二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡与活性氧之间的关系

目的:探讨二烯丙基三硫(diallytrisulfide,DATS)诱导人胃癌细胞系MGC-803凋亡与细胞内活性氧(re-activeoxygenspecies,ROS)之间的关系。方法:用12mg/L的DATS作用于体外培养的MGC-803细胞24h后,用流式细胞术检测凋亡率及细胞内活性氧水平。结果:12mg/LDATS作用于MGC-803细胞24h后,细胞凋亡率明显上升;细胞内活性氧水平与DATS呈浓度依赖性升高。用抗氧化剂NAC预处理细胞,能抑制细胞内活性氧水平的升高及DATS诱导的细胞凋亡。结论:DATS诱导胃癌细胞凋亡与细胞内活性氧产生增加有关。     

瘦素对多柔比星诱导人肝癌细胞凋亡影响的实验研究

目的观察瘦素对多柔比星诱导人肝癌细胞株Huh7凋亡的影响并探讨其可能的机制。方法用多柔比星作为凋亡诱导剂预处理细胞3h后,在培养液中加入浓度为100ng/mL的瘦素,24h后提取细胞DNA电泳检测DNA ladder,Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达情况。结果瘦素能够抑制多柔比星诱导的人肝癌细胞凋亡。与对照组相比,瘦素处理组的DNA ladder条带明显减弱,Hochest33258荧光染色也发现瘦素处理组的凋亡细胞明显减少,流式细胞仪检测发现对照组的凋亡率是(47.77±2.90)%,而瘦素处理组的凋亡率是(30.17±2.03)%,明显下降,P<0.01;实时荧光定量PCR检测发现Bcl-2 mRNA表达量增高至对照组的(2.31±0.17)倍,Bax mRNA表达量减弱至对照组的(0.46±0.04)倍,差异均有统计学意义,P<0.05和P<0.01。结论瘦素可以抑制人肝癌细胞的凋亡,可能是通过上调抗凋亡因子Bcl-2的表达及抑制促凋亡因子Bax的表达来实现其抗凋亡作用。     

TGF-β1对人肝癌细胞系凋亡的调控作用研究

 目的　本研究旨在明确人肝癌细胞系中TGF β1的作用及其与凋亡的关系。 方法　本研究选用了 3种含有不同 p5 3基因状态的人肝癌细胞系 ,应用TUNEL技术对TGF β1诱导的肝癌细胞的凋亡进行了定量检测。结果　TGF β1仅能诱导HepG2细胞 (野生型p5 3)凋亡 ,这提示凋亡与 p5 3基因的表达具有明确的联系。结论　HepG2细胞系比Huh 7和Hep3B系细胞更易发生TGF β1诱导的凋亡 ,TGF β1通过p5 3依赖性途径诱导肝癌细胞系发生凋亡     

蛋白激酶CK2抑制剂对H460细胞内活性氧水平及DNA双链断裂影响

目的 观察蛋白激酶CK2抑制剂对人肺癌细胞系H460细胞内活性氧水平及DNA双链断裂损伤的影响。方法 使用终浓度为0、12.5、25.0、50.0 μmol/L的蛋白激酶CK2抑制剂醌茜素分别作用H460细胞24 h,检测CK2各亚基蛋白及mRNA水平变化。不同浓度梯度醌茜素作用4、24 h后,采用流式细胞仪检测H460细胞内活性氧水平变化。通过免疫荧光法检测CK2抑制剂对H460细胞γ-H₂AX表达的影响,并计算细胞内γ-H₂AX焦点的平均值。采用方差分析和t检验。结果 醌茜素对H460细胞CK2各亚基蛋白或mRNA水平无明显影响(CK2α,0 μmol∶12.5 μmol/L,P=0.966;0 μmol/L∶25 μmol/L,P=0.355;0 μmol/L∶50 μmol/L,P=0.864, CK2α’, 0 μmol/L∶12.5 μmol/L,P=0.409;0 μmol/L∶25 μmol/L,P=0.833;0 μmol/L∶50 μmol/L,P=0.0.746, CK2β, 0 μmol/L∶12.5 μmol/L,P=0.532;0 μmol/L∶25 μmol/L,P=0.830;0 μmol/L∶50 μmol/L,P=0.061)。随着醌茜素浓度增加及作用时间延长,H460细胞内活性氧水平明显升高。不同浓度醌茜素可增加细胞内γ-H₂AX焦点数,并呈剂量和时间依赖性(醌茜素作用时间4 h或24 h, 0 μmol/L∶12.5 μmol/L,12.5 μmol/L∶25 μmol/L,25 μmol/L∶50 μmol/L,P均=0.000,浓度为12.5 μmol/L,25 μmol/L或50 μmol/L,4 h∶24 h,P均=0.000)。结论 醌茜素可通过抑制蛋白激酶CK2活性增加肺癌H460细胞内活性氧水平及DNA双链断裂损伤,该研究为醌茜素作为一种有潜力的肺癌放射增敏剂提供了理论基础。     

