兔股骨头骨形态发生蛋白-2的分布和意义

目的观察兔股骨头骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的分布规律。方法成年日本大耳白兔,取股骨头标本行免疫组织化学染色,光镜下观察染色情况。结果关节软骨放射带和骺板成熟带软骨细胞以及成骨细胞和破骨细胞胞浆中染色强阳性,骨基质中沿胶原纤维有阳性染色;软骨钙化带和骺板钙化带部分软骨细胞染色弱阳性;软骨和骺板其余各区软骨细胞和骨细胞胞浆中染色阴性,软骨基质染色阴性。结论关节软骨放射带和骺板成熟带软骨细胞能合成BMP-2,随软骨细胞的变性,这一能力降低以至消失,BMP-2对骨组织的代谢有重要作用。     

腺病毒介导骨形态发生蛋白2基因对兔软骨细胞的影响

背景:研究证实骨形态发生蛋白2具有促进软骨细胞增殖、分化的能力。目的:进一步验证由腺病毒介导的骨形态发生蛋白2对兔软骨细胞增殖的作用。设计、时间及地点:对比观察,实验于2006-01/2007-12在苏州大学附属第一医院骨科实验室完成。材料:5.0月龄健康的新西兰白兔4只,体质量3.0～4.0kg,雄雌不限。携带骨形态发生蛋白2基因的腺病毒载体,由苏州大学附属第一医院骨科实验室保存。方法:取兔耳郭的弹性软骨进行细胞培养,再以腺病毒为载体转染骨形态发生蛋白2到软骨细胞内作为实验组,未转染的作为对照组。主要观察指标:采用阿利新蓝染色、四甲基偶氮唑盐比色法和糖胺聚糖定量测定等方法观察软骨细胞增殖和分化。结果:实验组中的软骨细胞数量多,形态均一,融合率高,酸性黏多糖也较未转染组多。四甲基偶氮唑盐比色法和糖胺聚糖定量检测结果示实验组均高于未转染组。结论:腺病毒介导的骨形态发生蛋白2能促进软骨细胞增殖、保持软骨细胞的分化表型。     

重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白胶植入联合髓芯减压治疗兔股骨头缺血性坏死

背景:大量实验证明骨形态发牛蛋白2不但对骨组织来源的细胞有刺激分化作用,还可诱导非骨组织来源的细胞株分化为成骨细胞.但是,许多学者在研究中发现,将骨形态发生蛋白直接用于骨的修复效果不理想.目的:将重组人骨形态发,上蛋白2,纤维蛋白胶复合物植入髓芯减压后的兔激素性股骨头坏死区,观察股骨头坏死区域的新骨形成情况.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-01/2007-12在武警医学院完成.材料:在纤维蛋白胶的抑肽酶溶液内加入重组人骨形态发生蛋白2形成胶冻状的生物材料,最终聚合材料中重组人骨形态发牛蛋白2的质量浓度1 mg/L.方法:制造激素型股骨头缺血性坏死的动物模型,将实验动物分为3组全部进行股骨头钻孔减压,在霞组人骨形态发生蛋白2,纤维蛋白组和单纯重组人骨形态发生蛋白2组孔道内植入相应材料,髓芯减压组钻孔后不植入材料.主要观察指标:MRI检查股骨头软骨及软骨下骨质信号改变,光镜下观察新骨生长情况,原子吸收分光光度仪测定钙含量.结果:MRI观察显示,植入重组人骨形态发牛蛋白2/纤维蛋白胶8周后原骨缺损孔道消失,被新生骨所取代.单纯植入重组人骨形态发生蛋白2可见少量新生骨,髓芯减压组仍为纤维组织.组织形态学观察可见重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白胶组术后8周原骨缺损区基本消失,有大量相对较成熟的骨小梁及板状骨并存.单纯重组人骨形态发生蛋白2组骨缺损区明显缩小,周边亦有少量骨小梁存在,新生毛细血管少见,缺损区有大量纤维组织填充.髓芯减压组术后8周缺损区缩小,周边有少量新骨形成,中心部仍为纤维组织.重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白胶组钙含量显著高于另外2组(P<0.01).结论:骨形态发牛蛋白在缺血坏死的股骨头内可诱导新骨形成,与纤维蛋白胶复合后,骨形态发生蛋白诱导新骨形成的质量和数量均明显增强.     

