缺氧诱导因子1α过表达对前列腺癌细胞血管生成能力的影响

目的:观察转染缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对人前列腺癌细胞血管形成相关蛋白的影响,并探讨其分子机制。方法:用脂质体Lipofectamine2000包装重组真核表达载体pCDNA3.1(-)/HIF-1α后转染人前列腺癌细胞LNCaP,600μg/ml G418筛选稳定表达的抗性克隆。免疫荧光及Western印迹法鉴定HIF-1α过表达,Western印迹法检测血管形成相关蛋白血管内皮生长因子(VEGF)、iNOS、促血管生成素2(Ang-2)。结果:与未转染细胞LN-CaP相比,转染细胞LNCaP/HIF-1α中出现明显的HIF-1α蛋白条带,并激发出较强荧光,VEGF、iNOS表达增加,Ang-2未见明显变化。结论:HIF-1α过表达能够诱导LNCaP细胞血管形成相关蛋白表达增多,进而增强其体外血管形成能力。     

缺氧诱导因子1α过表达对前列腺癌细胞血管生成能力的影响

目的：观察转染缺氧诱导因子1α（HIF-1α）对人前列腺癌细胞血管形成相关蛋白的影响,并探讨其分子机制。方法：用脂质体Lipofectamine2000包装重组真核表达载体pCDNA3.1（-）/HIF-1α后转染人前列腺癌细胞LNCaP,600μg/ml G418筛选稳定表达的抗性克隆。免疫荧光及Western印迹法鉴定HIF-1α过表达,Western印迹法检测血管形成相关蛋白血管内皮生长因子（VEGF）、iNOS、促血管生成素2（Ang-2）。结果：与未转染细胞LN-CaP相比,转染细胞LNCaP/HIF-1α中出现明显的HIF-1α蛋白条带,并激发出较强荧光,VEGF、iNOS表达增加,Ang-2未见明显变化。结论：HIF-1α过表达能够诱导LNCaP细胞血管形成相关蛋白表达增多,进而增强其体外血管形成能力。     

缺氧诱导因子1α诱导前列腺癌LNCaP细胞上皮间质转化的体内外研究

目的:探讨在体内外环境下缺氧诱导因子1α(HIF-1α)过表达对前列腺癌细胞发生上皮间质转化(EMT)并导致肿瘤侵袭能力升高的影响.方法:对已构建的稳定表达HIF-1α的人前列腺癌LNCaP细胞(LNCaP/HIF-1α)复苏后培养,对HIF-1α过表达进行鉴定.MTT法测定细胞增殖;检测转染前后培养液上清PSA水平;软琼脂成瘤实验比较两种细胞体外成瘤能力;将转染前后的LNCaP细胞注射免疫裸鼠皮下建立皮下肿瘤模型,观察肿瘤生长情况;收集肿瘤标本进一步行免疫组化处理.结果:免疫荧光和Western印迹证实LNCaP/HIF-1α细胞中HIF-1α过表达.同LNCaP细胞相比,转染HIF-1α的人前列腺癌LNCaP细胞培养液中PSA水平明显降低;MTT法显示其更具有增殖活性,体外成瘤能力更强.体内实验显示皮下肿瘤成瘤率提高,成瘤时间提前.肿瘤标本免疫组化提示转染组E钙粘蛋白表达下调,波形蛋白表达上调.结论:HIF-1α过表达能够封闭E钙粘蛋白,上调波形蛋白表达,提示HIF-1α过表达可能通过诱导EMT增强LNCaP细胞侵袭能力.     

缺氧诱导因子1α诱导前列腺癌LNCaP细胞上皮间质转化的体内外研究

目的:探讨在体内外环境下缺氧诱导因子1α(HIF-1α)过表达对前列腺癌细胞发生上皮间质转化(EMT)并导致肿瘤侵袭能力升高的影响。方法:对已构建的稳定表达HIF-1α的人前列腺癌LNCaP细胞(LN-CaP/HIF-1α)复苏后培养,对HIF-1α过表达进行鉴定。MTT法测定细胞增殖;检测转染前后培养液上清PSA水平;软琼脂成瘤实验比较两种细胞体外成瘤能力;将转染前后的LNCaP细胞注射免疫裸鼠皮下建立皮下肿瘤模型,观察肿瘤生长情况;收集肿瘤标本进一步行免疫组化处理。结果:免疫荧光和Western印迹证实LNCaP/HIF-1α细胞中HIF-1α过表达。同LNCaP细胞相比,转染HIF-1α的人前列腺癌LNCaP细胞培养液中PSA水平明显降低;MTT法显示其更具有增殖活性,体外成瘤能力更强。体内实验显示皮下肿瘤成瘤率提高,成瘤时间提前。肿瘤标本免疫组化提示转染组E钙粘蛋白表达下调,波形蛋白表达上调。结论:HIF-1α过表达能够封闭E钙粘蛋白,上调波形蛋白表达,提示HIF-1α过表达可能通过诱导EMT增强LNCaP细胞侵袭能力。     

