脉部位血管钙化,计算血管钙化积分。结果 25例(64.1%)患者存在不同程度的血管钙化,中重度钙化者较轻度钙化者血清OPG高[(342.50±171.53)ng/L对(206.21±137.88)ng/L,P=0.025]、OPG/sRANKL比值高(454.65±455.63比135.31±136.81,P=0.035),sRANKL比较差异无统计学意义[(0.10±0.08)pmol/L对(0.12±0.08)pmol/L]。血液透析患者CRPWV及CFPWV均较对照组增高,差异有统计学意义[(9.48±1.80)m/s对(8.58±1.29)m/s,P=0.043]和[(13.42±3.26)m/s对(10.07±1.76)m/s,P<0.01]。血OPG较对照组高[(235.12±154.33)ng/L对(93.00±44.10)ng/L,P=0.01],sRANKL两组比较,差异无统计学意义[(0.12±0.08)pmol/L对(0.16±0.08)pmol/L]。相关分析发现CRPWV与舒张压、sRANKL呈正相关(r=0.389、0.349,P=0.025、0.040),控制年龄、血压因素后CRPWV仍然与sRANKL呈正相关(r=0.381,P=0.029)。多元线性回归分析显示血磷、sRANKL及钙磷乘积是CRPWV的独立影响因素,年龄是CFPWV的独立影响因素。结论血液透析患者外周动脉僵硬度增加,sRANKL独立于年龄和血压影响血液透析患者动脉僵硬度。     

Toll样受体,NF-κB与炎症性肠病

Toll样受体(Toll like receptor TLRs)是先天性免疫系统中的细胞跨膜受体及病原模式识别受体之一,主要参与病原微生物产物的识别及炎症信号传导。TLRS/核因子(NF-κB)通路已部分阐明,成为联系先天性免疫与后天性免疫的纽带。最近研究发现这一通路与炎症性肠病(inflammatory bowel diseaseIBD)关系密切。本文主要介绍TLRs介导NF-κB在IBD的起因、发展及治疗方面的研究进展,为深入探讨IBD提供新的思路。