p38丝裂原活化蛋白激酶信号分子在子痫前期患者血管内皮细胞损伤中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号分子在子痫前期患者血管内皮细胞损伤中的作用.方法选择2009年9月至2010年3月在重庆医科大学附属第一医院住院分娩的足月产妇54例为研究对象,其中36例为子痫前期患者,按病情分为子痫前期轻度组(20例)、子痫前期重度组(16例);同期足月择期剖宫产孕妇为对照组(18例).采用CD34标记血管内皮细胞,计数各组胎盘微血管密度(MVD);SP法检测磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)在胎盘组织中的定位;蛋白印迹法检测各组胎盘p38 MAPK及p-p38 MAPK的蛋白表达差异;双抗体夹心ELISA法检测各组血清中可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)及可溶性内皮糖蛋白(soluble endoglin,sEng)的水平.结果 (1)MVD:对照组、子痫前期轻度组及子痫前期重度组患者胎盘MVD分别为103±3、81±5、63±4,各组间两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白表达水平:对照组、子痫前期轻度组及子痫前期重度组患者胎盘组织p38 MAPK蛋白表达水平分别为0.84±0.05、0.90±0.14、0.86±0.18,各组间两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);p-p38 MAPK蛋白的表达水平分别为0.13±0.05、0.59±0.12和1.16±0.18,各组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)p-p38 MAPK蛋白的表达部位:p-p38 MAPK蛋白主要表达于胎盘滋养层细胞的胞质及胞核、血管内皮细胞及少量间质细胞的胞核.(4)sFlt-1及sEng的水平:①对照组孕妇血清sFlt-1、sEng水平分别为(5.2±0.3)、(10.9-±0.4)μg/L;子痫前期轻度组分别为(12.5±1.2)、(20.4±5.3)μg/L;子痫前期重度组分别为(19.3±3.0)、(29.5±3.7)μg/L;各组sFlt-1、sEng水平两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);②p-p38 MAPK蛋白表达水平与血清sFlt-1、sEng水平的相关性:子痫前期重度组和子痫前期轻度组p-p38 MAPK蛋白表达水平与血清sFlt-1、sEng水平均呈明显正相关(r=0.68,P＜0.05;r=0.87,P＜0.05).结论 子痫前期患者胎盘组织中p38 MAPK信号分子的显著活化,使血清中sFlt-l、sEng水平升高,损伤胎盘血管内皮细胞,导致胎盘MVD降低;p38 MAPK信号分子可能是子痫前期患者血管内皮细胞损伤的关键信号传导通路之一.

Abstract：

Objective To study expression and activation of p38 mitogen activated protein kinase (MAPK) in vascular endothelial cells dysfunction in preeclampsia. Methods From Sept. 2009 to Mar.2010, 54 pregnant women underwent deliveries in the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University were enrolled in this study, including 20 patients in mild preeclampsia group, 16 patients in severe preeclampsia group and 18 women with term cesarean section without perinatal complications as control group. Placental endothelial cells were labeled by CD34 to assay microvessel density (MVD) of each group. Immunohistochemical SP and western blot were used to detect localization and expression of p-p38 MAPK protein, respectively. The levels of sera soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1)and soluble endoglin(sEng) were measured by ELISA. Results ①The MVD of placenta were 103 ± 3 in control group, 81 ±5 in mild preeclampsia group and 63±4 in severe group, respectively, which showed statistical difference among each group (P＜0.05).②The expression of p38 MAPK protein were 0.84±0.05 in control group,0.90±0.14 in mild group and 0. 86 ±0.18 in severe group, which did not reach remarkable difference among each group (P＞0.05). The expression of p-p38 MAPK protein were 0.13±0.05 in control group,0.59±0.12 in mild group and 1.16±0.18 in severe group, which show statistical difference among each group(P＜0.05).(3) The localization of p-p38 was in trophoblast, endothelial cells and a few (5.2±0.3)and(10.9±0.4)μg/L in control group,(12.5±1.2) and (20.4±5.3)μg/L in mild group and (19.3±3.0) and (29. 5 ±3.7) μg/L in severe group. When drawing paired comparison in those p-p38 MAPK protein levels and the concentrations of serum sFlt-1, sEng in preeclampsia groups (r=0.68,P＜0.05;r=0.87,P＜0.05). Conclusions The remarkable activation of the p38 MAPK in the placenta of patients with preeclampsia induced the increased levels of sFlt-1 and sEng in maternal serum, which confer the injury of vascular endothelial cells that caused the significant decline of MVD in placentas. p38 MAPK signaling might be one of the key pathways in vascular endothelial cell dysfunction in preeclampsia.     

