应用蛋白质芯片检测白血病细胞株耐药相关蛋白的表达

目的利用低密度蛋白质芯片检测白血病细胞株耐药相关蛋白的表达。方法选择与白血病耐药密切相关的11种蛋白为检测指标,制备低密度蛋白质芯片,对人白血病细胞株HL-60、K562、Jurkat及耐药细胞株HL-60/VCR、K562/ADM、人Burkitt淋巴瘤Raji细胞株细胞裂解物进行检测。结果髓系白血病耐药细胞株P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药蛋白/主要穹窿蛋白(LRP/MVP)、谷胱甘肽-硫-转移酶-π(GST-π)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、黏附分子淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)表达高于非耐药细胞株,而淋巴系白血病细胞株P-糖蛋白及趋化因子受体CXCR4均有高表达。结论检测白血病耐药相关蛋白的蛋白质芯片可发现不同的白血病细胞株的耐药相关蛋白表达的差异,联合检测多种耐药相关蛋白有助于更好的研究白血病的耐药机制。     

蛋白质芯片技术及应用

在高密度微孔板技术和DNA微阵列技术的基础上发展起来的蛋白质芯片技术,能够在蛋白质水平上进行基因高通量表达分析,从而成为蛋白质组学研究的有效方法。蛋白质芯片依靠手工、压印或喷墨的方法将探针蛋白点样在化学膜、凝胶、微孔板或玻片上形成阵列,经过与样品的杂交捕获靶蛋白,再用原子力显微镜、磷光成像仪、光密度仪或激光共聚焦扫描仪进行检测,获得靶蛋白表达的种类、数量及关联等信息。蛋白质芯片已经用于研究蛋白质表达谱构成及变化、蛋白质与生物分子(蛋白质、核酸、配体等)的相互作用、抗原体筛选、酶与底物相互作用。蛋白质芯片在医学临床诊断、疗效分析和药物筛选方面具有潜在的重要应用价值。     

蛋白质芯片及其应用

人类基因组计划的实施和大量珍贵的功能基因组数据的获得 ,使得蛋白质的研究显得越发重要。蛋白质芯片技术的出现为我们提供了一种较传统的凝胶电泳技术更为方便和快速的研究方法     

用蛋白质芯片联合检测肺癌患者血清中的肿瘤标志物

肿瘤标志物的检测不仅有助于恶性肿瘤的早期诊断 ,也是监测病情的依据之一[1] 。蛋白质芯片是一种高通量、高灵敏度、高特异性且微型化的蛋白质分析技术[2 ,3 ] ,本实验采用肿瘤诊断用蛋白芯片试剂盒 ,对肺癌患者、正常人及疾病对照组血清中的肿瘤标志物ＣＥＡ ,神经元特异烯醇化酶 (ＮＳＥ) ,ＣＡ2 4 2 ,ＣＡ15 3进行了联合检测。1　材料与方法1 1　血清样品来源　肺癌组 :4 0例经临床病理确诊但都未经治疗的肺癌者 ;正常对照组 :15 9例年龄小于 30岁的检康体检者、2 0 6例年龄在 30岁至 6 0岁的健康体检者、92例年龄大于 6 0岁的健康体检…     

运用蛋白质芯片技术鉴定干扰素的亚型

目的：采用自制的6株干扰素单克隆抗体，在本实验室建立的金基底蛋白质芯片平台上对IFN-α1b、IFN-α2a、IFN-α2b、IFN-β及IFN-γ进行鉴定。方法：金基底蛋白质芯片用已知亚型的IFN半成品包被，封闭后与自制的6株干扰素单抗反应，再与Cy3-羊抗鼠IgG反应，反应后GenePix4100A芯片扫描仪扫描读数，将结果与ELISA法、Western blot法比较。同样方法检测IFN成品。结果：金基底蛋白质芯片检测技术结果表明，该平台鉴定干扰素的亚型具有特异性，与ELISA法、Western blot法能得出一致的结论。结论：运用本实验室建立的蛋白质芯片平台可以对干扰素的亚型进行鉴定，具有高通量，操作简单，样品用量少，重复性强等优点。     

