Cyclin G1对肝癌细胞HepG2放射敏感度的影响及其机制北大核心CSCD

目的探讨Cyclin G1对肝癌HepG2细胞放射敏感度的影响及其可能的分子机制。方法通过转染Cyclin G1-siRNA构建HepG2-Cyclin G1-siRNA细胞,通过成克隆分析观察Cyclin G1对肝癌细胞放射敏感度的影响,流式细胞仪检测肝癌细胞细胞周期分布,ELISA法检测乏氧因子HIF-1α及ROS的表达,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 q-PCR显示HepG2-Cyclin G1-siRNA细胞中,Cyclin G1表达下降至正常细胞的43.5%左右,成克隆分析显示Cyclin G1-siRNA可使HepG2细胞放射敏感度增高,与正常对照组相比,放射增敏比SER_(Dq)为1.41。流式细胞分析显示HepG2-Cyclin G1-siRNA细胞与正常HepG2细胞相比,G_2/M期细胞比例增加,G_0/G_1期细胞比例下降;ELISA显示X线照射可引起HepG2细胞的HIF-1α升高,而Cyclin G1-siRNA可以引起HIF-1α的含量显著下降。ROS含量在X射线照射后表现为轻度升高,Cyclin G1-siRNA可以使ROS含量增加,联合X线照射变化更明显。Western blot显示X线照射及Cyclin G1-siRNA均可使BCL-2表达下降及Bax表达增加,其中HepG2联合X线照射组改变最明显。结论 Cyclin G1-siRNA可以上调肝癌细胞HepG2的放射敏感度,其机制可能与调节HIF-1α、ROS及凋亡相关蛋白有关。     

RNA干扰沉默Survivin表达提高131I对甲状腺癌FTC-133细胞增殖的抑制作用

目的:探讨RNA干扰沉默Survivin表达对131I抑制甲状腺癌FTC-133细胞生长的作用及其机制。方法:采用脂质体法将Survivin-siRNA及其阴性对照NC-siRNA转染至干扰组和NC组细胞中,Real-time PCR和Western blot检测Survivin mRNA和蛋白的表达;以131I孵育后,MTT法、流式细胞仪检测Survivin对FTC-133细胞增殖、周期和凋亡的影响,Western blot检测细胞中CDK2、Cyclin E、Bax和Bcl-2蛋白的表达变化。结果:转染Survivin-siRNA成功沉默FTC-133细胞中Survivin mRNA和蛋白的表达,抑制FTC-133细胞增殖,诱导细胞阻滞于G0/G1期和细胞凋亡,并下调细胞中CDK2、Cyclin E和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达;131I孵育后,干扰组细胞中的上述变化较NC组明显增强。结论:沉默Survivin表达可提高131I对FTC-133细胞增殖的抑制作用和对细胞凋亡的促进作用,其作用机制可能与下调CDK2、Cyclin E、Bcl-2和上调Bax蛋白的表达有关。     

HIF干扰表达载体psilencer3.0-HIF-α siRNA的构建和鉴定

背景与目的：肾透明细胞癌是最常见的肾实质恶性肿瘤．生物学行为极为复杂，对放疗和化疗均不敏感。研究发现缺氧诱导因子HIF-α（和HIF-2α与肾透明细胞癌发生发展过程存在相关性．．本研究拟通过RNA干扰的方法构建psiletwer3．0-H1F-αsiRNA重组质粒，从而为进一步探讨HIF在肾细胞癌发生发展中的功能提供有效的工具。方法：设计并化学合成编码HIF-1α和HIF-2αsiRNA的DNA片段，通过基因重组的方法将其构建进siRNA的表达载体。采用实时定量PCR和Western blot检测构建成功的siRNA表达载体在mRNA及蛋白水平对目标基因表达的抑制。结果：786-0细胞转染psilem、er3．0-HIF-1αsiRNA和psilencer3．0-HIF-2α后，HIF-1α和HIF-2α的mRNA表达的抑制率分别达到r82．1％和87．4％；OS—RC-2细胞转染psilelwer3．0-HIF-1αsiRNA和psilencer3．0-HIF-2α后．抑制率分别达到了91．2％和81．2％。在786-0细胞和OS—RC-2细胞中转染HIF-1α干扰质粒和HIF-2α干扰质粒的实验组蛋白表达量较空白对照均有不同程度的减低、结论：构建成功的siRNA表达载体可以有效抑制目标基因HIF-1和HIF乏在mRNA硬蛋白水平的表达.     