子痫前期胎盘中生长阻滞和DNA损伤45α基因及p38丝裂原活化蛋白激酶的表达

目的 探讨子痫前期胎盘组织中生长阻滞和DNA损伤45α(growth arrest and DNA damage-inducible 45 alpha,Gadd45α)基因和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号分子的表达,及其与血清中可溶性血管内皮生长因子受体-1(soluble vascular endothelial growth factor receptor-1,sFlt-1)和可溶性endoglin(soluble endoglin,sEng)的相关性分析.方法 选择2009年9月至2010年3月在重庆医科大学附属第一医院住院分娩的孕妇54例为研究对象,按病情分为子痫前期轻度组20例、子痫前期重度组16例,以足月择期剖宫产孕妇18例为对照组.采用免疫组织化学SP法检测Gadd45α及磷酸化p38 MAPK(phospho-p38 MAPK,p-p38 MAPK)蛋白在各组胎盘组织中的定位;实时荧光定量PCR检测各组胎盘组织中Gadd45α mRNA水平;Western印迹法检测各组胎盘组织中Gadd45α蛋白的表达水平、p38 MAPK及p-p38 MAPK的蛋白表达差异;双抗体夹心酶联免疫吸附法检测各组孕妇血清样本中sFlt-1及sEng的含量,并进行单因素方差及LSD-t检验分析.结果 (1)免疫组织化学检测Gadd45α与p-p38 MAPK蛋白均定位于胎盘滋养层细胞胞质及胞核、血管内皮细胞胞核及少量间质细胞胞核.(2)子痫前期重度及轻度组Gadd45α mRNA相对表达水平(3.33±0.13和2.10±0.11)较正常对照组(1.01±0.18)明显上调,且子痫前期重度组高于轻度组,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)Western 印迹法检测正常对照组、子痫前期轻度组及重度组患者胎盘组织中Gadd45α蛋白表达水平分别为0.22±0.11、0.65±0.15、1.34±0.17;p-p38 MAPK蛋白的表达水平分别为0.32±0.08、0.72±0.12、1.45±0.21,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05);p38 MAPK蛋白水平组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).(4)子痫前期轻度组、重度组孕妇血清sFlt-1、sEng水平明显高于正常对照组,且子痫前期重度组高于轻度组,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).(5)各组Gadd45α蛋白水平与孕妇血清中的sFlt-1、sEng含量呈正相关(r分别为0.88和0.87,P均＜0.05).结论 Gadd45α在子痫前期患者胎盘组织中的表达明显升高,其可能通过调控p38 MAPK信号转导通路,诱使循环中的sFlt-1、sEng释放增加,从而加重胎盘血管重铸障碍和抑制滋养细胞浸润,参与子痫前期的发病.

Abstract：

Objective To evaluate the expression of Gadd45α and p38 MAPK in placentas and the correlations of Gadd45α protein and serum soluble vascular endothelial growth factor receptor-1 (sFlt-1) and soluble endoglin (sEng) in preeclampsia(PE). Methods Fifty-four pregnant women who delivered from September 2009 to March 2010 in the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University were chosen as the subjects. They were classified into mild preeclampsia group (n=20),severe preeclampsia group (n=16) and the control group (normal pregnant women underwent elective cesarean sections at term without labor and perinatal complications, n=18). Western blot and immunohistochemistry were employed to determine the expression and localization of Gadd45α and p-p38 MAPK protein respectively. Gadd45α mRNA level was determined by quantitative real-time PCR. The levels of seum sFlt-1 and sEng were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). One-way ANOVA and LSD-t test were applied for statistical analysis. Results (1)Immunohistochemistry identified that the positive stained cells were mostly located in trophoblast cells in normotensive placentas, whereas in preeclamptic placentas Gadd45α protein and p-p38 MAPK protein were detected in trophoblast and endothelial cells, as well as a few stromal cells at increased levels.(2)The mRNA levels of Gadd45α was significantly elevated in mild and severe preeclampsia groups compared to the control group (2.10±0.11 and 3.33±0.13 vs 1.01±0.18, P＜0.05), and Gadd45α mRNA level in severe group was significantly higher than in mild group (P＜0.05).(3)The data of Western blot revealed that the Gadd45α protein levels in each group were 0.22±0.11, 0.65±0.15 and 1.34±0.17, respectively, with significant differences between each group(P＜0.05). The p-p38 MAPK protein levels in each group were 0.32±0.08, 0.72±0.12 and 1.45±0.21, respectively, with significant differences between each group (P＜0.05). p38 MAPK protein levels in the total groups showed no difference(P＞0.05).(4)Compared with the control group, sFlt-1 and sEng concentrations in maternal circulation were significantly increasing in mild and severe preeclampsia groups, and concentrations in severe group were significantly higher than those in mild group (P＜0.05).(5) There were positive correlations between Gadd45α protein levels and the concentrations of serum sFlt-1 and sEng in each group( r=0.88 and 0.87, respectively all P＜0.05). Conclusions Upregulation of Gadd45α in preeclampsia placentas may play an important role in the pathogenesis of preeclampsia. It may induce the increased maternal serum levels of sFlt-l and sEng by activating p38 MAPK signaling pathway, leading to deficient cytotrophoblastic invasion and abnormal placental vascular reconstruction during pregnancy.     

葡萄糖调节蛋白78在子痫前期胎盘滋养细胞中的表达及意义

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78( GRP78)在子痫前期孕妇胎盘组织中表达及其与子痫前期发病机制的关系.方法:选择2009年1 ～12月在青岛市市立医院及青岛市第八人民医院住院的子痫前期孕妇120例,其中早发型轻度子痫前期孕妇30例(早发轻度组),晚发型轻度子痫前期孕妇30例(晚发轻度组),早发型重度子痫前期孕妇30例(早发重度组),晚发型重度子痫前期孕妇30例(晚发重度组);另选同期健康孕妇30例为健康孕妇组.采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胎盘组织中GRP78mRNA相对表达量;采用免疫组织化学方法、West-ern-Blotting检测胎盘组织GRP78蛋白的表达.结果:①子痫前期各组胎盘组织中GRP78 mRNA表达水平均高于健康孕妇组,差异有统计学意义(P＜0.05);但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义(P＞0.05).②子痫前期各组和健康孕妇组胎盘组织中都有GRP78蛋白表达,主要表达于细胞质,呈棕黄色染色.Western-Blotting检测结果显示,子痫前期各组胎盘组织中GRP78蛋白表达水平均高于健康孕妇组,差异有统计学意义(P＜0.05);但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:GRP78在子痫前期胎盘组织中表达升高,GRP78的表达水平变化可能与子痫前期发病有关.     

