桑寄生水煎液对小鼠胚胎肢芽生长发育及Tbx2和BMP-2基因表达影响

目的探讨桑寄生水煎液对小鼠胚胎肢芽生长发育及T-框蛋白2(Tbx2)和骨形成蛋白2(BMP-2)mRNA和蛋白表达的影响,评价桑寄生的胚胎发育毒性。方法利用超高高效液相色谱仪鉴定药材桑寄生,常规法制成水提液;取E13(embryos on day 13)前肢芽随机分为低、中、高剂量组和空白对照组,分别加入0.5、1和2 mg/ml不同浓度的桑寄生水煎液和双蒸水悬浮培养,72 h后收获肢芽,测量肢芽长度后,阿利新蓝染色用Neubert评分系统进行评分以评价肢芽软骨的发育情况;采用实时荧光定量PCR和免疫组化法分别检测肢芽中Tbx2和BMP-2 mRNA和蛋白的表达水平。结果 (1)经UPLC分析,槲皮苷峰面积比为38.45%,可鉴定所用药材为桑寄生。(2)肢芽长度测量:低、中、高剂量组和空白对照组的长度分别为1091.18±94.32、1107.07±80.29、1118.76±97.49和1080±89.54μm,各剂量组与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。(3)Neubert评分:低、中、高剂量组和空白对照组总评分分别为223.24±28.32、208.24±28.32、213.30±30.59和201.7±28.94。高剂量组评分最高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05),低和中剂量组与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。(4)实时荧光定量PCR和免疫组化结果显示:各剂量桑寄生水煎液均上调了Tbx2和BMP-2 mRNA和蛋白的表达水平,其中高剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05),而低和中剂量与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论各剂量桑寄生水煎液对小鼠胚胎肢芽的生长发育未体现出胚胎发育毒性,高剂量可诱导Tbx2和BMP-2 mRNA和蛋白表达促进肢芽软骨的发育。     

鲑鱼降钙素对小鼠MC3T3-E1细胞BMP-2蛋白表达的影响

目的通过不同深度的鲑鱼降钙素对骨形态发生蛋白的变化,研究鲑鱼降钙素改善骨质疏松与成骨细胞关系。方法采用纯化的小鼠MC3T3-E1细胞,随机分为对照组、低剂量组鲑鱼降钙素2.5 ng/mL、中剂量组:鲑鱼降钙素5 ng/mL、高剂量组:鲑鱼降钙素10 ng/mL,加药24 h后,采用蛋白质印迹分析BMP-2蛋白表达和活性。结果各浓度鲑鱼降钙素与对照组相比,BMP-2活性明显高于对照组,其中低剂量组(0.5620±0.020)与对照组(0.5386±0.028),中剂量组(0.6228±0.012)与对照组(0.5386±0.028)相比蛋白含量有增高,但无统计学意义。高剂量(0.7813±0.010)与对照组(0.5386±0.028)相比蛋白含量明显增高,且有统计学意义(P<0.05)。结论鲑鱼降钙素可以通过刺激BMP-2蛋白表现,促进成骨细胞增殖改善骨质疏松。     

