时间分辨荧光免疫分析法测定人血清α-FP

本文报告应用时间分辨荧光免疫分析技术测定人血清α-FP浓度。研究结果表明,将BAS引入该技术,使方法学稳定性和灵敏度有明显提高。本法批内CV为3.8～5.2％。批间CV为4.80～12.3％,最小检出值<1ng/ml,平均回收率为102.8％。健康成人测定参考值为5.56±5.38ng/ml(±SD)。聚苯乙烯微量滴定孔条经戊二醛处理后可提高包被抗体含量。     

时间分辨荧光免疫分析方法建立中有关问题的探讨

本文报告了时间分辨荧光免疫分析技术建立中有关问题的实验研究结果。包括对Eu~(3+)标记技术的改进,增强液的配制和检定,抗体包被固相材料的选择及操作中必须注意的防止稀土元素污染的措施。     

镧系元素时间分辨荧光免疫分析

一、概述 应用镧系元素的时间分辨荧光(TRF)分析技术,已在免疫检测中显示出它的优越性。在医学各学科中;如内分泌激素的检查、肿瘤标志物的检测,以及体内各种内或外源     

铁蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立

用夹心法建立铁蛋白(FER)时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),测定血清FER的含量。以FER单克隆抗体(McAb)806#包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu^3 及标记FERMcAb 803#,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液。采用双对数函数数据处理程序,方法的批内和批间CV分别为2．2％和3．7％,平均回收率为118％,灵敏度为0．5μg／L,可测范围为0．5-1000μg／L。ED20、ED50和ED80分别为27．8μg／L、88．5μg／L和247μg／L。Eu^3 FER McAb于-30℃保存至少4个月,免疫反应性基本无损失,同批试剂连续分析4个月结果稳定。本法与PE公司的FER-TRFIA试剂盒所得样品的测定值的相关系数为0．98。本文建立的FER-TRFIA法,是一种适用于人群贫血普查和各种肝脏疾病及肿瘤的联合诊断的良好方法,分析范围、灵敏度和稳定性均较理想,值得推广应用。     

CEA时间分辨荧光免疫分析

以ＣＥＡ单克隆抗体Ｃ５０包被微孔板,异硫氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Ｅｕ＾３＋标记Ｃ１７单抗。采用平衡法建立ＣＥＡ时间分辨荧光免疫分析,数据采用Ｌｏｇ＝Ｌｏｇｉｔ函数数据自理程序处理。方法的批内和批间ＣＶ分别为２．９７％和１．６０％,平均回收率为１０１．９８％,灵敏度为０．２０μｇ／Ｌ,可测范围为２．３９～５０８．９μｇ／Ｌ,ＥＤ５０为６０．９１μｇ／Ｌ。本方法与ＡＦＰ和ＣＡ１２５和ＣＡ１５３无交     

时间分辨荧光免疫分析技术在寄生虫病诊断中的应用

时间分辨荧光免疫分析（Time—resolved fluoroimmunoassay,TRFIA）是一种新型的体外超微量分析技术．被公认为是目前灵敏度最高的分析方法之一,并以其独特的优势近些年迅速发展,已延伸至生物医学、临床医学研究的各个领域。本文就该技术的研究进展及在某些寄生虫病检测诊断中的相关应用作一简要综述。     