孕妇血浆中sCD40及其配体与子痫前期发病及肾功能损害的关系

目的 探讨孕妇血浆中可溶性白细胞分化抗原(sCD40)和sCD40配体(sCD40L)水平变化与子痫前期发病及肾功能损害的关系.方法 选择2008年8月-2010年6月在青岛大学医学院附属医院产科分娩的轻度子痫前期孕妇28例(轻度子痫前期组),重度子痫前期孕妇35例(重度子痫前期组);另选同期妊娠结局良好的健康孕妇30例为对照组.比较3组孕妇分娩孕周及血压变化、血小板计数并检测其血常规、C反应蛋白(CRP)、尿常规、24h尿蛋白定量,以及血清尿酸(UA)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)等生化指标.采用ELISA法检测3组孕妇血浆中sCD40和sCD40L的水平,并对血浆sCD40和sCD40L的水平与各临床指标的相关性进行分析.结果 (1)血常规及l临床指标:重度子痫前期组和轻度子痫前期组孕妇血浆CRP水平(分别为10.8及7.1 mg/L)均明显高于对照组(3.3 mg/L),前后两者分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);重度子痫前期组高于轻度子痫前期组,两组比较,差异也有统计学意义(P＜0.05).重度子痫前期组孕妇分娩孕周(32.5周)明显低于轻度子痫前期组(37.2周)和对照组(38.6周),分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);轻度子痫前期组与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).重度子痫前期组孕妇血小板计数(132×109/L)明显低于轻度子痫前期组(212×109/L)和对照组(216×109/L),分别比较,差异有统计学意义(P＜0.01);轻度子痫前期组与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).3组孕妇之间血红蛋白水平及白细胞数分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(2)血浆sCD40及sCD40L水平:重度子痫前期组、轻度子痫前期组和对照组孕妇血浆sCD40水平分别为133.6、126.5和90.7 ng/L,sCD40L水平分别为12.5、10.4和4.4 ng/L,24h尿蛋白定量分别为4.5、0.8 g和0,UA水平分别为486、289和162 μmol/L,重度子痫前期组以上各指标均明显高于轻度子痫前期组和对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01);轻度子痫前期组也明显高于对照组,差异也有统计学意义(P＜0.01).重度子痫前期组孕妇血浆Cr(89 μmol/L)、BUN(5.32 mmol/L)水平高于轻度子痫前期组(分别为66μmol/L及4.49mmol/L)和对照组(分别为57 μmol/L及3.32 mmol/L),分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);轻度子痫前期组与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(3)相关性分析:轻、重度子痫前期组孕妇血浆sCD40水平与24 h尿蛋白定量呈正相关(r=0.434,P＜0.05),与UA、CRP呈明显正相关(r=0.536、0.528,P＜0.01),与收缩压、舒张压、分娩孕周、Cr、BUN、血小板计数无明显相关(r分别为0.135、0.183、-0.133、0.190、0.167、-0.221,P均＞0.05).轻、重度子痫前期组孕妇血浆sCD40L水平与24 h尿蛋白定量、UA、CRP均呈明显正相关(r分别为0.591、0.445、0.539,P均＜0.01),与收缩压、舒张压、分娩孕周、Cr、BUN、血小板计数无明显相关(r分别为0.178、0.212、-0.292、0.144、0.135、-0.273,P均＞0.05).轻、重度子痫前期组孕妇血浆sCD40L水平与sCD40呈明显正相关(r均为0.707,P＜0.01).对照组孕妇血浆sCD40、sCD40L水平与各项临床指标均无相关性(P＞0.05).结论 子痫前期孕妇血浆中sCD40和sCD40L水平明显升高,可能参与了子痫前期的发病,并导致肾功能损害.sCD40和sCD40L水平变化也与子痫前期的严重程度相关.

