单克隆抗体双抗体夹心ELISA检测日本血吸虫病人循环抗原

本文用抗日本血吸虫肠相关抗原的单克隆抗体Ｓｊ１１６和Ｓｊ１０ｃ作双夹心ＥＬＩＳＡ检测粪检阳性的血吸虫病人血清中的循环抗原，阳性率达９３．４％。正常人假阳性率为６．７％。与肺吸虫、华支睾吸虫、旋毛虫及囊虫病的交叉反应分另伪３．２％、０、１３．３％和１３．３％。     

4种抗原诊断血吸虫病效果的比较研究

目的 寻找特异性、敏感性较高，且价廉和制备简易的血吸虫病诊断抗原。方法 用酶链免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）比较４种抗原检测５８例慢性血吸虫病人的阳性率及４１例正常人血清和１０４例其它寄生虫病人的阴性率。结果 ＳＥＡ、ＳｊＭＡｇ，ｒＳｊ３２和ＫＬＨ４种抗原的敏感性分别为９４．８％、９８．３％，９３．１％和９６．６％，特异性分别为９５．２％、９７．９％、９７．２％和９９．３％。４种抗原之间敏感性和特异性     

抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究

为探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶（ｒＳｊＣＴＰＩ）的单克隆抗体检测血吸虫循环酶抗原在血吸虫病免疫诊断和疗效考核中的价值。制备日本血吸虫ｒＳｊＣＴＰＩ表达蛋白,以此重组蛋白免疫小鼠,筛选出高效价的抗ｒＳｊＣＴＰＩ单抗,建立以纯化的抗血吸虫可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）的多克隆抗体（ＩｇＧ）为捕捉系统,以酶标的抗ｒＳｊＣＴＰＩ单抗为检测系统的酶联免疫吸附试验（Ｐ－Ｍ－ＥＬＩＳＡ）法检测血吸虫病人等血清。并对该法的敏感性、特异性、交叉反应以及疗效考核与常规的ＳＥＡ－ＥＬＩＳＡ比较。结果获得了一株抗ｒＳｊＣＴＰＩ的单克隆抗体,其抗体同型为ＩｇＧ１。Ｐ－Ｍ－ＥＬＩＳＡ检浊急性、慢性血吸虫病人、健康人以及华枝睾吸虫病人、肺吸虫病人血清的阳性率分别为１００％、９１．７％、０、０和０。而ＳＥＡ－ＥＬＴＳＡ为１００％、９８．３％、６．     

谷胱甘肽-S-转移酶多克隆抗体免疫金测定法检测日本血吸虫循环抗原的研究

目的探讨谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）多克隆抗体诊断日本血吸虫病的应用价值。方法以抗ｒＳｊ２６ＧＳＴ多克隆抗体力捕获并检测抗体，建立双抗体夹心斑点免疫金测定技术，用于检测日本血吸虫循环抗原，并以斑点免疫金测定法和ＥＬＩＳＡ检测抗体作对照。结果３种方法检测急性血吸虫病的敏感性均为１００％；对慢性血吸虫病的敏感性分别为７６．４％、９８．１％和９６．２％；特异性分别为９５．０％、９８．０％和９６．０％。结论ｒＳｊ２６ＧＳＴ抗原对日本血吸虫病具有诊断价值，可望有较好的应用前景。     

日本血吸虫磷酸丙糖异构酶小鼠免疫试验

目的：探讨从日本血吸虫大陆株成虫分离的天然磷酸丙糖异构酶抗原（ＳｊｃＴＰＩ）免疫小鼠后对尾蚴攻击感染的保护性作用。方法：采用丙酮沉淀法从日本血吸虫大陆株成虫中提取天然的ＴＰＩ抗原，并以所提纯的ＳｊｃＴＰＩ抗原加福氏佐剂经皮下和肌肉注射免疫ＮＩＨ小鼠，攻击感染后６ｗｋ收集小鼠血清并计数成虫负荷及肝、肠组织虫卵数。同时设有日本血吸虫成虫抗原（ＳＷＡＰ）免疫对照组和攻击感染对照组。结果：天然ＳｊｃＴＰＩ抗原免疫小鼠后减虫率为２１．４％－２５．０％，肝组织减卵率达５７．８％－６０．３％；ＥＬＩＳＡ法检测ＴＰＩ免疫小鼠血清抗ＴＰＩ抗体ＯＤ值明显高于对照组小鼠的ＯＤ值（Ｐ＜０．０５）。结论：天然的ＳｊｃＴＰＩ抗原具明显的免疫原性和抗原性，可以继续进行编码ＴＰＩ基因的克隆与表达。     

