以糖蛋白类肿瘤标志物为靶向的嵌合抗原受体修饰T细胞研究进展

嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor,CAR)修饰T细胞是目前肿瘤治疗中新的靶向疗法,通过单链抗体(singlechainfragmentvariable,scFv)-共刺激分子-T细胞信号转导区构成的嵌合模式修饰T细胞,赋予T细胞非MHC依赖性靶向杀伤肿瘤细胞的能力,在动物模型及临床试验中取得了良好的效果.糖蛋白类肿瘤标志物由于其良好的靶向性成为了CAR修饰T细胞新的靶点,针对糖蛋白类肿瘤标志物的靶向研究显示出良好的临床前景,但是也考虑到脱靶效应,转染方式等问题对该治疗在临床运用的限制.相信随着研究的逐渐深入,基于CAR修饰T细胞的糖蛋白类肿瘤标志物靶向治疗会取得更大的突破.     

靶向人表皮生长因子受体2嵌合抗原受体T(HER2-CAR-T)细胞毒性作用的体内外验证

目的 对靶向人表皮生长因子受体2嵌合抗原受体T(HER2-CAR-T)细胞进行毒理学评估,为其后期HER2-CAR-T细胞治疗的临床上评估提供安全性依据。方法 利用重组慢病毒载体制备HER2-CAR-T细胞,采用软琼脂集落形成实验,观察HER2-CAR-T细胞集落形成情况并对集落形成率进行统计分析;将HER2-CAR-T细胞悬液与兔红细胞悬液共孵,通过直接观察法以及酶标仪检测法评估红细胞溶解情况;对雄性新西兰兔耳缘静脉注射HER2-CAR-T细胞制剂,通过组织切片染色观察HER2-CAR-T细胞对动物血管的刺激作用;以pMD 2.G载体上的水泡性口炎病毒囊膜糖蛋白(VSV-G)基因为目标序列,利用荧光定量PCR进行慢病毒载体安全性的验证;取接受HER2-CAR-T细胞输注的小鼠心、肝、肺、肾,HE染色观察其病变情况。结果 成功制备了HER2-CAR-T细胞,这些细胞在体外不具备软琼脂集落形成能力,HER2-CAR-T细胞制剂对新西兰兔红细胞不产生溶血现象。新西兰兔耳缘静脉输注HER2-CAR-T细胞后未发现明显血管刺激反应,也未检测到VSV-G的特异性扩增,治疗组小鼠心、肝、肺、肾组织...     

PD-1敲除及GPC3修饰的嵌合抗原受体T细胞治疗肝癌的实验研究

目的 构建程序死亡受体1(PD-1)敲除及磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)修饰的嵌合抗原受体T细胞(GPC3-PD1gRNA-CART cells),研究其对肝癌细胞株HepG2的体外杀伤作用,以及其对肝癌动物模型的体内抗肿瘤作用.方法 制备GPC3-PD1gRNA-CART细胞,用流式细胞仪检测PD-1、GPC3 ...     

嵌合抗原受体T细胞治疗血液肿瘤的研究进展

从1982年人类第一次诱导出淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine active killer cell, LAK),到2010年嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell, CAR-T)免疫疗法第一次由Rosenberg博士应用于慢性淋巴细胞白血病治疗并获得成功,再到2...     

以寡聚精氨酸为PTD的嵌合基因的表达及其对HER2阳性SGC-7901胃癌细胞的杀伤作用

目的:构建以寡聚精氨酸(R9)为蛋白质转导结构域的嵌合抗体/caspase-3的真核表达载体,并检测瞬时转染该载体对HER2阳性SGC-7901肿瘤细胞及HER2阴性HeLa肿瘤细胞生长的影响。方法:用PCR法获得融合了R9的活性caspase-3基因片段,并将其克隆入含有HER2单链抗体e23sFv基因的真核表达载体,以脂质体法转染SGC-7901细胞及HeLa细胞,用间接免疫荧光、细胞计数等方法,检测其在两种细胞中的表达及其对两种细胞生长的影响。结果:成功构建了以R9为蛋白质转导结构域的嵌合抗体/caspase-3基因真核表达载体pCMV-e23sFv-R9-casp3,瞬时转染该质粒发现SGC-7901细胞和HeLa细胞均以分泌形式表达e23sFv-R9-casp3蛋白,但SGC-7901细胞生长受到明显抑制,细胞形态发生改变,出现核浓缩等凋亡特征;而HeLa细胞生长未受抑制,细胞形态无明显变化。结论:以分泌形式表达的嵌合蛋白,其HER2抗体部分能够介导靶向识别,R9可以辅助效应分子活化、转位至细胞液,活性caspase-3能高效杀伤细胞。     