骨形态发生蛋白2复合脂肪源性干细胞修复兔缺血性股骨头坏死

背景:骨形态发生蛋白2和脂肪源性干细胞都有很强的成骨能力,对于缺血性股骨头坏死的修复有重要意义.目的:观察骨形态发生蛋白2体内复合脂肪源性干细胞成骨治疗兔股骨头缺血坏死的疗效.方法:48只新西兰大白兔采用液氮冷冻法造模,随机分为对照组,髓芯减压组,脂肪源性干细胞组,骨形态发生蛋白2复合脂肪源性干细胞组.结果与结论:脂肪源性干细胞组与骨形态发生蛋白2复合脂肪源性干细胞组兔股骨头坏死区域的组织修复旺盛,新生骨小梁较多且逐步强化,X射线未见明显的囊性变和股骨头塌陷发生.在8周时骨形态发生蛋白2复合脂肪源性干细胞组骨小梁及骨髓组织生长较单纯脂肪源性干细胞组更旺盛.表明骨形态发生蛋白2因子复合脂肪源性干细胞植入股骨头坏死模型后成骨较多,修复坏死区域功能较强.     

骨形态发生蛋白2复合脂肪源性干细胞修复兔缺血性股骨头坏死

背景：骨形态发生蛋白2和脂肪源性干细胞都有很强的成骨能力,对于缺血性股骨头坏死的修复有重要意义。目的：观察骨形态发生蛋白2体内复合脂肪源性干细胞成骨治疗兔股骨头缺血坏死的疗效。方法：48只新西兰大白兔采用液氮冷冻法造模,随机分为对照组,髓芯减压组,脂肪源性干细胞组,骨形态发生蛋白2复合脂肪源性干细胞组。结果与结论：脂肪源性干细胞组与骨形态发生蛋白2复合脂肪源性干细胞组兔股骨头坏死区域的组织修复旺盛,新生骨小梁较多且逐步强化,X射线未见明显的囊性变和股骨头塌陷发生。在8周时骨形态发生蛋白2复合脂肪源性干细胞组骨小梁及骨髓组织生长较单纯脂肪源性干细胞组更旺盛。表明骨形态发生蛋白2因子复合脂肪源性干细胞植入股骨头坏死模型后成骨较多,修复坏死区域功能较强。     

