60Co γ射线对肝癌细胞株HepG2增殖和细胞周期的影响

目的观察^60Coγ射线对肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡和细胞周期的影响，并探讨γ射线对细胞周期改变与p27^kip1蛋白表达和分布之间的关系。方法以不同剂量的γ射线照射培养的HepG2细胞，观察细胞形态和生长曲线变化，同时应用流式细胞计数仪观察细胞周期和凋亡的改变，并应用免疫荧光方法观察p27^dip1蛋白的表达和分布改变。结果^60Coγ射线照射细胞引起HepG2细胞株剂量依赖性的生长抑制和凋亡增加。^60Coγ射线可引起细胞G2／M期阻滞，同时p27^kip1表达明显抑制，并主要分布于细胞浆。结论^60Coγ射线所导致的肝癌细胞株HepG2细胞的G2／M阻滞可能与细胞内D27^kip1“pl的表达抑制和细胞浆的分布比例增加有关。     

60Coγ射线对大鼠星形胶质瘤细胞增殖抑制作用的机理研究

目的 研究^60Coγ射线对大鼠星形胶质瘤细胞的增殖抑制作用的机制。方法 ^60Coγ射线单次照射，分为对照组、4、16和64Gy组。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞生长曲线。照射后48h采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布，免疫组化法检测P53及P21蛋白的表达。结果 16和64G主y组C6细胞出现明显的增殖抑制。随着吸收剂量的增大，凋亡比例显著增加（P〈0．01），G0／G1期的细胞比例增加，S期的细胞比例降低。野生型p53与p21随着照射剂量增加，表达增强。P53与P21蛋白表达强度呈正相关，相关系数斜率为0．889。结论 γ射线对大鼠星形胶质瘤细胞系C6细胞的增殖抑制通过诱导细胞凋亡和G1期阻滞实现，G1期阻滞的分子调控通路可能为p53-p21通路。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导HeLa细胞p21WAF1/CIP1表达的分子机制研究

目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDIs）诱导肿瘤细胞产生周期阻滞以及诱导p21^WAF1／CIP1表达的分子机制。方法：以人宫颈癌HeLa细胞为模型，用曲古抑茵素A（TSA）处理HeLa细胞，通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡，通过Western印迹及RT-PCR检测周期相关分子的蛋白及mRNA的表达；并构建TSA靶分子启动子区的荧光素酶报告质粒，进一步检测TSA的主要作用位点，寻找相关作用途径。结果与结论：TSA可诱导HeLa细胞发生周期阻滞，并呈现明显的剂量和时间依赖关系，加大用药剂量及延长用药时间可诱导凋亡。TSA可显著诱导p21^WAF1／CIP1的表达，表现为转录水平的调节，其变化可以指示周期阻滞的程度。p21^WAF1／CIP1启动子区3′端是TSA作用的主要位点，同样被TSA诱导表达增加的p53很可能通过与其效应元件的结合而使TSA诱导p21^WAF1／CIP1表达的总效果增强。     

p53在调节细胞周期阻滞和细胞凋亡中的作用及其机制

p53作为抑癌基因，在各种应激情况下（包括电离辐射所致DNA损伤、核苷酸缺失、低氧或癌基因激活）调控细胞周期进程和细胞凋亡过程。本综述了p53及其下游分子在细胞周期和细胞凋亡中的作用，在此基础上探讨p53在选择细胞周期阻滞和细胞凋亡中的影响因素。     

p16负向调控通路与辐射诱导的G1期阻滞

辐射诱导细胞发生G1期阻滞，其分子调控机制尚不十分清楚。近期献报道，独立于p53基因之外的p16-Cyclins-CDKs(细胞周期素依赖性激酶)细胞周期负向调控通路在紫外线和电离辐射照后发生改变，提示此通路可能在辐射诱导的G1期阻滞中发挥至关重要的作用。     

p53在调节细胞周期阻滞和细胞凋亡中的作用及其机制

p53作为抑癌基因,在各种应激情况下(包括电离辐射所致DNA损伤、核苷酸缺失、低氧或癌基因激活)调控细胞周期进程和细胞凋亡过程。本文综述了p53及其下游分子在细胞周期和细胞凋亡中的作用,在此基础上探讨p53在选择细胞周期阻滞和细胞凋亡中的影响因素。     