大波斯菊苷抗肝癌活性及作用机制

目的 探讨大波斯菊苷(Apigenin-7-O-Glucoside,AGL)对肝癌Huh7细胞活性和Huh7细胞荷瘤裸鼠肿瘤增长的抑制效果.方法 CCK-8法检测AGL对Huh7细胞的增殖抑制作用及半数抑制浓度,线粒体膜电位测定方法分析经AGL处理后Huh7细胞的早期凋亡程度,流式细胞术分析AGL对Huh7细胞凋亡的影...     

QHF复方对人肝癌Huh7细胞生长、侵袭及肿瘤干细胞表面标志物表达的影响

目的：研究中药QHF复方对人肝癌Huh7细胞生长、凋亡和侵袭能力的作用,并初步研究其对肿瘤干细胞表面标志物表达的影响。方法：体外培养人肝癌Huh7细胞,MTT法检测QHF复方对细胞增殖的影响;流式细胞术检测QHF复方对Huh7细胞周期及凋亡的影响;Transwell实验检测QHF复方对Huh7细胞侵袭能力的影响;流式细胞仪检测QHF复方作用后Huh7细胞肿瘤干细胞表面标志物CD133和CD44的表达情况。结果：与溶剂对照组比较,QHF复方能够抑制Huh7细胞增殖,并且这种抑制作用具有剂量和时间依赖性（P均 < 0.05）;QHF复方能诱导细胞凋亡,使其生长周期阻滞在S期;QHF复方能够降低Huh7细胞的侵袭能力（P < 0.05）;并能够下调肿瘤干细胞表面标记物CD133和CD44的表达（P < 0.05）。结论：中药QHF复方能够抑制Huh7细胞的生长、侵袭,这种抑制作用可能与肿瘤干细胞表面标记物CD133和CD44表达的下调有关。     

隐丹参酮诱导人食管癌HCE-4细胞凋亡的机制

目的 探讨隐丹参酮对食管癌HCE-4细胞的药效和药理机制。方法 MTT比色法检测隐丹参酮对人食管癌HCE-4和TE-2细胞的杀伤作用。倒置显微镜观察隐丹参酮处理后HCE-4细胞形态学变化。Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞术检测隐丹参酮对HCE-4细胞的诱导凋亡作用、活性氧水平及加入活性氧清除剂NAC后细胞凋亡情况。Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达量。结果 MTT比色法检测结果显示隐丹参酮对HCE-4和TE-2细胞均具有良好的杀伤作用。经隐丹参酮处理后,HCE-4细胞呈现细胞核固缩、细胞变圆、悬浮细胞增多的现象。Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞术检测结果表明隐丹参酮可以诱导HCE-4细胞发生凋亡,增加细胞内活性氧的水平,预处理NAC后,隐丹参酮的诱导凋亡作用被抑制。Western blot检测结果显示促凋亡蛋白p-JNK、p-p38、Bad、Caspase-3及PARP表达量升高,抗凋亡蛋白p-ERK、p-AKT及Bcl-2表达量降低。结论 隐丹参酮对人食管癌HCE-4细胞具有良好的杀伤作用,其机制可能是隐丹参酮上调ROS的水平,调控MAPK和AKT信号途径,进而诱导食管癌HCE-4细胞发生凋亡。     