RNA干扰技术裸鼠体内沉默缺氧诱导因子1α的表达对宫颈癌的抑瘤效应

目的 观察体内沉默缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达后对宫颈癌的抑瘤效应,并探讨其可能的机制.方法 将实验用宫颈癌Siha细胞分为空白对照组(转染空载体)、无关对照组(转染无关对照质粒)和实验组(稳定转染pU-HIF-1α-shRNA的真核表达载体),接种裸鼠,建立裸鼠荷瘤模型,观测HIF-1α-shRNA对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用.采用免疫组化SP法和Western blot 法,检测HIF-1α和葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)蛋白在肿瘤组织中的表达.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测HIF-1α、GLUTI和己糖激酶Ⅱ(HKⅡ)mRNA的表达.采用酶显色法,检测肿瘤组织中的乳酸含量.采用原位末端标记(TUNEL)法,检测细胞凋亡.结果 实验组裸鼠肿瘤的生长速度较空白对照组和无关对照组明显减慢(P＜0.05).接种50 d后处死裸鼠,实验组裸鼠的肿瘤重量为(1.90±0.28)g,也明显轻于空白对照组[(2.95±0.77)g]和无关对照组[(2.54±0.56)g,P＜0.01].实验组肿瘤组织中HIF-1α mRNA和蛋白的相对表达量分别为0.45±0.04和1.25±0.92,GLUT1mRNA和蛋白的相对表达量分别为0.32±0.02和1.25±0.48,均明显低于空白对照组和无关对照组(均P＜0.05).实验组中HK Ⅱ mRNA和乳酸的含量均明显低于空白对照组和无关对照组(均P＜0.05),但凋亡细胞数较空白对照组和无关对照组明显增多(均P＜0.01).结论 以HIF-1α为靶点的基因治疗,可通过下调靶基因GLUT1和HKⅡ的表达来降低宫颈癌Siha细胞的糖酵解水平,促进肿瘤细胞凋亡,从而发挥抑制宫颈癌生长的作用.     

过表达miR-205对顺铂诱导的肾上腺皮质癌细胞株SW-13凋亡的影响及其机制

目的 研究过表达miR-205对顺铂（cisplantin,CDDP）诱导的肾上腺皮质癌细胞株SW-13凋 亡的影响及其机制。方法 设转染pcDNA3.1( + )-miR-205的SW-13细胞和转染 pcDNA3.1( + )的SW-13 细胞分别为实验组和对照组。在不同浓度顺铂作用下,采用CCK-8法比较两组细胞对CDDP敏感度; H33342及AnnexinV-FITC/PI荧光观察细胞凋亡,AnnexinV-PE/7AAD荧光流式细胞术检测细胞凋亡 率;用Western blot检测目的蛋白的表达水平;qPCR检测相关基因mRNA水平的变化。结果 不同浓度 顺铂作用下,实验组细胞生长抑制率、凋亡率明显高于对照组（P＜0.01,P＜0.05）;在0、20、30 μg/ml浓度的CDDP处理后,实验组促凋亡蛋白Bax、Caspase-9以及E2F1和VEGF-A mRNA水平较对照 组升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达则降低。结论 上调SW-13细胞miR-205可降低E2F1、VEGF-A的表 达水平,促进顺铂诱导细胞的凋亡,增强肾上腺皮质癌细胞对顺铂的敏感度。     