日本血吸虫循环抗原的生化检测

Ｓｊ６５蛋白为来源于日本血吸虫虫卵的循环抗原，该蛋白免疫原性较弱，能与一种分子量为６８ＫＤ的糖蛋白（Ｓｊ６５结合蛋白）专一结合。利用酶标记Ｓｊ６５结合蛋白，建立Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测感染血清中的Ｓｊ６５。用该法测定急、慢性血吸虫病人血清，阳性率分别为１００％及８１．３％。正常人、兔、鼠、肝炎病人血清及蛔、钩虫病人血清均未见阳性反应。在感染兔血清及并殖吸虫病人血清中可检出Ｓｊ６５，而在感染小鼠血清及并殖吸虫感染犬血清中却未检出。感染兔经吡喹酮治疗５周后，９０％转为阴性。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗１年后，６０％转为阴性。结果表明，感染血清中Ｓｊ６５的生化检测似能反映感染程度及考核治疗效果，同时也提示，血清中Ｓｊ６５的水平可因宿主的不同而不同。     

谷胱甘肽—S—转移酶多克隆抗体免疫金测定法检测日本血？…

目的 探讨谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）多克隆抗体诊断日本血吸虫病的应用价值。方法 以抗ｒＳｊ２６ＧＳＴ多克隆抗体为捕获并检测抗体，并建立双抗体夹心斑点免疫检测技术，用于检测日本血吸虫循环抗原，并以斑点免疫金测定法和ＥＬＩＳＡ检测抗体作对照。结果 ３种方法检测急性血吸虫病的敏感性均为１００％，对慢性血吸虫病的敏感性分别为７６．４％、９８．１％和９６．２％。特异性分别为９５．０％、９８．０     

重组日本血吸虫副肌球蛋白诱导水牛保护性免疫的研究

为观察重组日本血吸虫副肌球蛋白（ｒＳｊ９７）对水牛的保护效果。２０头水牛随机分为佐剂（Ｑｕｉｌ Ａ）对照组和抗原（ｒＳｊ９７）免疫组。对照组仅注射Ｑｕｉｌ Ａ，而免疫组注射Ｑｕｉｌ Ａ加ｒＳｊ９７，在第０、２１５周肌肉注射。第３次免疫后两周经腹部贴片攻击感染１０００条日本血吸虫尾蚴，感染后第４９ｄ剖杀冲虫，计数虫数和肝卵数。结果显示，与对照组相比，ｒＳｊ９７免疫组的减虫率为４９．９％（Ｐ〈０．０５），肝脏减卵率５７．３％（Ｐ〈０．０１）。提示ｒＳｊ９７可诱导水牛产生一定程度的血吸虫攻击感染的保护性免疫力，并具有一定程度的抗病作用，进一步证实了副肌球蛋白可作为抗血吸虫病的侯选疫苗分子。     

IL—12对血吸虫重组SjGST—Sj32蛋白保护性免疫效果的影响

为进一步提高重组ＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２（ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２）的免疫保护作用,用ＩＬ－１２作为佐剂进行免疫增强效果的观察。在０、２、６周用ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２经皮下免疫小鼠３次,攻击感染后１、３、５、７、９ｄ经腹腔注射佐剂ＩＬ－２,用减虫率及减卵率表示保护性免疫力。结果与ＰＢＳ对照组相比,ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２／ＩＬ－１２组减虫率为３８．２％（Ｐ〈０．０１）,每克肝卵数（ＬＥＰＧ）减少率为７５．１％（Ｐ〈０．０１）,每雌肝卵数（ＬＥＰＦ）减少率为７２．９％（Ｐ〈０．０１）;与单独注射ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２组相比,ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２／ＩＬ－１２组减虫率为２６．８％（Ｐ〈０．０５）,ＬＥＰＧ减少率为７２．５％（Ｐ〈０．０１）,ＬＥＰＦ减少率为６６．２％（Ｐ〈０．０５）。表明ＩＬ－１２作为佐剂,可同时增强ｒＳｊ     