非小细胞肺癌脑转移靶向治疗及免疫治疗进展北大核心CSCD

非小细胞肺癌(NSCLC)患者常见脑转移,发病率为25%~40%,预后极差且常伴有严重神经功能障碍,未经治疗平均中位生存期仅为1~2个月。靶向治疗和免疫治疗为NSCLC脑转移患者治疗开辟了新的途径,改善脑转移后神经功能障碍,延长中位生存期。本文就NSCLC脑转移靶向治疗及免疫治疗进展进行综述。     

用合成肽替代肿瘤抗原诱导肿瘤特异性T杀伤细胞的研究

利用海绵移植模型，将Ｆｆｉｅｎｄ病毒ｇａｇ基因编码蛋白的两个合成肽片段分别注入海绵中，植入Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２）小鼠皮下，经一定潜伏期后收集其中的浸润淋巴细胞（ｓｐｏｎｇｅｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ，ＳＩＬｓ）体外培养扩增后，发现合成肽３号能诱导出针对该合成肽特异性的ＳＩＬｓ，并特异性杀伤用合成肽３号致鳘的Ｅ１０靶细胞，但不杀伤Ｆｒｉｅｎｄ病毒在Ｃ５７ＢＬ／６小鼠诱导的ＦＢＬ－     

丙型肝炎发病中特异性细胞毒性T细胞的作用及其意义

随着对丙型肝炎病毒致病机理的深入研究，ＨＣＶ特异性细胞毒性Ｔ细胞的作用日益引起人们的重视。研究表明，ＨＣＶ感染者肝小叶内活化ＣＤ８＾＋Ｔ细胞润，识别感染肝细胞表达的抗原 要组织相容性抗原ＭＨＣ分子复合物，杀伤靶细胞，清除病毒。     

重组rAAV-LMP诱导的特异性细胞毒T细胞对LMP阳性靶细胞的识别与杀伤

在正常个体中Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ（ＥＢ）病毒是由病毒特异性细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）所控制，虽不能清除病毒，却对于控制细胞处于潜伏感染状态是必需的。抽取病人血分离淋巴细胞，在实验室制备ＥＢ病毒特异性ＣＴＬ，然后回输到病人体内，具有预防和治疗ＥＢ病毒相关疾病的意义。我们将ＥＢ病毒潜伏感染膜蛋白（ＬＭＰ）基因重组到腺病毒伴随病毒载体ｐＡＣＰ中去，与包装质粒Ａｄ８共转染已感染了Ⅱ型腺病毒的２９３细胞，获得重组病毒ｒＡＡＶ－ＬＭＰ，用此病毒感染淋巴细胞并表达ＬＭＰ，用高能Ｘ线照射灭活，与自体淋巴细胞共培养产生特异性ＣＴＬ。以ＥＢ病毒转化的类淋巴母细胞作靶细胞与ＣＴＬ反应，用ＢＬＴ活性法测定ＣＴＬ活性。结果表明，４株ＣＴＬ均能够识别和杀伤对应的靶细胞，并且随着ＣＴＬ数量的增加和反应时间的延长，上清中ＢＬＴ活性也增强。     

嵌合抗原受体修饰T细胞研究进展及肿瘤靶抗原的选择

嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T)是目前恶性肿瘤免疫治疗的一种新方法。CAR-T细胞对肿瘤的杀伤不依赖主要组织相容性复合体(MHC),并可克服肿瘤局部免疫抑制微环境和突破宿主免疫耐受状态,因此,CAR-T细胞在治疗肿瘤方面具有独特的优势。CAR-T细胞的构建和选择合适的靶分子是CAR-T细胞免疫治疗的两个关键的问题,我们在文中将围绕这两个问题做一综述。     