Abstract：

Objective To investigate the variance levels of plasma soluble leukocyte differentiation antigens CD40 (sCD40) and soluble CD40 ligand (sCD40L) in preeclamptic patients with renal damage and its relationship. Methods A total of 63 pregnant women attended the Department of Obstetrics, Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College between August 2008 and June 2010. In the present study included 28 pregnant women with mild preeclampsia and 35 patients with severe preeclampsia. Thirty matched normotensive pregnant women were enrolled in the study as the control group. Expression of sCD40 and sCD40L were determined by ELISA. At the same time, the blood routine, C reaction protein ( CRP),urine routine, 24 hours urine protein excretion, and serum uric acid (UA), creatinine (Cr), blood urea nitrogen (BUN) were measured. The correlation analysis was performed between the sCD40/sCD40L and the blood biochemical indexes in 3 groups. Results ( 1 ) The median levels of CRP in severe preeclampsia (10. 8 mg/L)and mild preeclampsia group(7. I mg/L)are significantly higher than that of control group (3. 3 mg/L,P ＜ 0. 05 ); The level of CRP in severe preeclampsia group was also higher than that of mild preeclampsia group ( P ＜ 0. 05 ). The median gestational age at delivery in severe preeclampsia ( 32. 5 weeks)was significantly less than that of mild preeclampsia group ( 37. 2 weeks) and normal group ( 38. 6 weeks,P ＜ 0. 05). However no significant differences were observed between mild preeclampsia group and normal group ( P ＞0. 05 ). The platelet count in severe preeclampsia ( 132 × 109/L) was significantly less than those of mild preeclampsia group (212 × 109/L) and normal group ( 216 × 109/L, P ＜ 0. 01 ), but no significant differences were observed in blood platelet amount between mild preeclampsia group and normal group ( P ＞0. 05 ). There was no significant difference in hemoglobin level and white blood cell in three groups ( P ＞0. 05). (2) The sCD40 plasma concentration in severe, mild preeclampsia and normal group was 133.6,126. 5 and 90. 7 ng/L, respectively. The sCD40 L plasma concentrations were 12. 5, 10. 4 and 4. 4 ng/L respectively in the 3 groups. 24 hours urinary protein quantitative was 4. 5 g/d,0. 8 g/d and 0 in the 3 groups respectively. And the UA level was 486 μ mol/L,289 μmol/L and 162 μmol/L. In the above three groups,the monitoring indicators were significantly higher in women with severe preeclampsia group compared with mild preeclampsia and control groups (P ＜ 0. 01 ), and there were also higher in mild preeclampsia group than that in control groups ( P ＜ 0. 01 ). The level of plasma Cr ( 89 μmol/L) and BUN ( 5. 32 mmol/L) in severe preeclampsia group were higher than those of mild preeclampsia group (66 μmol/L and 4. 49mmol/L) and control group ( 57 μmol/L and 3.32 mmol/L, P ＜ 0. 05 ). There was no significant difference between mild preeclampsia group and normal group (P ＞ 0. 05 ). (3) The correlation analysis indicated that the level of sCD40 has a positive correlation with 24 hours urinary protein quantitative( r = 0. 434, P ＜ 0. 05 ),also significant positive correlation( r =0. 536,0. 528 ,P ＜ 0. 01 ) between the level of sCD40 and UA or CRP in women with preeclampsia. There was no significant correlation between the level of sCD40 and systolic blood pressure, diastolic blood pressure, delivery gestational age, Cr, BUN, and platelet count(r =0. 135,0. 183, -0. 133,0. 190,0. 167, -0. 221 ,all P ＞0. 05 ). There were positive correlation between the level of sCD40L and 24 hours urine protein excretion, either UA or CRP( r =0. 591,0. 445,0. 539 ,all P ＜0. 01 ). No significant correlation was found between sCD40 L and systolic blood pressure, diastolic blood pressure,delivery gestational age, Cr, BUN, and platelet count( r =0. 178,0. 212, -0. 292,0. 144,0. 135, -0. 273,all P ＞0. 05). There was significant positive correlation between plasma sCD40 and sCD40L ( r =0. 707 ,P ＜0. 01 ). There was no relationship between the level of sCD40, sCD40L and the blood biochemical indexes in normotensive pregnant women ( P ＞ 0. 05 ). Conclusions The plasma concentrations of sCD40 and sCD40 L are significantly higher in pregnant women with preeclampsia compared with the control, which may be involved in the development of preeclampsia and contribute to the kidney damage. The variance levels of sCD40 and sCD40L may be also related to the severity of preeclampsia.     

氧化低密度脂蛋白及其受体与子痫前期发病的关系

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxLDL)及血凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)与子痫前期发病的关系.方法 选择2007年6月至2008年1月在青岛大学医学院附属医院产科住院分娩的子痫前期孕妇73例,其中轻度子痫前期孕妇35例(轻度子痫前期组),重度子痫前期孕妇38例(重度子痫前期组).选取同期正常晚期妊娠妇女45例为对照组.采用酶联免疫吸附试验检测各组孕妇血浆中oxLDL水平;采用RT-PCR、蛋白印迹法分别检测各组孕妇胎盘组织中LOX-1 mRNA及蛋白表达水平;采用RT-PCR检测各组孕妇胎盘组织中半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达水平.结果 (1)轻度及重度子痫前期组孕妇血浆中oxLDL水平分别为(0.42±0.11)及(0.68±0.12)mg/L,明显高于对照组的(0.35±0.14)mg/L,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(2)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中LOX-1mRNA表达水平分别为0.70±0.10及0.84±0.08,明显高于对照组的0.58±0.11,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(3)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中LOX-1蛋白表达水平分别为0.79±0.15及0.90±0.12,明显高于对照组的0.68±0.11,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(4)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中caspase-3 mRNA表达水平分别为3.82±0.18及5.39±0.14,明显高于对照组的2.19±0.20,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(5)轻度及重度子痫前期组孕妇血浆中oxLDL水平与胎盘组织中LOX-1 mRNA表达水平呈正相关(r=0.93,P<0.05);胎盘组织中LOX-1 mRNA表达与胎盘组织caspase-3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.84,P<0.05).结论 子痫前期孕妇血浆中oxLDL水平升高,并上调胎盘组织中的LOX-1表达水平,从而参与子痫前期的病理生理过程.     

