cagA与cag致病岛在中国人群感染幽门螺杆菌中关系的研究

目前研究认为幽门螺杆菌 (Hp)的致病性主要与其毒力因子有关。而作为毒力相关因子基因群集的特殊染色体区域—— cag致病岛 (Pathogenicity island) [1 ] ,已成为 Hp致病机制研究中新的热点之一。 cag致病岛编码蛋白的功能经计算机分析 ,推测为毒素及毒素转运功能相关的分泌系统 [1 ,2 ] 。本文在基因水平探讨毒素相关基因 A (cag A )与 cag致病岛在中国人群感染 Hp中的检出关系 ,为 cag致病岛的存在及相关意义的研究提供快捷、有效的方法。1　材料和方法1.1　菌株来源及细菌培养　胃镜下取患者胃窦粘膜活检组织 ,涂布于含 10 %脱纤维羊…     

幽门螺杆菌cagA基因 PCR检测方法初探

目的 建立敏感性高的幽门螺杆菌菌株cagA基因PCR检测方法,为客观评价CagA在我国幽门螺杆菌感染致病中的作用提供基础。方法 通过分析比较GenBank中已知的cagA基因序列,设计了一对针对cagA基因保守序列,可扩增297bp片段的PCR引物,用PCR方法检测幽门螺杆菌的cagA基因,与SDS-PAGE检测CagA蛋白的结果进行比较。结果 PCR检测82株国内幽门螺菌杆菌的cagA基因,77株为cagA阳性,阳性率为93.9%,SDS-PAGE显示包括所有PCR扩增阴性菌株在内的74株幽门螺杆菌均表达CagA,阳性率为100%,PCR检测cagA基因的敏感性为93.2%。结论 建立了敏感性高的幽门螺杆菌cagA基因PCR检测方法。     

胃十二指肠疾病患者感染幽门螺杆菌的cagA基因和血清CagA抗体 …

目的：探讨幽门螺杆菌ｃａｇＡ基因和血清ＣａｇＡ抗体与胃十二指肠疾病的关系。方法：用聚合酶链反应方法测定６２３汕慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者感染ＨｐｃａｇＡ基因；用酶免疫方法测定同一患者血清ＣａｇＡ抗体。结果：ＨｐｃａｇＡ基因阳性率为５６．４５％。慢性胃炎、消化性溃疡胃癌患者感染ＨｐｃａｇＡ基因阳性率分别为５５．５６％、５４．１７％和６３．６４％。三种疾病患者之间感染Ｈｐ的ｃａｇＡ基因阳性率无显著     

慢性胃炎和消化性溃疡中幽门螺杆菌babA2和cagA及vacA基因型分析

目的 :研究慢性胃炎和消化性溃疡中幽门螺杆菌 (Hp) bab A2、cag A、vac A基因型的分布 ,探讨 Hpbab A2、cag A、vac A基因型与慢性胃炎和消化性溃疡的关系。方法 :用聚合酶链反应测定 5 8株从浙江省慢性胃炎和消化性溃疡患者中分离的 Hp bab A2基因、cag A基因和 vac A基因亚型。结果 :5 8株 Hp中 bab A2、cag A、vac A s1a、vac A m1、vac A m2基因的阳性率分别为 87.9%、10 0 %、93.1%、1.7%、65 .5 %。慢性胃炎和消化性溃疡患者感染的Hp bab A2、vac A s1a、vac A m2基因阳性率差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :从浙江地区慢性胃炎和消化性溃疡患者中分离的 Hp bab A2、cag A、vac A基因型均以 bab A2阳性、cag A阳性和 vac A s1a/ m2型为主 ,未发现 Hp bab A2、cag A和 vac A基因型与慢性胃炎和消化性溃疡的关系。     

