阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静胁内皮细胞增殖及白细胞介素-18分泌的影响

目的:观察阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及白细胞介素-18(IL-18)分泌的影响.方法:体外培养的HUVEC株,第3～9代用于实验.实验分3组:①空白对照组;②ox-LDL组(100 mg/L);③阿托伐他汀组:先将阿托伐他汀0.01、0.05、0.1、0.5、1.0μmol/L分别,作用于内皮细胞4 h,然后加ox-LDL(100 mg/L)作用细胞24 h.采用细胞酶联免疫吸附分析检测细胞培养上清液IL-18含量;采用四唑盐比色法检测各孔的吸收度(OD),以评价增殖效果.结果:与空白对照组比较,100 mg/L ox-LDL抑制内皮细胞增殖(P＜0.01),阿托伐他汀呈剂量依赖性地促进ox-LDL诱导的内皮细胞增殖(P＜0.05,P＜0.01).正常内皮细胞不分泌IL-18,而100 mg/L ox-LDL促进IL-18分泌.0.01/μmol/L阿托伐他汀对ox-LDL诱导的HUVEC分泌IL-18无影响(P＞0.05),0.05,0.1,0.5,1.0 μmol/L阿托伐他汀能明显抑制oxLDL诱导的HUVEC分泌IL-18(P＜0.05,P＜0.01),抑制效应呈浓度依赖性.结论:阿托伐他汀呈剂量依赖性地抑制ox-LDL诱导的人HUVECs分泌IL-18,促进内皮细胞增殖,保护内皮功能,从而发挥他汀类药物调脂外抗动脉粥样硬化作用.     

过氧化物酶体增殖物激活受体α诱导内源性成纤维细胞生长因子21表达水平变化对氧化修饰的低密度脂蛋白引起的鼠内皮细胞凋亡的影响

目的 通过观察氧化修饰的低密度脂蛋白(ox-LDL)引起心脏血管内皮细胞损伤时,内源性成纤维细胞生长因子21(FGF21)基因表达及蛋白分泌水平的变化,以及过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)刺激内源性FGF21生成增加时,对ox-LDL诱导细胞凋亡的影响,探讨内源性FGF21对动脉粥样硬化早期内皮功能的保护作用.方法 分离并培养成年Wistar大鼠心脏微血管内皮细胞,给予ox-LDL溶液,建立心脏血管内皮细胞损伤模型,以实时(real time)PCR及ELlSA法分析FGF21基因及蛋白水平变化,并给予PPARα配基苯扎贝特(分为50、100及200μmol/L组),诱导FGF21高表达,ELISA法观察细胞凋亡情况.结果 10、50及100μg/ml ox-LDL溶液组,FGF21基因表达及蛋白分泌越来越高.50及100 μg/ml ox-LDL组FGF21 mRNA表达水平,100 μg/ml ox-LDL组FGF21蛋白分泌水平,200 μmol/L苯扎贝特组诱导FGF21水平均显著高于溶剂对照组(P均＜0.05).200 μmol/L苯扎贝特+100μg/ml ox-LDL组细胞凋亡水平显著低于100 μg/ml ox-LDL组(P＜O.05).结论 ox-LDL诱导心血管内皮细胞损伤时FGF21分泌水平可反应性增高,且呈剂量依赖性.PPARα配基苯扎贝特可引起FGF21表达水平增高,对ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡起到一定的抑制作用,提示FGF21可能作为一种心血管内源性保护因子,拮抗动脉粥样硬化早期心血管内皮功能障碍.     