三维能量彩色多普勒超声用于检测子痫前期孕妇胎盘组织血流灌注的价值

目的 探讨三维能量彩色多普勒超声检测子痫前期孕妇胎盘组织血流灌注的临床价值.方法 选择2007年7月至2008年5月在首都医科大学附属北京妇产医院超声科行产前超声检查的正常孕妇及子痫前期孕妇共80例,其中36例正常孕妇为正常孕妇组,44例子痫前期孕妇分为轻度子痫前期组(9例),重度子痫前期组(26例),慢性高血压合并子痫前期组(慢高合并子痫前期组,9例).应用三维能量彩色多普勒超声仪检测各组孕妇胎盘三维直方图血管指数(VI)、血流指数(FI)、血管化血流指数(VFI),应用二维多普勒超声检测脐血流收缩期/舒张期血流速度峰值(S/D值).并记录分娩孕周、新生儿出生体重、低出生体重儿百分比和胎盘重量.结果 (1)VI、FI、VFI及脐血流S/D值:正常孕妇组分别为6.3±2.9、38.6±4.4、2.7±1.3及2.5±0.6;轻度子痫前期组分别为5.7±3.8、36.3±7.2、2.4±2.0及2.4±0.3;重度子痫前期组分别为3.0±2.4、31.7±5.0、1.1±1.0及2.9±1.3;慢高合并子痫前期组分别为2.2±1.6、26.1±4.4、0.8±0.6及3.1±1.6.正常孕妇组孕妇胎盘VI、FI、VFI值与轻度子痫前期组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而重度子痫前期组和慢高合并子痫前期组孕妇胎盘VI、FI 、VFI兀值均明显低于正常孕妇组(P<0.01)及轻度子痫前期组(P<0.05).而各组孕妇脐血流S/D值相互比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(2)分娩孕周、新生儿出生体重、低出生体重儿百分比和胎盘重量:正常孕妇组分别为(38.7±1.5)周、(3280±520)g、3%及(568±141)g;轻度子痫前期组分别为(37.9 ±1.0)周、(2971±265)g.0及(576±98)g;重度子痫前期组分别为(33.2±2.6)周、(1820±737)g.58%及(458±154)g;慢高合并重度子痫前期组分别为(32.6±2.6)周、(1497±533)g.7/9及(396±141)g.正常孕妇组与轻度子痫前期组分娩孕周、新生儿出生体重、低出生体莺儿百分比和胎盘重量比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而重度子痫前期组和慢高合并重度子痫前期组的分娩孕周、新生儿出生体重、低出生体重儿百分比和胎盘重量均明显低于正常孕妇组(P<0.01)与轻度子痫前期组(P<0.05).结论 (1)重度子痫前期及慢高合并子痫前期孕妇胎盘组织的血流灌注明显减少,临床上相应出现胎盘重量及新生儿出生体重下降、分娩孕周偏低、低出生体重儿数量增加等结果;而脐血流S/D值无明显变化.(2)三维能量彩色多普勒超声对胎盘组织血流灌注的检测有重要的临床诊断意义.     

胎盘及外周血中STBM与早发型重度子痫前期病因的研究

目的:测定孕妇胎盘组织和血清合体滋养细胞层微绒毛膜(STBM)在重度子痫前期的表达情况,揭示早发型与晚发型重度子痫前期可能具有不同的病因及发病机制.方法:收集在我院治疗的早发型与晚发型重度予痫前期患者各15例,及与两组孕周相匹配正常妊娠孕妇各10例.采用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)方法测重度子痫前期患者胎盘中STBM的标记物TPAmRNA水平,另用酶联免疫分析法(ELLSA)测定血清和胎盘中STBM的标记物TPA蛋白表达水平.结果:①早发型组孕妇胎盘STBM的标记物TPA相对含量(2.04±0.32 ng/ml),高于晚发型组(1.75±0.31 ng/ml)(P＜0.05),早发型组胎盘STBM的标记物TPA mRNA含量(0.0342±0.0021)高于晚发组(0.0222±0.0020)(P＜0.05);②早发型组孕妇血清中STBM的标记物TPA水平(1.88±0.43 n#m1)高于晚发型组(1.59±0.26 ng/ml)(p＜0.05).早发型组和晚发型组血清中STBM的标记物TPA水平均高于同期正常孕妇血清中的TPA水平(P均＜0.05).③早发型组孕妇胎盘组织中STBM的标记物TPA水平与血清尿素氮水平、血清肌酐水平、S/D比值之间均呈显著正相关.晚发型组中与血清肌酐水平之间呈显著正相关.④早发型组孕妇血清中STBM的标记物TPA水平与血清肌酐水平、收缩压、舒张压之间均呈显著正相关.晚发型组中与血清肌酐水平、S/D比值、收缩压之间均呈显著正相关.结论:早发型重度子痫前期胎盘的合体滋养细胞凋亡早且严重,早发型与晚发型重度子痫前期可能具有不同的病因及发病机制.     

人白细胞抗原G1及G5在重度子痫前期患者胎盘组织中的表达

目的 探讨重度子痫前期(sPE)患者胎盘组织中人白细胞抗原(HLA)G1及G5表达的变化.方法 选取早发型及晚发型sPE患者各10例、早产及正常足月妊娠产妇各10例,通过蛋白印迹法及免疫组化方法检测胎盘组织中HLA-G1及G5蛋白的表达.结果 与早产产妇相比,HLA-G1蛋白在早发型sPE患者的胎盘组织中表达量明显减少,分别为2.9±1.1、2.4±0.6,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);与正常足月妊娠产妇相比,晚发型sPE患者的胎盘组织中HLA-G1蛋白的表 达量明显减少,分别为4.2±2.4、3.5±2.1,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与正常足月妊娠产妇相比,HLA-G5蛋白在晚发型sPE患者的胎盘组织中表达量增加,分别为1.1±0.9、1.8±1.1,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);与早产产妇相比,HLA-G5蛋白在早发型sPE患者胎盘组织中的表达量无明显变化(分别为1.4±0.7、1.6±0.9,P＞0.05).HLA-G1蛋白在早产产妇胎盘组织中的表达量较正常足月妊娠者减少(P＜0.05);HLA-G5蛋白在早产及正常足月妊娠产妇胎盘组织中的表达量无明显差异(P＞0.05).HLA-G1及G5蛋白主要在胎盘的绒毛外细胞滋养细胞中有表达,在血管周围及胚外中胚层中也有高表达.结论(1)HLA-G1在早发型及晚发型sPE患者胎盘组织中的表达均减少.(2)HLA-G5在早发型及晚发型sPE患者胎盘组织中的表达均增加,这一增加趋势在晚发型sPE患者中更为明显.(3)在妊娠晚期,HLA-G1在早产产妇胎盘组织中的表达较少.(4)胎盘组织中能够检测到HLA-G1及G5的表达,其主要位于胎盘的绒毛外细胞滋养细胞中.     

