系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中Foxp3的表达及意义

摘要 目的：探讨转录因子Foxp3在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)患者外周血单个核细胞中的表达水平及其在SLE发病中的作用及意义。方法：选择SLE活动性、SLE非活动性患者和正常对照，运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术检测SLE患者和正常对照组外周血单个核细胞中Foxp3mRNA和蛋白的表达水平。结果：活动期SLE组Foxp3mRNA和蛋白的表达水平明显低于SLE非活动性患者和正常对照（P<0.05），SLE非活动性患者Foxp3mRNA和蛋白的表达水平明显低于正常对照（P<0.05）。结论：SLE患者外周血单个核细胞中Foxp3mRNA和蛋白的表达水平显著低于正常对照，随着SLE患者病情的好转，Foxp3mRNA和蛋白的表达水平逐渐增高。提示Foxp3与SLE疾病的活动性呈一定的线性相关关系。     

肥胖患者外周血单个核细胞Toll样受体4表达及活性研究

目的研究肥胖患者外周血单个核细胞（PBMCs）Toll样受体4（11LR4）表达及活性。方法收集16例肥胖患者和16例正常对照者的PBMCs,蛋白印迹法检测PBMCsTLR4及IKBct蛋白表达,实时荧光定量PCR检测PBMCsTLR4及白细胞介素6（IL-6）mRNA表达,并测定空腹血糖、空腹胰岛素、血游离脂肪酸（FFA）、IL-6及肿瘤坏死因子仪（TNF-a）。结果与正常对照组比较,肥胖组血FFA、IL-6、TNF-a及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）明显增高[FFA：（879±64）、（458±48）umoL／L,t=24．613、P=0．000;IL-6：（2．20±0．35）、（1．264-0．25）ng／L,t=14．993、P=0．000;TNF—a（1．964-0．32）、（1．384-0．24）ng／L,t=9．128、P=0．000;HOMA．IR：1．84-0．2、0．44-0．1,t=32．254、P=0．000];肥胖组PBMCsTLR4mRNA及蛋白表达显著升高（TLR4mRNA：3．13±0．21与0．99±0．03,f=54．758,P〈0．05;TLR4蛋白：7．04±0．42与2．53±0．17,t：77．450,P〈0．05）;肥胖组PBMCsIKBet蛋白表达显著降低（2．52±0．16与4．00±0．30,t=23．284,P〈0．05）,IL-6mRNA表达显著升高（2．55±0．15与1．03±O．11,t=53．981,P〈0．05）。结论肥胖患者PBMCsTLR4表达及活性显著增加,可能在肥胖患者胰岛素抵抗的发生、发展中具有重要作用。     

类风湿性关节炎患者早期外周血单个核细胞Toll样受体2、4表达及意义

目的探讨类风湿性关节炎(RA)早期患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体(TLR)2、TLR4对其配体双糖链蛋白多糖(BGN)、脂多糖(LPS)的刺激反应性,阐明PBMC TLR2、TLR4在RA疾病早期中的作用。方法采用流式细胞术、实时荧光定量逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测BGN和LPS刺激前后,RA组和健康对照组外周血CD14+单核细胞TLR4+细胞频率、PBMC TLR2 mRNA和TLR4mRNA及上清液白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量变化。结果 RA早期患者TLR2 mRNA明显升高、TLR4 mRNA下降(P<0.01);经LPS刺激后,RA患者TLR4 mRNA升高3.50倍,而健康对照组下降到0.11倍;LPS和BGN促进了各组PBMC产生IL-6、TNFα,但RA早期患者组上升的倍数明显高于健康对照组。结论 PBMC TLR2、TLR4参与早期RA的发生、发展。     

系统性红斑狼疮患者Toll样受体、核因子-kB水平研究进展

系统性红斑狼疮(SLE)是多系统受损的一种自身免疫性疾病,临床表现复杂多样,免疫调节功能紊乱和大量致病性自身抗体的产生是其免疫异常的突出表现。新近研究发现,Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)/核因子-kB(NF-kB)介导的信号通路参与SLE的发生、发展,有可能为SLE的免疫治疗提供新的策略。     