p53与HBV相互作用对7721细胞凋亡及p21启动子的影响

为了观察HBV与p53是否存在相互作用的关系，以进一步揭示与原发性肝细胞肝癌发生发展的相关机制，选用7721肝癌细胞系（表达野生型p53，HBV阴性）为靶细胞，应用磷酸钙转染法，将pCMVp53单独或者与野生型HBV质粒（pCMVHBVa）、突变型HBV质粒（pCMVHBVb）共转染细胞，用annexin-V-FITC标记及流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。各组另与含有p21基因启动子的荧光素酶报告基因质粒p21-luc共转染细胞，通过检测荧光毒酶的表达，了解p21启动子的活化情况。结果表明，单独的pCMVp53质粒转染7721细胞系能够促进p21报告基因的表达，细胞凋亡率升高；pCMVp53与pCMVHBV。共同转染时，对p21基因启动子的激活作用增强、细胞凋亡率明显增加，而与pCMVHBVb共转染时则否。提示HBV在该细胞内的复制能够诱导增强p53的作用并对其下游基因p21的转录有促进作用，导致细胞凋亡的增强。     

辐射联合外源性野生型p53基因对不同p53状态的黑色素瘤细胞系的生物学效应

目的研究辐射结合腺病毒（Ad CMV）载体介导的p53基因转导对不同p53状态的人黑色素瘤细胞系基因转移效率、凋亡和辐射敏感性的影响。方法用复制缺陷的重组腺病毒载体（AdCMV-p53）介导入p53基因转导1Gy X射线预照射的黑色素瘤细胞系A375（wt p53）和WM983a（mu p53），RT-PCR检测mRNA水平，流式细胞仪测定细胞周期阻滞及外源性P53蛋白表达情况，Tunel法检测细胞凋亡，克隆形成率测定辐射后细胞存活率。用携带报道基因的复制缺陷重组腺病毒载体AdCMV-GFP作为对照。结果1Gy X射线照射可较高地增加AdCMV-p53对A375和WM983a细胞系的基因转导效率，转导的外源性野生型p53可在两种细胞中高效表达，并诱导细胞周期G1期阻滞；单纯转导p53对A375（wt p53）细胞无明显诱导凋亡和生长抑制效应，但可部分诱导WM983a（mu p53）细胞凋亡；而转导p53基因48h后给予X射线辐射，两种细胞的克隆存活率较其对照组均明显减低，外源性p53基因对WM983a（mu p53）细胞的辐射增敏作用较A375（wt p53）细胞明显。结论外源性野生型p53基因过表达可增加黑色素瘤细胞系A375和WM983a的辐射敏感性，但对WM983a细胞系的辐射增敏作用高于A375细胞系。表明p53是基因治疗黑色素瘤较好的候选基因。     

p16负向调控通路与辐射诱导的G1期阻滞

辐射诱导细胞发生G1期阻滞,其分子调控机制尚不十分清楚.近期文献报道,独立于p53基因之外的p16-Cyclins-CDKs(细胞周期素依赖性激酶)细胞周期负向调控通路在紫外线和电离辐射照后发生改变,提示此通路可能在辐射诱导的G1期阻滞中发挥至关重要的作用.     

腺病毒介导p53基因转染增加人胃癌细胞的放射敏感性

目的评价腺病毒介导p53基因(Adp53)转染对人胃癌细胞的凋亡效应和放射增敏作用。方法以重组腺病毒介导p53基因感染4种不同p53状况的人胃癌细胞，用免疫组织化学法和Western blot法检测P53蛋白在胃癌细胞中的表达；用细胞集落形成法检测细胞存活率；用TUNEL法检测细胞凋亡。胃癌细胞感染Adp53后照射4Gy，用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡；胃癌细胞种植肿瘤内注射Adp53后照射6Gy，以肿瘤相对体积增长曲线观察肿瘤抑制情况。结果1：100效靶比(MOI)Adp53产生细胞高转染率，以及p53基因在4种胃癌细胞中均高表达，并产生G2/M期阻滞、凋亡增加和细胞增殖抑制。如果以凋亡评价放射效应，Adp53转染对4Gy照射4种细胞的凋亡率比值为：W细胞3．0，M细胞3．6，neo细胞2．2，823细胞2．5。体内实验结果显示，Adp53对w细胞肿瘤6Gy照射的抑瘤率比值为1．41，而对M细胞肿瘤为1．91。结论腺病毒介导p53基因转染产生细胞凋亡并提高人胃癌细胞的放射敏感性，这种作用不依赖于细胞内在的p53状况。     