激活过氧化物酶增殖物激活受体对血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞中单核细胞趋化因子-1表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉内皮细胞分泌单核细胞趋化因子1（MCP-1）的影响，以及激活过氧化物酶增殖物激活受体（PPARs）中α，γ亚型对MCP-1的影响。方法以RT—PCR和ELISA方法测定AngⅡ在不同浓度（10^-8～10^-6mol／L）对人脐静脉内皮分泌MCP-1的影响以及血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）拮抗剂缬沙坦的干预作用；同时分析PPARa配体非诺贝特及PPAR7配体罗格列酮的干预对AngⅡ诱导MCP-1表达的效应。结果 AngⅡ显著刺激人脐静脉内皮细胞系（HUVEC-12）表达MCP1，增加的程度与AngⅡ的浓度呈正相关，罗格列酮和非诺贝特均可呈浓度依赖的抑制HUVEC12中由AngⅡ所诱导的MCP-1的表达。结论 AngⅡ可刺激HUVEC-12细胞表达MCP-1，其作用与AT1R受体相关；激动剂PPARa、PPAR7均可明晁加制AngⅡ所诱导的内古纲晌巾MCP-1嘉亍大     

过氧化物酶增殖物激活受体α激动剂对心脏成纤维细胞增殖的抑制作用

目的: 探讨过氧化物酶增殖物激活受体α（PPARα）激动剂非诺贝特(fenofibrate)对糜酶介导的大鼠心脏成纤维细胞（CFs）增殖的影响及作用机制。方法: 用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠的CFs。采用3H-脱氧胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法测定CFs的DNA合成,用流式细胞术分析细胞周期,用RT-PCR检测PPARα 及转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA的表达。结果: ①以不同浓度的非诺贝特预处理后,CFs的3H-TdR掺入量呈浓度依赖性减少,其中50和100 μmol/L组均较糜酶组明显减少（分别为P<0.05和P<0.01）。②随着非诺贝特浓度的增加,CFs在G0/G1期的百分率逐渐增加,S期的百分率和增殖指数逐渐减少,其中50和100 μmol/L组与糜酶组比较,上述各项指标均有显著性差异（分别为P<0.05和P<0.01）。③以25、50和100 μmol/L非诺贝特预处理后,PPARα mRNA表达的水平呈浓度依赖性增加,其中50和100 μmol/L组均较糜酶组显著增加（分别为P<0.05和P<0.01）。④随着非诺贝特浓度的增加,TGF-β1 mRNA表达水平呈递减趋势,其中50和100 μmol/L组均较糜酶组明显减少（P<0.01）。结论: PPARα 激动剂非诺贝特以浓度依赖的方式抑制糜酶诱导的大鼠CFs增殖的作用,其机制与PPARα基因表达的上调和TGF-β1基因表达的下调有关,提示PPARα 和TGF-β1这两条信号通路可能存在信息交流。     

蒲黄提取物对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的 研究蒲黄提取物对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用.方法　体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),采用MTT法测定不同浓度蒲黄提取物对HUVEC的影响.以蒲黄提取物(100,50,10 mg/L)预处理细胞24 h,再加入100 mg/L ox-LDL造成细胞损伤,取培养细胞上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,HUVEC用于测定细胞细胞间黏附因子(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白(MCP-1)mRNA的表达.结果 各剂量蒲黄提取物有显著的促进血管内皮细胞增殖的作用.与正常对照组比较,HUVEC经ox-LDL作用后,细胞活性显著下降,LDH的释放量和ICAM-1、MCP-1 mRNA的表达显著升高;100、50、10 mg/L 蒲黄提取物可显著降低LDH活性,下调ICAM-1、MCP-1 mRNA的表达.结论 蒲黄提取物具有促进脐静脉内皮细胞增殖的作用,并可抑制Ox-LDL诱导的HUVECs ICAM-1、MCP-1 mRNA表达的上调和LDH的释放,从而起到保护血管内皮细胞的作用.     