磷酸钙骨水泥复合骨形态发生蛋白修复实验性股骨头坏死

背景：骨形态发生蛋白有较强的诱导成骨作用,寻找一个合适的载体成为目前研究的热点问题.磷酸钙骨水泥因为具有许多优点而可能成为其良好的载体.目的：评价磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白复合物及单纯磷酸钙骨水泥对实验性股骨头缺血性坏死的修复作用.设计：随机对照的实验.单位：解放军第二○八医院动物实验室.材料：健康成年兔24只,体质量2.5～3.0kg,雌雄不限.骨形态发生蛋白（由第四军医大学西京医院骨科研究所提供）.磷酸钙骨水泥（由吉林大学第一医院骨科同日本爱知医科大学整形外科及日本三菱公司材料综合研究所共同研究开发）.方法：实验于2003-04/2004-04在解放军第二○八医院动物实验室完成.将磷酸钙骨水泥复合骨形态发生蛋白制备成磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白复合材料.兔24只,随机分为2组,即磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白复合物充填组及单纯磷酸钙骨水泥充填组,每组12只.制作实验性股骨头缺血性坏死骨缺损模型后于骨髓道内充填磷酸钙骨水泥或磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白复合物,术后动物3周及12周时分批处死动物进行X射线、组织学及电镜观察.主要观察指标：各组兔的成骨情况,骨缺损的修复情况及材料降解情况.结果：24只兔进入结果分析.①两组兔骨缺损区大体观察和X射线检查结果：术后12周时,磷酸钙骨水泥组可见有许多新骨形成,材料体积变小.磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白组有大量新骨形成,降解吸收现象明显,材料体积明显变小.②两组兔股骨头标本组织形态和超微结构观察结果：12周时磷酸钙骨水泥量减少,与新生骨之间部分区域可见空隙存在,新生骨小梁增粗,可见幼稚骨细胞,其细胞核圆形,染色质有轻度超边,粗面内质网扩张,线粒体有空化及嵴断裂现象;磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白组可见散在磷酸钙骨水泥,新生骨长人材料并与之相互分割包裹,成骨细胞紧帖附于磷酸钙骨水泥颗粒,其胞浆内粗面内质网增多扩张,线粒体增多肿胀,大量毛细血管侵入材料内部,血管周围依附较多成骨细胞.结论：磷酸钙骨水泥是骨形态发生蛋白的理想载体,磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白复合材料传导成骨和诱导成骨活性大于单纯磷酸钙骨水泥组,对实验性股骨头缺血性坏死具有修复作用.     

腺病毒介导骨形态发生蛋白2基因对免软骨细胞的影响

背景: 研究证实骨形态发生蛋白2具有促进软骨细胞增殖、分化的能力.目的: 进一步验证由腺病毒介导的骨形态发生蛋白2对兔软骨细胞增殖的作用.设计、时间及地点: 对比观察,实验于2006-01/2007-12在苏州大学附属第一医院骨科实验室完成.材料: 5.0月龄健康的新西兰白兔4只,体质量3.0-4.0 kg,雄雌不限.携带骨形态发生蛋白2基因的腺病毒载体,由苏州大学附属第一医院骨科实验室保存.方法: 取兔耳郭的弹性软骨进行细胞培养,再以腺病毒为载体转染骨形态发生蛋白2到软骨细胞内作为实验组,未转染的作为对照组.主要观察指标: 采用阿利新蓝染色、四甲基偶氮唑盐比色法和糖胺聚糖定量测定等方法观察软骨细胞增殖和分化.结果: 实验组中的软骨细胞数量多,形态均一,融合率高,酸性黏多糖也较未转染组多.四甲基偶氮唑盐比色法和糖胺聚糖定量检测结果示实验组均高于未转染组.结论: 腺病毒介导的骨形态发生蛋白2能促进软骨细胞增殖、保持软骨细胞的分化表型.     

关节软骨运动损伤修复中的骨形态发生蛋白

背景:骨形态发生蛋白是一种常用的组织工程支架材料,它在关节软骨损伤修复中起着不可替代的作用.目的:介绍关节软骨损伤修复的方法、骨形态发生蛋白的分类;重点阐述骨形态发生蛋白在运动性关节软骨损伤修复中的应用.方法:以"骨形态发生蛋白,运动损伤,关节软骨,修复"为中文检索词;以"bone morphogenetic protein,sports injuries,articular cartilage,repair"为英文检索词,应用计算机检索Pubmed数据库和维普数据库1998-01/2010-04的相关文章.纳入与骨形态发生蛋白关节软骨损伤修复研究相关的文献,排除重复性研究.结果与结论:共检索到74篇文献,排除无关重复的文献,保留20篇文献进行综述.目前研究证实骨形态发生蛋白具有强大的促成骨活性,能够诱导间充质细胞不可逆地分化为骨、软骨组织;但骨形态发生蛋白家族各成员诱导成骨作用的能力不同,其中骨形态发生蛋白2和骨形态发生蛋白7的成骨能力最强.同时相关研究表明骨形态发生蛋白对关节软骨损伤修复具有促进作用,但要将其应用于临床仍存在作用机制不明、复合材料的选择、应用于人体的安全性和有效性等问题.     

