反义蛋白激酶Cζ下调角质形成细胞中增殖相关基因的表达

自从1977年发现蛋白激酶C(PKC)以来,研究证明PKC信号转导通路在细胞生长、分化等功能的调节中起关键的作用[1],我们以往的研究已证明细胞的增殖与增殖相关基因的表达密切相关[2,3]。我们在以前研究的基础上,从细胞增殖相关基因的角度,进一步探讨了反义PK C灼抑制Colo16角质形成细胞增殖的机制,为弄清PK C灼在角质形成细胞增殖调控中的作用提供实验依据。一、材料和方法(一)材料:PTB654-PKC灼、PcD NA3、Colo16角质形成细胞株分别由日本神户大学Ono教授、北京大学医学部生化系侯维敏教授及日本北里大学H ikaru教授惠赠。Dulbecco…     

反义PKCξ对角质形成细胞增殖的调节

目的：探讨角质形成细胞中，反义蛋白激酶Cξ与磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和细胞外信号调节激酶ERK1／2信号转导网络以及与核因子NF-kB的相互作用关系。方法：通过细胞原位杂交、间接免疫荧光和激酶活性测定方法，研究反义PKCξ抑制角质形成细胞增殖的信号转导机制。结果：表达反义PKCξ的角质形成细胞中，PI3K的基因表达显著下调，ERK1／2和NF-kB的核内表达水平以及ERK1／2的激酶活性明显降低。结论：表达反义PKCξ可通过下调PI3K和ERK1／2信号通路抑制角质形成细胞的增殖。     

反义蛋白激酶Cζ对角质形成细胞增殖的影响

目的 研究蛋白激酶C(PKC)ζ亚类在角质形成细胞增殖中的作用.方法 采用基因转染的方法将PKCζ基因导入角质形成细胞株Colo16中,初步研究了表达反义PKCζ对Colo16角质形成细胞增殖的影响.结果 表达反义PKCζ的角质形成细胞形态发生改变,生长速率明显减慢,被阻抑在G1期.结论 反义PKCζ抑制Colo16角质形成细胞的增殖.     

人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞对蛋白激酶C激活的不同生物学效应

细胞信号传导调节通路主要包括蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)、酪氨酸激酶等酶系统。它们广泛参与细胞的各种生物学过程如增殖、分化、基因的表达和功能蛋白的合成等^[1,2]。PKC是其中重要的调节通路。已发现人角质形成细胞和真皮成纤维细胞中均有PKC的多种亚型,但是对这两种细胞在PKC激活后生物学效应的比较研究甚少。我们通过体外实验,观察了PKC激活剂乙酸肉寇佛泊酯(PMA)刺激后角质形成细胞和真皮成纤维细胞在形态学、细胞增殖以及细胞因子产生等方面的变化,发现这两种细胞在PKC激活后生物学效应存在差异。     

银屑病患者表皮细胞增殖与cvclinD1的关系研究

银屑病是一种良性增生性皮肤病，其病理特征为表皮过度增殖，伴角化及真皮淋巴细胞浸润。银屑病角质形成细胞动力研究发现表皮内角质形成细胞增生周期变短，进入增生的细胞增多。银屑病表皮细胞增殖较正常皮肤表皮细胞强，与增加循环干细胞数量以加强角质形成细胞向外生长能力有关。为了探讨其细胞增殖能力与细胞循环周期的关系，我们选择了在分     

TNF-α对体外培养的黑素细胞活力的影响

黑素细胞是皮肤树突状细胞，其产生的黑色素小体传递给角质形成细胞，经角质形成细胞呈现出肤色的深浅，因此，通过控制黑素细胞的增殖达到最终控制肤色深浅是我们研究的目标。肿瘤坏死因子-α(TNF—α)作为人体内合成和分泌的细胞因子，有抑制多种细胞增殖的作用。本文通过观察TNF—α对体外培养黑素细胞的生物学影响，以探讨其对皮肤色素变化方面的作用。     

维A酸对砷刺激角质形成细胞增殖的拮抗作用

目的研究维A酸药物对三价砷刺激角质形成细胞增殖的拮抗作用及其机制。方法以体外培养的角质形成细胞为对象,低浓度三价砷预处理细胞刺激增殖,并用3H-TdR掺入法分析不同维A酸药物对细胞增殖的拮抗效应,进一步用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果一定浓度三价砷可刺激角质形成细胞增殖,加入不同浓度芳维A酸氨丁三醇、依曲替酸处理24h,显示0.01~1μmol/L维A酸可不同程度拮抗砷剂的刺激增殖效应,芳维A酸氨丁三醇作用强于依曲替酸。流式细胞仪检测细胞周期分布变化,显示维A酸处理后S期细胞比例降低,G0-G1期细胞比例升高。结论低浓度的三价砷可刺激角质形成细胞增殖,而维A酸可拮抗砷剂的刺激增殖作用,使S期细胞比例降低,可能是维A酸类药物治疗砷相关皮肤病的机制之一。     