重度子痫前期患者胎盘合体滋养细胞凋亡的研究

目的 比较早发型与晚发型重度子痫前期患者胎盘合体滋养细胞凋亡水平变化,探讨其病因及发病机制的差异.方法 选择2008年11月至2009年5月在上海交通大学附属第六人民医院住院剖宫产分娩的早发型重度子痫前期患者15例(早发型组)、晚发型重度子痫前期患者15例(晚发型组)和健康妊娠妇女10例(对照组),采用酶联免疫吸附试验检测孕妇血浆中合体滋养细胞微粒(STBM)水平,蛋白印迹法检测胎盘组织中凋亡蛋白--半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达水平.结果 (1)STBM:早发型组孕妇血浆STBM水平为(71±21)μg/L,高于晚发型组的(42±30)μg/L和对照组的(26±11)μg/L,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);晚发型组血浆STBM水平与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)caspase-3蛋白:早发型组胎盘组织中caspase-3蛋白表达水平为0.85±0.61,晚发型组为0.77±0.46,对照组为0.32±0.15,早发型和晚发型组胎盘组织中caspase-3蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);但早发型组和晚发型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 早发型与晚发型重度子痫前期可能存在不同的发病机制,早发型重度子痫前期可能是一种胎盘疾病,而晚发型则可能与母体因素有关.     

孕妇血清及其新生儿脐血、胎盘组织中脂肪型脂肪酸结合蛋白表达变化与子痫前期发病的关系

目的 探讨孕妇血清及其新生儿脐血中脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)水平、胎盘组织中FABP4 mRNA的表达变化在子痫前期发病中的作用.方法 选择2008年12月-2009年10月在福建省妇幼保健院产科住院分娩的60例重度子痫前期孕妇,按发病时孕周不同分为早发型子痫前期组(发病时孕周≤34周)和晚发型子痫前期组(发病时孕周>34周)各30例;另选同期正常晚期孕妇60例,根据孕周不同分为早发型对照组(孕周≤34周)和晚发型对照组(孕周>34周)各30例.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测孕妇血清FABP4、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)及新生儿脐血FABP4水平;采用稳态模型评估法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用逆转录(RT)PCR技术检测胎盘组织中FABP4 mRNA的表达;记录临床相关指标,包括孕妇入院时体质指数(BMI)、收缩压(SP)、舒张压(DP)及平均动脉压(MAP)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、肾小球滤过率(GFR)、24 h尿蛋白定量和新生儿出生体质量.结果 (1)早发型及晚发型子痫前期组孕妇血清中FABP4水平分别为(176±9)及(170±9)ng/L,早发型及晚发型对照组分别为(81±13)及(94±15)ng/L,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)早发型及晚发型子痫前期组孕妇血清FINS、HOMA-IR水平分别为(21.9±4.3)mU/L、5.1±1.7及(22.6±4.0)mU/L、4.9±1.5,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)早发型及晚发型子痫前期组孕妇胎盘组织中FABP4 mRNA的表达水平分别为3.17±0.89及2.97±0.72,均高于晚发型对照组的1.00±0.28,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);但早发型子痫前期组与晚发型子痫前期组比较,差异无统计学意义(P>0.05).(4)早发型及晚发型子痫前期组新生儿脐血中FABP4水平分别为(92±10)及(100±8)ng/L,均低于晚发型对照组的(141±18)ng/L,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).早发型子痫前期组、晚发型子痫前期组及晚发型对照组新生儿出生体质量两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05).相关性分析结果显示,脐血FABP4水平与孕妇血清FABP4及胎盘组织中FABP4 mRNA表达水平均呈明显负相关(r分别为-0.882、-0.678,P<0.05),与新生儿出生体质量呈明显正相关(r=0.728,P<0.05).(5)早发型及晚发型子痫前期组孕妇血清中FABP4水平与胎盘组织中FABP4 mRNA表达水平均呈明显正相关(r分别为0.609、0.403,P<0.05),与血TG(r分别为0.702、0.562),FINS(r分别为0.528、0.423),HOMA-IR(r分别为0.566、0.519),Cr(r分别为0.443、0.523),UA(r分别为0.438、0.413)均呈明显正相关(P<0.05),而与血HDL(r分别为-0.539、-0.498),GFR(r分别为-0.717、-0.778)均呈明显负相关(P<0.05).结论 子痫前期孕妇血清FABP4水平及胎盘组织中FABP4 mRNA表达水平均明显升高,且两者呈明显正相关.提示FABP4水平升高可能是子痫的期发病的重要因素之一,而胎盘组织中FABP4 mRNA表达水平升高可能是导致子痫的期孕妇血清FABP4水平升高的主要原因.     