RNA干扰HIF-1α对低氧状态下食管鳞癌Eca109细胞放射敏感性的影响

目的:观察低氧状态下食管鳞癌Eca109细胞中低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达,探讨HIF-1α对Eca109细胞放射敏感性的影响及其可能的分子机制。方法:以常氧组为对照。氯化钴(cobalt chloride,CoCl_2)模拟肿瘤低氧微环境,用RT-PCR检测体外低氧状态下Eca109细胞中HIF-1α和EGFR mRNA表达水平,免疫细胞化学法检测HIF-1α和EGFR蛋白表达水平。Western blot检测RNAi沉默HIF-1α对EGFR蛋白表达的影响、采用流式细胞术检测HIF-1α沉默后,Eca109细胞经放射线照射后的凋亡情况,评价其放射敏感性的变化。结果:与常氧组比较,低氧状态下,Eca109细胞中HIF-1αmRNA表达无明显变化(P0.05),HIF-1α蛋白表达增加。EGFR mRNA表达明显升高(P0.05),EGFR蛋白表达也相应增加。与未转染组和对照组比较,siRNA转染Eca109细胞可有效沉默HIF-1α蛋白在低氧状态下的表达(P0.05),EGFR蛋白的表达水平也明显下调(P0.05)。Eca109细胞在低氧状态下放射敏感性较常氧下明显降低(P0.05)。RNAi沉默HIF-1α可部分逆转低氧造成的Eca109细胞的放射耐受。结论:低氧可上调食管鳞癌Eca109细胞HIF-1α蛋白水平;HIF-1α增加Eca109细胞在低氧状态下的放射抗性,可能与HIF-1α上调EGFR mRNA及蛋白表达有关,有效抑制HIF-1α可增加Eca109细胞的放射敏感性。     

曲古抑素A下调Bcl-2水平经线粒体途径诱导耐顺铂人肺腺癌细胞凋亡

背景与目的 以铂类为基础的联合化疗是非小细胞肺癌目前首选的治疗方案,然而由于铂类药物的毒副作用和耐药的发生,限制了铂类药物的广泛应用.曲古抑素A(Trichostatin A,TSA)是一种组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂,能诱导肿瘤细胞生长抑制、分化、凋亡,并可以增强多种肿瘤细胞对铂类药物敏感性.本研究探讨TSA诱导耐顺铂人肺腺癌A549/CDDP细胞株凋亡的作用及机制.方法 中性红法测定TSA对A549/CDDP细胞毒性,荧光显微镜观察细胞DNA的变化,流式细胞仪分析细胞周期及线粒体膜电位的变化,分别转染Bcl-2表达质粒过表达Bcl-2和利用siRNA干扰Bcl-2表达.Western blot分析凋亡相关蛋白的变化.结果 TSAX对A549/CDDP细胞的IC50是(446.59±27.32)nmol/L,随着TSA浓度升高A549/CDDP细胞生长率明显下降.细胞凋亡在浓度为(125-500)nmol/L TSA处理后24 h出现.凋亡细胞主要表现为核染色质固缩,荧光染色增强.流式细胞仪检测发现TSA阻断细胞于S期,线粒体膜电位降低.Western blot结果显示,TSA处理细胞后,Bcl-2蛋白水平下降,而Bax表达上调,同时观察到caspase-3被激活.转染Bcl-2表达质粒可以抑制TSA诱导的细胞凋亡,而沉默Bcl-2表达可以增加细胞对TSA的敏感性.结论 TSA可能通过线粒体途径诱导A549/CDDP细胞凋亡.     

泮托拉唑对胃癌细胞MKN-45增殖与凋亡的影响

目的 探讨泮托拉唑对胃癌细胞MKN-45增殖与凋亡的影响及相关机制.方法 采用0、10、20、40 μg/ml的泮托拉唑处理MKN-45细胞48 h;MTT法检测细胞活力;Hoechst染色检测细胞形态;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及Cyclin E表达.结果 与0 μg/ml比较,10、20、40 μg/ml的泮托拉唑能明显降低MKN-45细胞活力(P﹤0.01),使细胞核发白,皱染,使细胞周期阻滞在G1期(P﹤0.01),下调Cyclin D1及Cyclin E的表达(P﹤0.01);与0 μg/ml比较,20、40 μg/ml的泮托拉唑能明显下调MKN-45细胞中Bcl-2的表达(P﹤0.01),上调Bax的表达(P﹤0.01).结论 泮托拉唑通过调控细胞周期蛋白及细胞凋亡相关蛋白表达抑制胃癌细胞MKN-45的增殖,并诱导细胞凋亡.     