经皮冠状动脉介入治疗后再狭窄的实验研究--非诺贝特对内皮细胞增殖及凋亡的干预作用

目的建立再狭窄内皮细胞模型并探讨非诺贝特对经皮冠状动脉治疗后再狭窄的防治作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为:(1)正常对照组,(2)溶血卵磷脂(LPC)组,(3)低浓度非诺贝特组(10μmol/L),(4)中浓度非诺贝特组(50μmol/L),(5)高浓度非诺贝特组(100μmol/L)。分别观测内皮细胞增殖、凋亡及上清液一氧化氮(NO)浓度的的变化。结果与正常对照组比较,LPC抑制内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,降低NO浓度。非诺贝特可干预LPC对内皮细胞的作用,使内皮细胞增殖增强,细胞凋亡减少,NO浓度升高。结论非诺贝特可改善LPC对HUVECs的影响,使内皮细胞增殖增强,凋亡减少,升高NO浓度,从而起到防治PCI后再狭窄的作用。     

非诺贝特对溶血卵磷脂诱导的内皮细胞X连锁凋亡抑制蛋白基因表达的影响

目的:观察非诺贝特对溶血卵磷脂(LPC)诱导的内皮细胞X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达的影响。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,分为:①正常对照组、②LPC组、③非诺贝特低浓度(10μmol/L)组、④非诺贝特中浓度(50μmol/L)组及⑤非诺贝特高浓度(100μmol/L)组。采用实时定量PCR及流式细胞仪分别观测LPC对内皮细胞XIAP mRNA及蛋白表达的影响,及非诺贝特干预后的变化。结果:与正常对照组比较,LPC使XIAP mRNA及蛋白表达减弱。非诺贝特干预后内皮细胞XIAP mRNA及蛋白表达增强。结论:非诺贝特可通过促进XIAP基因表达干预LPC对内皮细胞凋亡的影响。     

姜黄素对脂质运载蛋白2诱导人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的研究姜黄素对脂质运载蛋白2(LCN-2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及与p38 MAPK通路的关系。方法以LCN-2不同质量浓度(0,5,10,20μmol/L)及不同时间(0,24,48,72 h)作用HUVEC,CCK-8法测细胞增殖,流式细胞仪测细胞凋亡,ELISA测细胞上清液中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及白细胞介素6(IL-6)含量,比色法测乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western blot测HUVEC中p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表达;分别加入10μmol/L姜黄素和25μmol/L SB203580观察姜黄素的干预作用。结果与对照组比较,LCN-2可显著抑制HUVEC增殖,上调HUVEC内Bax/Bcl-2蛋白比率而促进细胞凋亡,诱导HUVEC分泌MCP-1及IL-6,增加LDH活性(P0.05);与LCN-2组比较,姜黄素及SB203580均可显著减轻LCN-2诱导的HUVEC增殖抑制,下调Bax/Bcl-2蛋白比率而抑制HUVEC凋亡,减少LCN-2诱导的HUVEC分泌MCP-1及IL-6,降低LDH活性(P0.05)。结论姜黄素可通过抑制p38 MAPK通路,减轻LCN-2诱导的HUVEC损伤。     

血管紧张素(1～7)对氧化低密度脂蛋白诱导人血管内皮细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响

目的 探讨血管紧张素(Ang)(1～7)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人血管内皮细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响.方法 原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分别以不同终浓度的Ang(1～7)(10、100、1000 nmol/L)和ox-LDL[25、50、100 mg/L(蛋白质含量)]进行单独或联合刺激,并以A-779[Ang(1～7)特异性受体阻断剂,终浓度为100 nmol/L)]预处理,孵育24 h,以ELISA方法检测培养基上清液中MCP-1蛋白含量,RT-PCR法检测其mRNA的表达.结果 ox-LDL使MCP-1蛋白、基因表达增加,呈剂量依赖性(P＜0.05～0.01);基础状态下,Ang(1～7)对MCP-1表达无显著影响,但对ox-LDL诱导MCP-1的表达增强有抑制作用(P＜0.05～0.01);以A-779预处理后,Ang(1～7)的作用消失.结论 Ang(1～7)对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞单核细胞趋化因子1升高具有显著的抑制作用,此作用是通过特异性受体介导的.     

