血小板源生长因子调控肝星状细胞增殖的机制

血小板源生长因子具有促进肝星状细胞增殖的作用,其详细机制不明,可能涉及到血小板源生长因子与其受体结合后进一步影响三磷酸肌醇激酶,钙通道,信号转导及转录活化蛋白,细胞外信号调节激酶,磷脂酶Ｃ－γ１及钠－氢交换等。     

血小板源性生长因子D抗体制备及其在人心脏纤维化组织中的表达

目的制备血小板源性生长因子D,探讨血小板源性生长因子D在人心肌纤维化组织中的表达及其对I型胶原表达的影响,从而初步明确血小板源性生长因子D与人心肌纤维化的关系。方法通过原核表达系统表达并纯化血小板源性生长因子D融合蛋白,免疫新西兰大白兔,获取血小板源性生长因子D抗体。应用免疫组化的方法观察血小板源性生长因子D在人心脏室壁瘤纤维化组织及正常心肌组织的表达情况,利用细胞转染及细胞免疫组化的方法观察转染血小板源性生长因子D后成纤维细胞系NIH3T3细胞中I型胶原的表达水平改变。结果血小板源性生长因子D在人心脏室壁瘤纤维化组织中的表达与周围正常心肌组织相比,显著升高。转染血小板源性生长因子D后,NIH3T3细胞中的I型胶原表达显著增加。结论血小板源性生长因子D可以通过增加I型胶原表达从而促进人心肌纤维化。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠心脏成纤维细胞c-Jun氨基末端激酶通路活化的影响

目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对血小板源生长因子诱导的大鼠心脏戍纤维细胞增殖及胶原合成以及c-Jun氨基末端激酶表达的影响.方法 选用新生Wistar大鼠心脏成纤维细胞作为实验研究材料,MTT法检测心脏成纤维细胞代谢活性的改变,免疫细胞化学法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达的改变,Western Blotting检测大鼠心脏成纤维细胞中磷酸化JNK(p-JNK)和JNK蛋白及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果 10μg/L血小板源生长因子刺激下,代表大鼠心脏成纤维细胞代谢活性的OD值增加,Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达增强,表明血小板源生长因子刺激了心脏成纤维细胞增殖,促进了胶原的合成.同时p-JNK蛋白表达增高,而JNK蛋白表达无明显改变.10-9mol/L AcSDKP能够抑制血小板源生长因子诱导的大鼠心脏成纤维细胞代谢活性,同时抑制了Ⅰ型、皿型胶原及p-JNK蛋白的表达,而JNK蛋白表达无明显改变.结论 AcSDKP能够通过阻断血小板源生长因子介导的JNK通路激活进而抑制大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原蛋白表达.     

血小板源生长因子及其受体与动脉粥样硬化

血小板源生长因子是成纤维细胞、平滑肌细胞及其他间充质来源细胞的强有丝分裂原和化学驱动剂。近年来的研究表明,在动脉粥样斑块发展过程中,血小板源生长因子及血小板源生长因子受体的作用可能尤其重要。文章对血小板源生长因子及其受体的结构、特点、作用和与动脉粥样硬化的病理关系作了简要归纳,以期为更好理解动脉粥样硬化的过程和探索如何防止其发生提供参考。     