骨形态发生蛋白在股骨头坏死治疗中的应用

背景:股骨头缺血性坏死是世界性的难治性疾病.此病的治疗方法很多,目前尚缺乏一致公认的、疗效确切的治疗方法.骨形态发生蛋白是高效的骨诱导因子,将其直接或复合移植骨植入股骨头坏死区域,可诱导局部成骨,促进坏死骨修复,在实验和临床研究中均显示出良好的治疗效果.目的:探讨骨形态发生蛋白的作用及其治疗股骨头坏死的机制,总结骨形态发生蛋白治疗股骨头坏死的研究进展.方法:应用计算机检索CNKI期刊全文数据库和PubMed数据库(1995-01/2010-04)与骨形态发生蛋白及其治疗股骨头坏死有关的文章,检索词分别为"股骨头坏死;骨形态发生蛋白;发病机制;治疗"和"femoral head necrosis;bone morphogenetic protein;pathogenesy;therapy".纳入所述内容与股骨头坏死的发病机制、骨形态发生蛋白的作用及应用、骨形态发生蛋白治疗股骨头坏死相关的文章.排除重复研究或较陈旧的文章.结果与结论:收集到300篇相关文献,排除270篇不符合标准的文献,共纳入30篇符合标准的文献.经分析得出以下结论:骨形态发生蛋白治疗骨折和骨缺损的疗效明确,骨形态发生蛋白在股骨头坏死的治疗过程中应用广泛,疗效满意,可以在很大程度上修复股骨头坏死清除死骨后形成的缺损.骨形态发生蛋白在保留股骨头的各种姑息性手术如髓芯减压术、截骨术、骨移植等传统治疗方法均可用骨形态发生蛋白辅助治疗,提高传统治疗方式的治疗效果.     

骨诱导和骨形成机制的研究：β转化生长因子增强人重组骨形态发生蛋白—2在体内的诱导成骨作用

目的 对β转化生长因子（TGF－β）增强人重组骨形态发生蛋白－2(rhBMP-2)在体内的诱导成骨作用进行探讨。195只BALB／c小鼠随机分为3组，每组65只，试验侧均位于右后肢，设立rhBMP-2/TGF－β载体为实验组，rhBMP-2载体，单纯载体为对照组。分别于术后1－21d共10个时间点取材，观察其诱导成骨过程。结果 实验组在诱导间充质细胞增殖、分化、软骨细胞、新生骨形成方面均早于对照组，成骨量优于对照组，其碱性磷酸酶水平高峰较对照组提前，其组织钙含量明显高于对照组（P＜0．05）。结论 rhBMP-2和TGF－β在体内诱导成骨调节中存在着协同作用。     

