氧化应激所致的人皮肤成纤维细胞衰老中β-连环蛋白的表达研究

目的 观察β-连环蛋白在氧化应激所致的人皮肤成纤维细胞衰老中的变化,探讨其在应激诱导的皮肤衰老中可能的作用.方法 从儿童包皮分离培养原代成纤维细胞,H2O2:处理第2～4代人皮肤成纤维细胞,显微镜观察其形态学改变,β-半乳糖苷酶细胞衰老试剂盒检测β-半乳糖苷酶活性,RT-PCR、Western印迹检测β连环蛋白mRNA和蛋白表达水平.结果 150 μmol/L H2O2:处理2 h后可以诱导人皮肤成纤维细胞衰老.在应激诱导的衰老(SIPS)细胞中β-半乳糖苷酶阳性率达到(37.67±1.53)%.而对照细胞中只有(2.97±0.25)%,两组差异有统计学意义(P<0.01).RT-PCR 结果显示,在对照细胞组β连环蛋白/GAPDH mRNA比值为0.59±0.04,SIPS细胞组为0.29±0.30,对照细胞组明显高于SIPS细胞组,两组差异有统计学意义(t=10.06,P<0.01).Western印迹结果显示,对照细胞组β连环蛋白/GAPDH蛋白比值为0.62±0.03,SIPS细胞组为0.31±0.01,对照细胞组明显高于SIPS细胞组,两组差异有统计学意义(t=14.97,P<0.0).结论 150 μmol/L H2O2:处理2 h可以诱导人皮肤成纤维细胞发生衰老改变,SIPS细胞中β连环蛋白表达水平明显降低,初步推测β连环蛋白可能是调控皮肤衰老的重要靶基因.

Abstract：

Objective To observe the changes of β-catenin expression in human skin fibroblasts (HSFs) after induced by oxidative stress, and to explore its possible roles in oxidative stress-induced premature senescence (SIPS) of HSFs. Methods Fibroblasts were isolated from the foreskin of a child and subjected to a primary culture. The fibroblasts of second to fourth passage were treated with various concentrations of H2O2 for 2 hours to establish an optimized model of stress-induced premature senescence, β-galactosidase assay kit was used to detect the activity of β-galactosidase in H2O2rinduced HSFs, RT-PCR and Western blot to measure the mRNA and protein expressions of β-catenin in control and senescent HSFs. Results Premature senescence of HSFs could be induced by the treatment with H2O2 of 150 μmol/L for 2 hours. The proportion of β-galactosidase-positive cells was (2.97 ± 0.25)% in control HSFs and (37.67 ± 1.53)% in senescent HSFs (P< 0.01). A significant increase was observed in the β-catenin/GAPDH protein ratio and β-catenin/GAPDH mRNA ratio in control HSFs compared with the senescent HSFs (0.62 ± 0.03 vs. 0.31 ± 0.01, t = 14.97, P < 0.01; 0.59 ± 0.04 vs. 0.29 ± 0.30, t = 10.06, P < 0.01). Conclusions The two-hour treatment with H2O2 of 150 μmol/L could induce the premature senescence of HSFs, and there is a notable decrease in the expression of β-catenin in prematurely senescent HSFs induced by oxidative stress, implying that β-catenin is an important target gene for the regulation of skin aging.     