X射线诱导survivin在EL-4细胞中的表达及与P53表达的相互关系

目的观察电离辐射对EL-4细胞survivin蛋白表达的影响及与P53表达的关系。方法采用流式细胞术（FCM）观察EL-4细胞接受4GyX射线照射后，survivin蛋白的表达、P53表达及细胞凋亡的变化。结果4Gy X射线照射EL-4细胞，Survivin蛋白表达受抑制，在4h明显降低，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．001）；照射组P53蛋白表达水平均高于对照组，在此时间点上与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。照射后4h细胞凋亡率显著升高，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．001）。结论survivin与P53在细胞凋亡调控中发挥重要作用，survivin表达与P53表达水平相关。     

P21蛋白和生存素在美伐他汀诱导人非小细胞肺癌凋亡中的作用

目的 研究P21蛋白和生存素（survivin）在美伐他汀诱导非小细胞肺癌（NSCLC）细胞凋亡中的作用及其分子机制。方法 应用MTT法检测美伐他汀对A549、NCI-H520细胞株的抑制作用,应用流式细胞仪、透射电镜研究美伐他汀对A549、NCI-H520细胞株的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,应用流式细胞仪和RT-PCR检测P21蛋白、P21mRNA、生存素mRNA的表达。结果 MTT试验表明美伐他汀对A549、NCI-H520增殖有明显的抑制作用;流式细胞仪检测显示美伐他汀诱导A549、NCI-H520细胞G0／G1期阻滞;Annexin V结果证实美伐他汀可诱导A549、NCI-H520细胞凋亡,而且凋亡率随剂量的增加而增加。美伐他汀对A549、NCI-H520细胞P21mRNA及P21总蛋白的表达无影响,但可使P21胞膜蛋白的表达下降。美伐他汀作用后生存素mRNA表达下降。加入甲羟戊酸可完全逆转美伐他汀的上述作用。结论 美伐他汀通过甲羟戊酸途径诱导NSCLC G0／G1期阻滞,抑制增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制P21蛋白异戊二烯化和下调生存素mRNA表达有关。     

外源性野生型p53基因对不同p53功能状态的人肺腺癌细胞株的放射增敏作用

目的 观察外源性野生型p53基因(wtp53)对人肺腺癌细胞株的放射增敏作用,比较不同p53基因状态对照射的影响。 方法 免疫组织化学法、聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP法)筛选p53基因状态不同的两种人肺腺癌细胞系A549及GLC-82,用腺病毒介导wtp53 (Ad-p53)转染后分别给予0、2和4 Gy照射,测定集落形成率,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡。结果 A549细胞的p53基因正常,而GLC-82细胞的p53基因第7外显子突变,转染后wtp53在两种细胞内均成功表达。Ad-p53对A549及GLC-82细胞抑制率分别为55%和88%,对GLC-82抑制作用较强(P<0.01)。转染Ad-p53后照射,两种细胞集落形成率较对照组明显下降(P<0.001)。流式细胞仪分析Ad-p53使G₁期细胞比例增加和凋亡指数增高,Ad-p53＋照射组最为明显(P<0.001)。结论 Ad-wtp53可以抑制人肺腺癌细胞株的生长,增加其放射敏感性,其放射增敏作用并不依赖于细胞内源性p53基因的状态。     

In utero radiation-induced apoptosis and p53 gene expression in the developing rat brain