人肝癌HepG2细胞表达甲胎蛋白抑制AMD3100诱导凋亡的研究北大核心CSCD

目的研究CXCR4信号对人肝癌HepG2细胞增殖及甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)表达在肝癌细胞耐受诱导凋亡中的作用。方法 MTT法检测CXCR4信号的拮抗剂AMD3100对人肝癌细胞HepG2增殖的影响,并用Western blot分析AMD3100处理前后AFP、CXCR4的表达变化;用RNA干扰技术抑制AFP表达24 h后再给予AMD3100处理24 h,荧光显微镜观察HepG2细胞的形态学变化以及流式细胞术分析细胞的凋亡情况。结果 AMD3100对人肝癌HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用;AMD3100处理后HepG2细胞的CXCR4和AFP表达明显受到抑制;干扰AFP表达可协同AMD3100诱导HepG2细胞凋亡。结论 HepG2细胞通过表达AFP导致癌细胞耐受AMD3100诱导的凋亡。     

三氧化二砷对人肝癌HepG2细胞内活性氧水平的影响

[目的]探讨三氧化二砷（As2O3）对人肝癌细胞生长抑制和诱导凋亡作用及其对细胞内活性氧（ROS）水平的影响。[方法]用MTT法、DNALadder检测及流式细胞术等观察As2O3对人肝癌细胞株HepG2的生长抑制和诱导凋亡作用及细胞内ROS的变化。[结果]As2O3能明显抑制HepG2细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性。DNALadder检测示,121μmol／L As2O3处理HepG2细胞48h开始出现DNALadder条带。流式细胞仪分析显示As2O3处理人肝癌细胞HepG2 12、24、36h后细胞内ROS水平较对照组明显升高（P〈0．01）,且呈时间依赖性。[结论]As20,可通过抑制人肝癌细胞HepG2增殖和提高细胞内ROS水平诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

鸦胆子油对人肝癌细胞增殖的抑制作用及机制

目的:探讨鸦胆子油对人肝癌HepG2和Huh7细胞的增殖抑制作用及机制。方法:采用MTT法分析不同浓度鸦胆子油的增殖抑制作用,并用流式细胞仪进行细胞周期和细胞凋亡分析。结果:鸦胆子油能够使HepG2细胞和Huh7细胞的存活率降低,HepG2细胞24h和48h的IC50值分别为59.41μl/L和45.35μl/L,Huh7细胞24h和48h的IC50值为273.43μl/L和103.52μl/L。细胞周期实验中细胞G0/G1期比例升高。细胞凋亡实验中HepG2和Huh7细胞早期凋亡和晚期凋亡的比例均有增加,但晚期凋亡的细胞比例增加更大,分别为(61.47±7.74)%和(69.34±6.42)%。 结论:鸦胆子油能够抑制HepG2细胞和Huh7细胞的增殖,且通过阻滞细胞周期于G0/G1期诱导细胞凋亡。     

中期因子诱导肝癌细胞Hep3B抵抗失巢凋亡

目的：探讨肝素结合分子中期因子（midkine,MK）对肝癌细胞Hep3B抵抗失巢凋亡的影响。方法：采用悬浮培养法建立人肝癌来源细胞系Hep3B失巢凋亡模型,以不同质量浓度（10、50、100 ng/ml）MK或PBS（对照组）处理失巢培养的肝癌细胞Hep3B,采用流式细胞术检测Hep3B细胞的凋亡,采用Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3的表达。结果：随着悬浮培养时间的延长,肝癌细胞Hep3B失巢凋亡率逐渐升高,培养72 h后悬浮培养的Hep3B细胞凋亡率显著高于贴壁培养的Hep3B细胞凋亡率\[（38.76±4.23）% vs （6.76±1.43）%,P<0.01\]。不同质量浓度MK处理24 h后,悬浮培养Hep3B细胞的凋亡率均明显低于对照组,且与MK的浓度呈负相关关系（r=0.951,P=0.049）;同时,MK处理后Hep3B细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显增加,而促凋亡蛋白caspase-3则明显下降。结论：MK可能通过上调Bcl-2蛋白表达和下调caspase-3蛋白的表达来提高肝癌细胞Hep3B在失巢状态下抵抗凋亡的能力。     

