肿瘤抑制因子PTEN与心肌肥大关系的研究

目的 观察肿瘤抑制因子PTEN在心肌肥厚大鼠心肌组织以及在血管紧张素Ⅱ诱导的肥大心肌细胞中的表达,探讨PTEN在心肌肥大发生发展中的作用以及相关机制。方法采用腹主动脉狭窄术制备压力超负荷心肌肥厚动物模型,及血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大模型,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法、Western blot及免疫组化等方法,分别检测各组PTEN mRNA和蛋白表达的变化,以及PTEN蛋白在心肌细胞中的定位。结果(1)与对照组相比,心肌肥厚组大鼠左室肌PTEN mRNA和蛋白表达均明显减少;血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大组PTEN蛋白表达明显减少。(2)与心肌肥厚组相比,卡托普利组大鼠左室心肌PTEN mRNA和蛋白表达增加,接近对照组。(3)免疫组化实验结果显示心肌细胞胞核内有阳性免疫产物生成,提示PTEN蛋白定位于心肌细胞核内。结论PTEN在心肌肥大发生发展中可能起负调控作用,该作用与肾素-血管紧张素系统密切相关。     

肺动脉高压大鼠心肌骨桥蛋白及其整合素β3受体表达的变化

目的探讨肺动脉高压大鼠右心室心肌骨桥蛋白(OPN)及其整合素β3受体基因表达变化其与右心室重塑的关系。方法选取60只SD大鼠随机等分为1个对照组和4个肺动脉高压实验组(PAH组),每组12只,分别于注射MCT后第1,2,3,4周获取组织。测定平均肺动脉压(mPAP)和右心室肥厚指数;采用免疫组化、Western印迹和RT-PCR法测定不同时间点各组大鼠右心室心肌骨桥蛋白(OPN)及其整合素β3受体mRNA的表达水平。结果对照组大鼠右心室心肌OPN及其整合素β3受体mRNA表达水平低于肺动脉高压各组(PHA1-4组)(P<0.O5);肺高压各组左、右心室心肌OPN和整合素β3受体蛋白表达水平高于对照组,且随着产生的时间而逐渐增高(P<0.05);右心室心肌OPN mRNA及整合素β3 mRNA表达水平均与右心室肥厚指数呈正相关(P<0.05)。结论右心室心肌OPN及其受体整合素β3基因表达随着大鼠肺动脉高压及右室肥大形成逐渐增加,可能在右心室心肌重塑中起重要的作用。     

不同降压药物对自发性高血压大鼠模型左室心肌细胞中TRPC3及TRPC6表达的影响

目的探讨缬沙坦、雷米普利及氨氯地平对自发性高血压大鼠(SHR)左室心肌中瞬时受体通道蛋白C亚族3及6(TRPC3及TRPC6)表达的影响。方法将24只12周龄SHR大鼠随机分为4组,即SHR组、缬沙坦组、雷米普利组及氨氯地平组,每组6只。另以6只同龄的Wistar Kyoto大鼠(WKY)为正常对照组。给药4周后,检测各组大鼠的血压、左室质量指数、左室心肌细胞横径;RTPCR及Western Blot检测TRPC3及TRPC6 mRNA及其蛋白的表达。结果 SHR组血压、左室质量指数及左室心肌细胞横径均明显高于对照组(P<0.05),3个药物组上述指标均较SHR组降低。结论 SHR组及对照组大鼠均有TRPC3及TRPC6的表达,TRPC3及TRPC6可能共同参与调节心肌肥厚的病理生理过程;缬沙坦可能通过抑制TRPC3蛋白的表达参与逆转左室肥厚的过程。     

贝那普利下调TGF-β1及Bax表达对糖尿病大鼠心肌的保护作用

目的 探讨贝那普利(BZ)对糖尿病(DM)大鼠心肌转化生长因子β1(TGF-β1)和Bax的表达及心肌肥厚指标的影响.方法 SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备DM模型.实验分为正常对照组(CON)、DM组和BZ治疗组(BZ).治疗组每日灌胃给予贝那普利(10 mg·kg-1·d-1).8 w后测定心脏质量指数(HMI)、左心室质量指数(LVMI),并取左心室心肌免疫组化法检测TGF-β1和 Bax在心肌组织中的表达,透射电镜观察心肌组织超微结构变化.结果 与CON组相比,DM组大鼠HMI、LVMI明显升高;心肌TGF-β1和 Bax蛋白表达显著增强(P＜0.05,P＜0.01);电镜发现DM心肌细胞肿胀、肌丝稀疏,线粒体变性肿胀,间质胶原增生及微血管基底膜增厚.与DM组相比,BZ干预后,HMI、LVMI明显降低(P＜0.01);心肌TGF-β1和 Bax蛋白表达减弱(P＜0.01);心肌超微结构改变减轻.结论 TGF-β1 可能通过刺激促凋亡因子Bax表达诱导心肌细胞凋亡,促进DM心肌肥厚.BZ能在一定程度上抑制TGF-β1和Bax的表达从而延缓DM心肌病理进程.     