B淋巴细胞刺激因子及其受体BAFF-R在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的 探讨B淋巴细胞刺激因子(Blys)及其受体BAFF-R在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达情况及临床意义.方法 应用流式细胞仪技术,检测90例SLE患者PB-MCs中Blys及其受体BAFF-R的表达,并与45例健康志愿者检测结果 进行比较.分析Blys及BAFF-R的表达与SLE病情活动、其他实验指标及自身抗体的关系.结果 ①SEE患者PBMCs中Blys及BAFF-R的表述百分率比健康对照组高(均P<0.001).其中,活动期和稳定期SLE患者Blys和BAFF-R的表达率均高于健康对照组(P<0.001或0.01);活动期和稳定期比较,Blys的表达较高(P<0.05),而BAFF-R的表达无统计学差异.②SLE患者PBMCs中Blys的表达水平与SLE疾病活动指数评分呈正相关(r=0.728,P<0.001),与免疫球蛋白IgG、IgM里正相关(r=0.691,P<0.001和r=0.453,P<0.01),与补体C3、C4呈负相关(r=-0.510,P<0.001和r=-0.312,P<0.05).③抗dsDNA抗体(+)组患者PBMCs中Blys的表达较 dsDNA抗体(-)组高(P<0.01).Clq抗体(+)组患者PBMCs中的表达也较C1q抗体(-)组高(P<0.01).结论 Blys及BAFF-R在SLE外周血单个核细胞中的表达率升高.Blys的表达在一定程度上反映病情的活动,并与自身抗体的产生相关.Blys及其特异性受体BAFF-R可能参与SLE的发病.     

B细胞成熟抗原在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞的表达

目的检测B细胞成熟抗原（BCMA）mRNA在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）的表达水平,探讨BCMA在SLE发病中的意义。方法纳入2006年1-11月收治的36例SLE患者,同期17例健康志愿者作为对照组,采用半定量RT-PCR法检测外周血单个核细胞中BCMA mRNA的表达,并与SLE疾病活动指数（SLEDAI）进行相关性分析。结果 SLE患者组BCMA mRNA表达水平（0.598±0.230）均明显高于正常对照组（0.411±0.309）（P〈0.05）。SLE患者BCMA mRNA表达水平与SLEDAI评分无相关性（P=0.590）。结论 SLE患者BCMA mRNA表达水平的增高,可能在SLE的发病机制中具有一定的作用。     

雷公藤内酯醇对系统性红斑狼疮患者树突状细胞Toll样受体-9表达的影响

目的:检测雷公藤内酯醇对体外培养的系统性红斑狼疮(SLE)患者树突状细胞(DC)Toll样受体-9(TLR9)表达的影响。方法:体外培养SLE患者DC,用终浓度分别为20、40、60μg/L的雷公藤内酯醇刺激细胞3、6、12h,混合淋巴细胞反应观察DC刺激T细胞后T细胞增殖的变化,RT-PCR检测TLR9 mRNA在DC中的表达情况。结果:与健康对照者相比,SLE患者DC表达CD11c+、CD123+的百分率明显下降(P<0.05);雷公藤内酯醇以剂量依赖的形式抑制SLE患者DC刺激同种T细胞增殖;以剂量和时间依赖的形式下调SLE患者DCTLR9 mRNA表达。结论:雷公藤内酯醇可抑制SLE患者DC刺激同种T细胞增殖,雷公藤内酯醇可能通过下调SLE患者DCTLR9的表达而发挥免疫抑制作用。     

白癜风患者外周血单个核细胞中TLR7、TLR9、NF-κB的表达及意义研究

目的探究白癜风患者外周血单个核细胞(PBMC)中Toll样受体7(TLR7)、Toll样受体9(TLR9)、核因子-κB(NF-κB)的表达情况及其意义。方法前瞻性选取2017年4月至2018年4月沈阳市第七人民医院收治的33例白癜风患者作为观察组,33例同期健康体检者为对照组。使用流式细胞仪检测两组PBMC中的TLR7、TLR9表达情况,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组PBMC中的NF-κB表达情况。结果流式细胞仪结果显示,观察组患者PBMC中的TLR7表达量为(94.65±3.931)%,高于对照组的(92.84±3.52)%,但差异无统计学意义(P0.05);而观察组患者PBMC中的TLR9表达量为(86.68±11.01)%,低于对照组的(90.75±5.74)%,但差异无统计学意义(P 0.05); PCR反应结果显示,观察组患者PBMC中的NF-κB mRNA表达量为(0.96±1.52),高于对照组的(0.24±0.35),差异具有统计学意义(P 0.05)。结论白癜风患者PBMC中TLR7表达过量,TLR9则低表达,但与正常健康者的表达情况未见较大差异,而该信号通路的信号分子NF-κB表达量远高于正常健康者,推测TLR7、TLR9、NF-κB的表达与白癜风可能存在一定的关系,但具体机制需进一步探寻。     