人类白细胞抗原G的表达与子痫前期发病的关系

目的 通过检测子痫前期孕妇相关组织中人类白细胞抗原G (HLA-G)的表达,探讨其与子痫前期发病的关系.方法 选择2009年3月至12月在陕西省妇幼保健院产科住院分娩的子痫前期孕妇30例,根据病情分为轻度子痫前期组8例,重度子痫前期组22例.选择同期健康孕妇30例为对照组.3组孕妇均以剖宫产方式分娩.采用ELISA法检测孕妇外周血、脐血及羊水中的可溶性HLA-G(sHLA-G)水平;采用蛋白印迹法检测胎盘、胎膜及脐带组织中HLA-G蛋白的表达.结果 (1)各组孕妇外周血、脐血、羊水中sHLA-G水平:轻、重度子痫前期组孕妇外周血sHLA-G水平分别为(50±14)、(30±6) μg/L,新生儿脐血中sHLA-G水平分别为(34±10)、( 26±8)μg/L,均明显低于对照组的(100±16)、(70±9) μg/L,分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);重度子痫前期组与轻度子痫前期组比较,差异也有统计学意义(P＜0.01).重度子痫前期组新生儿脐血中sHLA-G水平虽低于轻度子痫前期组,但差异无统计学意义(P＞0.05).轻、重度子痫前期组孕妇羊水中sHLA-G水平分别为(26±7)、( 25±5) μg/L,均低于对照组的(27±6)μg/L,但分别与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);轻度子痫前期组与重度子痫前期组比较,差异也无统计学意义(P＞0.05).(2)各组孕妇胎盘、胎膜及脐带组织中的HLA-G蛋白表达:对照组胎盘组织中HLA-G蛋白表达水平为1.59±0.36,胎膜组织中表达水平为0.42±0.09,胎盘组织中的HLA-G蛋白表达水平明显高于胎膜组织,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组脐带组织中HLA-G蛋白表达水平为0.24±0.17,分别与胎盘及胎膜组织中的HLA-G蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).轻度子痫前期组胎盘组织中HLA-G蛋白表达水平为0.78±0.21,重度子痫前期组为0.29±0.17,分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).轻、重度子痫前期组孕妇胎膜及脐带组织中均未检测出HLA-G蛋白的表达.结论 与健康孕妇相比,HLA-G在子痫前期孕妇外周血、脐血及胎盘组织中呈明显低表达,HLA-G表达水平的异常可能与子痫前期的发病有关.     

子痫前期患者血清MPO、hs-CRP水平与新生儿出生体重的相关性

目的:研究重度子痫前期(PE)患者血清髓过氧化物酶(MPO)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平与新生儿出生体重的关系。方法:选择2012年1～10月于我院产科住院分娩的60例重度PE孕妇,按发病时孕周不同分为早发型PE组(发病时孕周34周)和晚发型PE组(发病时孕周≥34周)各30例;另选同期正常晚期妊娠孕妇60例,根据孕周不同分为早发型(对照1组)和晚发型(对照2组)各30例。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清MPO水平,采用散射比浊法测定hs-CRP。结果:(1)早发型及晚发型PE组孕妇的血清MPO水平高于对照1组及对照2组,4组比较差异有统计学意义(P0.05);且早发型高于晚发型PE组,差异有统计学意义(P0.05);但对照1组与对照2组比较,差异无统计学意义(P0.05)。(2)早发型与晚发型PE组血清hs-CRP高于同期对照组,差异均有统计学意义(P0.05);早发型组与晚发型组比较,差异无统计学意义(P0.05)。(3)早发型与晚发型PE组的血清MPO、hs-CRP水平与新生儿出生体重均呈负相关(P0.05);对照组则与新生儿出生体重无明显相关性(P0.05)。结论:血清MPO、hs-CRP可能在PE的病理生理过程中发挥作用。重度PE患者血清MPO、hs-CRP水平升高可引起新生儿体重下降,其机制可能与胎儿宫内生长发育有关。     

子(癎)前期孕妇胎盘硫氧还蛋白系统的表达及其意义

目的 研究子(癎)前期孕妇胎盘硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)、硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)mRNA的表达情况和胎盘TR的活性,探讨Trx系统与子(癎)前期发病的关系.方法 用半定量逆转录-聚合酶链反应检测26例子(癎)前期孕妇(10例轻度子(癎)前期,16例重度子(癎)前期)和28例正常妊娠妇女(对照组)胎盘TR、Trx mRNA表达的情况.采用紫外分光光度计测定胎盘TR活性.结果 (1)子(癎)前期组胎盘TR mRNA(轻度:0.865±0.018,重度0.800±0.025)和Trx mRNA表达(轻度:0.873±0.008,重度0.818±0.025)均低于对照组(TR:0.893±0.023,Trx:0.918±0.023;P均＜0.05),重度子(癎)前期组的表达水平低于轻度子(癎)前期组(P均＜0.05);(2)子(癎)前期组胎盘TR活性分别低于对照组(轻度:17.732±1.653,重度:15.626±1.543,对照:19.770±2.432;P＜0.05),重度子(癎)前期组低于轻度子(癎)前期组(P＜0.05);(3)两组胎盘TR活性和TR mRNA表达呈正相关(r=0.612,P＜0.001).结论 Trx系统的表达异常可能与子(癎)前期的发病有关,并有重要作用.     