丁基苯酞调控沉默信息调节因子 1/核因子相关因子 2通路抑制缺血性脑卒中大鼠氧化应激损伤的实验研究

目的 观察丁基苯酞对缺血性脑卒中大鼠氧化应激的影响,并探讨其对沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子相关因子2(Nrf2)通路的调控机制.方法 2018年3月至2019年3月,50只成年雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组、模型组和低、中、高剂量组5组,每组10只.建模且低、中、高剂量组分别腹腔注射40、80、160 mg/kg丁基苯酞,余均腹腔注射等量生理盐水.Zea Longa评分标准评价神经功能缺损;苏木素-伊红(HE)染色观察各组脑组织病理学变化;化学比色法检测各组脑皮质组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性;实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测脑皮质组织SIRT1、Nrf2 mRNA表达;蛋白质印迹法(Western Blot)检测脑皮质组织SIRT1、Nrf2蛋白表达.结果 给药后假手术组神经功能缺损评分无明显变化(P>0.05),模型组评分给药后明显高于给药前[(3.12±0.30)分比(2.67±0.23)分,P<0.05],给药前后低[(2.69±0.25)分比(1.96±0.23)分]、中[(2.67±0.22)分比(1.20±0.17)分]、高[(2.65±0.24)分比(0.85±0.22)分]剂量组评分均下降(P<0.05),且呈剂量依赖性;假手术组脑皮质组织基本无病理改变,余4组均呈病理变化,低、中、高剂量组均较模型组病理变化有所改善,且呈剂量依赖性;模型组MDA、SOD、GSH-PX的活性均明显异常(P<0.05),且低、中、高剂量组均较模型组的活性明显改善(P<0.05),效果呈剂量依赖性;模型组SIRT1、Nrf2 mRNA及蛋白表达均下降(P<0.05),低、中、高剂量组较模型组mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05),且呈剂量依赖性.结论 对缺血性脑卒中大鼠给予丁基苯酞可减轻神经功能缺损和脑组织病理改变,控制脑皮质氧化应激反应,推测可能是通过调控SIRT1/Nrf2通路,上调SIRT1、Nrf2 mRNA及蛋白表达实现的.     

番茄碱通过AMPK/COX-2通路调控食管癌细胞凋亡的机制研究北大核心CSCD

目的探究番茄碱通过单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/环氧合酶-2(COX-2)通路抑制食管癌凋亡的机制研究。方法将人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组、高剂量+抑制药组;对照组细胞不做处理,低、中、高剂量实验组细胞分别给予1.0、2.0和4.0μmol·L^(-1)的番茄碱处理细胞48 h,高剂量+抑制药组使用4.0μmol·L^(-1)番茄碱和10μmol·L^(-1)AMPK抑制药Dorsomorphin共同处理细胞48 h。用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞存活率;用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞相关蛋白表达情况。结果对照组,低、中、高剂量实验组及高剂量+抑制药组细胞TUNEL阳性细胞率分别为(3.73±0.60)%、(12.48±1.05)%、(17.03±1.29)%、(33.04±2.25)%和(13.99±1.12)%,Ki67蛋白表达水平分别为0.98±0.09、0.79±0.07、0.59±0.09、0.33±0.03和0.71±0.07,胱天蛋白酶(Cl-caspase-3)蛋白表达水平分别为0.30±0.04、0.59±0.05、0.75±0.07、1.00±0.06和0.54±0.05,p-AMPK蛋白表达水平分别为0.28±0.05、0.56±0.06、0.73±0.04、1.09±0.10和0.69±0.04;COX-2蛋白表达水平分别为1.13±0.08、0.74±0.07、0.57±0.07、0.39±0.04和0.72±0.07。低、中、高剂量实验组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量+抑制药组上述指标与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论番茄碱可通过激活AMPK/COX-2信号通路抑制食管癌细胞增殖、诱导凋亡。     

核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件信号通路在H_(2)O_(2)致MC3T3-E1细胞成骨分化损伤中的研究北大核心CSCD

目的研究核因子E2相关因子2(NRF2)/抗氧化应答元件(ARE)信号通路在过氧化氢(H_(2)O_(2))致小鼠胚胎成骨前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化损伤中的变化及作用。方法(1)将细胞随机分为对照组和低、高剂量实验组(0、200和400μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理细胞24 h)。用蛋白质印迹法检测1型胶原(COL1)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、NRF2和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白的表达水平。①将细胞随机分为对照组(0μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理细胞24 h)、高剂量实验组(400μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理细胞24 h)、抑制剂组(5μmol·L^(-1)ML385预处理细胞12 h)和联合组(5μmol·L^(-1)ML385预处理细胞12 h后,用400μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理24 h)。同法检测蛋白的表达水平,用流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平。结果(1)低、高剂量实验组和对照组的COL1蛋白相对表达水平分别为0.79±0.09、0.52±0.10和1.32±0.07,RUNX2蛋白相对表达水平分别为0.69±0.04、0.46±0.11和1.16±0.10,核NRF2蛋白相对表达水平分别为1.12±0.14、1.48±0.07和0.65±0.10,HO-1蛋白相对表达水平分别为0.59±0.03、0.77±0.08和0.40±0.07。低、高剂量实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。②联合组、高剂量实验组、抑制剂组和对照组的核NRF2蛋白相对表达水平分别为0.97±0.06、1.46±0.09、0.73±0.08和0.71±0.06,HO-1蛋白相对表达水平分别为0.34±0.04、0.83±0.10、0.48±0.06和0.46±0.04,COL1蛋白相对表达水平分别为0.24±0.04、0.57±0.08、1.35±0.08和1.33±0.10,RUNX2蛋白相对表达水平分别为0.25±0.05、0.48±0.09、1.17±0.23和1.12±0.16,ROS平均荧光强度分别为641.00±12.00、402.00±13.00、290.00±28.00和281.00±18.00。联合组的上述指标与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论NRF2-ARE信号通路在H_(2)O_(2)致成骨细胞分化损伤时激活,其可能通过抑制ROS水平升高在氧化应激致成骨分化损伤中发挥一定程度的代偿性保护作用。     

