卵巢上皮性癌组织中lnc-MyD88的表达及其与患者预后的关系

目的探讨长链非编码RNA-髓样细胞分化因子88(lnc-MyD88)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中的表达及其与患者预后的关系。方法选择2016年1月至2019年1月在四川省肿瘤医院接受初次肿瘤细胞减灭术且术后辅以铂类药物+紫杉醇方案化疗6～8个疗程的卵巢癌患者共70例, 收集其新鲜癌组织标本;另收集同期28例因妇科良性疾病行手术治疗患者的新鲜正常卵巢组织标本作为对照。采用逆转录(RT)-实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测卵巢癌和正常卵巢组织中lnc-MyD88、髓样细胞分化因子88(MyD88)mRNA的表达, 并采用Pearson相关法分析卵巢癌组织中lnc-MyD88与MyD88 mRNA表达的相关性;分析lnc-MyD88表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法计算卵巢癌患者的生存率, 单因素生存分析采用log-rank检验, 多因素生存分析采用Cox比例风险模型。结果 (1)RT-qPCR技术检测显示, 卵巢癌组织中lnc-MyD88、MyD88 mRNA的中位表达水平分别为0.009(0.000～0.049)、0.001(0.000～0.006)...     

Toll样受体2和4表达与原因不明复发性流产

母胎界面的免疫耐受对维持正常妊娠至关重要。Toll样受体2(TLR2)和TLR4是机体重要天然免疫受体分子之一,TLR2识别肽聚糖,TLR4识别内毒素脂多糖。通过信号转导机制引起核因子κB(NF-κB)等转录因子的活化并调节肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)等的产生。越来越多的证据认为,这些细胞因子与不明原因复发性流产(URSA)Th1/Th2细胞因子失衡密切相关。探讨TLR2和TLR4在胎盘中的表达,及其在URSA中的可能作用。     

ALKBH5调控AXL mRNA去甲基化促进卵巢癌细胞化疗耐药性

目的:探索m⁶A去甲基化酶ALKBH5调控受体酪氨酸激酶(AXL) mRNA甲基化,增强卵巢癌细胞(SKOV3)迁移、增殖及耐药的作用机制。方法:利用CPTAC数据库分析ALKBH5蛋白在卵巢癌中的表达情况及其与总生存期的相关性。对SKOV3细胞过表达或敲低ALKBH5,CCK-8法、平板克隆法、划痕实验分别检测细胞的增殖、迁移和化疗药物耐药性;流式细胞术检测细胞凋亡;RNA稳定性实验检测ALKBH5过表达或敲低对AXL mRNA降解的影响,以及AXL敲低后对紫杉醇(paclitaxel)药物敏感性的影响。结果:ALKBH5蛋白在卵巢癌细胞和组织中高表达,而ALKBH5表达升高可能是卵巢癌患者生存率降低的独立预后因素。ALKBH5高表达增强了细胞的增殖和迁移能力。ALKBH5敲低后卵巢癌细胞凋亡率提高,AXL mRNA降解半衰期下调。AXL mRNA沉默后,卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性增加。结论:卵巢癌细胞中ALKBH5具有降低AXL mRNA甲基化,稳定AXL mRNA,保障AXL功能的作用,进而强化了AXL高表达对卵巢癌细胞的耐药性。     

子(癎)前期患者胎盘组织中Toll样受体2和Toll样受体4的表达及意义

目的研究子痫前期（PE）患者胎盘组织中Toll样受体2（TLR2）和Toll样受体4（TLR4）的表达及其与胎盘中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）表达的关系,探讨PE胎盘中Toll样受体变化的意义。方法2005年1月至2006年12月在哈尔滨医科大学第一临床医学院采用免疫组化和RT-PCR法检测PE患者和正常晚期妊娠妇女胎盘组织中TLR2和TLR4的定位及表达,同时用脂多糖（LPS）体外刺激胎盘组织中的TLR4,检测其上清液中TNF-α、IL-6的变化。其中PE患者44例（PE组）,同期正常晚期妊娠妇女22例（对照组）。结果PE组和对照组胎盘组织中均有TLR2和TLR4的表达,其中PE组TLR4表达明显比对照组增强,组间差异有显著性意义（P〈0.05）;LPS体外刺激PE组胎盘组织,导致TNF-α、IL-6分泌量增加,刺激后2hPE组TNF-α、IL-6分泌量与对照组比较差异无显著意义（P〉0.05）,刺激后6hPE组TNF-α、IL-6的分泌量升高明显,与对照组比较,差异有显著性意义（P〈0.01）。结论PE患者胎盘中TLR4表达增加与TNF-α、IL-6改变密切相关,是造成局部细胞因子微环境异常的主要因素,其增加可能是PE发病机制中的关键环节之一。     