闽南地区某部队幽门螺杆菌感染及基因型分布情况

目的 探讨闽南地区某部队幽门螺杆菌(Hp)感染及其基因型分布情况,并分析其相关因素。方法 2016年12月间对某部队官兵进行Hp流行病学调查,采用整体随机抽样方式抽查202名官兵作为纳入对象,根据职别分为士兵组(n=150,作训士兵、炊事员及驾驶员)、军官组(n=52,地勤干部及飞行员)。采用问卷调查方式收集纳入对象年龄、职别、职业及疾病史等资料,并抽血检测纳入对象的Hp抗体及其基因型,分析Hp抗体阳性患者在职别、部门及年龄等方面分布情况,采用Logistics回归分析影响患者感染的相关因素。结果 总体Hp抗体阳性率为31.68%,军官阳性率为44.23%,士兵阳性率为27.33%。军官组Hp抗体阳性率明显高于士兵组(P<0.05)。部队官兵Hp感染以I型Hp感染为主,其中士兵组I型Hp抗体阳性率(56.1%)高于II型Hp抗体阳性率(43.9%),差异有统计学意义(P<0.05)。军官组I型Hp抗体阳性率(78.26%)较II型(21.74%)明显升高(P<0.05)。飞行员I型Hp抗体阳性率明显高于其它(P<0.05)。20～29岁Hp抗体阳性率明显高于其他...     

血清学检测CagA阳性幽门螺杆菌感染及其与胃肠疾病的关系

目的 研究血清抗细胞素素相关蛋白Ａ（ＣａｇＡ）抗体在幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染者中的分布。方法 采用酶联免疫吸附法检测１９８例Ｈｐ相关性疾病患者的血清ＣａｇＡ－ＩｇＧ抗体。结果 在Ｈｐ感染患者中血清ＣａｇＡ抗体总阳性率６９．２％。其中慢性浅表性胃炎为６７．２％。慢性萎缩性胃炎为７２．４％。胃溃疡为５６．８％,十二指肠球部溃疡为７９．２％。胃癌为７１．４％;各疾病间ＣａｇＡ抗体阳性率差异无显著性（Ｐ〉０．０５）。结论 血清ＣａｇＡ抗体检测不能作为区分Ｈｐ感染致不同胃肠疾病的单一指标。     

西安地区幽门螺杆菌cagA、cagE、vacA基因型与上消化道疾病的关系

目的:探讨西安地区就医人群幽门螺杆菌(HP)菌株vacA、cagA、cagE基因型与上消化道疾病的关系。方法:选取胃粘膜活检组织中分离培养到幽门螺杆菌的消化性溃疡58例,慢性胃炎30例,采用标准酚-氯仿抽提法提取HP基因组DNA,检测幽门螺杆菌cagA、cagE、vacA在消化性溃疡及慢性胃炎患者胃组织中的表达。结果:88株幽门螺杆菌中cagA的阳性率为100%,cagE的阳性率为100%,vacA s1/m-的阳性率为17.0%,vacA s1/m1a的阳性率为2.3%,vacA s1/m1a+m1b的阳性率为1.1%,vacA s1/m1a+m2的阳性率为1.1%,vacA s1/m2的阳性率为55.7%,vacA s1/m1b+m2的阳性率为1.1%,vacA s1/m1b的阳性率为17.0%,vacA s2/m2的阳性率为2.3%。结论:西安地区就医人群培养分离的HP菌株中,cagA和cagE阳性率均为100%,与本地区疾病类型和严重程度不相关,不能作为西安地区HP毒力强弱的标志。西安地区就医人群幽门螺杆菌菌株的vacA基因型以s1/m2为主,但vacA各基因亚型均与临床结局无相关性。     

新疆兵团农六师五家渠地区含cagA基因型幽门螺杆菌感染的流行病学调查

幽门螺杆菌 (Ｈｐ)的毒素在其致病性中的地位越来越受到人们重视。部分Ｈｐ菌株能表达细胞空泡毒素 (ＶａｃｕｏｌａｔｉｎｇＣｙｔｏｔｏｘｉｎ ,ＶａｃＡ)和细胞空泡毒素相关蛋白 (ＣｙｔｏｔｏｘｉｎＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＰｒｏｔｅｉｎ ,ｃａ ｇＡ) [1 ,2 ] ,ｃａｇＡ与ＶａｃＡ高度相关 ,被认为是Ｈｐ的毒力标志。许多研究资料表明Ｈｐ毒素与消化性溃疡及胃癌密切相关[3] 。本文用整群抽样的方法对新疆兵团农六师五家渠地区 1 1 1 2名自然人群的血清用ＥＬＩＳＡ法测定ｃａｇＡ -ＩｇＧ抗体 ,间接检测ｃａ ｇＡ基因。寻找其感染的重要…     