甘草酸对造影剂肾病细胞保护作用研究北大核心CSCD

目的研究甘草酸对造影剂肾病的保护作用及其机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2细胞),分为空白对照组、碘海醇组(75 mgI·mL^(-1)碘海醇)、碘海醇+甘草酸组(75 mgI·mL^(-1)碘海醇+100μmol·L^(-1)甘草酸)。干预HK-2细胞2 h后,用MTT法检测细胞活力;用蛋白质印迹法检测细胞溶解液高迁移率族蛋白B1(HMGB1)蛋白表达;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞IL-6 mRNA、MCP-1 mRNA表达量。结果空白对照组、碘海醇组和碘海醇+甘草酸组的细胞活力分别为(100.00±1.93)%,(92.88±6.72)%,(99.74±3.05)%,HMGB1蛋白相对表达量分别为1.00,1.33±0.08,1.14±0.07,IL-6 mRNA相对表达量分别为1.00±0.02,5.44±0.97,3.36±0.46,差异均有统计学意义(均P<0.05)。空白对照组、碘海醇组和碘海醇+甘草酸组MCP-1 mRNA相对表达量分别为1.00±0.13,2.07±0.56,1.82±0.61,碘海醇+甘草酸组与碘海醇组相比MCP-1 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论甘草酸对造影剂肾病诱导的HK-2细胞损伤有保护作用,且这种保护作用可能与HMGB1的抑制有关。     

柠檬苦素靶向VEGF/VEGFR2通路对肺癌A549细胞的增殖和血管生成的影响

目的:探讨柠檬苦素靶向血管内皮生长因子(VEGF)/血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)通路对肺癌A549细胞的增殖和血管生成的影响。方法:肺癌A549细胞分为空白对照组、氟尿嘧啶组(500μg·ml^-1)、柠檬苦素低、高剂量组(100,1000μg·ml^-1);MTT法测定各组细胞增殖水平,甲醇固定吉姆沙染色测定单克隆形成数目,BD Matrigel基质测定血管形成水平,transwell板测定相对迁移率,Axv-FiTC试剂盒测定细胞凋亡水平,RT-PCR法及酶联免疫吸附法测定VEGF、VEGFR2 mRNA及MEK1/2、ERK1/2蛋白表达。结果:柠檬苦素低、高剂量组和氟尿嘧啶组A值、存活率、克隆形成数目、相对总血管长度、相对总血管数目、相对迁移率、VEGF、VEGFR2 mRNA及MEK1/2、ERK1/2蛋白水平低于空白对照组,凋亡率高于空白对照组(P<0.05),且剂量-效应关系明显(P<0.05);柠檬苦素低剂量组A值、存活率、克隆形成数目、相对总血管长度、相对总血管数目、相对迁移率、VEGF、VEGFR2 mRNA及MEK1/2、ERK1/2蛋白水平高于氟尿嘧啶组,凋亡率低于氟尿嘧啶组(P<0.05);柠檬苦素高剂量组上述指标与氟尿嘧啶组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:柠檬苦素能抑制肺癌A549细胞增殖、血管生成、侵袭、诱导肺癌A549细胞凋亡;其机制可能与柠檬苦素抑制VEGF/VEGFR2诱导的MEK1/2、ERK1/2磷酸化有关。     