嵌合抗原受体T细胞与病毒相关的应用进展

嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell, CAR-T)疗法是近年来新兴的细胞免疫疗法,它通过基因工程技术使T细胞表达特异性嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR),以非MHC依赖形式识别并杀伤表达相应抗原的靶细胞。CAR-T疗法在血液系统恶性肿瘤的治疗中取得了令人振奋的结果,但在实体瘤治疗领域仍然存在很多困难。溶瘤病毒可直接裂解实体瘤细胞,逆转肿瘤局部的免疫抑制微环境,与CAR-T疗法联用可以增强抗实体瘤效果。此外,CAR-T疗法也显示出一定的抗病毒作用,主要表现在抗人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)、HBV等方面。文章从CAR-T与病毒的关系入手,主要就CAR-T疗法抗病毒的研究现状及溶瘤病毒与CAR-T疗法联合抗实体瘤机制等方面展开综述,以期为拓宽CAR-T抗病毒治疗领域以及CAR-T的联合治疗方案制定提供新思路。     

茴香霉素对小鼠T细胞反应性及其杀伤作用的影响

目的 茴香霉素对小鼠T细胞活化、反应性、杀伤作用及其同种异基因皮肤移植的影响.方法 利用荧光标记的单克隆抗体双染技术结合流式细胞仪检测茴香霉素对小鼠CD3 T细胞早期及中期活化标志分子CD69和CD25表达的影响; 用MTT法检测茴香霉素刺激下T细胞在单向或双向混合淋巴细胞反应中T细胞的反应性及其对大鼠肝癌(7919)细胞的杀伤效应;建立小鼠同种异基因皮肤移植动物模型,观察茴香霉素对移植皮肤存活时间的影响.结果 在最佳剂量10.0 ng/mL时,茴香霉素能够明显抑制T细胞表面分子CD69和CD25的表达,且能抑制单向或双向混合淋巴细胞反应中T细胞的反应性(P＜0.01);10.0 ng/mL茴香霉素亦能明显抑制T细胞对大鼠肝癌细胞的杀伤效应(P＜0.01);5.0和15.0 mg/kg茴香霉素能够明显延长小鼠移植皮肤的存活时间 (P＜0.01).结论 茴香霉素对T 细胞的活化、反应性、杀伤效应及同种异基因皮肤移植排斥反应均有明显抑制作用,可能为治疗免疫反应性疾病提供新的策略 .     

丙型肝炎发病中特异性细胞毒性T细胞的作用及其意义

随着对丙型肝炎病毒致病机理的深入研究，ＨＣＶ特异性细胞毒性Ｔ细胞的作用日益引起人们的重视。研究表明，ＨＣＶ感染者肝小叶内活化ＣＤ８＋Ｔ细胞浸润，识别感染肝细胞表达的抗原与主要组织相容性抗原ＭＨＣ分子（对于人类又名人类白细胞抗原ＨＬＡ）复合物，杀伤靶细胞，清除病毒。对ＨＣＶ特异性ＣＴＬ的研究可能使丙型肝炎的发病机理和防治研究进一步深入。     

过继转输的肿瘤特异性T杀伤细胞在小鼠体内维持杀伤功能的研究

体外试验从免疫小鼠脾细胞中诱导出对ＦＢＬ－３瘤细胞具有特异性杀伤功能的Ｔ杀伤细胞，转输到同系正常小鼠体内后发现，同时给予肿瘤抗原刺激和７ｄｒＩＬ－２作用，可使受鼠脾细胞获得杀伤ＦＢＬ－３细胞的活性，其杀伤功能与转输的Ｔ杀伤细胞有关，若转输后连续２１ｄ只给予ｒＩＬ－２不能维持体内建立的杀瘤活性，而间断给予肿瘤抗原再刺激，并联合应用短程ｒＩＬ－２，以１４ｄ为１周期，则可长期维持体内的肿瘤特异性杀伤功能     

MutS同源蛋白2可介导Vγ9δ2T细胞对人宫颈癌细胞的杀伤北大核心CSCD

目的：探讨Vγ9δ2 T细胞识别的肿瘤相关新蛋白质配体人MutS同源蛋白2（hMSH2）在宫颈癌免疫中的作用与意义。方法通过特异性抗体阻断宫颈癌细胞表面异位表达的hMSH2分子,分析Vγ9δ2 T细胞杀伤功能变化及IFN-γ、TNF-α分泌情况;使用ELISA检测宫颈癌患者血清hMSH2水平;使用肿瘤组织芯片（ TMA）分析hMSH2在宫颈癌组织中的表达情况。结果 anti-hMSH2抗体封闭后,Vγ9δ2 T细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用显著降低,分泌IFN-γ减少,TNF-α分泌无明显变化;宫颈癌患者血清hMSH2水平略高于正常人;hMSH2在宫颈癌组织中存在异常的核浆分布。结论 hMSH2可促进Vγ9δ2 T细胞杀伤宫颈癌细胞及分泌IFN-γ,在宫颈癌固有免疫中具有重要意义。     

