端粒酶活性抑制与肿瘤治疗的研究

端粒酶是一种核糖蛋白，包括人端粒酶ＲＮＡ、端粒酶相关蛋白和端粒酶催化蛋白亚单位三个主要组成部分，可向染色体末端添加端酶ＤＮＡ序列。端粒酶在８５％～９５％的恶性肿瘤组织中有阳性表达，而正常体细胞则一般阴性，是进行肿瘤基因治疗的理想靶点。目前以抑制端粒酶活性为靶点的肿瘤治疗研究较多，其主要策略有：①阻断人端粒酶ＲＮＡ的模板作用；②抑制端粒酶催化蛋白亚单位；③核苷类似物竞争性抑制反转录过程；④细胞分化诱     

端粒酶与细胞周期及细胞凋亡关系的研究进展

端粒酶是一种依赖RNA的逆转录酶 ,能够延长染色体末端的端粒长度。它由端粒酶RNA亚单位 ,端粒酶蛋白催化亚单位及连接二者的端粒酶相关蛋白组成。端粒酶活化是细胞永生化和肿瘤形成的关键步骤 ,而端粒酶的活性表达及其调控机制与细胞周期及细胞凋亡基因密切相关 ,阐明端粒酶与细胞周期及细胞凋亡的关系 ,对深入了解恶性肿瘤的发病机制及肿瘤的预防、诊断和治疗均有重要意义。     

恶性肿瘤端粒酶逆转录酶基因的表达及调控研究进展

人端粒酶是一个核糖核蛋白,在大多数恶性肿瘤和永生化细胞中广泛表达.人端粒酶逆转录酶是端粒酶的关键催化亚单位,对端粒酶活性起重要的调控作用.端粒酶逆转录酶的表达水平与端粒酶活性密切相关,且端粒酶逆转录酶基因表达的调控方式是多因子,多水平和多途径的.     

端粒酶与细胞增殖及炎性疾病的关系

人端粒酶由RNA亚基、催化亚基和端粒酶调节蛋白组成 ,端粒酶对端粒结构的稳定起着重要作用。端粒酶与肿瘤细胞增殖、分化密切相关 ,近年还发现在许多良性炎性疾病、非肿瘤衍生原代细胞中表达一定程度端粒酶活性 ,了解端粒酶在炎性疾病中的表达情况有助于更深入认识端粒酶本质及端粒酶在相关疾病中的作用。本文介绍风湿性疾病、甲状腺疾病及肝病的端粒酶活性表达情况。     

端粒酶与细胞增殖及炎性疾病的关系

人端粒酶由RNA亚基、催化亚基和端粒酶调节蛋白组成，端粒酶对端粒结构的稳定起着重要作用。端粒酶与肿瘤细胞增殖、分化密切相关，近年还发现在许多良性炎性疾病、非肿瘤衍生原代细胞中表达一定程度端粒酶活性，了解端粒酶在炎性疾病中的表达情况有助于更深入认识端粒酶本质及端粒酶在相关疾病中的作用。本文介绍风湿性疾病、甲状腺疾病及肝病的端粒酶活性表达情况。     

端粒酶蛋白质亚单位的研究进展

端粒酶在肿瘤发生的过程中具有重要作用,端粒酶由蛋白质及RNA两种组分构成。四膜虫的端粒酶有p80和p95蛋白,哺乳动物中p80的同源物为TP1/TLP1,近来发现的hEST2/TP2/hTRT结构上具有逆转录酶的结构域单元,其在多种肿瘤组织及细胞系中的表达与端粒酶的活性一致。提示它是端粒酶的蛋白催化亚单位,针对该亚单位的治疗可能成为端粒酶治疗的新靶点。     