果王素抗大鼠肺纤维化的作用

目的 通过观察不同剂量的果王素对肺纤维化大鼠肺组织中成纤维细胞生长因子2(FGF2)及细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的影响。方法 SD大鼠分为空白对照组(0.9%NaCl),模型组(0.9%NaCl),阳性对照组(5 mg·kg^-1醋酸泼尼松),低、中、高剂量实验组(60、120、180 mg·kg^-1果王素),除空白对照组气管内一次性注入0.9%NaCl外,其余各组气管内一次性注入5 mg·kg^-1博来霉素A5构建大鼠肺纤维化模型。用蛋白质印迹法、实时荧光定量聚合酶链反应检测FGF2、ERK1/2蛋白及mRNA的表达情况。结果 空白对照、模型组、阳性对照组和高、中、低剂量实验组的FGF2蛋白相对表达水平在第28天时分别为0.07±0.01、0.63±0.15、0.14±0.02、0.16±0.01、0.26±0.02和0.44±0.03,ERK1/2蛋白相对表达水平在第28天时分别为0.06±0.00、0.41±0.05、0.09±0.00、0.10±0.00、0.14±0.02和0.21±0.02,FGF2...     

土木香水煎液急性毒性和遗传毒性的研究CSCD

目的探讨土木香水煎液的急性毒性和遗传毒性,为土木香临床安全应用提供实验依据。方法采用最大耐受剂量法评价土木香水煎液的急性毒性,观察小鼠体重变化,心、肝、脾和肾的脏器指数变化;采用精子畸形实验,微核实验和彗星实验评价土木香水煎液的遗传毒性。将小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组和土木香水煎液高、中、低剂量组(分别灌胃蒸馏水,40 mg/kg·bw环磷酰胺,40、20、10 g/kg·bw土木香水煎液)。用药后取附睾制成精细胞悬液观察畸形精子数量。取骨髓细胞观察嗜多染红细胞的微核率。取肝、胸腺和脾细胞观察土木香水煎液对小鼠DNA的损伤。结果土木香水煎液经口给药小鼠最大耐受剂量为80 g/kg·bw,该剂量对小鼠的体重及各脏器指数无明显影响与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。高和中剂量组的精子畸形率明显高于阴性对照组(P<0.05),低剂量组精子畸形率与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。高剂量组的微核率明显高于阴性对照组,与之比较差异有统计学意义(P<0.05),而中和低剂量组与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。各剂量组肝细胞、胸腺及脾细胞头尾DNA百分比、尾长、尾矩及Olive尾矩与阴性组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论土木香的最大耐受计量为80 g/kg,属于无毒级。高和中剂量的土木香水煎液对生殖细胞有一定的毒性作用,且高剂量有潜在的遗传毒性。     

顺铂联合食管癌相关基因2蛋白对人食癌EC9706细胞的增殖抑制研究

目的研究顺铂(DDP)联合食管癌相关基因2(ECRG2)蛋白对人食管癌EC9706细胞增殖抑制作用及诱导其凋亡的机制。方法将人食管癌EC9706细胞分为空白对照组、阳性对照组和低、中、高3个质量浓度实验组。阳性对照组细胞用3 mg·L^-1顺铂处理,低、中、高3个质量浓度实验组细胞在阳性对照组的基础上用质量浓度为5.5,7.5,9.5μg·L^-1的ECRG2蛋白处理,空白对照组细胞不做任何处理。检测各组细胞的活性和细胞凋亡率,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测人食管癌EC9706细胞耐药基因的表达情况。结果空白对照组、阳性对照组和低、中、高3个质量浓度实验组人食管癌EC9706细胞活性分别为100.00%,(92.12±2.36)%,(88.62±3.22)%,(82.15±2.05)%,(78.41±2.16)%,阳性对照组和3个质量浓度实验组细胞活性显著低于空白对照组(P<0.05或P<0.01),中、高质量浓度实验组均显著低于阳性对照组(均P<0.05);且中、高质量浓度实验组细胞活性随ECRG2蛋白作用浓度增大逐渐降低(P<0.01)。阳性对照组和低、中、高3个质量浓度实验组人食管癌EC9706细胞凋亡率分别为(5.21±0.24)%,(11.45±0.66)%,(16.86±1.42)%,(22.62±2.12)%,均显著高于空白对照组的(2.89±0.32)%,低、中、高3个质量浓度实验组细胞凋亡率均明显高于阳性对照组(均P<0.01)。阳性对照组和低、中、高3个质量浓度实验组细胞谷胱甘肽巯基转移酶-π(GST-π)和多药耐药蛋白基因(MRP)mRNA相对表达量均低于空白对照组,且低、中、高3个质量浓度实验组低于阳性对照组(P<0.05或P<0.01)。结论顺铂可增强ECRG2蛋白对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用,并可促进细胞凋亡,其机制可能与顺铂联合ECRG2显著降低GST-π和MRP基因表达有关。     