日本血吸虫 26 kDa 谷胱甘肽S-转移酶DNA疫苗的研究及其保护性免疫效果观察

本文对大陆株日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ＤＮＡ疫苗进行研究，并观察了其免疫保护效果。分别构建含Ｓｊ２６ＧＳＴ基因的重组质粒ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６，采用脂质体介导的基因转移将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６分别导入ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞，用免疫荧光法（ＩＦＡ）证实Ｓｊ２６ＧＳＴ在真核细胞中的表达。分别将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６及ｐＢＫ－ＣＭＶ肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。免疫３次后，免疫鼠产生一定水平的抗血吸虫抗体。用日本血吸虫尾蚴攻击感染免疫小鼠，结果ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６免疫鼠减虫率分别为３７．１９％和４４．４４％，肝组织减卵率为７３．８０％和４７．２０％，每对成虫产卵减少５６．８８％和１５．６７％。实验结果表明，日本血吸虫Ｓｊ２６ＤＮＡ疫苗免疫小鼠后能诱生一定水平的抗血吸虫抗体，免疫鼠可形成一定水平的保护性免疫力，预防血吸虫尾蚴感染。同时可减轻宿主肝组织血吸虫卵所致的病理损害作用     

日本血吸虫31／32kDa分子抗原快速诊断试剂盒的研制与 …

目的 基于纯化的日本血吸虫３１／３２ｋＤａ分子抗原,建立一种敏感、特异、简便、快速诊断血吸虫病的试剂盒。方法 采用Ｃｈａｐｐｅｌｌ方法分离纯化Ｓｊ３１／３２ｋＤａ抗原并建立快速ＥＬＩＳＡ,检测急、慢性血吸虫病人,并以肺吸虫病人、肝吸虫病人及正常人血清作为平行对照。结果 血吸虫病人４５７例,阳性检出率９４．３％,６７例肺吸虫病人及７６例肝吸虫病人血清均不出现明显交叉反应,正常人群假阳性率为１％。结论     

18kDa抗原诊断泡型包虫病的评价

目的：评价１８ｋＤａ抗原在泡型包虫病（ＡＥ）诊断中的价值。方法：用免疫印渍法检测３３例泡型包虫病、６９例囊型包虫病（ＣＥ）、３０例囊虫病和８２例健康人血清对泡型棘球蚴（Ｅｍ）和囊型棘球蚴（Ｅｇ）原头节１８ｋＤａ抗原的抗体反应。同时用羊包囊液抗原常规ＥＬＩＳＡ法检测上述血清。结果：ＥＬＩＳＡ试验,ＡＥ血清阳性率为９３．９％、ＣＥ为８５．５％、囊虫病为５０％、健康人为６．１％。显示３种患者血清存在较强的交叉反应。免疫印渍试验,两种原头节的１８ｋＤａ抗原对ＡＥ血清阳性反应均为９０．９％、ＣＥ分别为１０．１％和１３％、囊虫病患者为１３．３％和１６．７％。与健康人血清不发生反应。结论：１８ｋＤａ抗原可以有效的鉴别两型包虫病。     