磷酸钙骨水泥复合骨形态发生蛋白修复实验性股骨头坏死

背景骨形态发生蛋白有较强的诱导成骨作用,寻找一个合适的载体成为目前研究的热点问题.磷酸钙骨水泥因为具有许多优点而可能成为其良好的载体.目的评价磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白复合物及单纯磷酸钙骨水泥对实验性股骨头缺血性坏死的修复作用.设计随机对照的实验.单位解放军第二○八医院动物实验室.材料健康成年兔24只,体质量2.5～3.0kg,雌雄不限.骨形态发生蛋白(由第四军医大学西京医院骨科研究所提供).磷酸钙骨水泥(由吉林大学第一医院骨科同日本爱知医科大学整形外科及日本三菱公司材料综合研究所共同研究开发).方法实验于2003-04/2004-04在解放军第二○八医院动物实验室完成.将磷酸钙骨水泥复合骨形态发生蛋白制备成磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白复合材料.兔24只,随机分为2组,即磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白复合物充填组及单纯磷酸钙骨水泥充填组,每组12只.制作实验性股骨头缺血性坏死骨缺损模型后于骨髓道内充填磷酸钙骨水泥或磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白复合物,术后动物3周及12周时分批处死动物进行X射线、组织学及电镜观察.主要观察指标各组兔的成骨情况,骨缺损的修复情况及材料降解情况.结果24只兔进入结果分析.①两组兔骨缺损区大体观察和X射线检查结果术后12周时,磷酸钙骨水泥组可见有许多新骨形成,材料体积变小.磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白组有大量新骨形成,降解吸收现象明显,材料体积明显变小.②两组兔股骨头标本组织形态和超微结构观察结果12周时磷酸钙骨水泥量减少,与新生骨之间部分区域可见空隙存在,新生骨小梁增粗,可见幼稚骨细胞,其细胞核圆形,染色质有轻度超边,粗面内质网扩张,线粒体有空化及嵴断裂现象;磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白组可见散在磷酸钙骨水泥,新生骨长人材料并与之相互分割包裹,成骨细胞紧帖附于磷酸钙骨水泥颗粒,其胞浆内粗面内质网增多扩张,线粒体增多肿胀,大量毛细血管侵入材料内部,血管周围依附较多成骨细胞.结论磷酸钙骨水泥是骨形态发生蛋白的理想载体,磷酸钙骨水泥/骨形态发生蛋白复合材料传导成骨和诱导成骨活性大于单纯磷酸钙骨水泥组,对实验性股骨头缺血性坏死具有修复作用.     

血管内皮细胞生长因子/骨形态发生蛋白2联合修饰骨髓间充质干细胞修复股骨头坏死

背景:将血管内皮细胞生长因子及骨形态发生蛋白二者联合修复坏死骨,有可能在保持种子细胞成骨表型的同时,又能持续高效地分泌血管内皮细胞生长因子及骨形态发生蛋白2,从而有效促进血管再生,促进组织工程化骨组织的形成和再血管化。目的:观察血管内皮细胞生长因子165/骨形态发生蛋白2体外修饰骨髓间充质干细胞移植治疗兔股骨头缺血性坏死效果。方法:建立兔右侧股骨头缺血性坏死模型,并以抽签法随机分为3组:单纯髓芯减压组、髓芯减压+骨髓间充质干细胞组、髓芯减压+血管内皮细胞生长因子165/骨形态发生蛋白2转染骨髓间充质干细胞组。关节镜监视下将坏死骨清除,组织学检查成骨及血管生成情况。结果与结论:通过关节镜观察显示各组坏死骨清除干净,有新鲜血流出。组织形态学检测发现,髓芯减压+血管内皮细胞生长因子165/骨形态发生蛋白2转染骨髓间充质干细胞组移植后不同时间点血管数量及修复区新骨面积比显著高于单纯髓芯减压组、髓芯减压+骨髓间充质干细胞组(P<0.05)。提示血管内皮细胞生长因子165/骨形态发生蛋白2基因转染加强了骨髓间充质干细胞成骨作用,提高了新生骨的数量与质量,加快了股骨头缺血性坏死的修复。     