不同剂量前列腺素E2对H9c2心肌细胞肥大的影响

目的:研究前列腺素E2(PGE2)对H9c2心肌细胞的肥大作用,并分析其量效关系,为寻找抗心肌肥大的潜在靶点提供理论依据.方法:将H9c2心肌细胞分为空白对照组(C组)和PGE2处理组,PGE2处理组又分为小剂量PGE2组(D1组)、中剂量PGE2组(D2组)和大剂量PGE2组(D3组).各组细胞培养液中PGE2终浓度分别为0、0.1、1及10 μmol/L.给药孵育48 h后,利用荧光显微镜观察大鼠H9c2心肌细胞形态及体积;通过测量细胞直径大小、BCA法测定细胞总蛋白含量来确定心肌细胞是否肥大;RT-PCR技术测量心钠肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(Brain natriuretic peptide,BNP)mRNA的表达水平,以此判断是否发生病理性肥大.结果:与C组比较,免疫荧光显示D1组、D2组及D3组细胞形态改变、体积增大;细胞直径及总蛋白含量显著增加(P＜0.05),不同剂量PGE2组间亦具有统计学差异(P＜0.05);D2组及D3组较C组细胞内ANP、BNP mRNA表达水平显著增高(P＜0.05).结论:PGE2可剂量依赖地诱导H9c2心肌细胞肥大,较大剂量PGE2引发心肌细胞病理性肥大.抑制PGE2合成有望为抑制心肌肥大提供靶点.     

黄芪注射液对大鼠CYP2D代谢酶的影响

目的:探究黄芪注射液对大鼠CYP2D代谢活性的影响。方法:制备大鼠空白肝微粒体,加入黄芪注射液孵育,HPLC法测定代谢产物去甲右美沙芬的浓度,比较空白对照组和黄芪注射液低、中、高剂量组之间代谢产物浓度的差异,评价黄芪注射液对CYP2D活性的影响。结果:黄芪注射液低、中、高剂量组代谢产物的浓度与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪注射液对大鼠CYP2D的活性有抑制作用。     

复方竹叶石膏颗粒对家兔急性放射性食管炎COX-2与MMP-2mRNA及蛋白表达的影响

目的 探讨复方竹叶石膏颗粒对家兔急性放射性食管炎环氧化酶-2(COX-2)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA及蛋白表达的影响.方法 将40只雄性家兔随机分为空白对照组、单纯照射组、复方竹叶石膏颗粒组、康复新液组,每组10只.空白对照组不做任何处理,其余3组均给予6 mV-X射线对家兔食管单次照射32 Gy.给药组于照射前1周给药至照射结束后7d,4组均于照射后第7天留取家兔全长食管,检测COX-2与MMP-2 mRNA及蛋白表达情况.结果 单纯照射组中COX-2与MMP-2 mRNA与蛋白水平高于空白对照组,复方竹叶石膏颗粒组和康复新液组均低于单纯照射组,且复方竹叶石膏颗粒组低于康复新液组(P＜0.05).结论 复方竹叶石膏颗粒能降低COX-2与MMP-2 mRNA与蛋白表达水平,从而发挥对急性放射性食管炎的防治作用.     

