抗白细胞介素—6受体单克隆抗体的制备

用白细胞介素－６（ＩＬ－６）依赖性人多发性骨髓瘤细胞株ＸＧ－１作为免疫原，我们成功地制备获得一株分泌抗人ＩＬ－６受体单克隆抗体的杂交瘤，命名为ＳＩ１５。夹心ＥＬＩＳＡ和位点竞争试验表明，ＳＩ１５和抗人ＩＬ－６受体单克隆抗抗Ｍ１９识别ＩＬ－６受体上的同一位点，对ＩＬ－６受体的生物活性无影响。     

重组牛白细胞介素4的原核表达及其单克隆抗体研制

目的:原核表达重组牛白细胞介素4(rBoIL-4)并制备针对抗rBolL-4的单克隆抗体(mAb).方法:通过PCR从重组质粒pSP73-BOIL-4中扩增BoIFN-γ基因,分别克隆入表达载体pGEX-6p-1和pET-30a(+)中,构建重组菌并对其进行诱导表达、纯化和鉴定.以纯化的融合蛋白rHis-BoIL-4为...     

人白细胞介素15单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :用rhIL 15与沙门氏菌裸菌相偶联制备IL 15单克隆抗体 (monoclonalantibody ,McAb) ,以便为疾病的诊断、治疗和发病机制的研究提供可靠的生物制剂。方法 :将纯化的rhIL 15蛋白与沙门氏菌裸菌相偶联制成免疫原 ,用脾内、腹腔、静脉三种途径相结合免疫BALB c小鼠 ,以PEG为促融剂 ,将脾细胞与SP2 0细胞进行融合 ,HAT选择培养 ,间接ELISA筛选阳性克隆 ,通过多次克隆化 ,获得稳定分泌特异性McAb的杂交瘤细胞株 ,并对所获得的细胞株及分泌的McAb特性进行了分析。结果 :获得 4株能稳定分泌特异性McAb的杂交瘤细胞系 (hybridomacell,Hc) ,ELISA法检测其效价分别为 1:10 6 、1:10 7、1:10 7、1:10 7。Dotblot检测IL 15的灵敏度为 1 5ng ,其中一株 (1 7E4 )尚可用于Westernblot检测。结论 :成功制备了 4株IL 15McAb杂交瘤细胞系。     

抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究

目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和 1F5 ,染色体数目分别为 92条和 90条 ,所分泌的抗体分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型 ,腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度达 95 %以上 ,效价为 1× 10 - 4和 1× 10 - 5,Westernblot显示 2株单抗均能特异性识别 18 3kD处的rhIL 18蛋白。 1C7单抗的亲和常数Ka=1 7× 10 5,1F5的亲和常数Ka=1 3× 10 5。 2株单抗识别不同抗原表位。结论 :制备的 2株单抗为进一步研究IL 18的分子结构、生物学功能及其与免疫相关性疾病的关系提供了实验材料。     

抗人白细胞介素- 4单克隆抗体的制备及应用研究

白细胞介素 4 (ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ,ＩＬ 4 )又称Ｂ细胞生长因子(ＢＣＧＦ)或Ｂ细胞刺激因子 1(ＢＳＦ 1) ,是一种主要由Ｔｈ2细胞亚群产生的细胞因子。ＩＬ 4可促进活化的Ｂ细胞增殖、ＩｇＥ的产生及上调ＦｃεＲⅡ (ＣＤ2 3)分子的表达。ＩＬ 4水平的异常增高 ,见于某些过敏性疾病、传染病和自身免疫性疾病。ＩＬ 4与Ｔｈ1和Ｔｈ2细胞的平衡也有密切的关系[1] 。因此 ,建立一种简便、灵敏的检测体液和细胞中ＩＬ 4的方法 ,对ＩＬ 4的基础及临床研究具有重要的意义。为此 ,我们制备了分泌抗ｒｈＩＬ 4ｍＡｂ的杂交瘤细胞系 ,鉴定了其…     

白细胞介素4构象研究进展

本文介绍了重组人白细胞介素4(rhu IL-4)一级结构及高级结构;通过rhu IL-4与单克隆抗体相互作用,初步探讨了其结构与功能的关系;并将rhu IL-4与同一受体超家族中其它细胞因子和激素的三级结构作了比较。     

抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的研制及初步鉴定

目的:制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb)。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChIFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Westernblot鉴定mAb的特异性。结果:获得2株可稳定分泌抗鸡γ-干扰素mAb的杂交瘤细胞株1G5、5E3,其Ig亚类均为IgG2a,腹水mAb1G5、5E3的ELISA效价分别为1∶1600000,1∶120000。在Dot-ELISA试验中,这2株mAb均只与表达His-ChIFN-γ及GST-ChIFN-γ的重组大肠杆菌反应,与未表达这2种IFN-γ的其他8种菌株均不发生反应。在蛋白质印迹试验中,2株mAb均能与融合蛋白GST-ChIFN-γ、His-ChIFN-γ发生反应,出现特异性条带。结果表明,mAb1G5、5E3是针对鸡γ-干扰素的特异性mAb。结论:成功地制备抗鸡γ-干扰素的mAb,它们在免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节研究等方面有应用价值。     