HIF-1α基因表达沉默对鼻咽癌组织VEGF和CXCR4表达影响的研究

目的：探讨在乏氧条件下,HIF-1α、VEGF及CXCR4在鼻咽癌细胞中的表达,并探讨HIF-1α与VEGF和CXCR4的关系。方法：利用荧光定量PCR方法检测不同乏氧时相HIF-1α、VEGF及CXCR4mRNA表达。利用Westernbolt检测HIF-1α蛋白表达。构建特异性的HIF-1α慢病毒干扰载体,利用慢病毒感染鼻咽癌细胞,杀稻瘟菌素进行药物筛选,利用荧光定量PCR和Westernblot检测干扰效果。利用荧光定量PCR检测HIF-1α表达沉默后,鼻咽癌细胞VEGF和CXCR4的表达变化。结果：在乏氧条件下,鼻咽癌细胞CNE2HIF-1αmRNA表达稳定,蛋白表达增强,VEGF及CXCR4的mRNA表达均明显增强。利用特异性的HIF-1α慢病毒干扰鼻咽癌细胞CNE2,CNE2细胞中HIF-1α表达降低了81％,说明HIF-1α载体构建成功。HIF-1α表达沉默后,VEGF及CXCR4的表达水平也明显降低。结论：乏氧可以诱导鼻咽癌细胞HIF-1α、VEGF和CXCR4的表达,且VEGF和CXCR4的表达受HIF-1α的表达调控。     

低氧影响卵巢癌细胞对泰素的敏感性及其机制

目的研究低氧、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对卵巢癌细胞多药耐药基因(mdr-1)及其编码P-糖蛋白(P-gp)表达的调控,探讨低氧影响卵巢癌细胞对泰素的敏感性及其机制。方法对常氧(21%O2)和低氧(1%O2、5%O2)培养的A2780细胞,应用免疫细胞化学、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)和四氮唑蓝(MTT)法等,检测HIF-1αmRNA、蛋白以及mdr-1、P-gp的表达水平和对泰素的敏感性。利用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对HIF-1α的短发夹状干扰RNA真核表达载体pSiHIF-1α,并转染A2780细胞,检测转染后HIF-1α的基因沉默效果、对mdr-1和P-gp表达的影响及其对泰素敏感性的改变。结果低氧能显著诱导A2780细胞HIF-1αmRNA和蛋白表达水平的上调,HIF-1αmRNA的表达水平与低氧浓度无关,而HIF-1α蛋白表达呈低氧浓度依赖性;低氧能诱导A2780细胞的表达上调,且呈低氧浓度依赖性;低氧A2780细胞对泰素的敏感性较常氧明显降低(P<0.05)。pSiHIF-1α转染后,低氧A2780细胞能显著下调HIF-1α的表达,明显抑制mdr-1和P-gp的表达,其对泰素的敏感性显著增加。结论低氧能降低A2780细胞对泰素的敏感性,其机制可能是通过HIF-1α调控mdr-1和P-gp的表达而实现的。     

HIF-1α对电离辐射诱导人非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡作用及其机制的探讨

目的:探讨HIF-1α对电离辐射诱导人非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞凋亡的作用及其调控机制.方法:以HIF-1α抑制剂Echinomycin(EC)预处理人NHL细胞后给予5 GyX线照射,采用Annexin V染色方法检测肿瘤细胞凋亡水平的变化,采用蛋白质印迹法检测各细胞系中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达水平.将HIF-1α siRNA反义转染至NHL细胞中,检测转染后细胞凋亡分数及Caspase-3蛋白表达水平.结果:流式细胞仪检测结果显示,Namalwa细胞空白对照组、单纯照射组(RI)、RI+EC 2 nmol/L组的凋亡率分别为5.27±1.13、13.81±3.12和39.96±6.81,Ramos细胞分别为6.02±1.26、12.98±3.07和40.76±11.58,Raji细胞则为7.16±0.46、17.62±4.94和47.85±10.22,P＜0.01.电离辐射后,转染vector和HIF-1α siRNA的Namalwa细胞凋亡率分别为15.32±3.64和20.20±1.87,Ramos细胞分别为15.05±2.46和21.02±3.12,t值分别为3.99和3.19,P＜0.05 ;而Raji细胞则为10.90±1.65和17.26±0.69,t=5.98,P＜0.01.蛋白质印迹法结果显示,通过EC预处理抑制HIF-1α的表达能够明显上调射线诱导的各NHL细胞系中Caspase-3蛋白表达水平,同时凋亡相关蛋白Bcl-2表达减低而Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值明显降低,与单纯照射组相比差异均有统计学意义,P＜0.05.结论:抑制HIF-1α能够增加射线诱导的NHL细胞凋亡,其机制可能与增加Bax蛋白表达而下调Bcl-2蛋白表达有关.     