银屑病成纤维细胞培育上清对角质形成细胞增殖的影响

目的 探讨银屑病成纤维细胞对角质形成细胞增殖的作用。方法 原代培养银屑病成纤维细胞、正常人成纤维细胞，无血清培养的角质形成细胞，四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测银屑病成纤维细胞、正常人成纤维细胞培养上清对角质形成细胞增殖的影响。结果 银屑病成纤维细胞培养上清培养的角质形成细胞的增殖活性高于正常人成纤维细胞培养上清组和无血清培养的角质形成细胞。结论 银屑病成纤维细胞可能通过释放某些可溶性细胞因子促进角质形成细胞的增殖，维持银屑病皮损表皮的过度增殖状态。     

尖锐湿疣患者角质形成细胞凋亡与增殖

有关尖锐湿疣(CA)患者角质形成细胞凋亡与增殖平衡方面的研究少见,故值得探讨。本研究采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术检测CA皮损角质形成细胞凋亡,采用免疫组化亲和素-生物素复合物(ABC法)检测CA皮损角质形成细胞增殖细胞核抗原(PCNA),以探讨CA皮损角质形成细胞凋亡和增殖及其平衡在CA发病中的作用。     

咪喹莫特对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的 探讨咪喹莫特对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法 使用噻唑蓝（MTT）法检测药物处理后细胞生长抑制情况，细胞克隆形成试验检测药物处理后细胞增殖能力变化，倒置显微镜观察药物作用前后细胞形态改变；端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法（TRAP-ELISA）检测细胞端粒酶活性变化；细胞免疫组化和实时定量RT-PCR技术检测端粒酶活性相关c-Myc基因表达情况。结果 咪喹莫特能明显抑制SCL-1细胞增殖，并存在浓度依赖性。培养48 h时，0，0.05，0.10，0.15和0.20 g/L咪喹莫特组细胞增殖抑制率分别为0，31.3% ± 3.19%，44.7% ± 4.21%，49.2% ± 3.71%和71.6% ± 3.24%。咪喹莫特作用SCL-1细胞48 h，端粒酶活性随药物浓度增高呈显著的递减关系。48 h时，0.05和0.15 g/L咪喹莫特组c-Myc mRNA和蛋白表达均低于空白对照组（P ＜ 0.05）。结论 咪喹莫特可明显抑制SCL-1细胞的增殖，降低c-Myc基因表达，下调SCL-1肿瘤细胞端粒酶活性，可能是其抗癌作用的机制之一。     

来氟米特对角质形成细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究来氟米特对角质形成细胞增殖及凋亡的影响。方法 以良性角质形成细胞株HaCaT为研究对象．用结晶紫染色及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化法反映细胞增殖变化；HE染色观察药物处理前后细胞形态变化：流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率变化。结果 μmol/L来氟米特处理HaCaT细胞，24h后表现出对上皮细胞增殖的抑制作用，PCNA阳性细胞开始减少。随着时间延长和药物剂量的加大．药物的抗增殖作用愈加明显，PCNA阳性细胞进一步减少，当药物浓度达到200μmol/L时，视野中未见PCNA阳性细胞。即药物对HaCaT细胞的抑制作用呈时间、剂量依赖关系。药物处理后，细胞变小或变圆，膜皱缩，核浓缩、深染，核分裂像减少。细胞S期比例增加，G2M期比例减少，G1期之前未见与药物剂量相关的凋亡峰。结论 来氟米特可抑制haCaT细胞增殖，对细胞凋亡影响不大。     

rhFGF-7对体外培养人皮肤角质形成细胞增殖的影响

目的建立一种人皮肤角质形成细胞分离和培养的方法,研究重组人成纤维细胞生长因子7(rhFGF-7)对人皮肤角质形成细胞增殖的影响。方法取环切术后包皮,分别用胰酶和dispaseⅡ酶消化法分离表皮,用无血清培养基进行无滋养层培养,采用免疫细胞化学方法对培养的细胞进行鉴定,并用细胞计数法测定细胞的生长曲线,MTT法检测rhFGF-7对人皮肤角质形成细胞增殖的影响。结果与胰酶消化分离表皮相比,dispaseⅡ酶消化获得的表皮,其细胞贴壁率高,增殖速度快,且成纤维细胞污染少;荧光显微镜下细胞胞浆呈黄绿色,为角蛋白阳性染色;培养的角质形成细胞可持续增殖至第8代,10ng/mL的rhFGF-7促角质形成细胞增殖作用最显著。结论所建立的人皮肤角质形成细胞分离和培养方法,可获得高纯度的人皮肤角质形成细胞,rhFGF-7可促进体外培养人皮肤角质形成细胞的增殖。     