急性白血病患儿血清CP RIA

血清铜蓝蛋白(Cerulplasmin, CP)是一种主要由肝脏合成的糖蛋白。哺乳动物血循环中的铜,96％以CP的形式存在。据文献报道,许多恶性肿瘤皆可引起血中CP含量之变化,但CP与白血病的关系研究甚少。1995年～1998年,我们对儿童急性白血病患儿血中CP进行了检测并动态观察,现将结果报告如下。 对象和方法 一、白血病组:初治组38例(男24,女14),其中急淋21例,急非淋17例。复发组31例(男19,女12),其中急淋21例,急非淋10例。缓解组32例(男20,女12),其中急淋19例,急非淋13例。全部病例(101例)皆为我院住院病例。白血病分型按1980年和1986年全国白血病分类分型诊断标准。诊断根据临床表现、骨髓涂片及组化染色。白血病缓解标准按1987年苏州全国白血病化疗讨论会标准。全部病例的肝肾功能实验室检查均示正常,并且近二周无急性感染。 二、对照组:选择同期本院外科行骨科或泌尿、     

人蛋白质组芯片筛选宿主中与结核分枝杆菌Rv1705c相互作用的蛋白质

目的:探究人体中与结核分枝杆菌( Mycobacterium tuberculosis, Mtb)Rv1705c蛋白相互作用的蛋白质。 方法:原核表达Rv1705c蛋白基因,收集包涵体,裂解后透析纯化Rv1705c并测定其浓度,ELISA法检测细菌Rv1705c刺激巨噬细胞后细胞因子I...     

急性白血病患者血清β2—m RIA

1990～1995年我们对97例急性白血病人进行血清β_2-m RIA检测现将结果报告如下。 材料和方法 一、临床资料: (一)正常对照组:32例健康献血员(男性21人,女性11人),年龄18～26岁,均排除肾、糖尿、甲亢、肿瘤等可能引起血清β_2-m改变的疾病。 (二)白血病组:系本院门诊、住院病人,均经临床血液学、骨髓细胞学检查确诊。急性粒细胞性白血病(ANLL)67例(男性32例,女性35例),年龄4～75岁,平均31岁。骨髓象以幼稚粒细胞为主,平均占74.7％,细胞增生明显活跃或极度活跃,血小板总数减少。急性淋巴细胞白血病(ALL)30例(男性17例,女性13例),年龄2.5～78岁,平均23.5岁,骨髓象     

急性髓系白血病干细胞研究进展

急性髓系白血病干细胞多数亚型的干细胞具有相似的免疫表型(CD34+、Cd38-、CD90-、CD117-、CD123+),表达核因子NF-KB。急性髓系白血病干细胞对化疗和放疗均不敏感,是急性髓系白血病复发的原因之一。选择急性髓系白血病干细胞高表达的抗原CD123或核因子NF-KB,作为清除急性髓系白血病干细胞或诱导急性髓系白血病干细胞凋亡的标记,是探索彻底治愈急性髓系白血病的最佳途径。     

完全缓解急性白血病脑脊液检出白血病细胞的检验分析

目的 探讨完全缓解的急性白血病患者脑脊液检出白血病细胞的检验分析。方法 回顾性分析我院2010年8月~2016年8月共38例完全缓解的急性白血病患者,而脑脊液常规检验和FCM检验中却发现白血病细胞的临床特点及实验室资料,对其结果进行总结。结果 38例急性白血病化疗患者在脑脊液常规检测和FCM中,发现白血病细胞侵犯中枢神经系统而确诊为中枢神经系统白血病（CNSL）。结论 处于缓解期的急性白血病患者,即使没有白血病细胞脑部浸润的症状,治疗前也应做腰穿行脑脊液细胞学常规检查,有利于脑膜白血病的早期发现,在急性白血病患者中应引起重视。     

A hybrid form of myeloid/NK-cell acute leukemia and myeloid/NK-cell precursor acute leukemia