5-Aza-CdR对人喉鳞癌Hep2细胞凋亡及蛋白质表达的影响

目的:探讨5-Aza-CdR对人喉鳞癌Hep2细胞凋亡及蛋白质表达的影响。方法:Hep2细胞分别经10-7mol/L 5-Aza-CdR和DMSO处理72h,应用Hoechst33258染色及流式细胞仪检测5-Aza-CdR对Hep2细胞凋亡的影响。抽提各组Hep2细胞总蛋白质,行双向电泳,采用PDQuest-7.0.1软件及MALDI-TOF质谱技术筛查5-Aza-CdR对Hep2细胞蛋白表达的影响,并通过Western blot对显著性差异蛋白质进行验证。结果:人喉鳞癌Hep2细胞在10-7mol/L 5-Aza-CdR处理72h后出现明显的细胞核致密浓染,Hep2细胞的凋亡率由对照组的(2.70±0.28)%增加到(13.96±0.41)%,具有统计学意义(P<0.05)。双向电泳筛查了包括S100A4在内的5种表达显著差异的蛋白质,Western blot进一步验证了5-Aza-CdR能明显上调喉鳞癌Hep2细胞中S100A4的表达,进而证明了双向电泳结果的可信性。结论:5-Aza-CdR介导的Hep2细胞部分蛋白质表达改变,直接或间接地参与了5-Aza-CdR诱导的Hep2细胞凋亡的发生,为5-Aza-CdR在喉鳞癌探讨性治疗中的机制研究奠定基础。     

丹参多酚酸盐通过线粒体途径诱导人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡

目的：研究丹参多酚酸盐(salvianolate)体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用及其可能机制。方法：不同质量浓度丹参多酚酸盐(0.5、1、2 mg/ml)与肝癌细胞共培养24 h后,流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡,线粒体膜电位试剂盒(JC-1)检测线粒体膜电位变化;比色法测定1.0 mg/ml丹参多酚酸盐作用后肝癌细胞内caspase8、caspase9 及caspase3的活性,流式细胞仪检测培养体系内加入caspase9抑制剂(zLEHDfmk)或caspase3抑制剂(zDEVDfmk)后细胞凋亡率的变化,Western blotting检测肝癌细胞内线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bcl2表达水平。结果：丹参多酚酸盐显著诱导肝癌细胞SMMC7721凋亡(P<0.05),同时线粒体膜电位随着药物浓度的升高而加剧下降(P<0.05)。1.0 mg/ml 丹参多酚酸盐处理肝癌细胞24 h后caspase-9与caspase-3的活性明显升高(P<0.05),而caspase-8的活性无明显变化(P>0.05);当培养体系内加入caspase-9或caspase3活性抑制剂后,丹参多酚酸盐诱导肿瘤细胞凋亡的作用明显降低(P<0.05)。Western blotting检测显示,丹参多酚酸盐处理组前凋亡蛋白Bax表达明显升高,抗凋亡蛋白Bcl2表达降低。结论：丹参多酚酸盐(0.5~2.0 mg/ml)剂量具有促进肝癌细胞凋亡的作用,且有剂量依赖的趋势,其机制与线粒体凋亡途径有关。     

携带mda-7基因的复制缺陷型腺病毒通过促进线粒体释放促凋亡蛋白杀伤肝癌细胞

目的 探讨黑色素瘤分化相关基因7/白介素24(mda-7/IL-24)基因选择性杀伤肝癌细胞的机制.方法 应用携带mda-7基因的复制缺陷型腺病毒Ad.mda-7感染正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2.通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附实验(ELISA)及Western blot方法,观察mda-7/IL-24基因的表达;应用Hoeehst染色和流式细胞仪观察mda-7/IL-24对肝癌细胞的杀伤作用;采用RT-PCR和Western blot方法,观察Bcl-2家族和caspase-9基因表达的变化,分离不同感染时点细胞内线粒体和胞浆蛋白,并检测线粒体释放促凋亡蛋白细胞色素C(Cyt-C)和Smac/DIABLO的变化过程.结果 Ad.mda-7能介导mda-7/IL-24在两种细胞株中的高效表达.能选择性杀伤肝癌细胞,感染24 h后,HepG2细胞凋亡率为24.0%±4.6%,而对正常的肝细胞没有影响.RT-PCR和亚细胞蛋白的分析结果显示,胞浆内Bel-2和Bcl-xL的表达在HepG2细胞中明显下降,而在L02细胞中的表达无变化,Bax在肝癌细胞中的表达明显增强,Bak的表达无变化;Ad.mda-7能促进细胞线粒体释放cyt-C和Smac/DIABLO蛋白,并促进caspase-9的表达.结论 Ad.mda-7能选择性杀伤肝癌细胞HepG2,通过促进线粒体促凋亡蛋白的释放而诱导肝癌细胞凋亡.     