抑癌基因DKK3对皮肤恶性黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 探讨DKK3 在人皮肤恶性黑素瘤细胞及组织中的表达及其对黑素瘤细胞A375增殖与凋亡的影响。方法 通过反转录（RT）？PCR及实时定量PCR分析DKK3 mRNA在人恶性黑素瘤细胞系HM、A375、WM451、WM35、SK？MEL？1、Hs？695T和MDA？MB？435s及38例原发性黑素瘤、4例转移性黑素瘤和20例色素痣组织中的相对表达。分别转染恶性黑素瘤A375细胞pcDNA3.1（＋）？Flag？DKK3 质粒（实验组）和pcDNA3.1（＋）？Flag？Vector 质粒（对照组）,RT？PCR 验证 DKK3 的过表达;通过CCK8法和平板克隆实验分析 DKK3 对A375细胞增殖的影响,流式细胞仪分析 DKK3对A375细胞凋亡的影响,Western印迹检测A375细胞周期和凋亡相关蛋白的表达。结果 DKK3 mRNA 在WM35细胞系表达下调,HM、A375、WM451、SK？MEL？1和Hs？695T细胞系表达缺失,MDA？MB？435s细胞高表达。与色素痣相比,DKK3 mRNA在人恶性黑素瘤组织表达降低（P 〈 0.001）。与对照组A375细胞相比 （100%）,实验组A375细胞克隆形成效率明显受到抑制（23.22% ± 3.55%）;同时转染后24、48、72 h细胞活性受到明显抑制（均P 〈 0.05）。流式细胞仪检测发现,与对照组A375细胞（G1期,25.38% ± 2.92%）相比,实验组A375细胞明显阻滞于G1期（48.68% ± 3.92%,P 〈 0.001）,细胞凋亡率明显升高（P 〈 0.001）。与对照组A375细胞相比,实验组周期凋亡相关蛋白p21、Bax、活化的parp和 活化的Caspase？3表达升高,细胞周期蛋白D1和Bcl2表达降低（均P 〈 0.001）。结论 DKK3在人皮肤恶性黑素瘤组织中表达下调,可能作为潜在的抑癌基因参与皮肤恶性黑素瘤的进展。     

重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 研究重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及相关机制。方法 采用CCK8法测定0（对照组）、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞和A375细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测A375细胞周期变化及细胞凋亡水平;荧光染料（DCFH？DA）测定A375细胞内活性氧的变化;罗丹明123染色测定线粒体膜电位变化;利用分光光度法检测重楼皂苷Ⅰ处理后的A375细胞内ATP和上清液中乳酸、葡萄糖含量;Western印迹法检测A375细胞内Bcl？2、Bcl？2相关X蛋白（Bax）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3、细胞周期蛋白D1、丙酮酸激酶同工酶2（PKM2）表达。多组均数比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK？q检验。结果 在工作浓度内重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞增殖无明显影响,但能明显抑制 A375 细胞的增殖（P 〈 0.01）;荧光显微镜下发现,重楼皂苷Ⅰ处理后的 A375 细胞出现明显的凋亡形态。0（对照组）、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ分别处理A375细胞后,随重楼皂苷Ⅰ浓度增加,细胞凋亡率（分别为4.25% ± 1.27%、10.03% ± 1.49%、36.62% ± 1.97%、44.11% ± 2.47%）逐渐升高（F = 665.7,P 〈 0.01）,G0/G1期细胞比例（分别为54.13% ± 2.57%、67.35% ± 3.79%、74.39% ± 3.29%、82.29% ± 3.99%）亦渐增多（F = 71.81,P 〈 0.01）;细胞内活性氧呈明显上升趋势,细胞线粒体膜电位呈明显下降趋势（P 〈 0.01）;细胞内ATP含量下降（P 〈 0.01）,培养液中乳酸含量下降,葡萄糖含量上升（P 〈 0.01）;细胞Bax、cleaved？caspase？3蛋白表达增多,但Cyclin D1、Bcl？2和PKM2蛋白表达下降（P 〈 0.01）。结论 重楼皂苷Ⅰ可能通过激活细胞内活性氧的产生,引起线粒体膜电位下降,诱导A375细胞凋亡,并通过抑制PKM2、细胞周期蛋白D1表达,使细胞阻滞于G0/G1期。     