P85磷酯肌醇-3激酶-蛋白激酶C-ζ复合物对血管紧张素Ⅱ激活平滑肌细胞p70核蛋白体S6激酶的调节作用

作者以前的研究发现蛋白激酶C-ζ介导血管紧张素Ⅱ经Ras-MEK途径激活血管平滑肌细胞丝裂素活化的蛋白激酶MAPK或细胞外信号调节激酶ERK1/2.本文研究了P85磷酯肌醇-3激酶-蛋白激酶C-ζ复合物核蛋白体激酶p70S6激酶活性的调节作用及其信号传递途径. Western Blot分析显示正常培养的血管平滑肌细胞表达p70S6激酶、p85磷酯肌醇-3激酶和蛋白激酶C-ζ.100 nmol血管紧张素Ⅱ和 10 μg/L 血小板源生长因子刺激并不影响p70S6激酶、p85磷酯肌醇-3激酶和蛋白激酶C-ζ表达. p70S6激酶磷酸转移酶活性分析发现血管紧张素Ⅱ与血管平滑肌细胞作用5 min 即开始激活p70S6激酶, 20 min达高峰, 并呈剂量依赖性.磷酯肌醇-3激酶抑制剂wortmannin (10 nmol)、蛋白激酶C-ζ抑制剂Pseudo Z (50 μmol) 和p70S6激酶抑制剂rapamycin (100 μg/L) 均可明显阻断血管紧张素Ⅱ诱导的p70S6激酶激活.有趣的是,我们观察到p85磷酯肌醇-3激酶和蛋白激酶C-ζ受血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子刺激后均向Ras转位并与之结合, 抗Ras抗体可将p85磷酯肌醇-3激酶或蛋白激酶C-ζ混合沉淀, 抗p85磷酯肌醇-3激酶抗体亦可使蛋白激酶C-ζ沉淀下来. 提示Ras、p85磷酯肌醇-3激酶和蛋白激酶C-ζ三种蛋白结合在一起形成一个功能复合体,Wortmannin和Pseudo Z可阻断这个功能复合体的形成.此外,血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子与血管平滑肌细胞孵育24 h 明显促进细胞增殖,氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入率增加约50%, Wortmannin和非特异性蛋白激酶C抑制剂Chelerythine均抑制血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子对血管平滑肌细胞的促增殖作用.综合上述结果, 说明血管紧张素Ⅱ通过Ras-磷酯肌醇-3激酶-蛋白激酶C-ζ途径激活p70S6激酶和刺激血管平滑肌细胞增殖, p85磷酯肌醇-3激酶-蛋白激酶C-ζ复合物在其中起重要调节作用.     

三七总皂甙对血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的探讨三七总皂甙对血小板源生长因子刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响及其可能机制。方法运用血小板源生长因子刺激兔体外血管平滑肌细胞增殖模型,通过四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术及免疫细胞化学法观察三七总皂甙对其增殖活性、细胞周期及c-myc蛋白表达的影响。结果血小板源生长因子显著刺激血管平滑肌细胞增殖,三七总皂甙呈浓度依赖性抑制血管平滑肌细胞增殖,对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖亦具有显著抑制作用;三七总皂甙作用下血管平滑肌细胞处于G1/G0期的细胞数增多,而G2/S期的细胞数显著减少,c-myc蛋白的表达亦降低。结论三七总皂甙对基础状态下及血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖均具有显著抑制作用,部分机制与其阻滞血管平滑肌细胞G1/G0期向S期转化以及下调c-myc基因表达有关。     

血小板源生长因子对人血管内皮细胞DNA及胶原蛋白合成的影响

为研究血小板源生长因子对血管内皮细胞增效及胶原蛋白合成的影响，采用培养的人脐静脉内皮细胞，应用氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷和氚标记脯氨酸掺入方法，观察血小板源生长因子BB对人血管内皮细胞DNA合成以及胶原蛋白合成的影响。结果发现，血小板源生长因子BB可促进处于静止状态的人血管内皮细胞DNA合成，并呈现出明显的浓度依赖关系，在40μg/L时DNA的合成达到高峰，DNA于血小板源生长因子BB作用48h时合成最为显著。血小板源生长因子BB对人血管内皮细胞胶原蛋白合成无明显促进作用。结果表明，血小板源生长因子BB可明显促进培养的人血管内皮细胞DNA合成，而对胶原蛋白合成无明显促进作用。     

血小板源生长因子BB通过JNK调控大鼠主动脉平滑肌细胞β-catenin核内外分布

目的探讨阻断JNK后对血小板源生长因子BB引起的细胞增殖的影响以及JNK对血小板源生长因子BB(50μg/L)刺激导致的β-catenin核内外分布的影响。方法应用CCK8法测定不同浓度JNK抑制剂SP600125(10、20和40μg/L)对血小板源生长因子BB诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响。应用WesternBlotting法检测血小板源生长因子BB刺激后不同时间点p-JNK、JNK及胞浆和胞核β-catenin的表达变化,以及在应用不同浓度SP600125(10、20和40μg/L)后对p-JNK以及胞核β-catenin表达的影响。免疫荧光法检测血小板源生长因子BB刺激后和给予JNK抑制剂后β-catenin的核内外分布变化。结果血小板源生长因子BB(50μg/L)显著促进大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖(0.876±0.041比0.370±0.082,P0.01),在给予不同浓度(10、20和40μg/L)JNK抑制剂SP600125后平滑肌细胞增殖成浓度依赖性下降(0.635±0.063、0.470±0.044和0.381±0.054比0.876±0.041,P0.01)。血小板源生长因子BB刺激15 min后p-JNK及60 min后细胞核内β-catenin的表达达峰值,在给予不同浓度SP600125后p-JNK和细胞核内β-catenin的表达成浓度依赖性下降。免疫荧光检测提示血小板源生长因子BB刺激60 min后β-catenin核内聚集明显,而在给予SP600125(40μg/L)后β-catenin核内聚集受到了抑制。结论 JNK磷酸化在血小板源生长因子BB刺激引起的β-catenin核内聚集中起关键调节作用。     