缬沙坦对氧化低密度脂蛋白诱导的人内皮细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的观察缬沙坦对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人内皮细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,待细胞生长到融合状态时,将细胞分为4组:对照组;OX-LDL组(加ox-LDL 100 mg/L);低浓度组(先加ox-LDL 100 mg/L,再加缬沙坦10 μmol/L);高浓度组(先加ox-LDL 100mg/L,再加缬沙坦30μmol/L)。RT-PCR测定MMP-1 mRNA的表达。结果与对照组比较,ox-LDL组MMP-1mRNA的表迭明显增多(P<0.05),与ox-LDL组比较,低、高浓度组抑制MMP-1 mRNA的表达(P<0.05),并呈浓度依赖性。结论缬沙坦的抗炎及稳定动脉粥样硬化斑块的作用,可能与抑制内皮细胞MMP-1的表达有关。     

轻度氧化低密度脂蛋白对巨噬细胞内质网应激的诱导作用及其信号通路

目的探讨非诺贝特对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管外膜成纤维细胞凋亡的作用以及非诺贝特是否通过Sirt1途径调控TNF-α诱导的血管外膜成纤维细胞凋亡。方法原代培养血管外膜成纤维细胞,Western blot检测Sirt1在细胞中的表达,免疫荧光对Sirt1进行定位。预先1 h加入不同剂量的非诺贝特(25、50和100μmol/L),再用TNF-α(20μg/L)刺激细胞24 h。用MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。Western blot检测Sirt1激动剂白藜芦醇,Sirt1抑制剂尼克酰胺和Sirtinol对血管外膜成纤维细胞Sirt1表达的影响。细胞加入非诺贝特(50μmol/L),1 h后加入白藜芦醇(20μmol/L)、尼克酰胺(10mmol/L)和Sirtinol(25μmol/L),1 h后再加入TNF-α(20μg/L)刺激24 h,流式检测细胞凋亡。结果 Sirt1在血管外膜成纤维细胞中有表达且主要位于细胞核中。与正常组比较,TNF-α能促进细胞增殖和诱导细胞凋亡(P<0.01),非诺贝特能够剂量依赖性抑制TNF-α诱导的细胞增殖和凋亡(P<0.01)。白藜芦醇能够上调细胞S...     

骨髓间充质干细胞拮抗氧化型低密度脂蛋白

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响及有关机制.方法 将对数生长期的HUVEC分成三组:对照组单纯培养HUVEC;ox-LDL组的HUVEC给予100 mg/L ox-LDL培养24 h;ox-LDL+ MSC组使用细胞培养池共同培养HUVEC和MSC,并加入100mg/L ox-LDL培养24 h.采用流式细胞术检测HUVEC的凋亡情况,采用ELISA检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)的含量,并通过Real-timePCR检测HUVEC中凋亡相关基因Bcl-2与Bax mRNA的表达情况.结果 在100 mg/L ox-LDL作用24 h后,细胞凋亡率明显上升,细胞培养上清液中TNF-α、VEGF含量明显上升,Bcl-2 mRNA表达下调,而Bax mRNA表达上调.MSC与HUVEC共培养可增加上清液中VEGF含量,减少TNF-α含量,上调Bcl-2 mRNA表达,下调Bax mRNA表达,使内皮细胞凋亡率明显下降.结论 MSC可以拮抗ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡,可能与其分泌VEGF、抑制炎性反应并上调Bcl-2 mRNA表达及下调BaxmRNA表达有关,为MSC治疗动脉粥样硬化等内皮损伤性疾病进一步提供了理论基础.     