人类皮肤:血管紧张素Ⅱ的起源和靶器官

<正>近10年来,在血管紧张素研究领域已有了新的发现。以往研究已证明血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)不仅在调节血压和体液中起作用,而且在细胞增生和分化中也起作用。在这些进展中有几方面主要的突破;一方面,血管紧张素受体已被证实存在于心血管或肾脏之外的组织中;另一方面,至少4个不同血管紧张素受体亚型与血管紧张素相互作用的研究,包括非心血管领域。     

瘢痕疙瘩及其成纤维细胞p16基因甲基化状态和相关基因表达研究北大核心CSCD

目的 探讨瘢痕疙瘩中成纤维细胞p16基因甲基化在其发生发展中的作用.方法 分离、培养来自瘢痕疙瘩皮损和健康人皮肤原代成纤维细胞;免疫组化法检测瘢痕疙瘩皮损中p16表达情况;实时荧光定量PCR检测瘢痕疙瘩成纤维细胞中p16、DNA甲基转移酶mRNA表达;亚硫酸氢盐修饰后测序（BSP法）检测瘢痕疙瘩皮损及培养的原代成纤维细胞p16基因甲基化状态.结果 瘢痕疙瘩成纤维细胞中p16基因mRNA表达低于健康人皮肤成纤维细胞（相对表达量2-△△Ct分别为0.64±0.18和1.92±0.23,t=10.54,P＜0.05）.瘢痕疙瘩成纤维细胞三种DNA甲基转移酶（DNMT）基因mRNA表达水平（DNMT1、DNMT3A、DNMT3B分别为2.58±0.23、4.87±0.46、1.57±0.12）与健康人皮肤成纤维细胞（分别为1.13±0.21、2.38±0.32、0.57±0.16）相比均存在高表达,两组比较,t值分别为11.22、10.81、12.45,均P＜0.05.瘢痕疙瘩组织和瘢痕疙瘩原代成纤维细胞内p16启动子区甲基化程度分别为1.81％±0.46％和3.15％±0.94％,明显高于健康人皮肤组织（0.90％±0.35％,F=14.23,P＜0.01）和原代成纤维细胞（0.17％±0.29％,F=37.62,P＜0.01）.结论 瘢痕疙瘩成纤维细胞中p16基因甲基化及其低表达与瘢痕疙瘩的失控性生长可能相关,DNA甲基转移酶在其发病中可能起一定作用.     

H2O2对人皮肤成纤维细胞衰老标记蛋白30及自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达的影响北大核心CSCD

目的 探讨H2O2对人皮肤成纤维细胞（NHSF）衰老标记蛋白30（SMP30）以及细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型（LC3Ⅱ）的影响。方法 用150 μmol/L H2O2处理2 ~ 4代NHSF 2 h,构建细胞衰老模型作为H2O2组,而未处理的NHSF作为对照组。细胞衰老β半乳糖苷酶（SA？β？gal）染色法检测衰老细胞比例,间接免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3的表达,反转录PCR（RT？PCR）检测SMP30 mRNA的表达,Western印迹法检测SMP30和LC3蛋白的表达。结果 H2O2组NHSF的SA？β？gal染色阳性率（41.70% ± 2.95%）显著高于对照组（3.03% ± 0.25%,t = 22.59,P 〈 0.05）。间接免疫荧光结果显示,H2O2组NHSF LC3阳性率（12.60% ± 1.57%）明显低于对照组（23.67% ± 3.04%,t = 5.61,P 〈 0.05）。Western印迹显示,H2O2组LC3Ⅰ/GAPDH比值（0.40 ± 0.02）与对照组（0.41 ± 0.04）比较差异无统计学意义（P 〉 0.05）,而H2O2组LC3Ⅱ/GAPDH比值（0.20 ± 0.02）明显低于对照组（0.80 ± 0.03,t = 29.69,P 〈 0.05）,且H2O2组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值（0.51 ± 0.03）亦明显低于对照组（1.98 ± 0.23,t = 10.967,P 〈 0.05）。H2O2组SMP30 mRNA和蛋白水平（与GAPDH mRNA和蛋白的比值分别为0.16 ± 0.01和0.27 ± 0.02）明显低于对照组（分别为0.35 ± 0.01和0.63 ± 0.02）,均P 〈 0.05。结论 H2O2可降低NHSF中SMP30及LC3Ⅱ的表达水平,加速NHSF衰老。     