CagA阳性幽门螺杆菌感染与上胃肠道疾病关系的研究

目的探讨CagA阳性幽门螺杆菌(Hp)感染与上胃肠道病变的关系;并观察Hp根除治疗后血清中抗CagAIgG抗体水平的变化.方法808例因上胃肠道症状而接受胃镜检查的病人,同时作Hp检查.对Hp感染者用ELISA方法检测血清中抗CagAIgG抗体;阳性者予含质子泵抑制剂(PPI)三联疗法根除治疗.其中60例根除治疗失败病人和120例根除成功病人在Hp根除治疗结束3个月和6个月时复查血清中抗CagAIgG抗体水平.结果在不同临床疾病中,慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)、胃溃疡(GU)、十二指肠溃疡(DU)和胃癌(GC)感染Hp的病人中抗CagAIgG抗体阳性率分别为55.4%、70.5%、83.2%、90.8%、89.7%.后4组阳性率明显高于CSG组,后3组均明显高于CAG组;在不同程度的胃粘膜病变中,CSG、CAG、肠上皮化生(IM)、非典型增生(Dys)和GC感染Hp的病人中抗CagAIgG抗体的阳性率分别为43.0%、53.8%、77.6%、88.6%、89.7%.IM、Dys和GC组均明显高于CSG和CAG组;60例根除失败者在治疗前及治疗后3个月和6个月时血清中抗CagAIgG水平分别为(72±41)U/ml,(67±36)U/ml和(69±40)U/ml,治疗前后差异无显著意义,无一例转为阴性;120例根除治疗成功者治疗后3个月和6个月血清中抗CagAIgG水平平均由(69±38)U/ml分别下降至(47±30)U/ml和(32±15)U/ml,治疗后与治疗前比较差异均有显著意义,在治疗后3个月和6个月时分别有7.5%(9/120)和19.2%(23/120)的病人抗体转为阴性.结论CagA阳性的Hp可能导致更严重的上胃肠道疾病和更严重的胃粘膜病变;Hp根除治疗后血清中抗CagAIgG抗体水平明显下降,但下降较慢,不宜作为个体监测疗效的指标.     

胃黏膜不同病变中表达凋亡蛋白与幽门螺杆菌CagA＋东亚型感染的关系研究

目的 研究胃黏膜不同病变中表达凋亡蛋白与幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A（CagA）＋东亚型感染的关系.方法 将医院收治的120例胃黏膜病变患者作为研究对象,比较不同病变患者感染幽门螺杆菌CagA＋东亚型的情况以及感染该菌型患者体内凋亡蛋白表达与未感染者的区别.结果 慢性萎缩性胃炎患者幽门螺杆菌CagA＋东亚型感染为30.61％,胃癌患者78.26％,胃溃疡患者52.08％,胃癌患者的感染率最高,三组间感染率比较差异显著（F=14.6815,P=0.0000）;感染幽门螺杆菌CagA＋东亚型的患者体内caspase-3、肿瘤蛋白P53、P73表达阳性率远高于未感染者,差异显著（x2 =37.1537,43.1159,40.9869;P=o.0000）,表达水平亦远高于未感染者,两者上述指标差异显著（f=35.8544,30.8209,30.2270;P=0.0000）.结论 感染幽门螺杆菌CagA＋东亚型的患者体内凋亡蛋白表达水平高于未感染患者,且胃癌患者该菌的感染率高于其他病变患者.     