特发性血小板减少性紫癜外周血单个核细胞Toll样受体表达研究

目的了解特发性血小板减少性紫癜(ITP)外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体(TLRs)的mRNA表达情况。方法采用RT-PCR方法(SYBR GreenⅠ荧光染料结合法),对30名ITP患者和30名健康者的PBMCs中所表达的TLR2、4、6、7、9 mRNA进行相对定量检测。结果ITP组TLR2和TLR7的mRNA相对表达量均明显高于对照组(P<0.05),而TLR4、TLR6、TLR9的mRNA相对表达量两组间无明显差异(P>0.05)。结论TLR2和TLR7在ITP患者中表达水平上调,可能在ITP发病机制中起重要作用。     

乙型肝炎肝硬化患者外周血中单个核细胞Toll样受体4的表达及其与血清内毒素的关系

目的:通过检测乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞(PMBCs)Toll样受体4(TLR4) mRNA的表达、血清内毒素水平及肿瘤坏死因子α(TNF-α);探索TLR4 mRNA表达与血清内毒素及TNF-α的关系.方法:抽取29例乙型肝炎肝硬化患者外周静脉血,分离单个核细胞,用RT-PCR半定量分析TLR4 mRNA水平;同时用鲎试剂测定血清内毒素水平和用放免法测定血清TNF-α水平.结果:正常对照组和肝硬化患者血清内毒素水平分别为0.050±0.020 EUmL-1和0.107±0.080 EUmL-1(P<0.05),血清TNF-α水平分别为1.282 pgmL-1±0.249 pgmL-1和2.076±0.358 pgmL-1(P<0.05),后者均明显升高,而且肝功能损害越严重内毒素水平升高越明显;肝硬化患者PMBCs中TLR4 mRNA的表达(0.900±0.263)与正常对照(0.923±0.461)无显著差异(P>0.05).结论:在肝硬化患者,尤其主要是Child-Pugh C级患者,血清内毒素及TNF-α水平较正常对照组明显升高,但PMBC的TLR4 mRNA的表达水平无变化,这可能与肝硬化患者同时存在内毒素耐受有关.     

脓毒症患者单个核细胞Toll样受体4表达与内毒素耐受的关系

目的观察革兰阴性菌感染所致脓毒症患者外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)的表达与内毒素耐受之间的关系。方法以重症监护病房治疗的32例革兰阴性菌感染所致脓毒症患者为研究对象,另选20例为健康对照组。两组入选人员均晨起空腹采血,分离外周血单个核细胞,采用流式细胞仪技术检测单个核细胞表面TLR4的表达;另一部分外周血分离单个核细胞,并加入1μg/ml脂多糖(LPS)培养24h,同样进行流式细胞仪检测单个核细胞表面TLR4的表达。并应用放射免疫法测定血清及外周血单个核细胞培养液中TNF-α、IL-6的浓度。结果 (1)脓毒症组外周血单个核细胞表面TLR4表达、血清细胞因子TNF-α、IL-6浓度均明显高于健康对照组(均P<0.001)。(2)脓毒症组患者外周血单个核细胞经LPS刺激后培养上清液中TNF-α、IL-6的浓度显著低于健康对照组(均P<0.05),脓毒症组患者外周血单个核细胞经LPS刺激后TLR4表达较刺激前轻度下调,但刺激前后组间无统计学差异(P>0.05)。结论脓毒症患者外周血单个核细胞体外给予大剂量LPS刺激后可以产生内毒素耐受,但这种现象不能单纯用TLR4的表达下调解释,其可能存在更复杂的机制。内毒素耐受状况下,单个核细胞表现为促炎因子表达的明显下调。     

急性髓系白血病患者外周血单个核细胞Toll样受体9以及血清肿瘤坏死因子和凋亡基因FAS的表达

背景：Toll样受体9（TLR9）、肿瘤坏死因子a、Fas可能共同参与白血病的发生发展过程。目的：测定TLR9在急性髓系白血病患者外周血单个核细胞中的表达及血清肿瘤坏死因子α、Fas水平。方法：从急性髓系白血病患者与正常对照组中分离出外周血单个核细胞,采用反转录-聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中TLR9mRNA的表达水平,采用酶联免疫吸附试验法检测血清肿瘤坏死因子α、Fas水平。结果与结论：在急性髓系白血病患者初治组和难治复发组中,外周血单个核细胞中TLR9mRNA表达高于正常对照组（P〈0.01）,化疗后完全缓解组与正常对照组差异无显著性意义（P〉0.05）;各病例组血清肿瘤坏死因子α、Fas水平显著高于正常对照组（P〈0.01）。TLR9mRNA的表达与血清肿瘤坏死因子α、Fas水平均呈正相关。     