己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、胶原合成及转化生长因子-β1表达的影响北大核心CSCD

目的探讨己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、胶原合成及转化生长因子（TGF）-β1表达的影响。方法取人瘢痕疙瘩及正常皮肤组织培养的第5～8代成纤维细胞,在含有0．1—3g／L己酮可可碱的环境中培养。应用噻唑蓝（M1Tr）法检测成纤维细胞增殖,双抗体夹心-ELISA法测定TGF—β1表达,RT—PCR检测I、Ⅲ型前胶原mRNA表达。结果0．1～2g／L己酮可可碱能明显抑制瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞的增殖,呈明显的量效一时效关系,抑制作用在浓度2g／L时达到最高。浓度为0．5～2g／L时己酮可可碱能降低瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞TGF—B1表达,1或2g／L时己酮可可碱能降低瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞I、Ⅲ型前胶原mRNA表达。结论己酮可可碱对瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞的增殖、TGF—β1以及I、Ⅲ型前胶原表达均有明显的抑制作用。     

UVA诱导人皮肤成纤维细胞光老化模型中miR-222的调节作用北大核心CSCD

目的探讨miR-222在长波紫外线(UVA)诱导的光老化模型中的调节作用。方法分离并培养人皮肤成纤维细胞(HDFs),用0,2.5,5.0和7.5J不同剂量UVA辐射诱导光老化模型,用实时定量PCR和Western-blot分别检测miR-222和基质金属蛋白酶1(MMP1)的表达情况。用miR-222的功能模拟物和miR-222的功能抑制物分别转染HDFs,检测MMP1表达情况。对HDFs细胞分别转染miR-222功能模拟物、miR-222阴性对照物、miR-222功能抑制物和miR对照的功能抑制物,转染24h后予UVA辐射诱导光老化模型,检测MMP1表达情况。结果 HDFs经不同剂量UVA辐射后,MMP1表达与对照组相比显著升高(P<0.01),同时miR-222表达与对照组相比显著降低(P<0.01)。miR-222转染HDFs后再予UVA辐射,miR-222转染组MMP1表达显著低于miR对照组(t=5.616,P<0.05),而miR-222抑制物转染组MMP1表达与miR对照组相比无显著的改变。结论人皮肤成纤维细胞光老化模型中UVA辐射可导致miR-222表达降低,从而上调MMP1表达。     