日本血吸虫Sj32DNA疫苗免疫效果的观察

目的：探讨血吸虫Ｓｊ３２ＤＮＡ疫苗抗血吸虫感染的免疫效果。方法：采用ＰＣＲ技术,人工合成引物,以重组ＤＮＡｐＳｊ３２为模板,扩增出编码３２ｋＤａ天冬酰胺肽链酶,即Ｓｊ３２全长ｃＤＮＡ和引入了起始密码子终止密码子的部分ｃＤＮＡ片段,将其分别克隆到ｐＫＢ－ＣＭＶ,构建真核表达载体ｐＢＫ－Ｓｊ３２－１和ｐＢＫ－Ｓｊ３２－２。采用脂质体介导的基因转移将两种重组ＤＮＡ导入ＮＩＨ３Ｔ３细胞,间接免疫荧光法证实Ｓｊ３２在真核细胞中表达。小批量制备纯化ＤＮＡ,进行动物免疫试验。将两种构建的真核表达载体分别直接ｉｍＢＡＬＢ／ｃ小鼠,共免疫３次,攻击感染后６ｗｋ剖杀小鼠。收集血清,ＥＬＩＳＡ法检测抗体水平,并计数成虫负荷及肝组织虫卵数。结果：ｐＢＫ－Ｓｊ３２－１组与ｐＢＫ－Ｓｊ３２－２组免疫小鼠后的减虫率分别为３８．６％和３０．９％,肝组织减卵率分别为５５．７％和５５．２％,与对照组比较,其间差别均具有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）。各ＤＮＡ疫苗免疫组能诱导一定水平的抗血吸虫抗体。结论：Ｓｊ３２ＤＮＡ疫苗可诱导小鼠产生一定程度的保护性免疫力,有可能作为血吸虫疫苗候选抗原分子。     

应用抑制ELISA和阻滞IHA检测囊虫病患者血清囊虫游离…

本文应用抑制ＥＬＩＳＡ和阻滞ＩＨＡ检测囊虫病患者血甭游离循环抗原和总循环抗原。共检测治疗前患者、吡喹酮治疗１，４，７个疗程患者血甭１２０份、３８份、３２份和２３份。抑制ＥＬＩＳＡ检测ＦＣＡｇ的阳性率和定量结果分别为７７．５％，８１．５％，５１．３％，和８．７％；阻滞ＩＨＡ检测ＦＣＡｇ的阳性率和定量结果分别为７５％，７６．３％和８．７％。     

纯化31/32kDa抗原和成虫粗抗原诊断日本血吸虫病的比较

用纯化的日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原（Ｓｊ３１／３２）与成虫粗抗原（ＡＷＡ）对不同类型日本血吸虫病患者血清抗体进行检测，结果３种不同类型（急性、慢性和晚期）血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体水平（ＯＤ值）分别为２．７７±０．２５、２．６７±０．３０和２．４６±０．１９（Ｐ＜０．０１），抗ＡＷＡ抗体水平分别为３．２７±０．１６、３．２８±０．１６和３．２０±０．１７（Ｐ＞０．０５）。慢性血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体与每克粪便虫卵数（ＥＰＧ）之间有高度的相关性（ｒ＝０．９３），明显高于抗ＡＷＡ抗体与ＥＰＧ的相关性（ｒ＝０．４５）。结果表明，利用纯化Ｓｊ３１／３２诊断血吸虫病能较好地区别不同的感染类型和感染度。     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原Sj 22.6kDa的核苷酸序列分析

目的：对ｐＧＳｊ２４克隆化基因进行核苷酸序列分析，了解其编码蛋白的属性。方法：常规制备ｐＧＳｊ２４克隆化基因并重组入测序载体Ｍ１３ｍｐ１９，以ＤＹＥＰＲＩＭＥＲ荧光测序试剂盒进行核苷酸序列测定。分别以ＤＮＡＳＩＳ和ＧＯＬＤＫＥＹ软件对序列资料进行分析。结果：ｐＧＳｊ２４克隆化基因长８４０ｂｐ，含一开放阅读框，可编码一分子量为２２．６ｋＤａ的蛋白质。开读框上游和下游均有终止密码子。该基因与已发表的日本血吸虫２２．６ｋＤａ蛋白的编码基因同源性达９５％，编码区同源性达９９．７％。在该基因内有一段典型的ＥＦ－Ｈａｎｄ钙结合区序列，并有内质网导肽、微体导向信号等功能位点。预测该蛋白质内可能的抗原决定簇位置为第２９－３２、６３－６８和８７－１０１等氨基酸片段。结论：ｐＧＳｊ２４克隆化基因为日本血吸虫２２．６ｋＤａ抗原编码基因。     