正常人外周血单个核细胞端粒酶各组分基因的表达

端粒酶是一种具有特殊性质的逆转录酶 ,能以自身的RNA为模板合成约 10 kb的端粒重复序列。端粒酶在大多数肿瘤细胞、干细胞、淋巴细胞中有表达。我们以前的研究显示 :正常人外周血单个核细胞 ( PBMC)可表达端粒酶活性 [1 ]。人端粒酶主要由 3部分组成 ,即 ,端粒酶 RNA( h TR) ,端粒酶相关蛋白 ( TP1) ,端粒酶催化亚单位 ( h TERT) [2 ]。我们进一步研究了这 3个组分基因表达的状况 ,现报道如下。1　材料和方法1.1　正常人　 2 0例健康志愿者均系我院职工 ,年龄 2 7～5 0岁 ,平均 3 2岁 ,男性 11例 ,女性 9例。1.2　外周血单个核细胞…     

端粒及端粒酶活性的调控机制

广义的端粒由帽子、双链的串联重复序列的DNA核心部分及亚端粒构成,其结合蛋白是一个复合体,由TRF1、TRF2、TIN2、Pot1、TPP1、RAP1 6个亚单位组成;另外,还结合组蛋白的特定成分H3K9三甲基聚合体和H4K20三甲基聚合体.端粒酶主要由hTerc、hTert、dyskerin构成.端粒的功能主要受端粒酶的活性调控;而端粒酶活性主要受hTert及hTerc的转录水平和转录后的剪切、hTert的翻译等因素的调控.端粒与端粒酶结构和功能的异常与细胞衰老及肿瘤的发生、发展关系密切.     

hTR-siRNA腺病毒的构建及其体外抗肿瘤的初步研究

目的:构建RNA干扰(RNAi)腺病毒,通过体外实验观察其抑制肿瘤细胞中人端粒酶RNA(hTR)基因表达、降低瘤细胞中的端粒酶活性、以及促进肿瘤细胞凋亡等作用.方法:首先用一种新的体外连接法构建腺病毒Ad-hTR-siR-NA,表达靶向hTR的小干扰RNA分子(siRNA),用100 MOI的重组腺病毒感染不同的肿瘤细胞系,再用TRAP-ELISA法测定细胞端粒酶活性、Real-time PCR测定hTR的mRNA水平、流式细胞术(FCM)测定肿瘤细胞凋亡率及人端粒酶反转录酶(hTERT)的蛋白变化.结果:感染了Ad-hTR-siRNA的肿瘤细胞的端粒酶活性明显降低,其中以HeLa细胞降低最明显,其端粒酶活性抑制率达到58.87%,hTR的mRNA表达下调70.21%,细胞凋亡率为29.7%,但hTERT的蛋白表达并不被阻断.结论:Ad-hTR-siRNA可以有效、特异地抑制hTR基因表达,诱导体外培养的肿瘤细胞凋亡,具有抗肿瘤活性;此结果提示Ad-hTR-siRNA在肿瘤基因治疗方面具有潜在的应用价值.     

端粒酶蛋白组分的研究进展

端粒酶是一种由ＲＮＡ和蛋白质组成的核糖核蛋白（ＲＮＰ）。它能够利用３’端粒作引物，以自身ＲＮＡ为模板来拷贝端粒ＤＮＡ序列并不断添加到染色体末端。其蛋白组分由多个亚基蛋白构成，对端粒酶活性的调控起着重要作用。目前，酵母、某些纤毛虫和人的端粒酶蛋白及其基因已相继提纯和克隆成功，端粒酶催化组分的研究也取得突破性进展。研究表明，端粒酶蛋白组分可能是一个潜在的抗肿瘤治疗的新靶点     

端粒体--调节端粒的多聚复合体

因端粒与衰老、肿瘤密切相关,近年来对端粒调节的研究进一步深入。最近发现端粒长度的动态平衡是由端粒、端粒酶、端粒结合蛋白组成的高分子复合体———端粒体调节的。在端粒体中,端粒、端粒酶、端粒结合蛋白相互作用,共同完成对细胞基本生命活动的调节。近年来,分子生物学技术的进展从分子水平上阐明了端粒体各组分间的关系,为端粒长度的调节开辟了新的靶点。     