子痫前期孕妇胎盘组织中生长阻滞和DNA损伤45α基因的表达变化及其临床意义

目的 通过检测子痫前期孕妇胎盘组织中生长阻滞和DNA损伤45α(Gadd45α)基因的定位及表达变化,探讨其与子痫前期发病的关系.方法 选择2009年9月至2010年3月在重庆医科大学附属第一医院住院分娩的36例子痫前期孕妇为研究对象,按病情分为子痫前期轻度组(20例),子痫前期重度组(16例),另以同期择期行足月剖宫产术的18例健康孕妇为对照组.3组孕妇分娩后取胎盘组织标本,采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测各组孕妇胎盘组织中Gadd45α蛋白的定位及分布,采用逆转录(RT)-PCR技术检测各组孕妇胎盘组织中Gadd45α mRNA表达水平,采用蛋白印迹(western blot)技术检测各组孕妇胎盘组织中Gadd45α蛋白的表达水平.结果 (1)子痫前期轻度组及重度组胎盘组织中均有Gadd45α蛋白表达,主要定位于胎盘滋养层细胞的胞质及胞核中,血管内皮细胞及少量间质细胞胞核也可见阳性染色;对照组胎盘组织中阳性染色较弱,且仅见于胎盘滋养层细胞中,血管内皮细胞中未见阳性染色.(2)子痫前期重度组及轻度组胎盘组织中Gadd45αmRNA表达水平分别为0.75±0.07及0.44±0.13,明显高于对照组的0.18±0.04,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);子痫前期重度组Gadd45α mRNA表达水平与子痫前期轻度组比较,差异也有统计学意义(P＜0.05).(3)子痫前期重度组及轻度组胎盘组织中Gadd45α蛋白表达水平分别为1.34±0.17及0.65±0.15,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);两组也明显高于对照组的0.22±0.11,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 子痫前期患者胎盘组织中Gadd45α mRNA和蛋白表达水平均明显高于健康孕妇,并且随子痫前期患者病情加重其表达上调;Gadd45α定位在与子痫前期发生密切相关的胎盘滋养层细胞中,Gadd45α基因可能参与了子痫前期的发生与发展.     

滋养细胞内质网应激特征性分子葡萄糖调节蛋白及内质网凋亡因子caspase-12与子痫前期发病的关系

目的 探讨滋养细胞内质网超微结构变化及内质网应激特征性分子--内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白(GRP)78、94和内质网凋亡因子--半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)mRNA及蛋白表达与子痫前期发病的关系.方法 选择2008年7月-2010年1月在南京医科大学第一附属医院分娩的孕妇共65例,其中子痫前期孕妇30例(子痫前期组),健康孕妇35例为对照组.应用透射电镜扫描观察胎盘组织中滋养细胞内质网超微结构改变,逆转录(RT)PCR技术检测胎盘组织中GRP78、GRP94和caspase-12 mRNA的表达,蛋白印迹法检测胎盘组织中GRP78、GRP94和caspase-12蛋白的表达.结果 (1)对照组胎盘组织中滋养细胞内质网体积无明显增大,内质网无扩张也无肿胀变化;子痫前期组滋养细胞内质网水肿,数量减少,内质网体积增大,内质网扩张及液泡化,且内质网脱颗粒改变明显.(2)子痫前期组胎盘组织中GRP78 mRNA及蛋白表达水平分别为2.59±0.09及0.81±0.31,显著高于对照组的1.16±0.07及0.40±0.10,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01).(3)子痫前期组胎盘组织中GRP94 mRNA和蛋白表达水平分别为1.31±0.91及0.55±0.24,显著高于对照组的0.63±0.57及0.22±0.09,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01).(4)子痫前期组胎盘组织中caspase-12 mRNA和蛋白表达水平分别为4.03±0.65及1.56±0.17,显著高于对照组的1.85±0.85及0.91±0.69,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 子痫前期孕妇的滋养细胞内质网有明显的扩张及肿胀性改变;胎盘组织中GRP78、GRP94以及caspase-12 mRNA及蛋白表达水平比健康孕妇有明显升高.提示,内质网应激介导的滋养细胞凋亡可能是子痫前期发病的又一重要机制.     

人白细胞抗原-G mRNA各亚型在重度子(癎)前期胎盘组织中的表达

目的　探讨人白细胞抗原-G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)各亚型在早发型、晚发型重度子(癎)前期患者以及正常妊娠产妇胎盘组织中表达的差异. 方法　使用巢式RT-PCR方法检测11例早发型重度子(癎)前期患者、14例晚发型重度子(癎)前期患者以及8例正常分娩产妇胎盘组织中HLA-G各亚型mRNA表达的差异情况. 结果 与正常对照组相比,HLA-G1亚型在早发型和晚发型重度子(癎)前期患者的胎盘组织中表达明显减少(中位数:早发型组1.37,P<0.05;晚发型组24.90,P<0.05;正常对照组46.67,P<0.05).HLA-G2亚型在晚发型重度子(癎)前期患者的胎盘组织中表达水平较高(中位数:早发型组0;晚发型组21.59,P<0.05;正常对照组5.39).HLA-G5亚型在早发型以及晚发型重度子(癎)前期患者的胎盘组织中表达水平增高(中位数:早发型组19.23;晚发型组3.65;正常对照组1.33). 结论 HLA-G膜结合型亚型mRNA在胎盘组织中表达减少以及HLA-G可溶性亚型mRNA在胎盘组织中表达的增高,可能在子(癎)前期的发病机制中起到一定的作用.