急性髓系白血病患者外周血单个核细胞Toll样受体9以及血清肿瘤坏死因子和凋亡基因FAS的表达

背景:Toll样受体9(TLR9)、肿瘤坏死因子a、Fas可能共同参与白血病的发生发展过程.目的:测定TLR9在急性髓系白血病患者外周血单个核细胞中的表达及血清肿瘤坏死因子α、Fas水平.方法:从急性髓系白血病患者与正常对照组中分离出外周血单个核细胞,采用反转录-聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中TLR9 mRNA的表达水平,采用酶联免疫吸附试验法检测血清肿瘤坏死因子α、Fas水平.结果与结论:在急性髓系白血病患者初治组和难治复发组中,外周血单个核细胞中TLR9 mRNA表达高于正常对照组(P < 0.01),化疗后完全缓解组与正常对照组差异无显著性意义(P > 0.05);各病例组血清肿瘤坏死因子α、Fas水平显著高于正常对照组(P < 0.01).TLR9 mRNA的表达与血清肿瘤坏死因子α、Fas水平均呈正相关.     

复方新诺明联合泼尼松治疗对系统性红斑狼疮患者外周单个核细胞TLR7和TLR9表达的影响

目的探究系统性红斑狼疮应用复方新诺明联合泼尼松治疗对外周单个核细胞TLR7和TLR9表达的影响。方法回顾性选择同济大学附属杨浦医院2018年5月至2019年12月期间收治的系统性红斑狼疮患者50例,对患者进行分组,为试验1组(n=20)和试验2组(n=30),其中试验1组为初次诊断患者,试验2组为复方新诺明联合泼尼松治疗患者,同时选同期同院健康体检的30例健康人作为对照组,对三组补体C4、补体C3、C-反应蛋白、红细胞沉降率、抗Sm抗体、抗ds-DNA抗体、抗核抗体、性别、年龄进行分析。结果在试验1组、试验2组、对照组中,外周血单个核细胞均有TLR9、TLR7表达。TLR9、TLR7转录水平经定量PCR检测,试验1组显著高于对照组(P 0.05)。试验2组TLR9、TLR7显著高于对照组(P 0.05)。试验2组的TLR7表达低于试验1组(P 0.05);系统性红斑狼疮活动指数与TLR9、TLR7呈正相关(P 0.01)。试验1组系统性红斑狼疮活动指数与TLR7的相关系数为0.099,与TLR9的相关系数为0.490;系统性红斑狼疮活动指数、抗Sm抗体滴度与TLR7的转录水平呈正相关(P 0.05)。TLR9和抗ds-DNA抗体滴度、系统性红斑狼疮活动指数呈正相关。TLR9与联合用药治疗剂量存在相关性。TLR9表达与药物治疗剂量、C4水平以及系统性红斑狼疮活动指数相关。TLR7转录水平与系统性红斑狼疮活动指数相关。结论系统性红斑狼疮病情变化情况与TLR9、TLR7基因转录呈正相关,而泼尼松、复方新诺明使用剂量是影响TLR9表达的主要因素。     

人纤维介素在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及意义

我们用免疫组化方法检测了32例系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMNC)中人纤维介素(hfg12)蛋白表达情况，探讨hfg12在SLE发病中的作用及其与SLE疾病的关系。     

Toll 样受体与系统性红斑狼疮关系的研究进展

系统性红斑狼疮(SLE)是一种复杂的以出现多种自身抗体为特征的自身免疫性疾病,可以累及多个系统。有多种因素参与了SLE的发病机制,其中免疫因素在SLE的发病机制中尤为突出。Toll样受体(TLRs)作为一种重要的模式识别受体,能够识别病原微生物的结构组分和代谢产物,构成机体免疫第一道防线。TLRs信号转导对固有免疫及获得性免疫均具有重要的调节作用。近年研究发现TLRs在SLE的发病机理中起重要作用,本文就此作一综述。     