端粒酶活性测定及其临床医学应用

端粒酶是由RNA和蛋白亚基组成的一种核酸蛋白复合物,它能以自身RNA为模板反转录合成端粒DNA序列,然后添加至染色体末端,以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短,使端粒延长,端粒功能得以恢复.从而使某些增殖旺盛的细胞和肿瘤细胞的端粒保持一个动态的平衡.随着人们对端粒认识的深化,特别是1989年Morin首先在人的癌细胞系中发现端粒酶以来,肿瘤细胞永生化的"端粒-端粒酶"学说已为越来越多的研究结果所证实.端粒酶几乎在所有的恶性肿瘤进程中都有表达,但良性病变和正常组织除生殖细胞和干细胞外均不表达,由于它的广泛表达和可能作为癌症治疗的新靶点,使得端粒酶成为目前全世界的研究热点,并使之成为诊断恶性肿瘤的重要标记物之一,本文就端粒酶活性测定及其在临床医学中的应用情况作一简要综述.     

永生细胞株和肿瘤中人端粒酶RNA和端粒酶活性

人类和鼠类端粒酶活性在各种永生细胞株和肿瘤中呈正调节,它在永生细胞株和肿瘤组织中能检测到,而在原代细胞株和许多邻近肿瘤正常组织中缺乏。为了了解肿瘤发生期间端粒酶的调节,作者应用Northern印迹法和敏感的PCR为基础的端粒酶检测法分析了端粒酶活化期间近期克隆的端粒酶RNA组分(hTR)水平。结果发现端粒酶活性在原代     

互补于hTERT关键区段的反义RNA抑制肝癌细胞

目的研究针对人类端粒酶催化亚单位(hTERT)调控区C-MYC结合位点的反义RNA抑制肝癌细胞生长。方法细菌内同源重组构建反义RNA腺病毒(rAd-asmycb),转染HepG2.2.15肝癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,透射电镜下观察凋亡细胞形态,聚合酶链反应-酶联免疫分析(PCR-ELISA)、逆转录-PCR(RT-PCR)分别检测细胞端粒酶活性及mRNA水平上hTERT表达。结果反义RNA抑制肝癌细胞生长,细胞凋亡率为40.7%,显示特征性凋亡细胞形态,能够显著降低细胞端粒酶活性,在mRNA水平上抑制hTERT表达。结论hTERT调控区C-MYC结合位点可能是肝癌基因治疗的有效靶位。     

星形细胞肿瘤中端粒酶与PTEN的表达及相关性

目的：研究星形细胞肿瘤中的端粒酶活性和PTEN表达,探讨其在星形细胞肿瘤发生发展过程中的相关性,方法：收集手术切除经病理证实的星形细胞肿瘤110例,8例正常脑组织作对照。用端粒酶原位杂交检测盒检测组织标本端粒酶活性,用LSAB法检测PTEN表达。结果：星形细胞肿瘤端粒酶活性和PTEN的阳性检出率分别为50％（55／110）和39．1％（43／110）,且随着肿瘤恶性程度的增加,端粒酶活性程度升高（P＜0．01）,端粒酶活性与PTEN表达有相关性（P＜0．01）,结论：端粒酶活性与星形细胞肿瘤的分化程度有关,提示端粒酶活性可能是星形细胞肿瘤恶性程度的重要标记物,PTEN蛋白可能对端粒酶的活性有调节作用。     