Natural killer (NK)-cell leukemia/lymphoma is a rare entity that has been defined only in recent years. In the Revised European-American Lymphoma and World Health Organization classifications, only the mature NK-cell malignancies are included. However, at least 3 types of precursor NK-cell neoplasms have been reported in the literature. These include myeloid/NK-cell acute leukemia, myeloid/NK-cell precursor acute leukemia, and blastic NK-cell lymphoma/leukemia. These leukemias are characterized by the presence of blasts, which express CD56, in the peripheral blood, bone marrow, lymph nodes, and/or extranodal tissues. We report a case that is morphologically consistent with myeloid/NK-cell acute leukemia but immunologically is myeloid/NK-cell precursor acute leukemia. This case is unique in its cutaneous presentation without involvement of the peripheral blood. Extensive flow cytometric studies were performed on the skin biopsy and bone marrow aspirate specimens, which included many markers that had not been tested before in these entities. The clinical implications of these findings are discussed.     

流式细胞仪检测急性婴幼儿白血病干细胞

背景：有关儿童急性髓细胞性白血病干细胞含量的测定及急性髓细胞性白血病患儿缓解后白血病干细胞含量与急性白血病微小残留病之间关系的研究国内外未见报道。 目的：通过测定急性髓细胞性白血病干细胞或急性髓细胞性白血病干细胞-IPIC在儿童急性白血病患儿骨髓单个核细胞中的含量,研究急性髓细胞性白血病患儿缓解后白血病干细胞含量与急性白血病微小残留病水平之间的关联。 方法：收集白血病患儿113例次。采用骨髓单个核细胞分离及单细胞悬液制成单细胞悬液,进行单个核细胞染色、急性髓细胞性白血病干细胞分析及根据初诊免疫表型获得白血病相关表型,并采用该白血病相关免疫表型进行单抗组合和流式细胞术测定分析。 结果与结论：①初诊急性髓细胞性白血病组骨髓单个核细胞中急性髓细胞性白血病干细胞含量明显高于初诊急性淋巴细胞性白血病组和非肿瘤对照组(P均< 0.017),初诊急性淋巴细胞性白血病组骨髓单个核细胞中急性髓细胞性白血病干细胞-IPIC含量显著高于非肿瘤对照组(P < 0.017)。②对33例次缓解急性髓细胞性白血病患儿急性髓细胞性白血病干细胞和急性白血病微小残留病相关性分析发现,两者存在显著负相关性。结果提示,①急性髓细胞性白血病干细胞-IPIC也存在于初诊急性淋巴细胞性白血病患儿骨髓细胞中,且当急性淋巴细胞性白血病获完全缓解时急性髓细胞性白血病干细胞-IPIC含量却没有下降,但非肿瘤对照组标本中急性髓细胞性白血病干细胞-IPIC的含量极微。②急性髓细胞性白血病患儿缓解后骨髓中急性髓细胞性白血病干细胞含量和急性白血病微小残留病水平之间存在着明显的负相关。     

急性白血病患者骨髓细胞形态和免疫表型同步检测的比较分析

目的 探讨骨髓细胞免疫表型在急性双表型白血病中的诊断价值以及与骨髓细胞形态学的比对研究.方法 利用流式细胞仪四色免疫荧光直接标记技术对230例急性白血病患者进行细胞免疫表型、骨髓细胞形态学分型检测及分析.采用流式细胞术四色免疫荧光直接标记技术与CD45/SSC设门分析技术检测13例双表型急性白血病患者,根据欧洲白血病免疫分类组(EGIL)积分标准进行免疫学分型.结果 230例急性白血病患者免疫分型诊断结果与骨髓细胞形态学和组织化学诊断具有高符合率,其中免疫分型诊断为急性双表型白血病的13例(5.7％).此外,急性双表型白血病患者高表达CD34胞膜抗原(84.6％),提示预后不良.结论 急性双表型白血病发病率较低,骨髓细胞免疫表型对诊断及鉴别双表型急性白血病极为特异,以髓系和B淋巴系抗原共表达为主.应用骨髓细胞形态学和流式细胞术联合检测急性双表型白血病可以提高诊断的准确性,有效地指导临床制定治疗方案和预后判断.     