中药复方调节模型大鼠精子尾部特异性钙通道

目的:研究中药复方"促育生精方"对环磷酰胺诱导的少弱精模型大鼠精子Catsper1、Catsper2基因及蛋白表达的影响,并探讨其调节机制。方法:采用实时荧光PCR法检测Catsper1 mRNA、Catsper2 mRNA在各组大鼠(随机分为模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、空白对照组)精子中的表达;用蛋白印迹法检测各组Catsper1,Catsper2蛋白的表达。结果:Catsper1 mRNA、Catsper2 mRNA表达量为:中、高剂量组显著高于模型组(P<0.05)。Catsper1、Catsper2蛋白表达量:中、高剂量组显著高于模型组(P<0.05)。结论:促育生精方能有效提高少弱精症模型大鼠精子特异性钙通道Catsper1、Catsper2基因及其蛋白的表达。     

刺山柑总生物碱对系统性硬皮病模型小鼠Notch通路的影响

目的:研究刺山柑总生物碱对系统性硬皮病(SSc)模型小鼠Notch通路相关蛋白Notch2、Delta-like 3(DLL3)、Jagged1和Notch胞内段1(NICD1)的影响。方法:将BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(青霉胺125 mg/kg)和刺山柑总生物碱低、中、高剂量组(225、450、900 mg/kg),每组16只。除空白对照组外,其余各组小鼠皮下注射博来霉素4周复制SSc模型,刺山柑总生物碱各剂量组小鼠外敷相应剂量的刺山柑总生物碱乳膏,阳性对照组小鼠灌胃相应剂量的青霉胺,空白对照组和模型组小鼠外敷不含药的乳膏基质,每天1次,连续给药8周。末次给药后4 h,取各组小鼠给药区皮肤,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测皮肤组织中Notch2、NICD1 mRNA表达,酶联免疫吸附法测定皮肤组织中DLL3含量,免疫组化法检测皮肤组织中Jagged1蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠皮肤组织中Notch2、NICD1 mRNA及DLL3含量、Jagged1蛋白表达均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,刺山柑总生物碱中、高剂量组和阳性对照组小鼠皮肤组织中NICD1 mRNA、DLL3含量、Jagged1蛋白表达均显著降低,刺山柑总生物碱高剂量组和阳性对照组小鼠皮肤组织中Notch2 mRNA表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:刺山柑总生物碱可抑制SSc模型小鼠皮肤组织中Notch2、NICD1、DLL3及Jagged1的异常表达,对SSc模型小鼠Notch通路的过度激活有一定的抑制作用。     

DAB2IP过表达对人胃癌细胞SGC7901增殖、迁移及对E-cad-herin、Snail、Twist表达的影响

摘要：目的:研究失活蛋白-2相互作用蛋白基因(DAB2IP)过表达对人胃癌细胞SGC7901增殖、迁移及对上皮间质转化(EMT)相关上皮细胞-钙黏蛋白基因(E-cadherin)、Snail、Twist蛋白表达的影响。方法:采用慢病毒介导DAB2IP过表达转染并筛选稳定人胃癌细胞SGC7901细胞株(过表达组),另设慢病组对照液转染的人胃癌细胞SGC7901作为慢病毒对照组,无转染人胃癌细胞SGC7901为空白对照组,采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测各组人胃癌细胞SGC7901 DAB2IP基因表达水平,采用噻唑蓝法(MTT)及平板克隆形成试验检测过表达DAB2IP对人胃癌细胞SGC7901增殖的影响采用细胞划痕试验检测过表达DAB2IP对人胃癌细胞SGC7901迁移的影响,采用免疫印迹(Western Blot,WB)法检测过表达DAB2IP对人胃癌细胞SGC7901中EMT相关蛋白表达水平。结果:同一时间及不同时间,空白对照组和慢病毒对照组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和慢病毒对照组比较,24,48,72 h过表达组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05)。与24 h比较,48和72 h过表达组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增值抑制率显著升高(P<0.05),与48 h比较,72 h过表达组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。提示48 h过表达效果最佳,可用于下游试验。空白对照组和慢病毒对照组平板克隆形成率、细胞迁移距离、E-cadherin、Snail、Twist蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和慢病毒对照组比较,过表达组人胃癌细胞SGC7901平板克隆形成率、细胞迁移距离、Snail、Twist蛋白水平显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白水平显著增加(P<0.05)。结论:DAB2IP过表达可抑制人胃癌细胞SGC7901增殖、迁移,可能与上调E-cadherin蛋白表达,下调Snail、Twist蛋白表达有关。     