不同降压药物对自发性高血压大鼠模型左室心肌细胞中TRPC3及TRPC6表达的影响

目的探讨缬沙坦、雷米普利及氨氯地平对自发性高血压大鼠(SHR)左室心肌中瞬时受体通道蛋白C亚族3及6(TRPC3及TRPC6)表达的影响。方法将24只12周龄SHR大鼠随机分为4组,即SHR组、缬沙坦组、雷米普利组及氨氯地平组,每组6只。另以6只同龄的Wistar Kyoto大鼠(WKY)为正常对照组。给药4周后,检测各组大鼠的血压、左室质量指数、左室心肌细胞横径;RTPCR及Western Blot检测TRPC3及TRPC6 mRNA及其蛋白的表达。结果 SHR组血压、左室质量指数及左室心肌细胞横径均明显高于对照组(P<0.05),3个药物组上述指标均较SHR组降低。结论 SHR组及对照组大鼠均有TRPC3及TRPC6的表达,TRPC3及TRPC6可能共同参与调节心肌肥厚的病理生理过程;缬沙坦可能通过抑制TRPC3蛋白的表达参与逆转左室肥厚的过程。     

不同降压药物对自发性高血压大鼠模型左室心肌细胞中TRPC3及TRPC6表达的影响

目的:探讨缬沙坦、雷米普利及氨氯地平对自发性高血压大鼠（SHR）左室心肌中瞬时受体通道蛋白C亚族3及6(TRPC3及TRPC6)表达的影响。方法: 将24只12周龄SHR大鼠随机分为4组,即SHR组、缬沙坦组、雷米普利组及氨氯地平组,每组6只。另以6只同龄的Wistar Kyoto大鼠(WKY)为正常对照组。给药4周后,检测各组大鼠的血压、左室质量指数、左室心肌细胞横径;RT-PCR及Western Blot检测TRPC3及TRPC6 mRNA 及其蛋白的表达。结果: SHR组血压、左室质量指数及左室心肌细胞横径均明显高于对照组（P<0.05）,3个药物组上述指标均较SHR组降低（P<0.05）;5个组均有TRPC3及TRPC6的表达,SHR组TRPC3及TRPC6 mRNA及其蛋白的表达显著高于对照组（P<0.05）,3个药物组TRPC3 mRNA及TRPC6 mRNA及其蛋白的表达均显著低于SHR组（P<0.05）,缬沙坦组TRPC3 mRNA及其蛋白表达的减少最显著（P<0.05）;3个药物组TRPC6 mRNA及其蛋白的表达有所下降,但组间比较差异无显著性。结论: SHR组及对照组大鼠均有TRPC3及TRPC6的表达,TRPC3及TRPC6可能共同参与调节心肌肥厚的病理生理过程;缬沙坦可能通过抑制TRPC3蛋白的表达参与逆转左室肥厚的过程。     

心肌肥厚大鼠心肌组织及肥大心肌细胞中环状RNA rno_circRNA_016002表达观察

目的 观察心肌肥厚大鼠心肌组织及肥大心肌细胞中环状RNA rno_circRNA_016002的表达变化,并探讨其在心肌肥厚过程中的作用.方法 将12只SD大鼠随机分为Control组与异丙肾上腺素(ISO)组,每组6只.ISO组每天腹腔注射ISO 3 mg/kg,Control组注射同等体积的生理盐水,连续注射两周后...     