紫癜性肾炎患者外周血单个核细胞Toll样受体3和4的信号转导途径

背景：目前关于Toll样受体3和Toll样受体4介导的信号转导通路在紫癜性肾炎的发病机制中的作用尚不清楚。 目的：分析Toll样受体3和Toll样受体4在过敏性紫癜和紫癜性肾炎发病机制中的作用。方法：选取过敏性紫癜患儿64例,分为过敏性紫癜无肾损害组36例及过敏性紫癜性肾炎组28例,另选健康儿童30例作为正常对照组。实时荧光定量PCR检测外周血单核细胞Toll样受体3、Toll样受体4、髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6、白细胞介素12 mRNA的基因相对表达量;应用流式细胞术检测外周血单核细胞Toll样受体3、Toll样受体4蛋白表达率。结果与结论：①过敏性紫癜患儿Toll样受体4 mRNA及蛋白表达显著高于正常对照组（P 〈 0.05）。紫癜性肾炎组Toll样受体4 mRNA及蛋白表达均显著高于紫癜无肾损害组（P 〈 0.05）。②过敏性紫癜组髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6 mRNA的表达均显著高于正常对照组（P 〈 0.05）,白细胞介素12 mRNA的表达显著低于正常对照组（P 〈 0.05）;紫癜性肾炎组髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6 mRNA的表达显著高于紫癜无肾损害组（P 〈 0.05）,紫癜性肾炎组白细胞介素12 mRNA的表达显著低于紫癜无肾损害组（P 〈 0.05）。③过敏性紫癜组患儿外周血单核细胞Toll样受体4 mRNA与蛋白表达呈正相关（r=0.60,P 〈 0.01）;过敏性紫癜患儿Toll样受体4 mRNA与髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6表达均呈正相关（P 〈 0.01）,与白细胞介素12 mRNA表达呈负相关（r=-0.66,P 〈 0.01）。提示Toll样受体4可能通过髓样细胞分化因子88依赖信号转导途径介导过敏性紫癜的免疫发病机制,Toll样受体4的过度活化可能与过敏性紫癜的肾损伤有关。     

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞蛋白组学的初步研究

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）外周血单个核细胞（PBMC）蛋白质组的变化。方法分别提取14例SLE患者及9例健康献血者的PBMC，采用双向电泳技术分离全蛋白质组，对部分差异的蛋白质点进行离子阱高效液相色谱／质谱分析，测定其肽质量指纹图谱，与互联网蛋白质数据库的数据进行比对。结果获得了较好的双向电泳图像，图像分析显示：1例SLE患者、4例健康献血者PBMC蛋白匹配点为1084个，其中SLE患者高表达及特异表达蛋白点为71个及17个，健康献血者高表达及特异表达蛋白点为45个及20个，与所有实验2-DE图谱逐个比对后，对表达差异重复性高的30个蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析，经数据库检索后，鉴定出2个胞浆蛋白质酪氨酸转运核糖核酸合成酶（tyrosyl—tRNA synthetase）和斑联蛋白（zyxin）在SLE患者的PBMC中低表达。结论SLE患者PBMC蛋白组学研究可能为深入研究其发病机制、建立新的诊断指标提供一个良好的平台。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞CD23,CD25,CD19检测的临床应用

目的 :了解系统性红斑狼疮 ( SL E)疾病中 T、B细胞的变化和两者之间的相互关系。方法 :采用 ABC免疫组化法检测了 3 0例 SL E患者治疗前、后外周血单个核细胞 ( PBMC)分化群 CD2 3、 CD2 5、 CD19的表达 ,并与 2 3名正常健康人作对照。结果 :SL E患者 PBMC CD2 3 、CD2 5 表达分别为 ( 7.9± 1.5 ) % ,( 2 7.2± 6.4 ) % ,均较正常组的 ( 1.6± 1.1) % ,( 4 .4± 1.7) %显著增高 ( P<0 .0 1)。经治疗病情稳定后 CD2 3 ( 2 .0± 1.2 ) % ,与正常组比较无显著性差异 ( P>0 .0 5 ) ;而 CD2 5 虽有下降 ( 10 .2± 6.7) % ,但仍较正常组显著增高 ( P<0 .0 1)。PBMCCD19 表达与正常组比较 ,无显著性差异 ( P>0 .0 5 )。活动性 SL E患者 CD2 3 与 CD2 5 表达呈正相关 ( r=0 .4 0 0 8,P<0 .0 5 )。结论 :在 SL E活动期 T、B细胞均被激活 ,共同参与了 SL E免疫调节。B细胞活化与 T细胞激活有关且主要表现为质的异常 ,而 T细胞异常更难以纠正。