血管内皮细胞生长因子/骨形态发生蛋白2联合修饰骨髓间充质干细胞修复股骨头坏死

背景：将血管内皮细胞生长因子及骨形态发生蛋白二者联合修复坏死骨,有可能在保持种子细胞成骨表型的同时,又能持续高效地分泌血管内皮细胞生长因子及骨形态发生蛋白2,从而有效促进血管再生,促进组织工程化骨组织的形成和再血管化。目的：观察血管内皮细胞生长因子165/骨形态发生蛋白2体外修饰骨髓间充质干细胞移植治疗兔股骨头缺血性坏死效果。方法：建立兔右侧股骨头缺血性坏死模型,并以抽签法随机分为3组：单纯髓芯减压组、髓芯减压＋骨髓间充质干细胞组、髓芯减压＋血管内皮细胞生长因子165/骨形态发生蛋白2转染骨髓间充质干细胞组。关节镜监视下将坏死骨清除,组织学检查成骨及血管生成情况。结果与结论：通过关节镜观察显示各组坏死骨清除干净,有新鲜血流出。组织形态学检测发现,髓芯减压＋血管内皮细胞生长因子165/骨形态发生蛋白2转染骨髓间充质干细胞组移植后不同时间点血管数量及修复区新骨面积比显著高于单纯髓芯减压组、髓芯减压＋骨髓间充质干细胞组（P〈0.05）。提示血管内皮细胞生长因子165/骨形态发生蛋白2基因转染加强了骨髓间充质干细胞成骨作用,提高了新生骨的数量与质量,加快了股骨头缺血性坏死的修复。     

重组人骨形态发生蛋白2／纤维蛋白胶植入联合髓芯减压治疗免股骨头缺血性坏死

背景：大量实验证明骨形态发生蛋白2不但对骨组织来源的细胞有刺激分化作用,还可诱导非骨组织来源的细胞株分化为成骨细胞。但是,许多学者在研究中发现,将骨形态发生蛋白直接用于骨的修复效果不理想。目的：将重组人骨形态发生蛋白2／纤维蛋白胶复合物植入髓芯减压后的兔激素性股骨头坏死区,观察股骨头坏死区域的新骨形成情况设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2005-01／2007—12在武警医学院完成。材料：在纤维蛋白胶的抑肽酶溶液内加入重组人骨形态发生蛋白2形成胶冻状的生物材料,最终聚合材料中重组人骨形态发生蛋白2的质量浓度1mg／L。方法：制造激素型股骨头缺血性坏死的动物模型,将实验动物分为3组全部进行股骨头钻孔减压,在重组人骨形态发生蛋白2／纤维蛋白组和单纯重组人骨形态发生蛋白2组孔道内植入相应材料,髓芯减压组钻孔后不植入材料。主要观察指标：MRI检查股骨头软骨及软骨下骨质信号改变,光镜下观察新骨生长情况,原子吸收分光光度仪测定钙含量。结果：MRI观察显示,植入重组人骨形态发生蛋白2,纤维蛋白胶8周后原骨缺损孔道消失,被新生骨所取代。单纯植入重组人骨形态发生蛋白2可见少量新生骨,髓芯减压组仍为纤维组织。组织形态学观察可见重组人骨形态发生蛋白2,纤维蛋白胶组术后8周原骨缺损区基本消失,有大量相对较成熟的骨小梁及板状骨并存。单纯重组人骨形态发生蛋白2组骨缺损区明显缩小,周边亦有少量骨小梁存在,新生毛细血管少见,缺损区有大量纤维组织填充。髓芯减压组术后8周缺损区缩小,周边有少量新骨形成,中心部仍为纤维组织。重组人骨形态发生蛋白2,纤维蛋白胶组钙含量显著高于另外2组（P〈0．01）。结论：骨形态发生蛋白在缺血坏死的股骨头内可诱导新骨形成,与纤维蛋白胶复合后,骨形态发生蛋白诱导新骨形成的质量和数量均明显增强。     