bFGF和PDGF-BB对内皮祖细胞分化的内皮样细胞和平滑肌样细胞增殖和迁移的影响

目的探讨内皮祖细胞分化的内皮样和平滑肌样细胞在碱性成纤维生长因子和血小板源生长因子BB作用下的增殖和迁移能力。方法将分离、培养及纯化的内皮祖细胞培养5天后进行分组:对照组、碱性成纤维生长因子组和血小板源长因子BB组。对照组使用20%胎牛血清的DMEM培养基;碱性成纤维生长因子组和血小板源生因子BB组在20%胎牛血清的DMEM培养基中分别添加碱性成纤维生长因子(30μg/L)和血小板源生长因子BB(40μg/L)。免疫荧光染色鉴定内皮祖细胞以及检测内皮祖细胞内皮方向分化标记物CD31和vWF,及平滑肌方向分化标记物α-SMA和Calponin。将分化的内皮样细胞和平滑肌样细胞用MTT法和Transwell小室分别检测其增殖活性和迁移能力。结果与对照组比较,内皮祖细胞经碱性成纤维生长因子或血小板源生长因子BB诱导后呈现较强的内皮细胞(CD31,vWF)或平滑肌细胞(α-SMA,Calponin)的荧光染色,被诱导细胞分别称为内皮样细胞和平滑肌样细胞;碱性成纤维生长因子促进内皮样细胞和血小板源生长因子BB促进平滑肌样细胞增殖的作用在一定范围内具有时间(0～48 h)和浓度(碱性成纤维生长因子:0～16μg/L;血小...     

血小板源生长因子诱导核受体Nur77调节血管平滑肌细胞增殖

目的 研究血小板源生长因子诱导血管平滑肌细胞中核受体Nur77表达机制及其与血管平滑肌细胞增殖的关系,探讨阿托伐他汀对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖和核受体Nur77表达的关系.方法 分离培养鼠血管平滑肌细胞,分别与PD98059、阿托伐他汀、核受体Nur77siRNA孵育后应用血小板源生长因子刺激,检测核受体Nur77、细胞外调节蛋白激酶表达;检测增殖细胞核抗原表达.结果 血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞中核受体Nur77通过ERK-MAPK信号途径表达.阿托伐他汀减少血小板源生长因子诱导的核受体Nur77表达,抑制血管平滑肌细胞增殖.在核受体Nur77沉默后的血管平滑肌细胞中,血小板源生长因子诱导的细胞增殖减少.结论 血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖受核受体Nur77调控,阿托伐他汀降低核受体Nur77表达,减少血管平滑肌细胞增殖,这可能是他汀类药物抗细胞增殖的新的途径.核受体Nur77可能是减少再狭窄的新的治疗靶点.     

血小板源生长因子诱导血管平滑肌细胞迁移及机构

为探讨血小板源生长因子诱导血管平滑肌细胞迁移和细胞内信号传递机制。以体外培养的平滑肌细胞为对象，用血小板源生长因子ＢＢ二聚体作诱导刺激物，采用改良的Ｂｏｙｄｅｎ微孔膜双槽法进行细胞迁移实验，荧光染料Ｆｕｒａ－２法测定细胞内游离钙离子浓度。结果发现，血小板源生长因子ＢＢ二聚体能明显诱导体外培养的平滑肌细胞迁移，使细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）明显升高（Ｐ＜０．０１），峰值浓度位于５ｇ／Ｌ。１００ｍｏｌ／Ｌ钙离子螯合剂ＢＡＰＴＡ和酪氨酸激酶抑制剂５０ｍｏｌ／Ｌ　Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ既能抑制血小板源生长因子－ＢＢ诱发的升高，也能抑制血小板源生长因子对平滑肌细胞的诱导趋化迁移作用。实验结果提示，血小板源生长因子是诱导平滑肌细胞迁移的趋化物；升高是平滑肌细胞对血小板源生长因子反应的早期细胞内信号传递通路之一；血小板源生长因子诱发的平滑肌细胞迁移既依赖于升高，又依赖于酪氨酸蛋白激酶活性。     