缺氧诱导因子1α诱导人前列腺癌细胞上皮间质化改变的研究

目的:研究人前列腺癌细胞在缺氧诱导因子1α(HIF-1α)诱导下能否发生上皮细胞间质转化态(EMT)改变,进而致侵袭能力增强,并初步分析其分子机制。方法:应用RT-PCR技术检测LNCaP细胞及其亚细胞系C4、C4-2、C4-2B这4种EMT阴性的人前列腺癌细胞中波形蛋白(vimentin)mRNA表达情况,并凭此筛选出适合于进一步作转染诱导试验的细胞。用脂质体Lipofectamine2000包装重组真核表达载体pCDNA3.1(-)/HIF-1α和pCD-NA3.1(-)空质粒后,分别转染上步试验所挑选出的人前列腺癌细胞LNCaP,600μg/mLG418筛选抗性克隆。免疫荧光及Western印迹法鉴定HIF-1α表达,Western印迹法检测EMT标志蛋白——上皮型钙粘素(E-cadherin)和vimentin的表达,Transwell验证转染后LNCaP细胞侵袭能力的改变。结果:RT-PCR证实4种EMT阴性的细胞中,仅LNCaP表达有vimentin编码基因,适合作转染诱导试验。免疫荧光也观察到HIF-1α转染细胞胞质中荧光亮度较空质粒转染细胞和未转染细胞明显增强。Western印迹法证实HIF-1α转染细胞发生了EMT转化,其E-cad-herin表达缺失,而vimentin表达增加。同时,Transwell体外侵袭试验也发现,LNCaP/HIF1α细胞的体外侵袭能力显著高于LNCaP细胞和LNCaP/pCDNA3.1(-)细胞。结论:HIF-1α过表达可以通过调节两种EMT相关蛋白诱导人前列腺癌细胞LNCaP发生EMT改变并致其侵袭能力增强。     

缺氧诱导因子-1α和血管内皮细胞生长因子在前列腺癌组织中的表达

目的：探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在前列腺癌中的表达及其与病理分级、临床分期的关系。方法：采用免疫组化方法检测前列腺癌和良性前列腺增生(BPH)组织中HIF-1α和VEGF的表达。结果：前列腺癌中HIF-1α和VEGF的表达均明显高于BPH；HIF-1α和VEGF在前列腺癌中的表达水平与其病理分级和临床分期均呈正相关；前列腺癌中的HIF-1α表达水平和VEGF的表达水平呈正相关。结论：HIF-1α和VEGF是检测前列腺癌的较好分子标志物，可望用于前列腺癌的辅助诊断和预后判断，HIF-1α是VEGF表达的调控因子之一。     

Ang2、HIF-1α及VEGF在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨促血管生成素2(Ang2)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学S-P法研究52例HCC中Ang2、HIF-1α及VEGF的表达情况,并结合临床病理学资料加以分析.结果 HCC组织中Ang-2、HIF-1α、VEGF的表达与HCC的临床病理特征,如肿瘤大小、包膜完整性、远处转移、门静脉癌栓等相关(P＜0.05),而与癌组织的病理学分级、是否合并肝硬化以及病人的肝功能分级无关(P＞0.05).结论 Ang2、HIF-1α及VEGF的异常表达可能在肝癌发生、发展和肝内转移过程中发挥重要作用.     

Angiostatin基因联合反义HIF-1α基因治疗人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的研究Angiostatin基因联合反义缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因治疗人肝癌裸鼠皮下移植瘤的协同抑制作用。方法用人肝癌细胞株SMMC-7721建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型。四组荷瘤裸鼠分别注射质粒PcDNA3、Angiostatin/PcDNA3、HIF-1α/PcDNA3B、Angiostatin/ PcDNA3 HIF-1α/PcDNA3B。观察肿瘤生长曲线,检测肿瘤的Angiostatin、血管内皮生长因子(VEGF)、HIF-1α表达和微血管密度(MVD),利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析。结果Angiostatin基因治疗在早期具有抑制肿瘤生长的作用;Angiostatin基因治疗组的MVD(24.8±2.8)低于空质粒对照组(30.2±4.1),VEGF表达高于空质粒对照组,细胞凋亡指数(2.87±0.48)高于空质粒对照组(1.55±0.43);联合治疗组有明显抑制肿瘤生长的作用,HIF-1α局部低表达,MVD (14.6±2.1)低于Angiostatin基因治疗组(24.8±2.8),VEGF表达低于单独治疗组,细胞凋亡指数(5.12±0.63)高于单独治疗组。结论肿瘤对Angiostatin基因治疗可以产生耐受性;反义HIF-1α基因阻断肿瘤的缺氧适应途径在一定程度上解决了抗血管生成治疗的耐药性问题。     