百草枯诱导AML12细胞凋亡过程中线粒体活性氧的作用

目的: 探讨百草枯诱导小鼠肝细胞系AML12细胞凋亡过程中线粒体活性氧的作用。方法: AML12细胞分别给予0、25、50、100、200、300 μmol/L的百草枯处理。采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;AnnexinV/PI双染法结合流式细胞术检测细胞凋亡率;DCFH-DA荧光探针经流式细胞仪测定细胞内活性氧水平;MitoSOX荧光探针检测线粒体活性氧变化;激光共聚焦测定JC-1探针荧光强度以检测线粒体膜电位变化。结果: 与对照组比较,25~300 μmol/L的百草枯处理后可以诱导AML12细胞活力下降,且具有剂量效应关系(r=-0.94,P<0.01);300 μmol/L的百草枯作用24 h可明显诱导AML12细胞发生凋亡(P<0.05);25~300 μmol/L 百草枯处理24 h后细胞内活性氧依次增加(P<0.05),25~100 μmol/L百草枯作用24 h时线粒体活性氧增加且呈剂量效应关系(r=0.98,P<0.05),而200 和300 μmol/L的百草枯作用24 h时线粒体活性氧水平降低(P<0.05)。细胞活力下降与细胞内活性氧升高呈负相关(r=-0.90 P<0.05);晚期凋亡细胞的比例与细胞内活性氧呈正相关(r=0.96,P<0.01);JC-1检测线粒体膜电位结果显示,与对照组相比,300 μmol/L的百草枯处理24 h时线粒体膜电位显著降低(P<0.05)。结论: 百草枯诱导AML12细胞凋亡过程主要由细胞整体水平的活性氧介导,提示线粒体活性氧并未直接参与百草枯诱导的肝损伤过程。     

吲哚美辛诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其对cyclin E蛋白表达的影响

目的　观察吲哚美辛诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡 ,及其对 cyclin E蛋白的影响。方法　采用 MTT比色法观察吲哚美辛对肝癌 Hep G2细胞增殖的影响 ;采用流式细胞仪检测吲哚美辛对 Hep G2细胞周期分布的影响 ,同时结合透射电子显微镜观察吲哚美辛诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡的作用 ;免疫细胞化学方法观察吲哚美辛对Hep G2细胞周期调控蛋白 cyclin E的影响。结果　吲哚美辛可抑制肝癌 Hep G2细胞的增殖 ,诱导其凋亡 ,改变细胞周期分布 ,使 G0 /G1 期细胞比例增高 ,S期比例降低 ,同时还可使 cyclin E蛋白表达下降。上述作用具有剂量和时间依赖性 (P<0 .0 5 )。结论　吲哚美辛可诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡 ,改变细胞周期分布 ,影响细胞周期调控蛋白表达 ,从而抑制细胞增殖。     

Wnt7a对肝癌细胞凋亡、迁移及侵袭的影响

目的:检测Wnt7a在肝癌中的表达,分析Wnt7a对肝癌细胞活性、凋亡、迁移及侵袭的影响,探讨Wnt7a在肝癌中的作用。方法:分别采用免疫组织化学染色和Western blot检测组织和细胞系中Wnt7a的表达情况;Hep3B细胞经人重组Wnt7a蛋白（rWnt7a）处理后,MTT法检测细胞活性改变,流式细胞仪检测细胞凋亡变化,Transwell分析细胞迁移及侵袭能力变化。结果:相对于癌旁组织,肿瘤组织低表达Wnt7a蛋白;经rWnt7a处理后,Hep3B细胞活性降低、细胞凋亡增多且迁移与侵袭能力下降。结论:Wnt7a蛋白能抑制Hep3B细胞生长、迁移与侵袭能力,可能在肝癌中发挥抑癌作用。     

活性氧改变在PIG11高表达诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡中的作用

目的:探讨活性氧(reactive oxygen species, ROS)改变在PIG11蛋白高表达诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡中的作用.方法:本研究采用2', 7'-二氯氢化荧光素二脂(2', 7'-dichlorofluorescin diacetate, DCFH-DA)荧光探针标记PIG11蛋白高表达肝癌细胞株pLXSN-PIG11-HepG_2细胞内 ROS,用N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcystine, NAC)清除细胞内ROS后,FCM检测细胞内ROS水平的变化以及细胞凋亡率.结果:FCM测定结果显示,pLXSN-PIG11-HepG_2细胞内ROS水平(15.60±0.92)明显高于pLXSN-HepG_2细胞(4.90±0.70)和HepG2细胞(5.37±1.17),差异有统计学意义(P<0.01).NAC(10 mmol/L)清除细胞内ROS后,FCM检测显示pLXSN-PIG11-HepG_2细胞凋亡率较未清除前明显降低(P<0.01).结论:PIG11高表达诱导细胞凋亡的机制可能与细胞内ROS水平升高有关.     