反义hTERT基因对白血病细胞端粒酶表达及活性的抑制作用

目的探讨反义hTERT基因体外对白血病细胞端粒酶基因表达及其活性的抑制作用。方法采用基因重组技术设计并构建了针对端粒酶活性蛋白催化亚单位mRNA的5’端序列的反义pcDNA-hTERT真核表达载体,通过SuperFect(QIAGEN)将其瞬时转染人早幼粒白血病细胞株Hk及人红白血病细胞株K562,并运用流式细胞术测定其细胞凋亡与细胞周期的变化,同时运用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应方法对其端粒酶蛋白催化亚单位基因的表达水平进行了检测,端粒酶活性的检测则采用了非放射性TRAP-银染法。结果成功地构建了反义pcDNA-hTERT真核表达载体,并将其转染至K562和HL60白血病细胞株。结果与空载体组、空白组相比,反义pcDNA-hTERT组体外显示出明显有效地抑制端粒酶的基因表达及其活性的作用;在细胞凋亡与细胞周期方面,反义组能引起细胞周期左移,增殖分裂能力降低,同时伴有细胞凋亡数的增加。结论研究构建的反义hTERT基因体外确实能明显有效地下调白血病细胞端粒酶的基因表达及其活性,在抗肿瘤基因治疗中具有特异的靶向性和潜在应用的广谱性。     

TNF相关凋亡诱导配体对肝癌细胞系生物学活性的影响

 目的：探讨新型凋亡分子TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人肝癌细胞系的作用及生物学活性的影响。 方法： 免疫细胞化学法检测HepG2细胞表面膜结合型TRAIL的表达，ELISA法检测HepG2细胞分泌型TRAIL的表达。MTT和TUNEL法分别进行细胞毒实验和凋亡的检测。HepG2细胞内端粒酶的活性由TRAP-PCR法检测，端粒酶催化亚单位hTERT的表达由流式细胞术进行检测。 结果： HepG2肝癌细胞系表面组成性表达TRAIL分子，并有适量的sTRAIL呈分泌表达。细胞毒实验显示TRAIL能够显著抑制肝癌细胞的生长，TUNEL检测结果显示TRAIL具有诱导肝癌细胞凋亡的效应。端粒酶的活性检测显示，TRAIL能够有效抑制肝癌细胞系内端粒酶的活性以及端粒酶催化亚单位的表达。 结论： TRAIL是一个有效的抑癌分子，能够通过诱导细胞凋亡、抑制端粒酶活性等途径控制肿瘤细胞的生长和进一步杀伤肿瘤细胞。     

反义端粒酶RNA对SMMC7721细胞P16、P21表达的增强作用

目的 观察反义端粒酶RNA对SMMC7721细胞周期的影响,检测P16和P21的表达,探讨端粒酶与细胞期调控间的关系及反义端粒酶RNA在肝癌基因治疗中的意义。方法 经脂质体介导,将反义端粒RNA真核表达载体pBBS212－hTR导入SMMC7721细胞中。细胞克隆转移扩大培养后,采用流式细胞仪、TRAP－PCR－ELISA及免疫组化技术,结合图像分析,在检测SMMC7721／pBBS212－hTR细胞端粒酶活性的同时,检测P16和P21的表达。结果 与对照组相比较,反义端粒酶RNA在抑制SMMC7721／pBBS212－hTR细胞端粒酶活性的同时,检测P16和P21的表达。结果 与对照组相比较,反义端粒酶RNA在抑制SMMC7721细胞端粒酶活性的同时,P16和P21蛋白的表达水平显著增高。结论 转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒活性表达的同时,伴发P21与P16表达水平的升高。本实验研究为探讨肝癌发病机制及治疗提供了一定的依据。     

端粒酶与前列腺癌

端粒是真核细胞染色体末端的特殊结构.端粒的不断缩短或丢失可阻止细胞的增殖.端粒酶是一种RNA依赖的DNA多聚酶,可以合成端粒DNA的重复片段与细胞永生化密切相关.研究发现,大多数肿瘤组织细胞中可检测到端粒酶活性,其被认为在肿瘤发生中起重要作用.本文主要综述端粒酶的主要特性及其在前列腺癌中的潜在作用.