酸性富含亮氨酸的核磷蛋白32家族成员A对心肌细胞肥大的影响及机制研究

目的探讨酸性富含亮氨酸的核磷蛋白32家族成员A(Anp32a)对心肌细胞肥大的作用及机制。方法通过挖掘数据库小鼠心脏假手术组及主动脉缩窄手术组芯片数据,进行差异基因分析。选取8~10周龄小鼠,随机分为模型组和假手术组(n=7或8),终末取材提取心脏组织RNA检测Anp32amRNA表达水平。构建Anp32a敲低(AdshAnp32a),Anp32a过表达(AdAnp32a)及其相应的对照组AdshRNA,AdGFP腺病毒并转染H9C2心肌细胞,以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激H9C2心肌细胞诱导心肌细胞肥大,提取细胞RNA通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测心肌肥厚指标[心房利钠肽(AnP),脑利钠肽(Bnp),β-肌球蛋白重链(β-Mhc)]表达变化,并通过心肌细胞骨架蛋白(α-actinin)的免疫荧光染色观察Anp32a对心肌细胞大小的影响。机制研究方面,通过蛋白免疫印迹(Western blot)检测Anp32a在调节心肌肥厚过程中涉及的信号通路的变化。结果 Anp32a在心肌肥厚模型中表达下调。AngⅡ刺激细胞,免疫荧光染色检测AdAnp32a组细胞明显较其对照组(AdGFP)减小,而AdshAnp32a组心肌细胞与其对照组(AdshRNA)相比显著增大。qPCR检测显示AdAnp32a组心肌肥厚基因(Anp、Bnp、β-Mhc)的mRNA表达降低,而AdshAnp32a组表达则相反。Western blot检测发现Anp32a能够抑制AngII诱导的Akt蛋白磷酸化水平的升高。结论 Anp32a通过AKT信号通路抑制心肌细胞肥大,可作为防治心肌肥厚及心力衰竭的潜在治疗靶点。     

硫化氢对内皮素诱导的大鼠心肌肥厚的作用研究

目的探讨硫化氢(H2S)对内皮素诱导的大鼠心肌肥厚的影响。方法取64只成年雄性大鼠,体质量180~200 g,随机分为4组:正常组10只、假手术组10只、内皮素诱导心肌肥厚模型组22只、内皮素诱导心肌肥厚+H2S(56μmol/kg)治疗组22只。4周之后检测左心室质量指数、心肌细胞肥大形态学指标、心肌间质胶原容积分数以及心肌羟脯氨酸含量等各项心肌肥厚指标。结果与单纯心肌肥厚组相比,H2S治疗组左心室质量下降21.4%,左心室质量指数下降5.97%,心肌细胞最短径下降12.5%,心肌细胞横断面面积下降10.8%,心肌间质胶原容积分数下降22.3%,心肌羟脯氨酸含量下降31.3%(P均0.05)。结论 H2S可降低内皮素诱导的心肌肥厚大鼠左心室质量指数,改善心肌细胞肥大,降低心肌胶原蛋白水平以及心肌纤维化,为治疗心肌肥厚提供思路。     

丹参酮IIA调控Cys C/Wnt信号通路抑制大鼠心肌肥厚

目的 探讨丹参酮ⅡA对自发性高血压大鼠心肌肥厚的抑制作用，及其与Cys C/Wnt信号通路的关系。方法 纳入20只18周龄自发性高血压大鼠随机分为心肌肥大组和丹参酮组，每组10只；同时，纳入10只同周龄健康大鼠为健康对照组。Western blot方法检测3组大鼠心肌组织中eNOS和Cys C/Wnt信号通路相关蛋白的表达。结果 心肌肥大组的LVW/HW指数和左室长轴值均显著高于空白对照组，与心肌肥大组相比，丹参酮处理组LVW/HW指数和左室长轴值均有明显下降（P<0.05）。与空白对照组相比，心肌肥大组大鼠心肌细胞肿胀，内容物成颗粒状，部分细胞核表现出核固缩。与心肌肥大组相比，丹参酮处理组心肌细胞肿胀程度有所好转，单个心肌细胞面积有所减小。与空白对照组相比，心肌肥大组大鼠心肌组织内eNOS和p-eNOS（Ser1177）表达显著减少，而Cys C和Wnt蛋白表达显著增加；丹参酮给药后eNOS和 p-eNOS（Ser1177）表达较心肌肥大组显著增加（P<0.05），而Cys C和Wnt蛋白表达显著下降（P<0.05）。结论 丹参酮ⅡA能够改变大鼠心脏肥厚指数；通过抑制Cys C/Wnt信号通路起到抑制大鼠心肌肥厚的作用。     