喉癌Hep2细胞系APAF-1表达及对5-Aza-CdR诱导凋亡敏感性的研究

目的:探讨喉癌中APAF-1基因的表达及其对5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-az-a-2′-deoxycitydine,5-Aza-CdR)诱导的Hep2细胞系凋亡的影响.方法:不同浓度5-Aza-CdR(5×10-8、10-7 、2×10-7 和3×10-7 mol/L)处理体外培养的Hep2细胞后,用流式细胞仪检测处理72 h的细胞周期分布和细胞凋亡率变化;通过RT-PCR及免疫组织化学技术检测APAF-1基因在喉癌中的表达情况,并建立APAF-1瞬时过度表达系统,观察在APAF-1过度表达情况下,5-Aza-CdR对Hep2细胞凋亡的影响.结果:10-7 mol/L 5-Aza-CdR处理Hep2细胞72 h后,凋亡率由对照组的1.07%增加到13.96%,且发生G1期细胞周期阻滞;喉鳞癌组织中APAF-1 mRNA和蛋白表达都明显下调,分别为16/42、14/31,且未发现APAF-1表达与肿瘤的分化程度具有相关性,P=0.093;在10-7 mol/L浓度5-Aza-CdR诱导下,APAF-1过度表达组Hep2细胞系凋亡率由空白对照组的12.46%及空载体转染组的14.74%增高到28.64%,且发生S期细胞周期阻滞.结论:过度表达APAF-1基因可以明显增加Hep2细胞系对去甲基化药物5-Aza-CdR诱导的凋亡敏感性.     

粉防己碱诱导人视网膜母细胞瘤细胞凋亡及其机制研究

背景与目的：粉防己碱(tetrandrine,Tet)是一种天然化合物,其抗视网膜母细胞瘤作用尚不清楚。该研究拟检测Tet对人视网膜母细胞瘤细胞的抗肿瘤作用,并进一步阐明其作用机制。方法：采用CCK-8法检测Tet对视网膜母细胞瘤细胞活力的抑制作用;应用Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况;在2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(2’, 7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)染色后,采用流式细胞术检测细胞内反应性活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;采用蛋白［质］印迹法(Western blot)检测细胞Akt、p-Akt蛋白表达量。结果：Tet显著抑制视网膜母细胞瘤细胞活力,Tet浓度为4、8、10和20 μmol/L处理细胞24 h时,WERI-Rb-1细胞抑制率分别为5.7%、25.0%、55.1%和84.9%,Y79细胞抑制率分别为2.4%、2.9%、23.8%和54.2% (P<0.01);10 μmol/L Tet处理细胞12、24和48 h时,WERI-Rb-1细胞抑制率分别为6.0%、45.5%和74.7%,Y79细胞抑制率分别为2.9%、19.4%和43.3%(P<0.01)。Tet诱导细胞凋亡,以10 μmol/L Tet处理细胞24和48 h时,WERI-Rb-1细胞凋亡率分别为(23.70±1.75)%和(34.83±3.15)%,Y79细胞凋亡率分别为(9.62±2.69)%和(14.97±1.50)%(P<0.01),凋亡抑制剂Z-VAD-FMK能够显著抑制Tet对视网膜母细胞瘤细胞的凋亡诱导作用(P<0.05)。10 μmol/L Tet作用细胞6及12 h后,细胞的ROS产生量较对照组明显上升(P<0.01),N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)能够抑制Tet诱导产生的ROS(P<0.01),NAC抑制ROS后,细胞的凋亡率较单独Tet作用组明显下降(P<0.01)。Tet能够抑制视网膜母细胞瘤细胞PI3K/Akt信号通路。结论：Tet诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡,该作用机制与细胞内ROS升高、PI3K/Akt信号通路抑制有关。