芹菜素抑制人恶性黑素瘤细胞株增殖及侵袭的研究北大核心CSCD

目的 研究芹菜素对恶性黑素瘤体外抑制作用及其分子机制.方法 将人恶性黑素瘤细胞株A375和C8161分为实验组和对照组,实验组经不同浓度芹菜素处理一定时间,对照组采用二甲基亚砜处理.采用噻唑蓝（MTT）法检测A375和C8161细胞的增殖,划痕法检测细胞迁移.Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭性,扫描电镜观察细胞树突形态,膜联蛋白V/碘化丙锭（Annexin-V/PI）法检测细胞凋亡,PI单染法检测细胞周期,Western印迹检测细胞凋亡及细胞外信号调节激酶通路相关蛋白的表达.结果 MTT显示,芹菜素在10 ～ 40 mg/L浓度范围内对A375和C8161细胞抑制作用呈量效关系,在0～48h呈时效关系,与对照组相比差异有统计学意义（均P＜ 0.05）;24 h的半数抑制率（IC50）均为25 mg/L.体外迁移试验证实,10、20、25 mg/L芹菜素作用于A375和C8161细胞24h后可明显抑制细胞迁移（P＜0.01）.体外侵袭实验证实,10、20、25mg/L芹菜素作用于A375和C8161细胞72 h,细胞侵袭数量显著少于对照组（P＜0.01）.扫描电镜示,经25 mg/L芹菜素作用24 h后,A375和C8161细胞树突均变细长,A375细胞树突长度为（23.30±2.62） μm,与对照组（12.38±2.27） μm相比差异有统计学意义（P＜0.01）;C8161细胞树突长度为（16.50±1.62）μm,与对照组（9.36±2.51）μm相比差异亦有统计学意义（P＜0.01）.10、25 mg/L芹菜素处理24 h后,A375细胞凋亡率分别为（3.30±0.82）％、（10.00±0.60）％,与对照组[（0.40±0.07）％、（4.00±0.70）％]相比差异有统计学意义（均P＜0.01）;C8161细胞凋亡率分别为（13.10±1.45）％、（25.77±2.40）％,与对照组（7.27±1.31）％相比差异亦有统计学意义（均P＜ 0.01）.25 mg/L芹菜素作用于A375和C8161细胞24 h后,细胞周期阻滞于G2/M期,其比例分别为（48.70±3.04）％、（31.10±1.90）％,与对照组[（21.30±0.75）％、（25.06±2.12）％]相比差异有统计学意义（均P＜ 0.01）.经25 mg/L芹菜素作用24 h后,A375和C8161细胞凋亡相关蛋白活化型半胱天冬酶3（Cleaved caspase-3）和多聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶裂解片段（Cleaved PARP）表达均增加,细胞外信号调节激酶通路均被活化.结论 芹菜素可抑制人恶性黑素瘤细胞增殖、迁移、侵袭,诱导细胞凋亡及周期阻滞,其机制可能与调节ERK信号通路相关蛋白的表达有关.     

线粒体融合素基因 -2 对人骶韧带成纤维细胞增殖及功能的影响

目的：研究外源性线粒体融合素基因-2（Mfn2）表达对骶韧带成纤维细胞的增殖及其合成前胶原蛋白功能的影响。方法：取新鲜骶韧带组织,用组织块法在体外培养出成纤维细胞。将第2～4代细胞分组：转染LV-Mfn2-GFP组（Mfn2＋组）,转染LV-GFP组（Mfn2-组）和未转染组（对照组）。流式细胞仪检测细胞绿色荧光蛋白（GFP）表达,RT-PCR和Western blot检测Mfn2表达。细胞计数和cck-8法检测Mfn2对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期分布。RT-PCR和Western blot检测细胞前胶原1 A1/1A2/3A1的表达。结果：转染慢病毒的成纤维细胞GFP蛋白表达率73.2％～79.1％,转染Mfn2＋组成纤维细胞稳定高表达Mfn2蛋白,显著高于Mfn2-组和对照组（P＜0.05,both）。cck-8实验提示,转染表达Mfn2基因96h后,成纤维细胞增殖明显受到抑制,Mfn2＋组细胞数显著低于 Mfn2-组和未转染组（P＜0.05 both）;DNA直方图分析法测定显示转染Mfn2基因的细胞大部分停滞于G0/G1期,Mfn2＋组G0/G1期细胞比例（60.7％±3.26％）,显著高于 Mfn2-组（43.2％±3.32％）和对照组（40.8％±2.28％）,（P＜0.05, both）。半定量RT-PCR和Western blot示Mfn2＋组成纤维细胞合成表达前胶原1A1/1A2/3A1显著低于Mfn2-组和对照组（P＜0.05,all）。结论：Mfn2基因在体外转染成纤维细胞后,抑制细胞增殖并使成纤维细胞前胶原蛋白表达下降,可能是导致骶韧带细胞外基质减少,影响韧带纤维数量和质量的重要原因。     