p15与c-Myc在TGF-β1诱导的大鼠心肌细胞肥大中的表达及与TGF/Smad信号通路的关系

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠心肌细胞肥大中Smad信号通路及其目的蛋白p15的表达。方法建立TGF-β1诱导的体外大鼠心肌细胞肥大模型。PI染色标记细胞双链RNA法检测心肌细胞RNA表达量,间接检测心肌细胞肥大。实时荧光定量PCR检测心肌细胞肥大相关基因β肌球蛋白重链(β-MHC)的表达。Smad2 siRNA干扰Smad信号通路表达并检测其相关蛋白表达。Western blot检测心肌细胞p-Smad2、Smad2、Smad2/3、p15及c-Myc蛋白表达。结果 TGF-β1可诱导体外培养的心肌细胞肥大基因的表达,β-MHC的表达明显高于对照组(P0.01)。PI染色标记细胞双链RNA法检测发现,TGF-β1组RNA含量明显增高(P0.01),与对照组相比,TGF-β1可明显上调p-Smad2、Smad2、Smad2/3及Smad通路目的蛋白p15、c-Myc的表达(P0.01)。给予Smad2 siRNA特异性干扰后,p15表达较TGF-β1组减少(P0.01)。结论 TGF-β1可能通过Smad蛋白通路诱导心肌细胞肥大形成,此过程中相关目的蛋白p15表达增加。     

慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及Fas基因、FasL(Fas蛋白配体)的变化

目的本实验将探讨腹主动脉缩窄所致慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡与Fas及Fas蛋白配体(Fas Ligand, FasL)基因表达的变化,揭示二者与心力衰竭发展过程的关系.方法以腹主动脉缩窄法建立大鼠慢性心力衰竭模型.30只大鼠随机分成假手术组、手术左室代偿性肥厚组(简称肥厚组)及手术心衰组.采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)观察发生心衰的大鼠和同期仅左室肥厚而未发生心衰的大鼠的心肌细胞凋亡情况,同时以免疫组化ABC显色法分别检测Fas与FasL蛋白水平变化,以逆转录聚合酶链反应法检测Fas基因mRNA的表达改变,从而探讨心肌组织中Fas基因的蛋白与mRNA表达水平与心肌细胞凋亡的关系以及二者在心衰发展过程中的作用.结果假手术组心肌中仅有少许心肌细胞凋亡,实施手术的代偿性肥厚组与心衰组大鼠均有心肌细胞凋亡发生,但心衰组心肌细胞凋亡的数目明显高于对照组.大鼠经腹主动脉缩窄术后4周,左室肥厚而未发生心衰的大鼠其心肌组织Fas蛋白阳性染色指数明显高于假手术组,但Fas配体蛋白阳性染色指数与假手术组间无显著性差异;而发生心衰的大鼠其心肌组织Fas及Fas配体蛋白阳性染色指数明显高于肥厚组,差异有显著性意义(P＜0.05).与假手术组和肥厚组相比较,心衰组心肌组织Fas基因的mRNA表达也上调(P＜0.05).结论实验性心衰大鼠心肌细胞凋亡、Fas基因的蛋白与mRNA表达水平及FasL蛋白表达均增加,心肌细胞出现凋亡可能是心脏由代偿性心肌肥厚向心衰转变过程中的重要机制,心肌组织Fas水平的升高可能与这一改变有关,并可能是其促进因素;心肌细胞凋亡与Fas/FasL系统参与了慢性心力衰竭的发生、发展过程.     