羟基磷灰石复合骨形态发生蛋白2人工骨的理论及其应用特征

目的:系统回顾当前国内外关于骨形态发生蛋白2复合羟基磷灰石人工骨的研究进展。资料来源:应用计算机检索Pubmed 1965-01/2007-03关于骨形态发生蛋白2符合羟基磷灰石人工骨的文章。检索词“BMP-2,hydroxyapatite”并限定文章的语言种类为English。同时利用计算机检索万方数据库2002-09/2005-07的相关文章,限定文章语言种类为中文,检索词“骨形态发生蛋白2,羟基磷灰石”。资料选择:纳入标准:①骨形态发生蛋白2复合羟基磷灰石人工骨的动物实验及临床运用。②骨形态发生蛋白2的分子生物学,成骨机制。③羟基磷灰石成骨作用。④能获取文章的全文。排除标准:①较陈旧文献。②重复性研究。资料提炼:共收集到50篇与骨形态发生蛋白2复合羟基磷灰石人工骨有关的文章,45篇符合纳入标准。其中研究内容相似的,以近7年发表在较权威杂志者优先。排除的15篇为较陈旧的文献及重复研究;对符合标准的30篇文献进行分析。资料综合:由于骨形态发生蛋白2弥散能力较强,单独植入体内会很快弥散被吸收,需要一种合适的载体吸附骨形态发生蛋白2,而羟基磷灰石具有与松质骨相类似的多孔支架结构,无抗原性,为理想的骨形态发生蛋白载体系统。虽然此种材料的应用尚处于实验阶段,但应用前景广阔,其必将成为具有主导性的人工骨材料。结论:生物组织工程学的发展,为骨缺损的修复提供了契机,也提出了挑战,即要求有一种生物相容性更好、又满足生物力学需要的载体材料。在这一方面骨形态发生蛋白2复合羟基磷灰石人工骨有着广阔的研究、开发前景。     

重组人骨形态发生蛋白2对兔椎间盘成骨作用的诱导

背景:重组人骨形态发生蛋白2作为一种新药已应用于临床,但在椎间盘内诱导成骨的研究报道很少。目的:通过动物实验,观察重组人骨形态发生蛋白2对兔椎体间融合的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验多水平评估,于2003-02/07在青岛大学医学院附属医院完成。材料:24只纯种成年新西兰大白兔,体质量3.5～4.5kg,分离暴露L4～5、L5～6椎间盘;重组人骨形态发生蛋白2,1mg/支,纯度≥95%,无菌包装,购自北京市百灵克生物制品有限公司。方法:24只大白兔随机投币法分为实验组和对照组,每组12只。实验组向L4～5椎间盘的髓核中注射含200μg重组人骨形态发生蛋白2的生理盐水溶液20μL;向L5～6的髓核中注射等量的生理盐水作为自身对照;对照组动物L4～5椎间盘的髓核中注射生理盐水20μL。主要观察指标:术后10,30,60,90d应用手法检查、组织学和影像学观察注射节段的形态变化。结果:纳入新西兰大白兔24只,均进入结果分析。①实验组10dL4～5节段活动范围无明显变化;30d活动范围轻度受限;60d活动范围明显受限;90dL4～5节段皆固定。作为自身对照的L5～6节段及对照组关节活动范围无明显变化。②实验组10dL4～5椎体间隙变窄;90dL4～5椎间隙消失,椎体间形成骨性融合。对照组及作为自身对照的L5～6节段椎间隙透光度无明显改变。③实验组10d髓核细胞逐渐变小,90d部分软骨终板已转化为成熟的编织骨;纤维环的胶原纤维结构逐渐消失,10d和30d均可见大量间充质细胞在纤维环外围聚集;90d纤维环靠近软骨终板处已形成成熟的编织骨。对照组各时间点组织学形态无明显变化。结论:重组人骨形态发生蛋白2可诱导椎间盘成骨,达到椎体间融合的目的。     

转化生长因子β1与骨形态发生蛋白2对关节软骨损伤修复的价值

关节软骨损伤的修复,一直是医学界及运动损伤领域所关注的问题.随着分子生物技术的应用和发展,生长因子在关节软骨损伤中的作用显得尤为重要.文章通过分析关节软骨损伤修复难的原因,阐述众多生长因子中转化生长因子β1与骨形态发生蛋白2对关节软骨损伤修复的作用及机制,并对存在的问题进行了归纳,为今后的实验研究提供重要的参考依据.     