HIF-2α在肾透明细胞癌血管生成中的作用

目的探讨体外水平HIF-2α在肾透明细胞癌血管生成中的作用。方法采用RNAi方法,体外化学合成HIF-2α序列特异的siRNAs,转染肾透明细胞癌786-0细胞抑制HIF-2α表达,Western blotting、ELISA方法检测VEGF表达变化,应用BrdU抗体ELISA比色法研究HIF-2α抑制后肿瘤细胞血管生成能力改变。结果肾透明细胞癌786-0细胞不表达HIF-1a,仅表达HIF-2α,缺氧诱导HIF-2α蛋白表达增加。HIF-2α序列特异的siRNAs特异抑制HIF-2α蛋白的表达,转染效率>80%,抑制率(72.0±8.0)%;HIF-2α抑制后,缺氧诱导的细胞结合型VEGF表达减少,分泌型VEGF在正常氧压情况下抑制率(21.7±3.8)%,缺氧情况下抑制率(37.8±4.7)%,肿瘤细胞在体外水平的血管生成能力降低(42.7±5.0)%。结论HIF-2α在肾透明细胞癌中具有促进肿瘤血管生成的作用,抑制HIF-2α下调细胞结合型与分泌型VEGF表达而降低肾透明细胞癌在体外水平的血管生成能力。     

TP、HIF-1α、VEGF在乳腺癌中的表达及与血管生成关系的研究

目的:探讨TP、HIF-1α、VEGF在乳腺癌中的表达及其与血管生成关系.方法:免疫组化法检测15例正常乳腺组织标本和37例浸润性乳腺癌组织中HIF-1α、VEGF、TP的表达情况,同时以CD34为标记检测微血管密度(MVD).结果:乳腺癌组织中TP、HIF-1α、VEGF均存在高表达,与正常乳腺组织相比,差异具有显著性.TP、HIF-1α、VEGF表达阳性组的MVD值明显高于表达阴性组(P＜0.01).HIF-1α表达与VEGF呈正相关(rs＝0.357,P＜0.05),且HIF-1α阳性组TP表达明显高于阴性组(t﹦9.778,P＜0.01),随HIF-1α与VEGF表达的增加,TP逐渐增高.TP、HIF-1α、VEGF表达与乳腺癌有无淋巴结转移及组织学分级均呈正相关.结论:TP、HIF-1α、VEGF在乳腺癌组织存在高表达,并与肿瘤血管生成有关.     

抑癌基因VHL治疗实体肿瘤的实验研究

目的探讨抑癌基因VHL治疗EL-4实体肿瘤的效果。方法皮下注射EL-4淋巴瘤细胞建立C57BL/6小鼠实体肿瘤模型。当肿瘤生长至直径分别为0.1cm和0.4cm时,将小鼠随机分为治疗组和对照组,每组各6只。治疗组瘤体内采用脂质体法注射pcDNA3-VHL基因,对照组注射空载体,观察肿瘤生长情况。用免疫组织化学(免疫组化)和(或)Western印迹方法检测VHL基因、血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、抗凋亡因子(bcl-2)在瘤组织内的表达,测定肿瘤的微血管密度(MVD);TUNEL法测定肿瘤的凋亡指数(AI)。结果VHL基因治疗能够根除小的肿瘤(直径0.1cm),但只能减慢而不能消除较大肿瘤(直径0.4cm)的生长。治疗组VHL基因在瘤组织内高表达,VEGF、HIF-1α和Bcl-2的表达显著低于对照组,MVD明显低于对照组(P<0.05),AI显著高于对照组(P<0.01)。结论VHL基因疗法对小鼠EL-4实体肿瘤的生长有显著的抑制作用。     

Inhibition of vascular endothelial cell growth factor suppresses the in vivo growth of human prostate tumors

The LNCaP human prostate cancer cell line is androgenand stromal-dependent for in vivo growth. We co-inoculated LNCaP cells with human fetal fibroblasts, isolated from prostate, bone (male), and lung (male and female) derived from 18- to 22-week-old human fetal tissue, into non-castrate male nude mice. Co-inoculation of LNCaP with fetal prostatic fibroblasts resulted in high tumor take rates (27 of 30, or 90%) 6 to 8 weeks after subcutaneous co-inoculation. Serum prostate specific antigen (PSA) values correlated strongly with wet tumor weight (r=0.86). The fetal fibroblast enhancement of tumor take rates in vivo was neither gender- nor organ-specific. Fetal fibroblast-conditioned medium (CM) did not have a significant proliferative effect on LNCaP cell growth in vitro. Areas of angiogenesis were demonstrable in all tumors, with blood vessels arising at the interface between stromal and tumor cells. The fetal fibroblasts, but not the LNCaP cells, expressed significant amounts of the mRNA and protein for vascular endothelial cell growth factor (VEGF). Treatment of tumor-bearing animals with neutralizing antibodies to VEGF resulted in significant tumor growth suppression. These findings indicate that VEGF is an important mediator of stromal-induced enhancement of human prostate cancer cell growth in vivo.