Purpose : This study addressed the question of the role of the p53 gene in prenatal low-dose radiation-induced apoptosis in the neuroepithelium, in an effort to elucidate molecular mechanisms involved in the extreme radiosensitivity of the developing brain. Materials and methods : Pregnant Wistar rats were exposed to a single dose of 10, 20 or 40 cGy of X-rays on day 15 or 17 of gestation. Animals were sacrificed 4 or 24 h after exposure. Apoptosis was studied by gel electrophoresis of isolated DNA and in situ by the TUNEL reaction. Expression of the p53 gene was studied by immunocytochemistry and Western analysis, as well as Northern analysis, for the detection of the protein and mRNA respectively. Results : In utero low-dose irradiation led to apoptosis and an increase of p53 gene expression in the developing rat brain. Apoptotic as well as p53 immunopositive cells were detected among proliferating, migratory and post-mitotic neurones in the developing neuroepithelium following prenatal irradiation, even after only 10 cGy. In addition to the p53 protein, p53 mRNA brain levels were also increased following prenatal irradiation. Conclusions : Low-dose prenatal irradiation of the developing brain led to p53 induction and cell death by apoptosis.     

In utero radiation-induced apoptosis and p53 gene expression in the developing rat brain

PURPOSE: This study addressed the question of the role of the p53 gene in prenatal low-dose radiation-induced apoptosis in the neuroepithelium, in an effort to elucidate molecular mechanisms involved in the extreme radiosensitivity of the developing brain. MATERIALS AND METHODS: Pregnant Wistar rats were exposed to a single dose of 10, 20 or 40 cGy of X-rays on day 15 or 17 of gestation. Animals were sacrificed 4 or 24h after exposure. Apoptosis was studied by gel electrophoresis of isolated DNA and in situ by the TUNEL reaction. Expression of the p53 gene was studied by immunocytochemistry and Western analysis, as well as Northern analysis, for the detection of the protein and mRNA respectively. RESULTS: In utero low-dose irradiation led to apoptosis and an increase of p53 gene expression in the developing rat brain. Apoptotic as well as p53 immunopositive cells were detected among proliferating, migratory and post-mitotic neurones in the developing neuroepithelium following prenatal irradiation, even after only l0 cGy. In addition to the p53 protein, p53 mRNA brain levels were also increased following prenatal irradiation. CONCLUSIONS: Low-dose prenatal irradiation of the developing brain led to p53 induction and cell death by apoptosis.     

曲古抑菌素A抑制肿瘤细胞增殖及提高p21基因表达

目的:探讨组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人肿瘤细胞的杀伤作用和机制.方法:选用3种人肿瘤细胞株,即白血病细胞株HL-60、非小细胞肺癌细胞株A549、乳癌细胞株MCF-7,采用MTT法检测TSA作用后肿瘤细胞的增殖状态;用流式细胞仪定量分析肿瘤细胞增殖周期的改变;用半定量RT-PCR法测定细胞周期相关基因p21的表达.结果:TSA能有效抑制肿瘤细胞的增殖,呈剂量依赖性;在接近各细胞IC50浓度的TSA作用下,可使肿瘤细胞主要阻滞在G2/M期,而S期细胞明显减少;TSA作用48 h内即可引起细胞周期相关基因p21的表达显著增强.结论:TSA在体外能有效抑制多种人肿瘤细胞的生长,具有广谱抗肿瘤效应;其抗肿瘤生长机制可能是通过细胞周期阻滞和上调p21基因表达水平实现的.     

腺病毒介导人p53抑癌基因对肝癌细胞系HepG2生物学行为的影响

研究腺病毒介导入野生型Ｐ５３抑制肝癌细胞系ＨｅｐＧ２生物学行为的影响。构建含人野生型Ｐ５３抑癌基因的生组腺病组载体，导入肝癌细胞系ＨｅｐＧ２后，分别用光镜，电镜ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡发生和在裸鼠体内的成瘤性改变。     

3.5Gy X射线对小鼠间充质干细胞的损伤及其机制的研究

目的 探讨中等剂量X射线对小鼠间充质干细胞的损伤及其机制.方法 小鼠间充质干细胞株C3H10T1/2行3.5 Gy X射线照射,于照射后3、6、12、24、48和72 h及照射后1周采用Hoechst33258染色和Annexin V-FITC/P1染色检测细胞凋亡.于照射后24、48和72 h及照射后1周采用SA-β...