幽门螺杆菌cagA基因全长克隆及序列分析

目的探索扩增cagA基因全长的PCR方法,克隆中国2株胃癌幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)分离株和1株十二指肠溃疡分离株及国际标准株SS1的cagA基因,初步探讨cagA序列和磷酸化位点变异及其临床意义.方法针对已知cagA基因两侧及cag致病岛右侧反转重复序列设计PCR引物,扩增cagA基因并克隆测序,分析已知cagA序列同源性及其酪氨酸磷酸化位点.结果3株中国Hp分离株cagA氨基酸序列的同源性约为94%(93.9%、94%、94.5%),并都有pY117/118/122和EPIYA-A、B、D 4个酪氨酸磷酸化位点.SS1株cagA与西方菌株同源性大于85%,而与中国菌株的同源性小于80%,具有pY117/118/122和EPIYA-A、B、C 4个酪氨酸磷酸化位点.结论建立的PCR方法可扩增cagA基因全长.CagA序列变异和磷酸化位点具有地区聚类特征,但与Hp感染临床结局无特殊关联.     

浙江地区小儿幽门螺杆菌cagA基因变异性研究

目的 研究浙江地区儿童感染的幽门螺杆菌 (Hp)cagA基因的变异性。方法 应用3对不同引物对66例Hp感染患儿胃粘膜Hp菌株通过聚合酶链反应 (PCR)技术 ,分别扩增cagA基因不同DNA片段 ,检测cagA基因阳性 (cagA +)检出率 ;用免疫印迹法检测患儿血清CagA抗体。结果 Hp 菌株cagA基因DNA404bp、349bp、298bp 片段分别经3对引物扩增后 ,cagA +检出率分别为56.1%、39.4%、72.7% ,三者之间差别有显著性意义(χ2=14.63,P<0.01) ,总阳性检出率为90.9%。66例患儿血清CagA抗体阳性率为97.0%。结论 浙江地区儿童感染的Hp菌株cagA基因存在变异性和多态性 ,增加引物对数量进行检测可以提高Hp菌株cagA +检出率。     

中国人感染幽门螺杆菌的基因分型及其临床意义

目的：研究细胞毒素相关基因Ａ（ｃａｇＡ）在幽门螺杆菌菌株中的分布，并初步探讨其应用价值。     

幽门螺杆菌的细胞毒素分析

目的 探讨幽门螺杆菌临床分离株的毒素鉴定方法。方法:临床分离幽门螺杆菌HP1菌株,以国际标准株NCTC11637(VacA~+CagA~+)和NCTC11639(VacA~- CagA~+)为参照,运用细胞培养、PCR、Westernblot等技术对HP1进行细胞毒素鉴定。结果:HP1菌株可诱导Hela细胞发生空泡变性,经PCR检测含cagA基因,Western blot显示87kD及130kD处有蛋白条带。结论:HP1菌株为VacA~+ CagA~+菌株。     

幽门螺杆菌细胞毒素的鉴定方法

目的 :探讨幽门螺杆菌临床分离株的毒素鉴定方法。方法 :临床分离幽门螺杆菌HB1菌株 ,以国际标准株NCTC 116 37(VacA+CagA+)和NCTC 116 39(VacA-CagA+)为参照 ,运用细胞培养、PCR、Westernblot等技术对HB1进行细胞毒素鉴定。结果 :HB1菌株可诱导HeLa细胞发生空泡变性 ,经PCR检测含cagA基因 ,Westernblot显示 87× 10 3 及 130× 10 3 处有蛋白条带。结论 :HB1菌株为VacA+CagA+菌株     

幽门螺杆菌cagA蛋白的克隆表达与鉴定

目的　构建表达幽门螺杆菌 (Hp)毒素相关基因A蛋白 (cagA)的重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白 ,为检出幽门螺杆菌致病株和运用于临床检测Hp感染奠定基础。 方法　PCR扩增出编码毒素相关基因蛋白DNA片段后构建出重组质粒 pET -cagA ,并经质粒酶切筛选、DNA测序、IPTG诱导DE3 表达融合蛋白和Western blot予以证实。表达的融合cagA蛋白经过纯化和凝血酶酶切验证cagA蛋白抗原性。 结果　克隆的cagA核苷酸序列与GeneBank(AB116 74 4 )公布的序列相比较 ,同源性达 99.34% ,推定氨基酸序列同源性为 99.0 1%。SDS -PAGE和Western blot检测到带有His tag的约 4 0kD融合蛋白中表达。融合蛋白酶切后能与抗cagA人抗血清发生阳性反应。 结论　重组cagA的原核表达质粒构建正确 ,蛋白表达成功 ,具有反应原性     