皮肤科学基础

20042639　角蛋白K14反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖的影响/陈玉欣(四军大西京医院全军皮肤性病中心)…//临床皮肤科杂志.-2004,33(5).-263～265采用脂质体将人工合成的正义、反义及错配寡核苷酸基因片段导入体外培养的角质形成细胞,应用细胞生长抑制实验、透射电镜和流式细胞仪分别检测反义寡核苷酸对角质形成细胞的增殖、超微结构和细胞增殖周期的影响。结果显示,脂质体介导的K14反义寡核苷酸对角质形成细胞的增殖活性有明显抑制作用;电镜下见角质形成细胞中角蛋白合成明显减少;流式细胞仪检测见细胞周期发生明显改变,G1期细胞百分率上…     

nicastrin基因沉默的HaCaT细胞基因表达谱分析

【摘要】 目的 通过沉默人永生化角质形成细胞HaCaT细胞中nicastrin（NCSTN）基因的表达,研究其下游细胞增殖及分化相关信号通路的改变。方法 将HaCaT细胞分为干扰组、阴性对照组和空白对照组：干扰组转染特异性NCSTN-siRNA,阴性对照组转染阴性对照siRNA,空白对照组转染等量转染试剂。实时PCR及Western印迹检测各组NCSTN mRNA和蛋白表达验证转染效率。运用Agilent人类全基因组表达谱芯片技术研究干扰组HaCaT细胞基因表达谱与阴性对照组之间的差异,以表达上调或者下调倍数 ≥ 2.0且P ≤ 0.05为标准,将差异基因用GO分析进行富集,筛选出表达差异显著且与角质形成细胞增生分化相关的基因,用实时PCR验证结果。结果 干扰组HaCaT细胞NCSTN mRNA及蛋白相对表达量分别为0.287 ± 0.090、0.443 ± 0.085,明显低于阴性对照组（0.969 ± 0.127、1.047 ± 0.114）以及空白对照组（1.000 ± 0.151、1.000 ± 0.111）,差异均有统计学意义（F值分别为30.787、31.139,P值均为0.001）。表达谱芯片显示,与阴性对照组相比,干扰组表达下调基因605条,上调基因444条。GO分析显示,干扰后差异表达基因富集到上皮发育、上皮细胞分化、角质形成细胞分化、角化4种生物学过程。对表达差异显著且与角质形成细胞增生分化相关的Sprouty相关蛋白2基因、表皮生长因子7基因、胰岛素样生长因子结合蛋白5基因、人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2基因和骨形成发生蛋白6基因通过实时PCR验证,验证结果与芯片结果显示的差异趋势一致。结论 NCSTN基因功能缺失有可能通过调节其下游细胞增殖及分化相关信号通路的表达,影响角质形成细胞的正常增殖和分化。     

反义PKCζ对角质形成细胞增殖的调节

目的:探讨角质形成细胞中,反义蛋白激酶Cζ与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和细胞外信号调节激酶ERK1/2信号转导网络以及与核因子NF-κB的相互作用关系。方法:通过细胞原位杂交、间接免疫荧光和激酶活性测定方法,研究反义PKCζ抑制角质形成细胞增殖的信号转导机制。结果:表达反义PKCζ的角质形成细胞中,PI3K的基因表达显著下调,ERK1/2和NF-κB的核内表达水平以及ERK1/2的激酶活性明显降低。结论:表达反义PKCζ可通过下调PI3K和ERK1/2信号通路抑制角质形成细胞的增殖。     