孕激素对重度子痫前期TLR4信号通路的调控作用

目的:研究孕激素在重度子痫前期孕妇外周血血浆中的水平及其在重度子痫前期发病机制Toll样受体4(TLR4)信号通路中的作用。方法:选择重度子痫前期孕妇30例(重度子痫前期组)和正常孕妇30例(正常对照组),采用稀释定量法分别测定其血浆孕激素水平;原代培养重度子痫前期组孕妇外周血单个核细胞(PBMC),以不同浓度(0、10-8mol/L、10-6mol/L、10-4mol/L)孕激素(孕酮)刺激,实时定量聚合酶联反应检测TLR4、髓样分化因子88(My D88)、核转录因子-κB(NF-κB)mRNA的表达;酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-6(IL-6)蛋白的表达。结果:重度子痫前期组孕妇血浆孕激素水平明显低于正常对照组(P0.05)。随着孕激素浓度的增加,重度子痫前期组孕妇TLR4、My D88、NF-κB mRNA的相对表达量逐渐减少,4组组间两两比较,差异均有统计学意义(P0.01);TNF-α及IL-6蛋白的表达均减少,4组组间两两比较,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:孕激素水平在重度子痫前期孕妇外周血浆中明显降低,孕激素可在重度子痫前期发病机制TLR4信号通路中发挥抑制作用,从而对机体产生保护作用。     

miR-217靶向调控TLR4对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-217靶向调控TLR4对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用双荧光素酶试验验证TLR4为miR-217的下游靶基因,在卵巢癌细胞中转染NC mimics和miR-217 mimics,并设立mock对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测TLR4 mRNA的表达量、Western blotting检测TLR4蛋白的表达量。然后通过CCK8、划痕和Transwell小室法检测卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果 miR-217靶向调控TLR4的3'-UTR,降低了荧光素酶的表达活性。与NC mimics组比,miR-217 mimics组TLR4 mRNA和蛋白表达水平明显降低,且miR-217 mimics组细胞的增殖、迁移、侵袭能力也均降低。结论 miR-217通过靶向调控TLR4抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

稽留流产患者绒毛组织中TLR4、NF-κB和HBD2的表达及其相关性

稽留流产是常见的病理性妊娠之一,病因复杂,发病机制尚未完全阐明.生殖免疫学认为,稽留流产是母胎间免疫平衡失调,母体对胎儿产生免疫排斥的结果.Toll样受体4( Toll-like receptor 4,TLR4)是天然免疫系统中一类重要的模式识别受体,研究发现,滋养细胞能够表达TLR4;TLR4通过一系列跨膜信号传导激活核因子κB(NF-κB),引起大量炎症因子的合成和释放,发挥天然免疫和获得性免疫的作用[1-3].研究发现,人β防御素2(human β defensin,HBD2)具有直接杀伤细菌和抗病毒等活性,对维持生殖道微生物环境的稳态及妊娠的成功起关键作用[1].为探明TLR4、NF-κB、HBD2在稽留流产与健康早期妊娠妇女绒毛组织中的表达情况,本研究采用逆转录PCR( RT-PCR)和ELISA方法对其mRNA和蛋白表达水平进行检测,以探讨TLR4、NF-κB和HBD2在稽留流产发病过程中的作用.     