幽门螺杆菌CagA抗原性多态性分析

目的 了解我国幽门螺杆菌CagA抗原性的多态性，为临床血清学诊断CagA阳性菌株感染提供实验依据，以及是否存在特定胃十二指肠疾病相关的CagA抗原性型提供线索。方法 采用Western blots方法，比较38株我国幽门螺杆菌分离株的CagA与3种不同胃肠疾病分离株兔免疫血清的反应强度。分析不同抗原性类型CagA与疾病的关系。结果 任何一种血清均不能识别所有CagSA，但任一CagA至少可被一种血清识别，多数菌株CagA的抗原性与CAPM N62接近；抗原性与NCTC11637接近的CagA可能与消化性溃疡相关，但不显著。结论 我国不同幽门螺杆菌菌株CagA抗原性存在明显多态性，血清学方法诊断CagA阳性菌株感染时应至少使用3种抗原或抗体，不同抗原性类型CagA与胃十二指肠疾病的关系有待进一步研究。     

Biological activity of the virulence factor cagA of Helicobacter pylori

Background China is one of the countries with the highest incidence of H. pylori and more than 9090 isolates possessed the cagA gene. This study was to evaluate the biological activity of the H. pylori virulence factor cagA isolated from Chinese patients. Methods cagA DNA fragments were amplified from the genomic DNA and subsequently cloned into the mammalian expression vector for cell transfection and DNA sequencing, cagA protein, phosphorylated-tyrosine cagA and the complex of cagA precipitated with SHP-2 were identified respectively by western blot in the crude cell lysate from conditionally immortalized gastric epithelial cells at 48 hours after transfection with cagA DNA. In addition, the ability of induction of scattering phenotype was examined after transient expression of cagA in AGS cells. Results The C-terminal half of cagA contained only one repeated sequence and three tandem fiveamino-acid motifs glutamic acid-proline-isoleucine-tyrosine-alanine (EPIYA). Moreover, the amino acid sequence of D2 region in repeated sequence was aspartic acid-phenylanaline-aspartic acid (D-F-D) which was significantly distinguished from the three repeated sequences and aspartic acid-aspartic adid-leucine (D-D-L) in the western standard strain NCTC11637. Western blot revealed that cagA became phosphorylated in tyrosine site and bound with SHP-2 after transient expression of cagA DNA in gastric epithelial cells. Transient expression of cagA in AGS cells showed that cagA was able to induce the elongation phenotype although to a lesser extent than western strains. Conclusions cagA perturbs cell signaling pathways by binding with SHP-2. However, significant difference exists in amino acid sequence and biological function of cagA in Chinese compared with those of western countries.     

幽门螺杆菌CagA基因的原核表达及抗原性测定

目的：合成胃癌相关幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的 CagA基因片段,建立原核表达系统,鉴定重组表达产物的抗原性。方法：选取前期研究确定的与胃癌相关的H.pylori CagA基因片段,优化设计并合成CagA基因,将合成的CagA基因从pUC57-CagA质粒中切出,用表达载体pET32a携带该基因转化宿主菌BL21(DE3),通过氨苄青霉素抗性筛选和菌落PCR挑选出阳性克隆pET32a-CagA;以IPTG诱导含pET32a-CagA的宿主菌表达融合蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分析CagA蛋白表达情况,用Western印迹鉴定融合蛋白的抗原性。结果：设计并人工合成了CagA基因片段,序列测定结果显示,合成的CagA基因序列与设计的序列（AF289435）基本一致;成功构建pET32a-CagA原核表达质粒,对应蛋白序列与AAG09884同源性为100%;含pET32a-CagA的BL21(DE3)宿主菌经IPTG诱导后能表达CagA融合蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分析结果表明,融合蛋白相对分子质量大小与预期一致(45 kD);Western印迹检测结果显示该融合蛋白可与抗H.pylori全菌抗体结合反应。结论：本实验构建的原核表达系统表达的CagA融合蛋白具有良好的抗原性,为临床胃癌相关H.pylori菌株的筛选和针对性治疗奠定了基础。