凝血酶对大鼠血管平滑肌细胞血小板源生长因子受体基因表达的影响

为了研究凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源生长因子受体基因表达的影响 ,探讨凝血酶刺激血管平滑肌细胞增殖的机制 ,通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,用斑点杂交检测凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源生长因子受体mRNA的表达。结果发现培养的血管平滑肌细胞在基础状态下可表达血小板源生长因子α受体和 β受体mRNA ,凝血酶在作用于血管平滑肌细胞 2～ 12h抑制了血管平滑肌细胞血小板源生长因子α受体 β受体mRNA的表达 ,2 4～ 48h后血管平滑肌细胞血小板源生长因子α受体 β受体mRNA的表达恢复到基础状态。提示凝血酶对血管平滑肌细胞具有较强的促增殖作用 ;凝血酶显著降低了血管平滑肌细胞血小板源生长因子α受体 β受体mRNA的表达     

血小板源生长因子受体结合域基因与乙型肝炎核心抗原基因融合克隆的构建

血小板源生长因子在动脉粥样硬化发生中起着重要的作用。为了阻断血小板源生长因子致动脉粥样硬化的作用，我们利用基因工程技术试图制各血小板源生长因子受体结合城与乙型肝炎核心抗原的融合蛋白，并以此蛋白作为疫苗，探讨其防治动脉粥样硬化发生发展的可能性．本文报道血小板源生长因子受体结合城基因的化学合成以及与乙型肝炎核心抗原基因的融合克隆的构建，经双酶切、序列分析证实，这两种基因融合成功。     

凝血酶与血管平滑肌细胞增殖研究进展

凝血酶是血管平滑细胞表达的选择增殖促进剂，其作用通过血管平滑肌细胞表达的选择性受体所介导。凝血酶受体的激活导致细胞内信号传递和内源性血小板源生长因子A链和碱性纤维母细胞生长因子的产生。凝血酶抑制剂可阻断凝血酶受体的激活、细胞内信号传递和凝血酶诱导的血小板源生长因子A链和碱性纤维母细胞生长因子表达。凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖可被抗血小板源生长因子和碱性纤维母细胞生长因子抗体所阻断，因而认为凝血酶对血管平滑肌细胞的增殖作用可能是通过诱导血小板源生长因子A链和碱性纤维母细胞生长因子自分泌和（或）旁分泌来实现的。     

血小板源生长因子BB对人血管平滑肌细胞钙调素的影响

为研究血小板源生长因子BB对培养的人血管平滑肌细胞钙调素的影响，采用培养的人血管平滑肌细胞，应用磷酸二酯酶法观察不同浓度的血小板源生长因子BB对钙调素含量变化的影响及其时间效应。结果发现，平滑肌细胞在进入细胞增殖周期后，细胞内钙调素含量逐渐增加，在9h时出现一个短暂的高峰，随后细胞内钙调素含量逐渐下降。血小板源生长因子BB可促进钙调素含量的增加，并呈现出明显的浓度依赖关系，30μg/L血小板源生长因子BB作用最为显著。结果提示，血小板源生长因子BB可明显促进培养的人血管平滑肌细胞钙调素含量的增加，并存在着一定的量效依赖关系及时间反应性。     

血小板源生长因子β受体反义寡核苷酸对血小板源生长因子诱导大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响

为研究血小板源生长因子β受体反义寡核苷酸对血小板源生长因子诱导的大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响和作用机制，利用激光共聚集显微镜观察平滑肌细胞对异硫氰酸荧光素标记的反义寡核苷酸的摄取和细胞内定位，改良Boden's小室法观察平滑肌细胞迁移。结果发现，加入反义寡核苷酸培养24h及48h后荧光分别位于细胞浆内和细胞核内，5umol/L以上浓度反义寡核苷酸作用36h后，被血小板源生长因子诱导迁移通过Boyden's小室碳纤维素膜的细胞数量小于空白对照组；正义，错义寡核苷酸和5umol/L以下浓度反义寡核苷酸迁移抑制不明显，提示血小板源生长因子β受体反义寡核苷酸在细胞核内呈时间和浓度依赖性抑制血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞迁移。     