低氧诱导因子-1αRNAi表达质粒对卵巢癌细胞影响的实验研究

目的：探讨人HIF-1α短发夹 （sh） RNA表达质粒对卵巢癌SKOV3细胞HIF-1α基因的表达及对紫杉醇敏感性的影响。方法： 构建HIF-1α （sh） RNA表达质粒, 脂质体法转染, RT-PCR和Western blot检测癌细胞HIF-1α mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测癌细胞对紫杉醇的敏感性。结果： 转染质粒48 h后, H质粒转染组SKOV3细胞紫杉醇作用24 h的IC50值明显降低 （P<0.05）, 同时P-糖蛋白表达水平显著降低, 差异有统计学意义 （F=7.24, P=0.01）。结论： 针对HIF-1α的RNAi表达质粒可下调低氧培养的卵巢癌细胞SKOV3 HIF-1α基因mRNA和蛋白及P-gp的表达, 从而提高癌细胞对紫杉醇的敏感性。     

Shp2对舌癌细胞恶性生物学行为的调控作用

目的 探讨Src同源磷酸酪氨酸磷酸酶2(Shp2)在舌癌组织中的表达水平及其对Cal-27细胞增殖、转移、侵袭、凋亡等恶性生物学行为的影响.方法 采用免疫组织化学法检测舌癌组织中Shp2的表达情况;采用RNA干扰技术靶向沉默Cal-27细胞中Shp2的表达;采用噻唑蓝(MTT)法检测Cal-27细胞24、48、72、96 h的增殖活性;采用流式细胞术检测Shp2对Cal-27细胞凋亡的影响;采用蛋白质印迹(Western blot)法检测Shp2对Cal-27细胞中Bax、p53和Bcl-2蛋白表达的影响;采用Transwell小室侵袭实验和划痕实验检测Shp2对Cal-27细胞体外侵袭和迁移能力的影响.结果 舌癌组织中Shp2的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P﹤0.01);Shp2-siR-NA Cal-27细胞的增殖、侵袭和迁移能力均低于Cal-27细胞(P﹤0.05).与空白对照组比较,Shp2-siRNA组和阴性对照组的Cal-27细胞凋亡率均有所升高,差异均有统计学意义(P﹤0.05).Shp2-siRNA组中的p53、Bax蛋白表达水平均高于空白对照组和阴性对照组,Bcl-2蛋白表达水平低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 Shp2在舌癌细胞中具有促癌基因的活性,可促进Cal-27细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制其凋亡.     

西咪替丁对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

摘要：目的研究西咪替丁对其增殖及凋亡的影响并探讨其可能的机制。方法分别以不同浓度的西咪替丁处理A549细胞48 h后,采用MTT法测细胞存活率,流式细胞术测细胞凋亡率,Western blot测Bcl-2和Bax蛋白表达水平情况,观察西咪替丁对A549细胞增殖和凋亡的影响。结果经西咪替丁干预48 h后,A549细胞的增殖受到明显抑制,凋亡增加,且该抑制呈药物浓度依赖性增加。Western blot检测显示随着西咪替丁浓度增加,Bcl-2蛋白的表达减少,而Bax蛋白的表达增加。结论西咪替丁预处理能抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与其下调细胞Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达有关。     