紫杉醇联合LY294002对卵巢癌3AO细胞CyclinD1表达的影响

目的通过对人上皮性卵巢癌细胞株3AO在紫杉醇及紫杉醇联合2-（4-吗琳基）-8-苯基-4氢-1-苯并毗喃-4-酮（LY294002）作用后细胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表达及细胞周期变化和细胞凋亡的分析,为卵巢癌化疗寻求一种新的高效辅助治疗手段及一种高效的生物学标志物。方法采用RT-PCR技术,检测3AO在空白组、单纯紫杉醇组、和LY294002预处理24h后紫杉醇（紫杉醇＋LY294002）作用组的CyclinD1的表达。并采用流式细胞术分析3组CyclinD1的表达水平及细胞凋亡及细胞周期的变化。结果 3AO在空白组、紫杉醇组和紫杉醇联合LY294002组CyclinD1mRNA表达水平不同,呈逐渐减弱趋势。空白组、紫杉醇组和紫杉醇联合LY294002组细胞周期各时相、细胞凋亡率及细胞增殖指数PI（S＋G2/M）值不同,细胞凋亡率逐渐增加,细胞增殖指数PI值逐渐下降,细胞生长受到抑制,CyclinD1表达水平逐渐下降。结论卵巢癌3AO中存在CyclinD1基因的异常扩增及过表达,CyclinD1的表达水平与细胞增殖呈正相关。紫杉醇联合LY294002能促进3AO凋亡,LY294002对紫杉醇诱导3AO凋亡具有协同效果。     

TLR2、TLR4在特发性胎儿生长受限患者胎盘组织的表达及意义

目的:探讨特发性胎儿生长受限(IFGR)胎盘组织中Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)的表达及意义,讨论IFGR的可能病因及发病机制。方法:选取我院2009年6月~2010年4月剖宫产分娩的IFGR孕妇30例为实验组,剖宫产分娩的正常足月孕妇30例为对照组。用免疫组化法检测胎盘组织TLR2、TLR4的表达水平。结果:(1)实验组及对照组的胎盘组织中均有TLR2、TLR4蛋白不同程度的阳性表达;(2)实验组TLR2、TLR4在胎盘合体滋养细胞上的表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胎盘组织中TLR2、TLR4表达增加促使了IFGR的发生,可能是IFGR发病机制中的关键环节之一,为临床上应用免疫干预手段预防或治疗IFGR提供了依据。     

抑制长链非编码RNA FAL1表达对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响及其分子机制

目的:探索上皮性卵巢癌细胞与正常人卵巢细胞中长链非编码RNA(lncRNA)FAL1的表达差异及沉默卵巢癌细胞株SKVO3中lncRNA FAL1的表达对卵巢癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测组织中lncRNA FAL1表达水平;设计并合成FAL1-siRNA引物序列转染SKVO3,通过细胞划痕试验检测卵巢癌细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞的侵袭能力,流式细胞术检测卵巢癌细胞的凋亡,蛋白质印迹(Western blotting)检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)和磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)蛋白的表达水平。结果:lncRNA FAL1在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢组织([15.04±2.24)vs.(2.93±0.39),P0.05]。沉默lnc RNA FAL1的表达后,卵巢癌细胞的凋亡能力显著增强([18.38±0.73)%vs.(2.86±0.09)%,P0.05],而卵巢癌细胞迁移、侵袭能力均降低([6.68±1.49)μm vs.(12.85±2.56)μm,(25.80±2.59)个vs.(145.6±5.23)个,均P0.05],MEK/ERK通路MEK1/2和ERK1/2蛋白磷酸化水平明显降低(P0.05)。结论:lncRNA FAL1通过激活MEK/ERK通路影响上皮性卵巢癌细胞的侵袭、迁移及凋亡,其表达异常增高可能是卵巢癌发生发展的重要分子机制。     

多囊卵巢综合征的临床分型及意义

多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)的主要特点包括高雄激素临床表现和(或)实验室检测雄激素水平升高、慢性无排卵、卵巢多囊样改变(polycystic ovary,PCO)、雄性脂肪分布、胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)和高胰岛素血症等,是导致女性不孕的主要原因,且患者妊娠后流产的风险也增加;其远期并发症包括子宫内膜癌、乳腺癌、糖尿病、心血管疾病、高血压等[1-4].     