血小板源生长因子对大鼠血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的影响

目的本实验研究血小板源生长因子对血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的影响以及对血管平滑肌细胞与单核细胞粘附的作用。方法利用基因芯片和RT-PCR技术检测鼠主动脉血管平滑肌细胞经血小板源生长因子处理0min、20min、6h后血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的mRNA表达变化;细胞粘附实验观察血管平滑肌细胞经血小板源生长因子分别处理0min、20min、6h后与单核细胞粘附情况。结果血小板源生长因子对鼠血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的表达有显著的诱导作用,其诱导作用在20min即已出现(P<0.05),6h时明显增强(P<0.01)。细胞粘附实验显示随着血小板源生长因子的作用时间的延长,血管平滑肌细胞与单核细胞的粘附率增高,血小板源生长因子处理20min和6h后粘附率是对照组的1.92倍和3.04倍(P<0.05)。结论血小板源生长因子明显诱导血管平滑肌细胞中血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的表达,促进血管平滑肌细胞与单核细胞的粘附,从而参与了损伤早期,白细胞向内膜下迁移的炎症反应。     

结合肝素的表皮样生长因子及血小板源生长因子A在动脉粥样硬化血管壁中的表达

探讨结合肝素的表皮样生长因子及血小板源生长因子A与动脉粥样硬化的关系 ,将 1 6只中华本兔随机分为普通饲料组和高脂饲料组 ,喂养 1 2周形成动脉粥样硬化模型后 ,运用内参比法逆转录聚合酶链反应对动脉壁中结合肝素的表皮样生长因子、血小板源生长因子A基因表达进行定量分析。结果发现 ,普通饲料组主动脉正常 ,高脂饲料组主动脉均有粥样斑块形成 ,脂质斑块面积占主动脉面积百分比为 2 7.80± 1 3 .97,斑块最大厚度为2 1 .1 7± 7.63μm。普通饲料组动脉壁中结合肝素的表皮样生长因子含量较高脂饲料组显著降低 ,而血小板源生长因子A含量则较高脂饲料组显著升高。结果提示 ,结合肝素的表皮样生长因子与动脉粥样硬化的形成与发展关系密切 ,血小板源生长因子A在动脉粥样硬化的形成与发展中可能不起主要作用     

氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血小板源性生长因子B mRNA表达的影响

目的 观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA表达的影响,从一个新的角度探讨氨氯地平的抗动脉粥样硬化作用机制.方法 预实验筛选出氧化型低密度脂蛋白对血小板源性生长因子B表达适宜的处理浓度(50 mg/L)与时间(24 h).实验分为5组:对照组、氧化型低密度脂蛋白组和三个不同剂量(0.1、1.0和10.0 μmol/L)氨氯地平组,用RT-PCR检测血小板源性生长因子B mRNA的表达.结果 以50 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激HUVEC-12内皮细胞24 h.随着预处理氨氯地平浓度增加,细胞血小板源性生长因子B mRNA的表达逐渐降低,并呈现浓度依赖性,当浓度为10.0 μmol/L时作用更明显.结论 氧化型低密度脂蛋白可影响HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA的表达,氨氯地平可下调氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA的表达.     

血小板源性生长因子影响血管弹性蛋白酶表达

探讨球囊损伤后血管平滑肌细胞丝氨酸弹性蛋白酶表达增加的机理。用球囊导管损伤Wistar系雄性大鼠主动脉或颈总动脉。以血小板源性生长因子A和大鼠胰腺丝氨酸弹性蛋白酶的地高辛标记RNA探针进行原位杂交，并用抗5-溴脱氧尿嘧啶抗体进行双重染色。用抗血小板源性生长因子从、抗血小板源性生长因子BB、抗胰腺弹性蛋白酶、抗人增殖细胞核抗原等抗体进行免疫染色或免疫双重染色。电镜观察细胞的超微结构。结果发现：①在球囊损伤后O．5～4h，血小板源性生长因子mRNA表达细胞多于弹性蛋白酶mRNA表达细胞；②增殖细胞和迁移细胞既有血小板源性生长因子mRNA和其蛋白表达，又有弹性蛋白酶mRNA和其蛋白表达；③迁移细胞多为增殖细胞核抗原染色阳性．细胞内可见到核分裂像。提示血小板源性生长因子可能是刺激中膜平滑肌细胞增殖、迁移并使其弹性蛋白酶增加的影响因子之一。