辛伐他汀对心肌肥厚的防治作用及其与JAK激酶/信号转录活化因子通路关系的实验研究

目的 探讨辛伐他汀对心肌肥厚的防治作用及其与JAK激酶/信号转录活化因子(JAK/STAT)信号转导通路的关系.方法 采用心肌营养素-1(CT-1)诱导新生大鼠心肌细胞肥大模型和腹主动脉缩窄术建立心肌肥厚动物模型.通过改良Lowry法测定心肌细胞总蛋白含量.相差显微镜测定心肌细胞表面积.逆转录聚合酶链法检测血管紧张素原(AGT)mRNA及c-fos mRNA表达.尾动脉无创测量大鼠收缩压的变化.称量心脏重量/体重(HW/BW)、左心室重量/体重(LVW/BW)比值.Western blot方法 检测磷酸化-JAK激酶(p-JAK2)和磷酸化-信号转录活化因子(p-STAT3)蛋白表达.结果 (1)辛伐他汀能明显抑制CT-1诱导的心肌细胞总蛋白含量增加(9.20 μg/105cell降至6.66 μg/105cell)和心肌细胞表面积增加(1741.63 μm2降至826.76 μm2).(2)辛伐他汀、JAK激酶抑制剂AG490均可明显抑制CT-1诱导的心肌细胞p-JAK2和p-STAT3蛋白表达以及AGT mRNA和c-fos mRNA表达(P<0.01).(3)辛伐他汀可明显降低腹主动脉缩窄大鼠的收缩压[186.64 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)降至132.56 mm Hg]、HW/BW比值(3.87 mg/g降至3.29 mg/g)、LVW/BW比值(2.74 mg/g降至2.32 mg/g).(4)辛伐他汀可明显抑制腹主动脉缩窄大鼠心肌p-JAK2和p-STAT3蛋白表达(P<0.01).结论 辛伐他汀对CT-1诱导的大鼠心肌细胞肥大和腹主动脉缩窄所致心肌肥厚均具有明显的防治作用,其作用机制可能与其抑制JAK/STAT信号通路的激活,减少肥厚相关基因AGT mRNA、c-fos mRNA表达有关.     

环状RNA _005647通过结合miR-99b-5p抑制心肌细胞中肥厚相关基因的表达

目的研究环状RNA circRNA_005647抑制心肌肥厚相关基因表达的作用机制。方法建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)灌注诱导的心肌肥厚小鼠模型。原代分离获得C57BL/6乳小鼠心肌细胞(NMVC),AngⅡ处理NMVC建立心肌细胞肥大模型。利用NMVC,分别感染circRNA_005647重组腺病毒(rAd-circRNA_005647)和转染miR-99b-5p模拟物来研究对NMVC肥大的影响。通过双荧光素酶报告基因实验和RNA Pull-down实验验证circRNA_005647与miR-99b-5p的结合作用。实时荧光定量PCR和Western blot检测NMVC中心肌肥厚相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果在AngⅡ诱导的小鼠心肌肥厚模型和心肌细胞肥大模型中,circRNA_005647及其宿主基因肌球蛋白IXA(Myo9a)表达升高。过表达circRNA_005647可抑制AngⅡ诱导的NMVC中肥厚相关基因心房钠尿肽(Anp)和肌球蛋白重链7(Myh7)基因表达升高。circRNA_005647与miR-99b-5p间存在结合作用。过表达circRNA_005647可抑制miR-99b-5p促心肌细胞肥大的作用。结论circRNA_005647通过结合miR-99b-5p发挥抑制心肌细胞肥大的作用。     

肺动脉高压对右心重构及右心室AT_1R、TGF-β1、ERK1/2蛋白表达的实验研究

目的:探讨肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)对大鼠右心重构及右心室AT1R,TGF-β1及ERK1/2蛋白的表达。方法:选取体质量250~260g的健康雄性SD大鼠12只,随机分为:对照组(n=6)、PAH右心重构组(n=6)。对照组和PAH右心重构组分别予以0.9%氯化钠液和野百合碱(MCT)60 mg/kg单次注射于大鼠颈背部皮下,饲养6w建立模型。应用超声生物显微镜测定其右心室前壁厚度(RVAWd)及右心室射血分数(RVEF),应用右心导管测定肺动脉平均压(mPAP)。处死后分别称量右心室(RV)和左心室+室间隔(LV+SP)质量,计算右心室肥厚指数(RVHI)。天狼猩红染色计算心肌组织胶原容积分数(CVF)。应用Western blot测定右心室AT1R,TGF-β1,ERK1/2蛋白表达。结果:与对照组相比,野百合碱诱导6w后,PAH右心重构组的RVAWd、mPAP、RVHI及CVF均高于对照组,差异有统计学意义,分别为RVHI[(25.01±1.20)vs.(40.57±4.17)%],mPAP[(16.56±1.98)vs.(29.46±2.47)mmHg],RVAWd[(0.65±0.09)vs.(1.17±0.08)mm],RVEF[(54.15±4.60)vs.(62.63±9.54)%],均为P0.01;PAH右心重构组右心室心肌组织AT1R、TGF-β1及ERK1/2蛋白表达显著高于对照组(均为P0.05)。结论:肺动脉高压对大鼠右心重构及右心室AT1R、TGF-β1及ERK1/2蛋白表达显著上调。     