ROCK1基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与迁移及相关分子表达的影响

目的研究ROCK1基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和迁移能力及相关分子表达的影响。方法免疫组化检测人瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中ROCK1蛋白的表达, Western印迹检测人瘢痕疙瘩组织中ROCK1、转化生长因子β1(TGF-β1)和E钙黏附蛋白(E-Cad)的表达。体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF), 分为ROCK1基因过表达对照组(ROCK1 NC组, 转染ROCK1基因过表达对照载体)、ROCK1基因过表达组(ROCK1 OE组, 转染ROCK1基因过表达载体)、ROCK1基因干扰对照组(sh NC组, 转染ROCK1基因干扰对照载体)、ROCK1基因干扰组(shROCK1组, 转染ROCK1基因干扰载体)共4组。细胞计数试剂盒8(CCK8)检测ROCK1基因对HKF存活率的影响;Transwell小室检测ROCK1基因对HKF迁移的影响;实时荧光定量PCR、免疫印迹检测ROCK1、TGF-β1和E-Cad基因mRNA和蛋白的表达。结果免疫组化检测显示, 人瘢痕疙瘩组织中ROCK1表达较正常组织显著降低(t = 6.47, P = 0.003);Western印迹检测显示, 与正常...     

沉默单核细胞趋化蛋白3对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、迁移及凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨沉默单核细胞趋化蛋白3(MCP-3)对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、迁移及凋亡等功能的影响。方法:取增生性瘢痕组织和正常皮肤组织,qRT-PCR检测正常皮肤组织和增生性瘢痕组织中MCP-3 mRNA表达水平;分离培养增生性瘢痕组织成纤维细胞(HSF)和正常皮肤组织成纤维细胞(NSF),qRT-PCR和Western blot检测两种成纤维细胞中MCP-3 mRNA和蛋白表达水平。采用MCP-3干扰慢病毒(shRNA-MCP-3)和其阴性对照病毒(shRNA-NC)感染HSF,MTT检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞的迁移能力,qRT-PCR检测各组细胞中MCP-3、collagenⅠ和collagenⅢmRNA水平,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白MCP-3、Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3及collagenⅠ和collagenⅢ蛋白表达水平。结果:MCP-3在增生性瘢痕组织及HSF中高表达。与blank组和shRNA-NC组比较,shRNA-MCP-3组细胞中MCP-3 mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.01),细胞增殖活性、迁移能力及细胞中collagenⅠ、collagenⅢ和Bcl-2表达水平均显著降低(P<0.01),同时细胞凋亡率及凋亡蛋白Bax和Cleaved-caspase-3表达水平显著上升(P<0.01)。结论:干扰MCP-3表达可能通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,减少细胞合成胶原,从而发挥抑制瘢痕形成与发展的作用。     