抑制长链非编码RNA FAL1表达对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响及其分子机制

目的：探索上皮性卵巢癌细胞与正常人卵巢细胞中长链非编码RNA（lncRNA） FAL1的表达差异及沉默卵巢癌细胞株SKVO3中lncRNA FAL1的表达对卵巢癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响。方法：利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）技术检测组织中lncRNA FAL1表达水平;设计并合成FAL1-siRNA引物序列转染SKVO3,通过细胞划痕试验检测卵巢癌细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞的侵袭能力,流式细胞术检测卵巢癌细胞的凋亡,蛋白质印迹（Western blotting）检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）和磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2（p-MEK1/2）蛋白的表达水平。结果：lncRNA FAL1在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢组织[（15.04±2.24） vs. （2.93±0.39）,P＜0.05]。沉默lncRNA FAL1的表达后,卵巢癌细胞的凋亡能力显著增强[（18.38±0.73）% vs. （2.86±0.09）%,P＜0.05],而卵巢癌细胞迁移、侵袭能力均降低[（6.68±1.49）μm vs. （12.85±2.56）μm,（25.80±2.59）个 vs. （145.6±5.23）个,均P＜0.05],MEK/ERK通路MEK1/2和ERK1/2蛋白磷酸化水平明显降低（P＜0.05）。结论：lncRNA FAL1通过激活MEK/ERK通路影响上皮性卵巢癌细胞的侵袭、迁移及凋亡,其表达异常增高可能是卵巢癌发生发展的重要分子机制。     

TLR2及β-arrestin2在子宫内膜癌中的表达及关系的初步研究

目的:初步研究TLR2及β-arrestin 2在子宫内膜癌发生、发展及转移中的表达及关系。方法:(1)选取2005年11月至2011年9月北京大学人民医院的组织标本80例,其中正常子宫内膜20例,子宫内膜非典型增生20例,子宫内膜癌40例(其中复发转移癌20例)。采用免疫组化染色检测TLR2及β-arrestin 2的表达。(2)分别转染β-arrestin 2空白荧光质粒(GFP)、β-arrestin 2全长质粒(全长质粒过表达组)及β-arrestin 2干扰RNA质粒(β-arrestin 2-iRNA干扰组)至子宫内膜癌HEC-1B细胞,real-time PCR方法验证转染效果,同法测定各组总RNA中TLR2、MYD88、NF-κB的表达。结果:子宫内膜癌组织中TLR2、β-arrestin 2表达均显著高于正常内膜组织及非典型增生组织(P均0.01),TLR2与β-arrestin 2表达呈正相关(r=0.875,P0.01)。TLR2、MYD88、NF-κB在β-arrestin 2-iRNA干扰组中表达降低(P0.05),在全长质粒过表达组中表达增高(P0.05)。结论:β-arrestin 2可作为TLR2激动剂,激活TLR2途径的MyD88依赖型信号转导通路活化NF-κB。     

血根碱对紫杉醇耐药卵巢癌A2780/taxol细胞生长及化疗敏感性影响的研究

目的:探讨血根碱对紫杉醇耐药卵巢癌A2780/taxol细胞生长及化疗敏感性的影响和机制。方法:培养A2780/taxol细胞,分为对照组、血根碱组、紫杉醇组、血根碱+紫杉醇组,对照组加0.9%氯化钠液,血根碱组加2.0μmol/L血根碱,紫杉醇组加2μg/ml紫杉醇,血根碱+紫杉醇组同时加2.0μmol/L血根碱及2μg/ml紫杉醇。应用MTT法、流式细胞仪和Western blot法检测血根碱对A2780/taxol细胞增殖、凋亡、克隆形成及Bax、β-tubulinⅢ蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,血根碱组、紫杉醇组及血根碱+紫杉醇组均能显著抑制A2780/taxol细胞增殖,血根碱+紫杉醇组抑制率最高(P0.05);紫杉醇组、血根碱组及血根碱+紫杉醇组细胞克隆形成率[(35.67±7.37)%、(27.67±2.52)%和(8.87±3.38)%]明显降低,血根碱+紫杉醇组降低最为明显(P0.05);紫杉醇组、血根碱组及血根碱+紫杉醇组细胞凋亡率[(18.01±7.13)%、(57.03±12.91)%和(81.68±11.23)%]明显增加,血根碱+紫杉醇组细胞凋亡率最高(P0.05);紫杉醇组、血根碱组、血根碱+紫杉醇组Bax蛋白表达显著上调、β-tubulinⅢ蛋白表达显著降低,血根碱+紫杉醇组表达量变化最大(P0.05)。结论:血根碱可下调β-tubulinⅢ表达,诱导肿瘤细胞凋亡,增强紫杉醇对耐药卵巢癌细胞的生长抑制作用,从而促进其对紫杉醇药物的敏感性。     