红芪多糖对糖尿病心肌病db/db小鼠核因子2相关因子2信号通路的影响北大核心CSCD

目的研究红芪多糖(HPS)对db/db小鼠糖尿病心肌病(DCM)心肌组织中抗氧化应激的作用。方法按随机数表法将db/db小鼠分为5组(每组12只):模型组、对照组和高、中、低3个剂量实验组。正常组为同月龄同背景非转基因db/m小鼠(12只)。于7周龄对小鼠灌胃给药,1次/天,连续灌胃8周。高、中、低3个剂量实验组分别给予HPS 200,100,50 mg·kg^(-1)灌胃(质量浓度为20 mg·m L^(-1));对照组灌胃4 mg·kg^(-1)罗格列酮70μg·m L^(-1);模型组和正常组灌胃等量0.9%Na Cl 0.2 m L·d^(-1)。连续干预8周。用生化法检测心肌组织中丙二醛(MDA)含量;用蛋白印迹法和反转录聚合酶链式反应检测小鼠心肌组织核因子2相关因子2(Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)及还原性辅酶/醌氧化还原酶(NQO1)蛋白和mRNA的表达。结果给药8周后,正常组、模型组和中、高2个剂量实验组的Nrf2蛋白表达分别为1.33±0.07,0.19±0.06,0.66±0.06,1.12±0.06;模型组与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.01);中、高2个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。正常组、模型组和低、中、高3个剂量实验组的MDA含量分别为(4.74±0.36),(7.20±0.49),(7.08±0.57),(6.62±0.67),(5.80±0.52)nmol·mg^(-1),模型组与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.01);高、中2个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。mRNA表达与其相应的蛋白表达趋势一致。结论 HPS可能通过调控Keap1-Nrf 2信号通路改善db/db小鼠DCM心肌损伤。     

竹节参与丹参和山楂复方改善小鼠非酒精性脂肪肝作用的实验研究北大核心CSCD

目的研究竹节参、丹参和山楂复方(ZDS)对高糖高脂所诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠的保护作用。方法制备竹节参、丹参和山楂提取物,通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)清除率实验,优化竹节参、丹参和山楂的体外抗氧化活性的复方ZDS。按随机数字表法将小鼠分成4组,每组10只:正常组、模型组和低、高2个剂量实验组。正常组用普通饲料喂养,模型组用高脂饮食,实验组用混有ZDS药物的的高脂饲料喂养,每只分别给予50,100mg·kg^(-1)。1个月后,用生化法检测血清谷丙转氨酶(ALT)水平和丙二醛(MDA)含量;以实时定量-PCR法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(P21)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)基因的表达。结果 3种药物和降脂复方均有体外抗氧化活性,3种药物DPPH清除率均在50%以上,影响配方药物DPPH自由基清除率的因素由大到小依次为山楂>丹参>竹节参,且有联合抗氧化活性。给药后,正常组、模型组和低、高2个剂量实验组的ALT水平(U·L^(-1))分别是31.72±4.53,51.36±5.34,41.59±10.30,44.91±8.64,低、高2个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。这4组的MDA浓度(nmol·m L^(-1))分别为7.64±0.85,11.71±1.17,6.51±0.62,4.70±0.34,低、高2个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组和低、高2个剂量实验组的肝组织中p21 mRNA表达水平分别7.44±0.93,1.45±0.18,0.76±0.10;低、高2个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);这3组的CDK2 mRNA表达水平分别0.31±0.05,0.33±0.05,0.55±0.06,高剂量实验组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论竹节参、丹参和山楂降脂复方通过抗氧化活性,可改善高脂饮食所诱导的小鼠非酒精性脂肪肝。     