基本消灭日本血吸虫病地区人群循环抗原的检测

探讨在基本消灭日本血吸虫病地区检测循环抗原的应用价值。用夹心ＥＬＩＳＡ和ＥＬＩＳＡ检测抗原，用ＩＨＡ检测抗体，抗原阳性者进一步测ＣＯＰＴ。结果：在１１００份样本中，夹心ＥＬＩＳＡ的阳性率为５．１％，斑点ＥＬＩＳＡ的阳性率为６．５％，两者均阳性者４６例，两者阴性者１０１９例，两者符合率为９６．８％。ＩＨＡ检测抗体的阳性率为２５．３％，有治疗史人群中抗体的阳性率明显高于无治疗史者。结论：抗体的阳性率显     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原Sj 22.6kDa的核苷酸序列分析

目的：对ｐＧＳｊ２４克隆化基因进行核苷酸序列分析，了解其编码蛋白的属性。方法：常规制备ｐＧＳｊ２４克隆化基因并重组入测序载体Ｍ１３ｍｐ１９，以ＤＹＥＰＲＩＭＥＲ荧光测序试剂盒进行核苷酸序列测定。分别以ＤＮＡＳＩＳ和ＧＯＬＤＫＥＹ软件对序列资料进行分析。结果：ｐＧＳｊ２４克隆化基因长８４０ｂｐ，含一开放阅读框，可编码一分子量为２２．６ｋＤａ的蛋白质。开读框上游和下游均有终止密码子。该基因与已发表的日本血吸虫２２．６ｋＤａ蛋白的编码基因同源性达９５％，编码区同源性达９９．７％。在该基因内有一段典型的ＥＦ－Ｈａｎｄ钙结合区序列，并有内质网导肽、微体导向信号等功能位点。预测该蛋白质内可能的抗原决定簇位置为第２９－３２、６３－６８和８７－１０１等氨基酸片段。结论：ｐＧＳｊ２４克隆化基因为日本血吸虫２２．６ｋＤａ抗原编码基因。     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原 Sj22.6kDa 的免疫学活性鉴定

目的：对重组Ｓｊ２２．６ｋＤａ抗原（ｒＳｊ２２．６）进行免疫学活性鉴定，了解其作为疫苗候选抗原的潜力。方法：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ反应确定ｒＳｊ２２．６的抗原性；将ｒＳｊ２２．６注射家兔，制备特异抗血清；以血吸虫尾蚴对Ｃ５７小鼠进行攻击感染，初步鉴定其免疫保护力。结果：ｒＳｊ２２．６可与特异性抗体发生反应，并刺激家兔产生特异性抗体应答，抗体滴度为１１２８０。攻击感染中，免疫组小鼠的减虫率达７７．２％。结论：ｒＳｊ２２．６具有良好的免疫学活性，在诱导抗日本血吸虫感染方面具有一定的潜力。     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原 Sj22.6kDa 的免疫学活性鉴定

目的：对重组Ｓｊ２２．６ｋＤａ抗原（ｒＳｊ２２．６）进行免疫学活性鉴定,了解其作为疫苗候选抗原的潜力。方法：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ反应确定ｒＳｊ２２．６的抗原性;将ｒＳｊ２２．６注射家兔,制备特异抗血清;以血吸虫尾蚴对Ｃ５７小鼠进行攻击感染,初步鉴定其免疫保护力。结果：ｒＳｊ２２．６可与特异性抗体发生反应,并刺激家兔产生特异性抗体应答,抗体滴度为１１２８０。攻击感染中,免疫组小鼠的减虫率达７７．２％。结论：ｒＳｊ２２．６具有良好的免疫学活性,在诱导抗日本血吸虫感染方面具有一定的潜力。