重组人骨形态发生蛋白2在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

背景:骨形态发生蛋白是一类调节骨组织发育的生长因子,其中骨形态发生蛋白2诱骨活性最强,在骨组织工程研究中需要大量的骨形态发生蛋白2.目的:克隆表达骨形态发生蛋白2基因,并进行蛋白表达及蛋白纯化定量.设计、时间及地点:单一样奉观察,于2008-05/07在宝牛物工程(大连)有限公司开放实验室完成.材料:表达载体pET28a Vector及相应的宿主细胞E.coil BL21(DE3)购于Novagen公司;分子伴侣质粒pTF16、pGr07、PKJE7购于宝生物工程(大连)有限公司.方法:利用基因重组技术,优化片人工合成骨形态发生蛋白2基因,亚克隆至含T7启动子的原核表达载体pET28a中,构建表达载体pET-BMP.将重组质粒pET-BMP与3种含分子伴侣质粒共转入宿主菌E.coil BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导表达.菌体经超声波破碎,镍柱亲和层析纯化并定量.主要观察指标:①3种表达质粒的表达及町溶性检测及表达上清的westem blotting检测.②pET-BMPg的纯化.结果:在表达宿主菌中,骨形态发生蛋白 2基因获得了高效表达,其中一组为可溶性表达,表达产物经亲和层析纯化后,可溶性表达量达12.18 mg/L培养基.结论:人骨形态发生蛋白2基凼能在PET表达系统中得到高效可溶性表达.     

Brg1调控重组人骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞分化

背景:Brg1是依赖ATP的染色质改变复合物的核心催化亚基,该亚基在基因的转录调控、复制、重组,骨骼肌的分化、抑制肿瘤的发生等活动中起着重要的作用.目的:探索Brg1基因在骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞分化过程中的调控机制.方法:采用胶原酶消化法进行小鼠颅骨成骨细胞的原代培养;分别用0,50,200 μg/L的重组人骨形态发生蛋白2诱导原代培养的成骨细胞的分化,摸索骨形态发生蛋白2的最佳作用剂量;实时荧光定量PCR和Western blot进行骨形态发生蛋白2对Brg1的作用时间的动力学分析;实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测敲除Brg1对骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化的影响;构建Dlx5腺病毒重组表达载体,实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测Brg1在骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化过程中对Dlx5的调控作用.结果与结论:用自行合成的重组人骨形态发生蛋白2可诱导原代培养小鼠成骨细胞分化,200 μg/L剂量有着较好的诱导分化效果;重组人骨形态发生蛋白2可诱导Brg1基因转录水平和翻译水平表达水平上调;敲除Brg1可抑制重组人骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化;Brg1能够调控Dlx5的表达水平.说明Brg1通过调控Dlx5的表达水平调控重组人骨形态发生蛋白2诱导的小鼠成骨细胞的分化.     

骨形态发生蛋白-2在糖尿病大鼠种植体周围的表达

目的：应用大鼠糖尿病模型,观察实验性2型糖尿病（T 2DM）大鼠种植体周围骨形态发生蛋白-2（BM P-2）的表达水平,探讨影响糖尿病种植体骨整合的分子生物学机制,试图为发现新的治疗糖尿病骨整合方法打下理论基础。方法：将48只大鼠均分为正常组和糖尿病组。糖尿病组按40 m g/kg腹腔内一次性注射枸橼酸钠链脲佐菌素溶液建立T 2DM模型。在胫骨近骺端种植纯钛种植体。种植后2,4,8周分批分次处死动物。采用不带种植体脱钙标本硬组织切片、脱钙标本切片常规苏木精-伊红染色（HE染色）和免疫组织化学法检测种植体周围骨组织中骨形态BM P-2的表达并做图像分析。结果：HE染色镜下观察糖尿病组骨形成滞后。正常组和糖尿病组的种植体周围骨组织BM P-2免疫组织化学灰度值两组间差异有显著性（P〈0.05）。结论：糖尿病者的骨质疏松化倾向可能与糖尿病种植修复较正常者失败率高有关,糖尿病者BM P-2的减少可能是影响种植体骨整合的原因之一。