雌、孕激素和促性腺激素对卵巢癌细胞存活率、Bcl-2和Bax表达的影响

目的:研究雌(E)、孕激素(P)及人绒毛膜促性腺激素(HCG)对卵巢癌细胞存活率以及Bcl-2、Bax表达的影响。方法:采集卵巢癌患者术中切除的组织标本进行细胞培养,按药物作用不同分为3组:雌激素组(E组)、孕激素组(P组)、人绒毛膜促性腺激素组(HCG组)。MTT法和流式细胞技术检测细胞凋亡率与细胞周期;药物作用48h后,荧光定量PCR法进行相对定量,检测雌、孕激素对癌细胞Bcl-2、Bax表达的影响。结果:(1)高浓度(10-4mol/L)雌、孕激素能降低癌细胞的存活率,呈时间-剂量依赖性(P0.001);低浓度(10-8mol/L)雌激素能提高卵巢癌细胞的存活率。低浓度(50U)HCG对卵巢癌细胞存活率的影响不明显。150U/ml和200U/ml HCG作用72h后,对卵巢癌细胞存活率的影响显著(P0.05)。(2)高浓度(10-4mol/L)雌、孕激素能促进卵巢癌细胞凋亡(P0.001),但当雌激素浓度为10-8mol/L时,却抑制细胞凋亡(P0.001);HCG对卵巢癌细胞凋亡率的影响无显著差异。雌、孕激素和HCG对卵巢癌的细胞周期均无显著影响。(3)高浓度雌、孕激素(10-4mol/L)能抑制卵巢癌细胞Bcl-2的表达(P0.05),促进Bax的表达(P0.001);低浓度E(10-8mol/L)上调Bcl-2的表达(P0.001),下调Bax的表达(P0.001)。结论:高浓度雌激素与孕激素对体外培养的卵巢癌细胞有促进凋亡、降低存活率的作用,这可能与下调Bcl-2的表达和促进Bax的表达有关。     

缺氧小鼠滋养细胞HMGB1通过TLR4增加内皮细胞通透性

目的:探讨高迁移率族蛋白1-Toll样受体4(HMGB1-TLR4)信息途径在子痫前期(PE)内皮细胞屏障功能障碍过程中的作用。方法:原代培养C57BL/6小鼠胎盘滋养细胞(PMT)与腹主动脉内皮细胞(MAECs),PMT或HMGB1 siRNA干预后的PMT缺氧培养,将缺氧培养PMT上清或rHMGB1作用于MAECs。检测缺氧培养PMT的细胞活性、细胞凋亡、高迁移率族蛋白(HMGB1)基因与蛋白表达水平;检测缺氧培养PMT上清处理MAECs后,Toll样受体4(TLR4)蛋白表达及单层细胞通透性。再利用TLR4基因敲除小鼠(TLR4-/-)MAECs,观察缺氧培养PMT上清对TLR4基因敲除MAECs通透性的改变。结果:缺氧24h可诱导PMT HMGB1 mRNA、蛋白表达增加,缺氧培养上清HMGB1含量显著高于常氧培养组(P0.05);PMT缺氧培养上清可明显增加MAECs单层细胞的通透性及TLR4蛋白表达,siRNA沉默PMT HMGB1或MAECs TLR4基因敲除可逆转PMT缺氧培养诱导的MAECs单层细胞通透性(P0.05)。结论:缺氧小鼠滋养细胞释放HMGB1通过TLR4途径增加MAECs通透性。     