MiR-146a 在长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化中作用机制的研究

目的：探讨长波紫外线（UVA）诱导人皮肤成纤维细胞（HSF）光老化中 miR-146a 的表达情况,以及上调 miR-146a 表达对其靶基因 Smad4及细胞光老化的影响。方法以10 J/cm2 UVA 照射 HSF （UVA 照射组）,分别在0、3、7、14 d 提取 RNA,实时定量 PCR 检测 miR-146a 的表达量。通过慢病毒转染上调 miR-146a 的表达（miR-146a 过表达组）,在7 d、14 d 后用荧光显微镜观察转染效率,并通过实时定量 PCR 验证细胞内miR-146a 表达量。空白对照组为正常培养的 HSF（不做任何处理）,miR-146a 过表达组为慢病毒转染 HSF 后,再用 UVA 照射。MTT 法检测空白对照组、UVA 照射组、miR-146a 过表达组、miR-146a 过表达组细胞增殖吸光度（A 值）,实时定量 PCR 检测各组细胞内老化相关基因 p53、p16和 p21 mRNA 的表达,Western 印迹法检测各组细胞内 Smad4蛋白表达。采用重复测量的方差分析、析因设计的方差分析进行统计学分析。结果重复测量的方差分析显示,随培养时间的延长,UVA 照射组和空白对照组 miR-146a 的表达量均逐渐下降（F =213.840, P <0.01）;UVA 照射组表达量低于空白对照组（F =52.55,P <0.01）,且照射时间越长,下调越明显。慢病毒转染HSF 后,细胞内均有较高的荧光表达,miR-146a 过表达组在第7天（10.31±0.17）与第14天时（9.65±0.19）的miR-146a 表达量差异无统计学意义（P >0.05）,但较空白对照组（分别为8.33±0.13和7.86±0.11）显著增高,组间差异有统计学意义（F =42.49,P <0.01）。析因设计的方差分析显示,UVA 照射对细胞增殖活性有抑制作用（P <0.01）,UVA 照射组、UVA + miR-146a 组细胞增殖均分别低于空白对照组、miR-146a 过表达组（P <0.01）;慢病毒转染上调 miR-146a 的表达对细胞增殖活性也有影响（P <0.01）,但 miR-146a 过表达组与空白对照组差异无统计学意义（P >0.05）,UVA + miR-146a 组显著高于 UVA 照射组（P <0.01）。实时定量 PCR 和 Western 印迹法结果显示,UVA 照射可上调 p21、p53、p16 mRNA 的表达（均 P <0.01）,同时对细胞内 Smad4蛋白表达有促进作用（P <0.01）;UVA 照射组、UVA + miR-146a 组 p21、p53、p16 mRNA 和 Smad4蛋白表达均分别高于空白对照组、miR-146a 过表达组（均 P <0.01）,而 miR-146a 过表达组与空白对照组相比差异均无统计学意义（均 P >0.05）, UVA + miR-146a 组均显著低于 UVA 照射组（均 P <0.01）。结论在 UVA 诱导光老化的 HSF 中,miR-146a 的表达受到抑制,上调其表达能够抑制 Smad4的表达,促进光老化细胞增殖,起到抗细胞光老化的作用。     

体外研究真皮填充剂的一种新方法：用体外重建皮肤模型研究透明质酸增加成纤维细胞活性北大核心CSCD

面部老化的主要特征是皱纹、皱褶、弹性下降和皮肤松垂,反映皮肤深部出现了渐进性、持久性的改变。用填充材料增加软组织的含量以减少老化的临床表征,是一种普遍的抗皮肤老化策略,也是美容医学的一个扩展领域。     

五倍子酸通过TGF-β/Smads信号通路对人瘢痕成纤维细胞生长抑制效应的初步研究

目的研究五倍子酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞的形态、增殖、细胞周期、胶原收缩程度及对转化生长因子β(TGF-β)/Sma和Mad相关蛋白(Smads)信号通路的影响, 探讨五倍子酸治疗瘢痕疙瘩的作用及机制。方法 2022年8 - 12月在武汉市第一医院皮肤外科获取术中切除的经临床及病理确诊的瘢痕疙瘩组织标本3份, 采用组织块培养法进行原代成纤维细胞培养, 取第3 ～ 8代细胞进行实验。设置低、中、高剂量五倍子酸组(分别用0.025、0.05、0.1 mg/ml五倍子酸干预细胞)及对照组(仅用含10%胎牛血清的DMEM培养细胞)。培养24、48、72 h后, 细胞计数(CCK8)法检测各组细胞增殖活性, 三维培养观察胶原收缩情况。按上述分组培养细胞24 h后, 在微分干涉倒置荧光显微镜下拍照并使用流式细胞仪分析各组细胞周期变化。使用0.1 mg/ml五倍子酸干预细胞作为实验组(高剂量五倍子酸组), 与对照组细胞分别培养24 h后, 酶联免疫吸附试验(ELISA)测定两组TGF-β1、2、3浓度变化, 实时荧光定量PCR检测TGF-β1、2、3, Smad2、3、4及α平滑肌肌动蛋白(SMA)mR...