RNA干扰抑制FANCD2基因对多药耐药骨髓瘤细胞株药物敏感性的影响

目的：探讨FA/BRCA（fanconi anemia/BRCA）中siRNA干扰对多药耐药骨髓瘤细胞株的影响.方法：体外培养多发性骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞系,通过相应渐增浓度的马法兰药物处理,选择性获得多药耐药的子代肿瘤细胞株RPMI-8226/R细胞.MTT法检测RPMI-8226和RPMI-8226/R细胞马法兰、ADM、VCR、CTX、Ara-C、VP-16及DDP的敏感性.siRNA干扰抑制FA/BRCA途径FANCD2蛋白表达,观察多发性骨髓瘤多药耐药细胞株对烷化剂药物敏感性的变化.结果：成功构建针对FANCD2基因的siRNA,将其转染多药耐药骨髓瘤细胞株,可以抑制细胞中FANCD2基因表达,转染细胞较转染前细胞FANCD2基因表达降低,对烷化剂的敏感性升高.结论：人多发性骨髓瘤多药耐药细胞株RPMI-8226/R其多药耐药性的产生可能与FA/BRCA途径中FANCD2表达增强有关,可通过抑制FANCD2表达而逆转细胞的耐药性达到增强烷化剂对耐药肿瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.沉默FANCD2表达可以提高多药耐药MM细胞对烷化剂的敏感性,而RNA干扰是一种沉默FANCD2表达的理想方法,因此它可能是一种有潜力的耐药MM辅助治疗新方法.     

沉默Y盒结合蛋白-1表达抑制SH-SY5Y细胞增殖促其凋亡的作用与机制

目的:观察短发夹RNA（shRNA）沉默Y盒结合蛋白-1（YB-1）对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖、凋亡的影响及其调控机制。方法:构建针对YB-1的短发夹RNA真核表达载体,利用LipofectamineTM2000脂质体转染SH-SY5Y细胞,检测蛋白表达水平,鉴别干扰效果;四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测干扰与否对SH-SY5Y细胞增殖的影响;流式细胞技术分析干扰与否对SH-SY5Y细胞凋亡的影响;Western blot法检测CyclinD1、Bcl-2及Bax在蛋白水平的变化。结果:Western blot结果显示转染组YB-1表达低于对照组和无效转染组,后两组无显著差异;MTT法检测显示转染组细胞增殖水平低于对照组,无效转染组细胞增殖水平接近对照组;流式细胞术检测结果显示转染组凋亡细胞数占总细胞数的（23.21±1.90）%,高于对照组（5.05±0.83）%（P<0.01）,无效转染组（6.24±1.05）%与对照组无显著性差异（P>0.05）;Western blot技术检测转染组CyclinD1、Bcl-2蛋白水平较对照组明显下降,Bax升高,无效转染组同对照组无明显差异。结论:shRNA介导的YB-1表达沉默可抑制SH-SY5Y细胞CyclinD1、Bcl-2表达,促进Bax表达,进而抑制细胞增殖、促进凋亡。     

基因沉默HIF-1α在结直肠癌SW480细胞的缺氧与上皮-间质转化中的作用

目的通过基因沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),研究其对结直肠癌SW480细胞的生长增殖、侵袭迁移能力,及对锌指转录因子(Snail)与上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响和作用。方法利用氯化钴(CoCl2)化学诱导建立结直肠癌SW480细胞的缺氧模型,设计合成HIF-1α的小干扰RNA(HIF-1α-siRNA)并将其转染入细胞内。通过四甲基偶氮唑兰(MTT)法检测细胞的体外生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell法)检测细胞的体外侵袭迁移力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫蛋白印迹(Western blot)检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherinmRNA与蛋白的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,缺氧条件下,基因干扰组的OD值及细胞存活率均降低(P<0.05);体外侵袭实验结果显示,基因干扰组侵袭迁移率降低(P<0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示,基因干扰组中HIF-1α和Snail mRNA和蛋白的表达明显降低,E-cadherin mRNA和蛋白的表达明显增强(P<0.05),对3种因子进行相关性分析,结果显示HIF-1α和Snail的表达呈正相关,HIF-1α和Snail均与E-cadherin的表达呈负相关(P<0.05)。结论 RNA干扰沉默HIF-1α基因可抑制结直肠癌SW480细胞的体外生长增殖和体外侵袭迁移能力,其机制可能是由于基因沉默HIF-1α导致细胞中Snail低表达,E-cadherin高表达,抑制了EMT发生、发展所致。     