白细胞介素4受体及其临床意义

白细胞介素４受体分膜结合型和可溶型两种形式。目前已克隆出人及鼠ＩＬ－４Ｒ的ｃＤＮＡ并确定了其基因的染色体定位及蛋白的一级结构，两种ＩＬ－４Ｒ均为糖蛋白，属于造血生成素受体超家族，膜结合型ＩＬ－４Ｒ能特异性结合ＩＬ－４并介导其许多功能的发挥；而可溶型则因在体液中与Ｌ－４结合而抑制了其功能，由于ＩＬ－４与多种疾病有关，ＩＬ－４Ｒ在这些疾病中的作用也受到人们的关注。ＩＬ－４Ｒ或其阻断剂对于治疗相关的疾病     

抗人CA50单克隆抗体的制备、鉴定及其应用北大核心CSCD

目的制备抗人糖抗原50（CA50）单克隆抗体（m Ab）,鉴定其免疫学特性并建立化学发光免疫分析法检测体系。方法将人CA50抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选后得到稳定分泌抗CA50抗体的杂交瘤细胞株。经细胞扩大培养及纯化获得m Ab后,建立化学发光免疫分析法检测体系,并对其线性范围、准确度、灵敏度、重复性进行评估,同时进行血样的测定。结果筛选出4株抗人CA50的杂交瘤细胞株,效价均在1∶108以上,2株配对抗体不与CA125、CA153、CA199、CA724交叉。建立的化学发光免疫分析法检测范围为0~500 U/m L,回收率为107.08%,灵敏度为0.83 U/m L,重复性CV值〈10%,与参比试剂检测血样的结果比较符合率为96.7%,Kappa值为0.911。结论成功制备了抗人CA50m Ab,建立了人CA50的化学发光免疫分析法检测体系。     

抗人重组IL—1单克隆抗体的制备及初步鉴定

以重组人ＩＬ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞６５３融合，得到一组分泌抗人重组ＩＬ－１单克隆抗体的杂交瘤细胞。对其中的３株 ＹＡ１３３、ＹＡ１４０和ＹＡ１６３进行了初步鉴定，抗体类别为ＩｇＧ，亚类均为ＩｇＧ１，免疫转印显示，３株抗体均能特异性地识别分子量为１７．５ｋＤ的ＩＬ－１蛋白条带，ＥＬＩＳＡ法证明与其它细胞因子如：ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＤ－α，ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ均无     

鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白单克隆抗体的制备及其初步鉴定

目的:经发表的鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)ORF214基因序列,利用PCR方法扩增出目的片段,测序后并克隆至原核表达载体pET-28a,用表达产物制备抗FPVORF214蛋白单克隆抗体(mAb)。方法:以鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,用间接ELISA方法检测筛选。结果:阳性细胞株经3代克隆纯化后,获得3株能稳定分泌抗FPVORF214蛋白mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2F10C9、3C3B10、2G8G7。3株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与FPVORF214蛋白反应,细胞上清ELISA效价均在1×102以上,mAb腹水效价达1×104以上。结论:该特异性mAb的研制成功为进一步研究ORF214的生物学特性奠定基础。     

白细胞介素4生物学功能研究进展

ＩＬ－４丰富多彩的生物学功能，日益受到人们的重视。本文对ＩＬ－４体内的生物功能，ＩＬ－４在细胞因子网络中的调节作用等新近研究成果进行综述。     

抗人白细胞单克隆抗体的特异性及其特性鉴定

目的制备抗人白细胞单克隆抗体（ｍＡｂ），并对其识别抗原及组织的特异性进行鉴定。方法采用分离的人全白细胞悬液免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０细胞常规融合，用间接ＥＬＩＳＡ筛选ｍＡｂ，流式细胞仪及免疫组化染色ＳＰ法鉴定其组织特异性。　结果成功地制备１株抗人白细胞　ｍＡｂ，命名为ＳＺ－１０５。ＥＬＩＳＡ法测定其腹水效价为１×１０－５。琼脂糖双扩散鉴定为ＩｇＧ１类。流式细胞仪间接免疫荧光技术及免疫组化ＳＰ法测定表明，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５可选择性地与外周血液的粒细胞、单核细胞和淋巴细胞呈强阳性反应，而与红细胞及血小板不出现反应。该ｍＡｂ还可与正常人骨髓的白细胞前体起反应。另外，在肝、肺、脾、胸腺及淋巴结正常组织中的巨噬细胞表面，也有ＳＺ－１０５抗原表达。ＳＺ－１０５抗原经亲和层析纯化，再经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　和Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ证实，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５识别的抗原是相对分子质量（Ｍｒ）为７５　０００左右的单链蛋白多肽。结论　获得１株具有高度免疫学活性和组织特异性的抗人白细胞ｍＡｂ　ＳＺ－１０５，其对研究白细胞的分化、免疫功能，以及隐匿性急、慢性炎症疾病的放免显像诊断都具有一定的临床意义。     

白细胞介素4受体的研究进展

白细胞介素４受体（ＩＬ－４Ｒ）的作用不仅是介导ＩＬ－４的信号传导，新近发现ｓＩＬ－４Ｒ能抑制机体对器官移植的排斥反应，在机体免疫反应的调节机制中发挥着重要作用，因此日益受到人们的重视。本文对ＩＬ－４Ｒ的分子和基因结构，ｓＩＬ－４Ｒ在基因与蛋白水平的相互关系以及ｓＩＬ－４Ｒ对免疫排斥反应的调节作用等新近研究成果进行综述。