非诺贝特对心肌细胞代谢损伤及凋亡的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体α(PPARα)的配体非诺贝特对异丙肾上腺素诱导的原代乳鼠心肌细胞代谢损伤及凋亡的作用与机制。方法体外原代培养新生乳鼠心肌细胞,分为空白组、实验组、对照组,空白组为未干预组,实验组以浓度为10μmol/L的非诺贝特预处理1 h后加入浓度为100μmol/L异丙肾上腺素诱导培养24 h,对照组直接以100μmol/L异丙肾上腺素诱导培养24 h。以分光光度计测定三组心肌培养上清液中乳酸及丙酮酸浓度,荧光显微镜定性测定线粒体ROS生成,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞成活率,AnnexinV/FITC染色和流式细胞分析心肌细胞凋亡,Westembloting法测定PPARoα及UCP2的蛋白表达。结果 (1)以异丙肾上腺素诱导心肌细胞24 h后,心肌细胞培养上清液乳酸、丙酮酸含量升高,分别为(10.57±1.66)μmol/L比(4.90±0.05)μmol/L和(549.63±2.41)nmol/L比(221.25±0.86)nmol/L(均P<0.05);细胞凋亡增加为26.51%±6.74%比0.12%±0.17%(P<0.05);(2)与对照组相比,以非诺贝特预处理1h后,心肌细胞培养上清液乳酸、丙酮酸含量减少,分别为(6.88±0.56)比(10.57±1.66)μmol/L和(335.49±1.82)比(549.63±2.41)nmol/L(均P<0.05);细胞凋亡减少14.12%±3.17%比26.51%±6.74%;(3)以非诺贝特干预后ROS生成减少,细胞成活率提高为69.87%±6.08%比39.22%±4.15%;(4)异丙肾上腺素诱导后PPARa蛋白含量减少,UCP2蛋白含量增加,而以非诺贝特预处理后PPARa蛋白含量增加为(0.66±0.09)比(0.13±0.02),UCP2蛋白含量减少(0.47±0.06)比(0.88±0.14)(P<0.05)。结论 (1)PPARα配体非诺贝特可改善异丙肾上腺素诱导的心肌能量代谢损伤。(2)非诺贝特可减少线粒体ROS的生成及细胞凋亡。(3)非诺贝特可能通过上调PPARa及减少UCP2蛋白含量,增强心肌脂肪酸氧化,为心肌提供能量。     

川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及其分子机制。方法体外培养人冠状动脉内皮细胞,并随机分为对照组、ox-LDL组、不同浓度川芎嗪为1μmol/L组、10μmol/L组、100μmol/L组。用RT-PCR及Western blot法检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因和蛋白表达;采用免疫荧光法观察NF-κB p65蛋白的核转位。结果与对照组比较,ox-LDL组MCP-1、ICAM-1基因和蛋白表达明显升高(P<0.01);与ox-LDL组比较,10μmol/L组、100μmol/L组MCP-1、ICAM-1基因表达明显降低(P<0.01),1μmol/L组、10μmol/L组MCP-1、ICAM-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。免疫荧光显示,1μmol/L组、10μmol/L组可抑制NF-κB p65亚基的核转位。结论川芎嗪对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用。     

过氧化物酶体增殖物激活受体α对氧合血红蛋白诱导的蛛网膜下腔出血大鼠血管平滑肌细胞炎性细胞因子的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)对氧合血红蛋白(OxyHb)诱导的蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠血管平滑肌细胞炎性因子的影响。方法选用清洁级SD大鼠30只,雄性,体质量100~120 g,约4周龄。无菌状态下截取胸主动脉,分离血管壁中层细胞,采用贴壁法原代培养血管平滑肌细胞,传4~6代后,α-SMC-actin染色鉴定血管平滑肌细胞,选取合格细胞建立模型。将细胞随机分为对照组、OxyHb组(10μM OxyHb诱导)、非诺贝特1组(10μM OxyHb诱导前1 h加入100μM非诺贝特)、非诺贝特2组(10μM OxyHb诱导后0.5 h加入100μM非诺贝特)、GW1组(10μM GW6471预先0.5 h阻断非诺贝特1组)、GW2组(10μM GW6471预先0.5h阻断非诺贝特2组),各6只。给予OxyHb及相关干预因子孵育48 h后,细胞离心收取上清液,采用ELISA法检测各组TNF-α、IL-1β水平。结果对照组TNF-α为(122.9±7.0)ng/L,OxyHb组为(282.7±53.5)ng/L,非诺贝特1组为(164.8±24.4)ng/L,非诺贝特2组为(179.±26.8)ng/L,GW1组为(274.3±41.8)ng/L,GW2组为(293.9±29.6)ng/L;对照组IL-1β为(64.0±0.6)ng/L,OxyHb组为(183.8±21.1)ng/L,非诺贝特1组为(102.1±9.9)ng/L,非诺贝特2组为(122.4±7.4)ng/L,GW1组为(182.0±17.2)ng/L,GW2组为(180.1±15.1)ng/L。对照组、非诺贝特1组和非诺贝特2组TNF-α和IL-1β水平低于OxyHb组,对照组TNF-α和IL-1β水平低于非诺贝特1组,OxyHb组、非诺贝特2组、GW1组和GW2组TNF-α和IL-1β水平高于非诺贝特1组(P0.05)。结论 PPAR-α激动剂能明显抑制OxyHb诱导的SAH大鼠血管平滑肌细胞炎性因子的表达,且该作用能被PPAR-α抑制剂特异性阻断。     