抗CD20scFv-Fc-CD28/ζ基因修饰T细胞靶向杀伤Raji细胞的研究

目的 研究重组抗cD20scFv-Fc-CD28/ζ基因修饰T淋巴细胞在杀伤Raji细胞时T细胞活化情况和诱导Raji细胞凋亡的变化,进一步探讨特异基因修饰T细胞杀伤淋巴瘤细胞的机制.方法 将重组质粒转染至PA317细胞中,用转染成功的PA317培养液感染外周血T淋巴细胞后,用800μg/ml的G418筛选1周后杀伤Raji细胞,分别在不同时间点用流式细胞仪检测Raji细胞Bcl-2的阳性率,用ELISA检测培养上清液中的IL-10、IFN-γ.结果 Raji细胞Bcl-2的阳性率在24 h内就明显下降,72 h内由98.43%下降到38.45%,下降幅度明显高于对照组和空白组.72 h检测IL-10发现实验组为100.3 pg/ml,明显低于对照组(210.88 pg/ml)和空白组(286.71 pg/ml),同时IFN-γ的分泌量(1487.23 pg/ml)也显著高于对照组.结论 抗CD20介导的T细胞靶向杀伤Raji细胞不需要CD28的协同刺激.CD28和CD3ζ协同刺激可增强T细胞抑制Raji细胞TL-10表达使其降低Bcl-2的表达从而加速靶细胞的裂解.CD28/ζ在没有外源协同刺激分子B7/CD28时能允分激活T细胞,促进其分泌IFN-γ,增强了抗CD20修饰T细胞靶向杀伤Raji细胞的能力.     

嵌合抗原受体T细胞的联合疗法在肿瘤治疗中的研究进展

嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell, CAR-T)免疫疗法作为新型的免疫疗法发展迅速,显示出良好的疗效,并已被批准用于治疗血液系统恶性肿瘤。然而CAR-T免疫治疗在实体瘤中的疗效却未有较大突破。以CAR-T免疫疗法为基础的联合治疗近年来已成为研究的新热点,并为CAR-T免疫疗法治疗血液系统肿瘤和实体瘤提供了广阔的应用前景。CAR-T免疫疗法与免疫检查点、溶瘤病毒等免疫疗法的联合应用,抑制了肿瘤细胞的免疫逃逸,可从不同角度提高机体的抗肿瘤免疫力,显示出了协同增效的作用。CAR-T免疫疗法联合放疗、化疗等传统疗法可以重塑肿瘤免疫微环境,增强抗肿瘤作用。建立以CAR-T为基础的治疗模式是肿瘤免疫治疗的一个新方向,也是对肿瘤治疗新模式的探索。该文概述CAR-T免疫疗法与其他疗法联合治疗的进展,并介绍它们目前的应用状况。     

T淋巴细胞亚群在妊娠与复发性自然流产中作用及治疗研究进展北大核心CSCD

胚胎携带父方的MHC单元型,相对于母体犹如同种异体移植,母胎免疫耐受是妊娠建立与维持的前提,机体免疫系统在其中发挥着复杂而精细的调控作用。T淋巴细胞是机体免疫调节的主体,主要包括辅助性T淋巴细胞（Th cell）及调节性T淋巴细胞（Treg）,在抵御外界病原体感染、     

嵌合型抗原受体T细胞在实体肿瘤治疗的现状和展望

从1989年Gross与Eshhar提出嵌合型抗原受体(CAR)T细胞的理念,到2014年FDA授予CTL019“突破性治疗”荣誉,CAR-T细胞治疗肿瘤已走过25年.从早期的单一CD3ζ结构域到后来的串联CD28、CD137等,随着人类对肿瘤免疫研究的深入,以及临床试验研究开展,CAR T细胞治疗得到不断优化.虽然CD19为靶点的淋巴瘤治疗获得成功,但实体肿瘤治疗仍处于临床试验摸索阶段.基于促进CAR T细胞向肿瘤局部迁移浸润以及克服抗肿瘤微环境的免疫抑制作用等理念及技术优化,CAR T治疗实体肿瘤的研究越来越深入.未来CAR T治疗的适应症将不断扩大.