RBMS3-AS3对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制

目的：探讨RNA结合基序单链相互作用蛋白3反义链3（RBMS3-AS3）对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法：培养人宫颈永生化细胞Ect1/E6E7和宫颈癌HeLa、Caski和SiHa细胞,实时荧光定量PCR检测细胞中RBMS3-AS3表达水平,Western blot法检测RNA结合基序单链相互作用蛋白3（RBMS3）蛋白水平。将HeLa细胞分为对照组（细胞正常培养）、si-RBMS3-AS3组（转染RBMS3-AS3小干扰RNA）、阴性序列组（转染乱序无意义阴性序列）、si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组（共转染RBMS3-AS3和RBMS3的小干扰RNA）和si-RBMS3-AS3+阴性序列组（共转染RBMS3-AS3与乱序无意义阴性序列）,四甲基噻唑蓝染色法（MTT）检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测各组HeLa细胞中细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果：宫颈癌细胞系HeLa、Caski和SiHa中RBMS3-AS3表达水平均高于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05）,而RBMS3蛋白表达低于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05）。与对照组或阴性序列组相比,si-RBMS3-AS3组HeLa细胞的活性、侵袭细胞数、Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低（P < 0.05）,细胞凋亡率及RBMS3和Bax蛋白表达水平升高（P < 0.05）。与si-RBMS3-AS3+阴性序列组比较,si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组HeLa细胞活性、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高（P < 0.05）,细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论：抑制RBMS3-AS3表达可抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭,并促进细胞凋亡,这可能与上调RBMS3表达有关。     

siRNA干扰MT1H基因对A549/DDP细胞耐药性的逆转

目的：探讨siRNA干扰金属硫蛋白1H（metallothionein 1H,MT1H）基因逆转A549/DDP细胞耐药的可行性。方法：采用RT-PCR方法检测MT1H基因在A549和其顺铂耐药株A549/DDP细胞中的表达;将针对MT1H的siRNA导入A549/DDP细胞;用RT-PCR和斑点印迹方法分析MT1H基因表达情况;MTT法观察细胞顺铂耐药性;TUNEL、流式细胞术检测顺铂诱导细胞凋亡率;免疫细胞化学分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果：MT1H在A549/DDP细胞中高表达但不在A549细胞中表达;A549/DDP细胞转染48 h后,与对照组比较,MT1HsiRNA转染组MT1H mRNA和蛋白表达均明显下调,细胞对DDP的药物敏感性明显提高,DDP诱导凋亡率明显增加,Bcl-2表达明显下降,Bax表达无变化。结论：MT1H基因沉默能降低Bcl-2表达,增强顺铂对A549/DDP细胞凋亡诱导作用,有效逆转A549/DDP细胞耐药。     

RBMS3-AS3对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制

目的：探讨RNA结合基序单链相互作用蛋白3反义链3（RBMS3-AS3）对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法：培养人宫颈永生化细胞Ect1/E6E7和宫颈癌HeLa、Caski和SiHa细胞，实时荧光定量PCR检测细胞中RBMS3-AS3表达水平，Western blot法检测RNA结合基序单链相互作用蛋白3（RBMS3）蛋白水平。将HeLa细胞分为对照组（细胞正常培养）、si-RBMS3-AS3组（转染RBMS3-AS3小干扰RNA）、阴性序列组（转染乱序无意义阴性序列）、si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组（共转染RBMS3-AS3和RBMS3的小干扰RNA）和si-RBMS3-AS3+阴性序列组（共转染RBMS3-AS3与乱序无意义阴性序列），四甲基噻唑蓝染色法（MTT）检测细胞增殖率，流式细胞术检测细胞凋亡率，Transwell检测细胞侵袭能力，Western blot检测各组HeLa细胞中细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果：宫颈癌细胞系HeLa、Caski和SiHa中RBMS3-AS3表达水平均高于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05），而RBMS3蛋白表达低于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05）。与对照组或阴性序列组相比，si-RBMS3-AS3组HeLa细胞的活性、侵袭细胞数、Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低（P < 0.05），细胞凋亡率及RBMS3和Bax蛋白表达水平升高（P < 0.05）。与si-RBMS3-AS3+阴性序列组比较，si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组HeLa细胞活性、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高（P < 0.05），细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论：抑制RBMS3-AS3表达可抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭，并促进细胞凋亡，这可能与上调RBMS3表达有关。