血压变异性对Sprague Dawley大鼠主动脉及心肌组织瞬时受体电位通道6表达的影响

目的研究血压变异性(BPV)对Sprague Dawley(SD)大鼠主动脉及心肌组织瞬时受体电位通道6(TRPC6)表达的影响,探讨TRPC6与BPV的关系。方法 20只10周龄雄性SD大鼠随机分为两组,去窦弓神经(SAD)手术组和假手术组,每组10只。术后8周测量两组大鼠BPV、左心室质量指数(LVMI)以及主动脉和心肌组织中TRPC6的mRNA和蛋白表达。计算大鼠收缩压和舒张压的均数及标准差,并以标准差作为该时段的BPV。结果 SAD组24h收缩压标准差[(12.6±3.4)比(7.0±2.1)mmHg]及舒张压标准差[(8.2±3.8)比(3.4±0.5)mmHg]、LVMI[(2.19±0.06)比(1.71±0.04)mg/g]、主动脉及心肌组织中TRPC6的mRNA和蛋白表达均明显高于假手术组(均P<0.05)。结论 BPV增大时,大鼠主动脉及心肌组织TRPC6表达量增加。     

慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及Fas基因、FasL（Fas蛋白配体）的变化

目的　本实验将探讨腹主动脉缩窄所致慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡与Fas及Fas蛋白配体 (FasLigand ,FasL)基因表达的变化 ,揭示二者与心力衰竭发展过程的关系。方法　以腹主动脉缩窄法建立大鼠慢性心力衰竭模型。 3 0只大鼠随机分成假手术组、手术左室代偿性肥厚组 (简称肥厚组 )及手术心衰组。采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)观察发生心衰的大鼠和同期仅左室肥厚而未发生心衰的大鼠的心肌细胞凋亡情况 ,同时以免疫组化ABC显色法分别检测Fas与FasL蛋白水平变化 ,以逆转录聚合酶链反应法检测Fas基因mRNA的表达改变 ,从而探讨心肌组织中Fas基因的蛋白与mRNA表达水平与心肌细胞凋亡的关系以及二者在心衰发展过程中的作用。结果　假手术组心肌中仅有少许心肌细胞凋亡 ,实施手术的代偿性肥厚组与心衰组大鼠均有心肌细胞凋亡发生 ,但心衰组心肌细胞凋亡的数目明显高于对照组。大鼠经腹主动脉缩窄术后 4周 ,左室肥厚而未发生心衰的大鼠其心肌组织Fas蛋白阳性染色指数明显高于假手术组 ,但Fas配体蛋白阳性染色指数与假手术组间无显著性差异 ;而发生心衰的大鼠其心肌组织Fas及Fas配体蛋白阳性染色指数明显高于肥厚组 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5)。与假手术组和肥厚组相比     

血栓调节蛋白在糖尿病大鼠心肌中的表达及意义

目的探讨STZ诱导的糖尿病大鼠心肌组织中血栓调节蛋白(TM)的表达及意义,为糖尿病心肌病(DCM)的防治提供新的靶向。方法从50只SD大鼠中随机选取32只采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型,剩余18只作为正常对照。每日观察大鼠进食、饮水等一般状况,每周固定时间测量体重、血糖及尿糖。分别在2、8、12 w末分批处死一定数量两组大鼠。分别检测各批大鼠的心脏指数(HW/BW)、血糖、血脂;采用透射电镜观察心肌组织超微结构的改变;免疫组化方法观察心肌组织中TM的蛋白表达;通过RT-PCR检测TM mRNA的表达水平。结果与正常对照组相比,2 w末模型组心脏指数无明显差异;8、12 w末心脏指数均显著增加,且12 w高于8 w(P<0.01)。模型组各时间段各项生化指标均高于正常对照组(P<0.01),各项指标变化由低到高排列顺序为2、8、12 w末。2 w末模型组大鼠未见明显病理变化;8、12 w末模型组大鼠出现心肌细胞肥大、排列紊乱、细胞外间质增多,线粒体肿胀、嵴断裂、溶解等病理变化;12 w末模型组大鼠上述病理变化较8 w末模型组更加明显。免疫组化显示,模型组TM表达明显高于正常对照组(P<0.01);组间比较阳性表达由低到高顺序依次是2、8、12 w末。与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织中TM mRNA的表达明显增高(P<0.01),其中,12 w末表达最强,其次是8,2 w末表达最弱。结论 TM在糖尿病大鼠心肌组织中呈时间依赖性高表达,并与病程呈正相关,显示其可能在DCM的发生、发展中发挥重要作用,这为该病的防治提供了新的靶向。