时间分辨荧光免疫分析方法学评价

目的：通过内质控的定量分析，对时间分辨荧光分析的方法学进行客观评价。方法：以促甲状腺激素检测为例，对系统探测灵敏度 ，低、中、高持控血清的批内和批间精密度，批间稳定性参数Slope、ED20、ED50、ED80等4项指标，系统探测的准确度（回收试验），系统探测的有效性（平行试验），受试者工作特性曲线（receiver operator characteristic,ROC）等进行定量测定和描述。结果；TSH的最小测定值为0．002μU/mL.低、中、高3种质控样品批内和批间变异系数均小于5％，批间稳定性参数各变异系数均小于5％，与统计学要求相一致，且符合标准曲线质控参数的重现性。回收试验满足临床要求，符合检验统计结果。理论值与实测值间作回归分析，相关系数r=0．999。ROC显示，甲亢诊断的最佳阈值为0．3μU/mL，甲低诊断的最佳阈值为5．0μU/mL。甲亢敏感度为89．3％，特异度为93．3％，准确度为90．1％，阳性似然比为13．4，甲低敏感度为83．8％，特异率为90．9％，准确度为86．4％，阳性似然比为9．2。结论：时间分辨荧光免疫分析方法是一种效果好、准确度高、灵敏度高、特异性强、测试精度良好的自动化免疫分析方法。     

CA19-9时间分辨荧光免疫分析方法建立及EDTA处理血浆对其测定结果的影响

建立双抗体夹心法CA19-9时间分辨荧光免疫分析(TRFIA),探讨抗凝剂EDTA对其检测结果的影响,并对本法的稳定性和与Abbort Axsym测定结果的相关性等指标进行评价.分别按一步法和二步法对CA19-9进行测定,并比较血清标本和用EDTA处理的血浆标本对CA19-9结果的影响.结果表明本试剂盒的线性范围为0.19～600U/mL,灵敏度为0.19U/mL,批内和批间CV(%)分别为1.1%～5.4%,1.2%～5.6%.对3230份标本用本试剂盒检测与Abbort Axsym试剂盒检测结果相关系数为0.931.一步法中EDTA处理血浆标本的检测结果明显低于血清标本,二步法中两者无显著性差异.本试剂盒各项指标达到规定的要求,可用于临床血清CA19-9检测.使用中采用血清或血浆标本时要用二步法进行测定,以减少EDTA对结果的影响.     

尿游离皮质醇化学发光免疫分析

目的 :应用IMMULITE化学发光系统测定尿游离皮质醇并进行评价。方法 :尿液以二氯甲烷抽提后行化学发光免疫分析。结果 :抽提回收率为 (92 7～ 10 5 33) % ,平均为 97 74 % ;稀释试验O/E比值为 87 9～ 10 7 9,平均为 10 0 76 % ;批内变异系数分别为 9 4 %、3 7%、8 1% ,平均 7 1% ,批间变异系数为 7 7%、5 7%、9 7% ,平均 7 7% ;4 2份样本结果分析本法与RIA相关性好r =0 .90 5 (P <0 .0 1) ;正常人参考范围(17 34～ 116 0 2 ) μg/2 4h。结论 :本法具有良好的准确性、健全性和重复性 ,适用于临床常规测定。     

新型时间分辨荧光免疫分析螯合剂中间体的合成

为研制新型时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)螯合剂,以2-氨基-6-甲基吡啶为原料两步合成基础化合物6,6'-二甲基-2,2'-二联吡啶,考察了温度,反应时间,pH值和催化剂等因素的影响.结果表明,第一步反应过程必须严格控制反应温度,产率可达82%;第二步反应的pH值应控制在10～11之间,控制反应物的摩尔比,产率可达42.7%.产物经DSC,元素分析,红外光谱和核磁共振谱表征加以确证.     

A Simple,Sensitive, Rapid and Specific Detection Method for Bisphenol A based on Fluorescence Polarization Immunoassay

A rapid, sensitive, specific and simple method based on Fluorescence Polarization Immunoassay (FPIA) was developed for the quantitative detection of Bisphenol A in water. 4, 4-Bis (4-hydroxyphenyl) valeric acid (BHPVA) was selected as the hapten to produce the immunogen. Fluorescein-labeled Bisphenol A derivatives (tracers) with different structures were synthesized and purified by thin layer chromatography. Based on the polyclonal antibody and tracers, an optimized FPIA method was developed with a detection limit (10% inhibition) of 2 μg L^?1 and a linear working range of 20 to 800 μg L^?1. FPIA was suitable for screening a large number of samples. The recoveries of fortified Tai lake water samples ranged from 91.85 to 102.78%, and tap water samples ranged from 90.36 to 96.01%. The coefficients of variation were all less than 20%. This FPIA method, which did not require a complicated cleanup process, proved to be very useful for the screening of Bisphenol A in environmental water samples.     