血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子在急性白血病患儿血清中的表达及意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子( bFGF)急性白血病(AL)患儿血清中的表达及其与临床意义.方法:采用ELISA方法检测40例初治AL患儿化疗前及治疗1疗程后37例患儿和40例健康儿童血清中VEGF和bFGF的水平.结果:治疗前,AL组以及ALL组、ANLL组血清VEGF和bFGF水平均显著高于对照组(P＜0.05),而血清VEGF和bFGF水平在AL不同类型之间差异无统计学意义(P＞0.05).治疗前,AL缓解(CR)和未缓解(NR)患儿血清VEGF和bFGF水平差异无统计学意义;治疗后,CR患儿血清VEGF和bFGF水平显著下降,与治疗前和NR患儿比较均有显著性差异(P＜0.05);而NR患儿治疗前后血清VEGF和bFGF水平差异无统计学意义.结论:VEGF和bFGF在AL患儿血清中呈高表达,血清VEGF和bFGF水平可作为AL患儿疗效观察指标,并且与患儿的预后有关.     

胃腺癌血清蛋白质标志物的筛选及鉴定

目的: 探讨并鉴定胃腺癌患者血清中肿瘤相关蛋白作为特异性标志物的可能性。方法: 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测109例胃腺癌和106例对照(60健康者、30例慢性浅表性胃炎和16例慢性萎缩性胃炎)的血清标本,应用生物信息学方法筛选差异蛋白峰,经高效液相色谱(HPLC)分离出差异蛋白,酶解后进行液质联用串联质谱(LC-MS/MS)分析,利用Xcalibur的程序组件Bioworks 3.2完成蛋白质序列数据库鉴定分析。结果: 经SELDI-TOF-MS技术筛选出m/z位于5 906.5的蛋白质标志物在胃腺癌中高表达(胃腺癌组表达强度为8.53±4.33,正常组表达强度为0.88±0.31),显著差异(P<0.01);6 635.7和8 716.3的蛋白质标志物在胃腺癌中低表达(胃腺癌组表达强度为6.54±2.44和0.93±0.29,正常组表达强度为17.56±4.43和2.16±0.98),差异显著(P<0.01)。联合上述3种潜在蛋白质标志物,区别胃腺癌组和对照组的灵敏度为93.85%(61/65),特异性为94.34%(50/53)。对m/z为5 906.5、6 635.7和8 716.3的标志物进行鉴定,结果分别为纤维蛋白原α链、载脂蛋白 A-II和载脂蛋白 C-I。结论: 鉴定出的纤维蛋白原α链、载脂蛋白 A-II和载脂蛋白 C-I在胃腺癌的诊断中具有一定价值和广泛应用前景,值得进一步研究和探讨。     

端粒酶在小儿急性白血病中表达的意义

目的 探讨端粒酶在小儿急性白血病中的表达及作为预测病情，判断预后标志物的可能性。方法 采用端粒重复序列扩增-微孔杂交法（TRAP-Kyb)，检测16例急性白血病患儿骨髓和外周血单个核细胞端粒酶活性，对照组为10例非白血病血液病患儿的骨髓及5例正常健康小儿的外周血单个核细胞，结果 16例急性白血病患儿表达阳性率83.1%)；10例非白血病血液病患儿有2例呈低度阳性表达，5例正常健康小儿外周血单个核细胞中未见阳性表达。结论 端粒酶活性在急性白血病患儿骨髓和外周血单个核细胞中明显升高，表明端粒酶的活性与急性白血病的发生可能有着密切关系。检测其活性可能成为一种评估急性白血病病情及预后的有用指标。     

The cell of origin and the leukemia stem cell in acute myeloid leukemia

There is experimental and observational evidence that the cells of the leukemic clone in acute myeloid leukemia (AML) have different phenotypes even though they share the same somatic mutations. The organization of the malignant clone in AML has many similarities to normal hematopoiesis, with leukemia stem cells (LSCs) that sustain leukemia and give rise to more differentiated cells. LSCs, similar to normal hematopoietic stem cells (HSCs), are those cells that are able to give rise to a new leukemic clone when transplanted into a recipient. The cell of origin of leukemia (COL) is defined as the normal cell that is able to transform into a leukemia cell. Current evidence suggests that the COL is distinct from the LSC. Here, we will review the current knowledge about LSCs and the COL in AML.     