虫草素对高糖诱导脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用研究

目的探讨虫草素对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用及其机制。方法原代培养HUVECs,实验分为空白对照组、模型组、对照组、抑制剂A组、抑制剂B组、干预A组、干预B组和低、中、高浓度虫草素组。空白对照组给予正常糖浓度(5.5 mmol·L^-1);模型组给予40 mmol·L^-1高糖孵育48 h;对照组给予10μmol·L^-1白藜芦醇+高糖;低、中、高浓度虫草素组分别给予1,10,20μmol·L^-1虫草素+高糖;抑制剂A组给予1μmol·L^-1 CLI-095+高糖;抑制剂B组给予100 nmol·L^-1西罗莫司+高糖;干预A组给予1μmol·L^-1 CLI-095+20μmol·L^-1虫草素+高糖;干预B组给予100 nmol·L^-1西罗莫司+20μmol·L^-1虫草素+高糖。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷-酶联免疫吸附法检测光密度值观察细胞增殖能力,用Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶流式细胞术检测细胞凋亡率,用实时荧光定量聚合酶链反应检测沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)mRNA的表达水平,用Western Blot检测SIRT1蛋白的表达水平。结果模型组、对照组和低、中、高浓度虫草素组以及干预A组、干预B组的增殖能力(光密度值)分别为(1.38±0.11),(1.86±0.06),(1.44±0.03),(1.60±0.05),(1.70±0.08),(1.85±0.04)和(1.85±0.06),细胞凋亡率分别为(6.72±1.00)%,(0.56±0.37)%,(3.86±0.16)%,(2.64±0.23)%,(2.16±0.15)%,(1.57±0.28)%和(0.86±0.20)%,SIRT1 mRNA表达相对倍数分别为(0.24±0.05),(2.97±0.41),(0.62±0.07),(1.37±0.18),(2.14±0.35),(3.45±0.76)和(3.02±0.79)。模型组、对照组、高浓度虫草素组、抑制剂B组和干预B组的SIRT1蛋白表达分别为(0.82±0.11),(1.14±0.29),(0.98±0.13),(0.74±0.19)和(1.30±0.20)。对照组和高浓度虫草素组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。干预A组和干预B组的细胞增殖力及SIRT1 mRNA表达水平与高浓度虫草素组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。干预B组细胞凋亡率与高浓度虫草素组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。干预B组SIRT1蛋白表达与抑制剂B组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论虫草素可能通过促进SIRT1表达,从而起到保护高糖损伤的内皮细胞作用。     

亚砷酸钠对雌性SD大鼠性成熟前期ERmRNA的表达及VEGF、CyclinD1、PR蛋白含量的影响

目的采取不同剂量的亚砷酸钠(NaAsO_2)灌胃染毒,针对其对雌性SD大鼠性成熟前期ERmRNA(雌激素受体mRNA)的表达及VEGF(血管内皮生长因子)、Cyclin D_1(细胞周期蛋白D_1)和PR(孕激素受体)蛋白含量的影响,探讨其对生殖毒性的可能机制。方法 SD大鼠40只,随机分为4组:对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,经灌胃,分别给予其双蒸水,1.25、2.5和5 mg/kg·d的NaAsO_2,4周后,断颈处死,取血、左侧卵巢做以下检测:(1)Elisa法测定VEGF、Cyclin D_1和PR蛋白的含量;(2)实时荧光定量PCR检测卵巢组织中ERmRNA的表达。结果 Elisa结果显示,随着灌胃的NaAsO_2剂量增加,中和高剂量大鼠血清VEGF、Cyclin D_1和PR蛋白含量分别为(13.54±1.98)ng/L、(12.44±2.06)ng/L、(1.089±0.133)μg/L、(1.040±0.136)μg/L、(324.27±19.77)ng/L和(320.46±18.01)ng/L呈下降趋势,中、高剂量组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。RT-PCR结果显示,大鼠卵巢ER mRNA基因的表达降低,且低、中和高剂量组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论染毒NaAsO_24周后可引起SD雌性大鼠卵巢与子宫结构改变,在性成熟前期染毒NaAsO_2,可能通过下调卵巢ER mRNA基因,使得ER下游的VEGF、Cyclin D1蛋白以及PR蛋白生成减少,最终导致卵泡发育异常,产生生殖毒性。