瘦素通过激活STAT3信号通路促进HaCaT细胞增殖

【摘要】 目的 探讨瘦素对人角质形成细胞的生物学作用及其分子机制。 方法 以人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞为研究对象,不同浓度人重组瘦素处理细胞,CCK-8法检测瘦素对细胞增殖影响,流式细胞仪检测细胞周期变化,Western印迹分析瘦素激活的下游信号分子活化程度。采用GraphPad Prism 5 软件进行统计分析,组间差异采用t检验。 结果 CCK-8法检测显示,50 μg/L及100 μg/L瘦素作用24及48 h后可使细胞增殖活性不同程度增加,且瘦素在24 h内的促增殖效应呈剂量依赖方式（r = 0.9989,P < 0.05）。流式细胞仪检测发现,与未经瘦素处理的对照组相比,100 μg/L瘦素作用24 h后S期细胞比例增多,而G0/G1期细胞比例减少;处理组细胞增殖指数为0.603 ± 0.0157,显著高于对照组（0.564 ± 0.0144）,差异有统计学意义（P < 0.05）。Western印迹发现,100 μg/L瘦素可使HaCaT细胞STAT3的磷酸化程度明显增高。STAT3抑制剂piceatannol能明显抑制瘦素刺激的HaCaT细胞促增殖作用。 结论 瘦素可能通过激活STAT3信号转导途径促进角质形成细胞增殖。     

β-溶血型链球菌与角质形成细胞增殖和凋亡研究

目的 探讨β－溶血型链球菌诱发银屑病的机制。方法 ＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法、流式细胞仪测定亚二倍体含量、片段化ＮＤＡ分析、ＡｎｎｅｘｉｎＶ凋亡检测法。结果 链球菌悬液活化的外周血细胞培养上清液作用于角质形成细胞４８ｈ，可促进角质形成细胞增殖，再次加入上清液继续作用４８ｈ，则诱则细胞凋亡（Ｐ〈０．０１）；而链球菌本身对角质形成细胞增殖或凋亡无明显影响。结论 链球菌作为超抗原活化Ｔ细胞，使之释放细胞因子而     

FoxM1对HaCaT细胞增殖、细胞周期的影响

目的:确定FoxM1对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响。方法:采用DNA重组技术构建FoxM1的表达载体pEGFP-N2-FoxM1,脂质体法转染HeLa细胞并将其上清液按原浓度、1:1、1:2稀释后作用于HaCaT细胞。采用MTT法检测HaCaT细胞增殖情况;采用流式细胞仪测定HaCaT细胞周期变化。结果:FoxM1促进HaCaT。细胞的增殖,随着浓度增加,增殖作用愈明显;HaCaT细胞经FoxM1作用后,G1期细胞比例显著降低,S期与G2期比例则显著升高。结论:FoxM1对HaCaT细胞具有诱导增殖作用,呈剂量依赖性。     

活化型表皮生长因子受体和转录调节因子E2F在尖名湿疣中的表达

活化型表皮生长因子受体（EGFR）指磷酸化后的表皮生长因子受体，是一种相对分子质量为１７００００、具有生物学活性的跨膜糖蛋白。其广泛分布于哺乳动物细胞膜上，直接参与细胞的信号转导，促进细胞的增殖和分化；E２F是一种细胞周期依赖性转录调节因子，它存在于细胞核内，能调节细胞的基因表达，与细胞增殖直接相关。尖锐湿疣（CA）是一种由人类乳头瘤病毒（HPV）引起的皮肤粘膜良性增殖性病变。为了研究EGFR和E２F在尖锐湿疣增殖中的作用，我们采用免疫荧光方法分别观察了活化型EGFR和E２F在尖锐湿疣皮损中的表达情况，现报…     

亚砷酸对角质形成细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究亚砷酸对不同角质形成细胞增殖及凋亡的影响。方法：以体外培养的角质形成细胞株为对象，不同浓度的亚砷酸处理细胞后，用MTT比色分析法反映细胞增殖变化，用光镜和电镜观察细胞形态，流式细胞仪测定细胞周期分布及凋亡峰的出现，Annexin-V染色荧光照相证实凋亡的发生。结果：0.5-10μmol/L亚砷酸对良性角质形成细胞株HaCaT细胞有明显抑制作用，并呈时间和剂量依赖关系，而该浓度砷剂对A431细胞无明显影响。光镜及HE染色后观察均显示随浓度升高、时间延长，凋亡细胞增多。高于上述范围HaCaT细胞变性死亡增多，流式细胞仪检测细胞周期分布变化，G2M期细胞比例及亚G1期凋亡明显升高，Annexin-V法显示有绿色荧光的阳性细胞。而A431细胞无明显形态和细胞周期分布变化。结论：一定浓度的亚砷酸可抑制HaCaT细胞增殖，并具有诱导凋亡作用，对皮肤鳞状细胞癌A431细胞无明显影响，提示良性表皮角质形成细胞株HaCaT对亚砷酸的处理比鳞状细胞癌A431细胞株更敏感。