Prognostic significance of flow cytometric immunophenotyping in acute myeloid leukemia

The prognostic significance of flow cytometric immunophenotyping (FCI) in acute myeloid leukemia (AML) has been controversial. In this study, we re-investigated the possible role of FCI in the prediction of AML relapse following standard chemotherapy. A total of 209 AML cases with follow-up information were analyzed. Among those, 78 cases were in remission (M:F=44/34; mean age of 48.9 years) and 131 had relapse (M:F=71/60; mean age of 51.3 years). The expression of CD34, HLA-DR or a combination of both was significantly different between the remission and relapse groups for all AML as well as AML without t(15;17). None of the pammyeloid markers or their combinations analyzed was found to correlate with treatment outcomes. Complex cytogenetic abnormalities were more likely associated with relapse group than with remission group, but were not statistically significant after excluding AML with t(15;17). In conclusion, FCI is useful in predicting treatment outcome and disease relapse in AML.     

急性淋巴细胞白血病患者BAALC基因表达水平也许有临床意义

目的研究急性淋巴细胞白血病（ALL）患者脑和急性白血病细胞胞浆（BAALC）基因的表达水平及其临床意义。方法57例经细胞形态学、组织化学染色及流式细胞术免疫学分型确诊的ALL患者,其中男性35例,女性22例;中位年龄23（14～66）岁。FAB分型L19例。L245例,L33例。建立实时荧光定量PCR检测BAALC基因表达的技术,并定量检测57例初发ALL患者BAALC基因的表达水平及进一步分析其与临床疗效的关系。结果57例初发ALL患者BAALC基因表达水平显著高于对照组。FAB各亚型中BAALC基因表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）,BAALC基因表达水平的高低与初发AI上患者的免疫表型具有显著性相关．T—ALL患者和伴有髓系抗原表达ALL患者BAALC基因表达水平显著高于B—ALL（P〈0．05）和不伴有髓系抗原表达ALL患者（P〈0．01）。ALL中BAALC基因表达的水平与外周血白细胞计数（WBC）、血红蛋白（Hb）、血小板计数（Plt）及骨髓白血病细胞比例无明显相关性（P〉0．05）。BAALC基因高表达ALL患者的完全缓解率（73．3％）同低表达组f81．0％）比较差异无统计学意义（P〉0．05）,但BAALC基因高表达患者1年复发率（81．8％）明显高于低表达组（44．1％）（P〈0．05）。结论BAALC基因高表达提示可能是ALL患者一个不良预后因素,检测ALL患者BAALC基因表达水平可能有助于指导治疗。     

Monoclonal antibodies against nucleophosmin mutants: potentials for the detection of acute myeloid leukemia

Nucleophosmin (NPM1) gene mutations resulting in cytoplasmic delocalization of Nucleophosmin (NPMc+) are the most common genetic alteration in acute myeloid leukemia (AML). Here, we attempted to prepare monoclonal antibodies (mAbs) against NPM1 mutation A (NPM-mA) and investigated the mAbs' clinical utility in immunohistochemical detection of NPMc+AML. The pET-32a-NPM-mA vector with the whole open reading frame of the NPM-mA gene was constructed. E.coli BL21 transformed with the vector were induced to express the NPM-mA recombinant protein. BALB/c mice were immunized with the recombinant NPM-mA. Positive clones were selected by indirect ELISA and the mAbs were obtained. Immunohistochemistry was performed to detect the NPMc+ in bone marrow smears from 10 AML patients with NPM-mA. The results showed that the pET-32a-NPM-mA vector was successfully constructed and the NPM-mA recombinant protein was used to immunize the mice. Two positive clones (2G3 and 3F9) were selected. The mAbs against NPM-mA were raised, but did cross-react with wild type NPM1. The mAbs can be used to detect the cytoplasmic dislocation of NPM1 in all AMLs carrying NPM-mA. Our results show that anti-NPM-mA mAbs were produced. Though they would cross-react with wild type NPM1, the mAbs may still have potential in the detection of NPMc+AMLs.