再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞分离及培养

目的 分离再生障碍性贫血(再障)患儿骨髓间充质干细胞,进行体外培养,为进一步研究打下实验基础.方法 从再障患儿及正常志愿者骨髓中分离骨髓间充质干细胞,进行体外培养,诱导向成骨细胞、成脂细胞分化和流式细胞仪检测表面标志CD34、CD45、CD73和CD90.绘制生长曲线描述原代和传代细胞生长情况.结果 分离的贴壁细胞经向成骨细胞和脂肪细胞分化诱导培养,分别显示茜素红染色和油红染色阳性;CD73和CD90阳性.生长曲线显示,与正常志愿者相比再障患儿体外培养的骨髓间充质干细胞传代培养中生长能力减低.结论 再障患儿骨髓间充质干细胞存在异常,可能在再障发病机制中起着重要作用.     

骨髓间充质干细胞缺陷与获得性再生障碍性贫血

获得性再生障碍性贫血(AA)患者骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)缺陷已成为近年来研究的热点之一.该文对BM-MSCs 缺陷在AA 发病中的作用及其对AA 治疗的临床应用进行综述.越来越多的实验室证据证明了BM-MSCs 缺陷在AA 的发病中极有可能起着重要的作用,无论是其生物学特点、基因表达谱的缺陷,抑或是增殖分化能力、造血支持作用乃至免疫调节功能的耗竭,都成为在免疫失衡基础上促使AA 不断进展至难以恢复的重要节点.随着MSCs 研究的不断深化,将恢复骨髓造血微环境为主要目的的MSCs 输注可能成为AA 治疗的新模式.     

再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞体外造血支持作用的研究

目的：骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell, MSC）具有造血支持作用，再生障碍性贫血（aplastic anemia, AA）的发病机制涉及到造血微环境的异常，将两方面联系起来，体外研究再障患儿骨髓MSC的造血支持作用与再障的造血微环境异常的关系。方法：采集24例再障患儿和19例对照儿童的骨髓标本，分离、培养和扩增MSC；观察细胞形态及骨髓MSC成纤维细胞集落形成单位（CFU-F）计数分析；应用MTT法检测骨髓MSC粘附造血细胞的能力；应用ELISA检测骨髓MSC分泌干细胞生长因子（SCF）的浓度；对骨髓MSC进行贴壁培养，接种骨髓单个核细胞，计数扩增细胞数和红系爆式集落生成单位（BFU-E），粒细胞巨噬细胞集落生成单位（CFU-GM），混合细胞集落生成单位（CFU-GMME）。结果：①再障患儿骨髓MSC传代时间延长，CFU-F计数15.70±5.78显著低于对照组21.73±5.74，P<0.05；②再障患儿骨髓MSC培养上清中SCF的浓度30.69±16.82 pg/mL显著低于对照组50.74±14.83 pg/mL，P<0.01；③再障患儿骨髓MSC支持下的单个核细胞（MNC）细胞扩增总数和红系爆式集落生成单位（BFU-E），粒细胞巨噬细胞集落生成单位（CFU-GM），混合细胞集落生成单位（CFU-GMME）计数显著低于对照组，P<0.01。结论： 再障患儿骨髓MSC体外造血支持作用较对照儿童骨髓MSC显著降低，其发生机制可能与再障患儿骨髓MSC增殖能力减低及分泌SCF减少有关。     

再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞免疫调节特性和造血支持作用的研究

目的研究再生障碍性贫血(AA)患儿骨髓间充质干细胞(MSCs)的免疫调节特性和支持造血的功能。方法从AA患儿和成人骨髓中分离、培养、扩增MSCs,用流式细胞仪测定免疫标记;用3H-TdR法检测PHA刺激后,正常淋巴细胞转化以及MSCs对转化的影响;用造血祖细胞集落培养法(CFU-c)检测MSCs对造血的支持作用。结果从AA患儿骨髓中分离得到了MSCs,与正常骨髓MSCs具有相似的细胞形态和表面标志,但其增殖能力低于正常骨髓MSCs。AA-MSCs体外可抑制脐血淋巴细胞的转化,其抑制能力随细胞数量增加而增强,但与正常骨髓MSCs相比,抑制作用较弱。AA-MSCs体外可以支持脐血造血细胞的生长,但其支持能力只有正常骨髓MSCs的一半。结论AA-MSCs与正常MSCs虽体外生长形态相似,但传代能力、免疫抑制力及对造血集落生长的支持作用均较正常骨髓MSCs减低,提示间充质干细胞参与再生障碍性贫血的发病机制。     

再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞体外生物学特性及其与免疫抑制疗效的关系

目的：探讨再生障碍性贫血（再障）患儿骨髓间充质干细胞（MSC）体外生物学特性及与免疫抑制治疗（IST）疗效的关系,评价MSC异常在再障发生、发展中的作用。方法：对29例再障患儿进行了骨髓MSC培养,其中17例患儿接受IST,观察MSC体外生长特点、表面标志、细胞周期、对PHA刺激的外周血淋巴细胞增殖的抑制作用,并与5例正常儿童骨髓作对照;观察再障患儿MSC异常与IST疗效的关系。结果：55%（16/29）的再障患儿表现为不同程度的MSC生长异常,主要为MSC数量减少及增殖能力下降,其中以重型再障（SAA）、病程较长者或放/化疗后再障为多见。培养成功的再障患儿第3代MSC表面标志、细胞周期、转化生长因子-β1（TGF-β1）分泌水平及对PHA刺激的淋巴细胞增殖的抑制作用与对照组比较,差异均无显著性（P>0.05）。在17例接受IST患儿中,9例MSC生长基本正常的再障患儿经IST后8例达完全缓解,而8例MSC生长异常者仅2例达完全缓解,两组比较差异具有显著性（P<0.01）。结论：多数再障患儿骨髓MSC体外生长存在不同程度的异常,其MSC异常对IST后患儿骨髓造血功能恢复具有一定的负面影响。