原代卵巢上皮性癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定

目的 研究无血清培养基悬浮培养原代卵巢上皮件癌(卵巢痛)细胞,筛选并鉴定卵巢癌千细胞样细胞.方法 卵巢癌组织取自1例卵巢浆液性囊腺痛Ⅲ期、细胞分化2级的患者,分离的原代细胞培养于无血清培养液[添加表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白血病抑制因子(LIF)和胰岛素等细胞因子]得到球样细胞团细胞,并采用常规含血清的培养液进行培养得到贴壁细胞.应用定量PCR技术检测球样细胞团细胞表达干细胞标志基因的情况,应用四甲基偶氮唑蓝比色法、Hoechst 33342染色的流式细胞仪检测球样细胞团细胞的耐药性,并榆测球样细胞团细胞的裸鼠体内致瘤性.结果 在无血清添加细胞因子的培养条件下,原代卵巢癌细胞形成球样细胞团,这些细胞能够存活、增殖、具有自我更新的功能.球样细胞团细胞Nanog、Oct-4、Sox-2、nestin、CD_(133)、CD_(117)及ABCG2等干细胞标志基因的mRNA表达量为分化贴壁细胞的14～400倍.球样细胞团细胞还具有对顺铂和紫杉醇更强的耐药性,将顺铂与紫杉醇同时作用于贴壁细胞及球样细胞团细胞48及72 h后,球样细胞团细胞抑制率为31%、29%,显著低于分化细胞(抑制率为61%、73%),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).球样细胞团细胞中Hoechst 33342染色阳性的细胞比例为21.83%,而贴壁细胞为83.04%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).500个球样细胞闭细胞可在裸鼠体内成瘤,肿瘤组织的病理特征与原发肿瘤相似,且高表达上皮性肿瘤标志物CA_(125)和细胞角蛋白7.结论 采用无血清悬浮培养法从原代卵巢癌组织中获取的球样细胞团细胞,可能含有比例较高的具有增殖和分化能力的卵巢癌干细胞样细胞,并具有干细胞的功能.     

血小板活化因子受体在不同病理类型卵巢上皮性癌中的表达及意义

卵巢上皮性癌(卵巢癌)是妇科常见的恶性肿瘤之一,病理类型复杂,包括卵巢浆液性腺癌、黏液性腺癌、子宫内膜样癌及透明细胞癌等.目前的治疗方式仍然是手术及术后辅以铂类和紫杉醇等药物为主的化疗,但效果不满意,5年生存率仍徘徊在40%左右[1].     

干扰CLDN6基因表达通过调控MAPK/ERK信号通路对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的:探讨Claudin-6(CLDN6)在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的表达及其对卵巢颗粒细胞(GC)增殖与凋亡的影响和可能作用机制.方法:SD雌性大鼠皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)诱导建立PCOS模型,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和West-ern blot法检测卵巢组织中CLDN6表达.分离培养原...     

卵巢癌细胞系CAOV3体外化疗后survivin mRNA表达的变化

目的　探讨卵巢癌细胞系CAOV3体外化疗后survivinmRNA表达的变化。方法　采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测不同浓度 (分别为 2 0 0 0、2 0 0、2 0、2、0 2mg/L)紫杉醇或卡铂对CAOV3细胞体外生长的抑制作用。应用RT PCR技术检测高浓度紫杉醇或卡铂 (分别为 2 0 0、5 0 0mg/L)处理 1d ,低浓度紫杉醇或卡铂 (分别为 2 0、5 0mg/L)处理 1、3、5d后存活的卵巢癌细胞中survivinmRNA的表达水平 ,同时利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果　不同浓度 (分别为 2 0 0 0、2 0 0、2 0、2、0 2mg/L)紫杉醇或卡铂作用后CAOV3细胞的抑制率分别为 94 %、88%、34%、2 2 %、13%或 97%、4 6 %、14 %、9%、7% ,随着药物浓度的下降 ,细胞受抑制程度明显减弱 (P <0 0 5 )。低浓度紫杉醇处理1、3、5d后CAOV3细胞的凋亡率分别为 15 %、2 3%和 2 9% ;高浓度紫杉醇处理 1d后CAOV3细胞的凋亡率为 4 3%。低浓度卡铂处理 1、3、5d后CAOV3细胞的凋亡率分别为 14 %、2 2 %和 2 6 % ;高浓度卡铂处理 1d后CAOV3细胞的凋亡率为 19%。紫杉醇或卡铂低浓度处理 3d及高浓度处理 1d后存活的卵巢癌细胞中survivinmRNA的表达量均明显高于未加药的对照 (P <0 0 1) ,尤其是紫杉醇处理后存活的卵巢癌细胞中survivinmRNA的表达量增加更为明显