咖啡酸苯乙酯对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子分泌的抑制作用

目的研究咖啡酸苯乙酯(CAPE)对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子分泌的影响及其可能机制。方法用不同浓度CAPE预处理THP-1源性巨噬细胞2 h,再用40 mg/L ox-LDL处理24 h,ELISA检测炎症因子TNF-α,IL-6以及MCP-1的分泌情况;用40 mg/L ox-LDL分别处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,Westernblot检测细胞COX-2蛋白表达的情况;最后,采用Western blot分析CAPE对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达、IκB-α降解及其NF-κB核转位的影响。结果 40 mg/L ox-LDL可诱导THP-1源性巨噬细胞TNF-α,IL-6以及MCP-1分泌增多,而CAPE明显抑制了ox-LDL诱导的细胞炎症因子分泌,呈浓度依赖性(P<0.05);随着ox-LDL处理时间的延长,THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达逐渐增高,以24 h最为明显(P<0.05),而CAPE能抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达上调,并可抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞IκB-α降解及其NF-κB核转位。结论 CAPE对ox-LDL诱导的巨噬细胞炎症因子分泌应具有抑制作用,作用机制可能与其抑制NF-κB激活,下调COX-2蛋白表达有关。     

前列腺素E1对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 探讨前列腺素E1(PGE1)对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattactant protein-1,MCP-1)表达的影响及可能机制.方法 用培养的人脐静脉内皮细胞观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对MCP-1、核因子(NF)-κB表达的影响及PGE1的干预作用.采用ELISA检测上清液MCP-1浓度,原位杂交检测MCP-1 mRNA的表达,免疫印迹检测NF-κB蛋白表达.结果 (1)PGE1(0.001、0.010、0.100 mol/L)组与ox-LDL(100 μg/ml)组比较,MCP-1蛋白表达为(0.327±0.051)、(0.214±0.213)、(0.247±0.228)pg/ml对(0.655±0.013)pg/ml,MCP-1mRNA表达为(0.061±0.008)、(0.033±0.006)、(0.026±0.004)吸光度(A)/μm2对(0.220±0.032)A/μm2,PGE1显著抑制了ox-LDL所诱导的MCP-1改变.(2)Western blot结果显示,PGE1呈浓度依赖性抑制ox-LDL所诱导的NF-κB P65蛋白表达.结论 PGE1可抑制ox-LDL诱导的内皮细胞MCP-1及NF-κB表达上调,这可能与PGE1介导的血管内皮保护作用有关.     