化学发光免疫分析定量检测乙肝病毒标志物方法学研究

采用碱性磷酸酶标记,金刚烷衍生物发光,自动化学发光分析仪测量等,进行乙肝病毒五种标志物化学发光免疫分析(CLIA)方法学研究.结果表明这五种标志物CLIA方法的精密度、灵敏度、回收率和临床符合率等技术参数均达到方法学和临床诊断的要求.CLIA方法比ELISA和RIA更简便、快速而实用,为临床诊断和科研工作提供了一种有用的检测手段.     

Development of a dual label time‐resolved fluoroimmunoassay for the detection of (β‐agonists in cattle urine

β‐Agonists are among the most widely abused drugs in veterinary medicine for the illegal promotion of farm animal growth. An array of analytical procedures has been developed to detect the residues of these compounds in many biological materials. As the number of β‐agonist formulations increases, it has become increasingly difficult to devise screening techniques capable of detecting a broad spectrum of these residues in a single test. A dual immunoassay based on time‐resolved fluorescence was developed that incorporated a monoclonal antibody raised to tertiary butyl amines and a polyclonal antibody to biphenolic β‐agonists. This assay was capable of detecting residues of a range of β‐agonists present in bovine urine without the need for sample extraction. The limits of detection of the assay ranged from 1 to 8.5 ng ml^‐1 depending on the cross‐reactivity of individual compounds with the antibodies employed in the procedure.     

Comparison of a commercial Varicella Zoster glycoprotein IgG enzyme immunoassay with a reference time resolved fluorescence immunoassay (VZV TRFIA) for measuring VZV IgG in sera from pregnant women, sera sent for confirmatory testing and pre and post vOka vaccination sera from healthcare workers

Background

Recently, a commercial, standardised VZV IgG glycoprotein EIA, Binding Site VaccZyme™VZV glycoprotein IgG low level EIA (VaccZyme™EIA) has become available. The VaccZyme™EIA is more robust and user friendly than the reference VZV time-resolved fluorescence immunoassay (VZV TRFIA).

Objectives

To assess the usefulness of the VaccZyme™EIA in the diagnostic laboratory by comparing VZV IgG levels generated by both assays on serum panels representing, non-vaccinated, and vOka vaccinated populations.

Study design

Sera from non-vaccinated individuals were tested; 248 from pregnant women, 117 from various patient groups referred to the Virus Reference Department for confirmatory VZV IgG testing and 102 from healthcare workers enrolled in a study (ROVE) of antibody/IgG response to vOka. From the ROVE study, 282 post vaccination sera were tested; 108 and 101 collected at six weeks post first and second doses of vOka, respectively, and 73 collected at 18 month follow-up.

Results

Sensitivities and specificities (equivocals treated as negatives) of the VaccZyme™EIA for sera from pregnant women were 97.8% (95% CI: [94.6%, 99.4%]) and 96.8% (95% CI: [89.0%, 99.6%]), respectively, and for sera referred for confirmatory testing were 81.2% (95% CI: [71.2%, 88.8%]) and 96.9% (95% CI: [83.8%, 99.9%]), respectively, and for ROVE baseline sera were 54.2% (95% CI: [32.8%, 74.4%]) and 100% (95% CI: [95.4%, 100.0%]), respectively. For the post vOka serum panels sensitivities of the VaccZyme™EIA ranged from 65.3% (95% CI: [50.4%, 78.3%]) to 80.4% (95% CI: [71.1%, 87.8%]). Specificities were all 100%. Correlation with VZV TRFIA was high and agreement varied between the serum panels tested.