非诺贝特对脂多糖诱导的心肌细胞肿瘤坏死因子—α表达的影响

目的 探讨过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)激活剂对新生大鼠心肌细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和PPARα自身表达水平的影响。方法 体外原代培养新生Wistar大鼠心肌细胞，给予不同浓度的非诺贝特(PPARα激活剂)刺激，并辅加脂多糖诱导TNF-α表达。采用半定量逆转录．聚合酶链反应法检测TNF-α和PPARα mRNA的表达，酶联免疫吸附测定法检测TNF-α的蛋白水平，Western印迹法检测PPARα蛋白表达。结果与对照组相比，非诺贝特组的TNF-α mRNA及蛋白表达水平明显降低，且呈剂量依赖性。而相应的PPARα mRNA及蛋白水平则无显变化。结论 PPARα激活剂可显抑制新生大鼠心肌细胞中脂多糖诱导的TNF-α表达，PPARα活化后发挥抗炎作用，但PPARα本身的表达水平可能并没有改变。     

非诺贝特对血管钙化的影响及机制研究

目的在大鼠血管钙化模型上,探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator activated re-ceptorα,PPARα)激动剂非诺贝特对血管钙化的影响及其可能的作用机制。方法实验动物按随机数字表法分正常组、钙化组及钙化+非诺贝特组,每组10只。钙化组采用维生素D3和尼古丁诱导大鼠血管钙化模型,钙化+非诺贝特组于造模后第2天开始,非诺贝特灌胃[30 mg/(kg·d)]。采用Von Kossa染色检测血管钙化程度,采用钙离子测试盒、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒测定大鼠主动脉钙浓度和ALP活性,采用Beckman Coulter AU5800仪器检测血清三酰甘油(triacylglycerol,TG)浓度,采用放射免疫法检测大鼠血清单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)浓度,采用免疫组织化学法检测主动脉MCP-1受体表达。结果 Von Kossa染色可见血管钙化模型大鼠主动脉有大量黑色颗粒沉淀,钙化组血管钙浓度、ALP活性高于正常组,差异有统计学意义(P0.01);同时,与正常组比较,钙化组血清MCP-1浓度和主动脉组织MCP-1受体表达明显上调(P0.01)。用非诺贝特干预后,血管钙化程度减轻(P0.01),同时血清MCP-1及其受体的表达下调,与钙化组比较差异有统计学意义(P0.01)。3组动物血清TG浓度比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 PPARα激动剂非诺贝特可抑制血管钙化,可能通过下调MCP-1表达和ALP活性抑制血管钙化的发生、发展过程。     

TLR4/NF-κB信号通路在ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞分泌MCP-1中的作用

目的:探讨Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路在氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)分泌单核细胞趋化因子-1(MCP-1)中的作用。方法:取SD大鼠胸主动脉中膜培养血管平滑肌细胞,以2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L的TLR4中和抗体(TLR4阻断剂)、5μmol/L、10μmol/L、、20μmol/LPDTC(NF-κB特异性阻断剂)分别进行干预,并分别设置空白对照组和ox-LDL组,观察其对血管平滑肌细胞中ox-LDL诱导的MCP-1表达的影响。结果:与空白对照组比较,ox-LDL组VSMCs MCP-1mRNA及蛋白的表达明显升高(P<0.05);与ox-LDL组比较,用TLR4中和抗体预孵育后Anti-TLR4三组MCP-1mRNA[(1.23±0.21)比(0.81±0.02)、(0.75±0.01)、(0.49±0.01)]及其蛋白的表达[(0.64±0.05)ng/ml比(0.41±0.12)ng/ml、(0.32±0.07)ng/ml、(0.21±0.02)ng/ml]明显降低(P均<0.01),且呈浓度依赖性;用PDTC预孵育后PDTC三组MCP-1mRNA[(1.37±0.19)比(1.02±0.08)、(0.87±0.01)、(0.56±0.02)]及其蛋白的表达[(0.65±0.07)ng/ml比(0.51±0.07)ng/ml、(0.30±0.08)ng/ml、(0.19±0.02)ng/ml]亦明显降低(P均<0.01),且呈浓度依赖性。结论:氧化性低密度脂蛋白是TLR4的内源性配体;氧化性低密度脂蛋白通过或部分通过TLR4/NF-κB信号通路介导血管平滑肌细胞单核细胞趋化因子-1的表达。