Conclusions

VaccZyme™EIA is recommended for detecting VZV IgG in sera from non-vaccinated populations; however, caution is advised when measuring post vOka VZV IgG levels.     

人血清CA15-3化学发光免疫分析方法的建立及应用

目的：建立人血清CA15-3化学发光免疫分析方法并在临床检测中的应用。方法：使用CA15-3定量测定试剂盒（化学发光法）检测1232例,其中754例正常人及478例病人血清标本,并与CA15-3电化学发光全自动免疫分析方法进行对比。结果：灵敏度0．032KU／L,线性范围1．2～160KU／L,与CA125及CEA无交叉反应,样本中抗凝剂量的柠檬酸钠、肝素、EDTA-Na2对测定结果没有影响。添加回收率和稀释回收率为90％～110％,分析内和分析间变异均〈10．0％。该方法正常参考值为（0～23．08）KU／L（95％可信限）。ECLA测定结果与本法相比,临床总符合率为96．65％。结论：该方法灵敏度高、特异性好、稳定性强、检测范围宽,有良好的准确性和重复性,完全可以替代进口化学发光试剂用于临床样本的检测。     

稀释介质与稀释方式对化学发光免疫法测定血清雌二醇浓度的影响

探讨不同的稀释介质与稀释方式对化学发光免疫法测定血清雌二醇(Estradiol,E2)浓度的影响.评价SIEMENS Centaur化学发光分析仪的E2测定精密度与线性范围.然后选择线性范围内的血清样品,等分为4份,1份使用仪器自动稀释的方式和配套稀释液D9完成测定,另外3份分别使用配套稀释液D9、混合低值血清和生理盐...     

TrFIA检测CA242对结直肠癌的临床价值

目的：观察采用时间分辨荧光免疫分析检测的CA242在恶性肿瘤普查、诊断和预后的应用价值。方法：收集我院2004年10月～2006年3月的住院病例。包括恶性肿瘤组共226例,良性病变组共74例,正常组50例。采集患者静脉血,常规离心分离血清进行检测。CA242采用TrFIA,CA242正常值为〈20U／ml。结果：使用TrFIA检测CA242在恶性肿瘤组表达水平较良性病变组与正常对照组的表达水平及阳性例数明显升高,其差别明显,P〈0．05,有统计学意义。CA242与其他肿瘤标记物比较,以CEA的灵敏度（45．21％）和CA242的特异度（92．86％）最高。当CA242与另外一项肿瘤标志物联用时,采用平行联检CA242-CEA诊断的灵敏度（59．57％）最高,而采用系列联检CA242-CAl99和CA242-CA50的特异度可以达到100％。当CA242与其他其二项肿瘤标志物联用时,CA242-CEA-CA50平行联检灵敏度最高达67．74％。三项联合应用时,系列联检特异度都是100％。当CA242与其他三项指标联合时,平行联检在本文所用方法中灵敏度最高（69．23％）,系列联检特异度是100％。结论：采用TrFIA检测糖链抗原CA242对直肠癌等的普查、诊断、预后的判断提供了一定的应用价值。     

高灵敏均相酶免疫法测定血清皮质醇方法建立与性能评价

目的 建立高灵敏均相酶免疫法定量检测血清皮质醇.方法 对此方法的线性范围、准确度、精密度、抗干扰能力、临床可报告范围以及参考区间进行性能验证.结果 本研究建立的血清皮质醇均相酶免疫测定方法,线性范围为30.0～1200.0ng/mL,准确度相对偏差B≤10.0％,批内CV≤10.0％,批间差R≤10.0％,当样本中胆红素≤50mg/L、血红蛋白≤1000mg/L、白蛋白≤100g/L、抗坏血酸≤176mg/dL时,对测定结果无影响,临床可报告范围上限6500ng/mL,血清皮质醇参考区间为60～230ng/mL.结论 该均相酶免疫法能够满足临床血清皮质醇检测的需求,可以进一步推广至临床使用.