TPD52通过调控PI3K/AKT信号通路调控乳腺癌细胞凋亡和细胞周期

目的 研究乳腺癌中TPD52的表达水平及对人乳腺癌细胞凋亡和细胞周期的影响。方法 通过GEPIA数据库分析乳腺癌组织中TPD52表达情况;利用Kaplan Meier plotter数据库分析TPD52的表达和乳腺癌患者预后的关系;体外培养人乳腺癌MDA-MB-453和HCC1937细胞系,将TPD52小干扰RNA分别转染进MDA-MB-453和HCC1937细胞系中敲低TPD52的表达。qRT-PCR检测乳腺癌细胞系中TPD52 mRNA的表达;流式细胞术检测乳腺癌细胞凋亡率和细胞周期。Western blot实验检测乳腺癌细胞中p-PI3K和p-AKT蛋白的表达。结果 GEPIA数据库显示TPD52在乳腺癌组织中表达水平显著高于正常乳腺组织;TPD52高表达和乳腺癌患者预后较差显著相关;敲低TPD52可显著促进乳腺癌细胞凋亡并阻滞细胞周期进程、抑制乳腺癌细胞系中p-PI3K和p-AKT蛋白的表达。结论 TPD52在乳腺癌组织中高表达,其可通过调控PI3K/AKT信号通路促进乳腺癌细胞凋亡并阻滞细胞周期进程。     

HDAC1调控Wnt/β-catenin信号通路对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:研究组蛋白脱乙酰酶1(HDAC1)对乳腺癌细胞凋亡的影响及机制。方法:RT-qPCR和Western blot法分别测定正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平。在MDA-MB-231细胞中转染HDAC1 si RNA,RT-qPCR和Western blot测定HDAC1的表达水平,MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定凋亡,Western blot测定细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cleaved caspase-3的蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理下调HDAC1表达后的乳腺癌细胞,测定细胞活力和凋亡。结果:乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平均明显高于正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P 0. 01),并且MDA-MB-231细胞中的HDAC1水平最高。HDAC1 si RNA可以降低乳腺癌细胞中HDAC1的m RNA和蛋白水平。敲减HDAC1表达后的MDA-MB-231细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-3水平升高,β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白水平降低(P 0. 05)。Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以逆转HDAC1下调诱导的MDA-MB-231细胞凋亡和细胞活力降低,减少cleaved caspase-3的水平(P 0. 05)。结论:敲减HDAC1的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活诱导乳腺癌细胞凋亡。     

乳腺癌组织及细胞系中CCDC34的表达及其生物学功能

目的 探索乳腺癌组织及细胞系中CCDC34的表达情况及其对乳腺癌细胞增殖能力的影响。方法免疫组织化学染色方法检测34例乳腺癌组织及15例癌旁正常乳腺组织中CCDC34的表达和定位情况;利用Kaplan-Meier Plotter和The Human Protein Atlas数据库分析CCDC34与乳腺癌患者预后的相关性;Western blot检测人正常乳腺细胞MCF-10A及乳腺癌细胞SKBR-3、MCF-7、MDA-MB-453和MDA-MB-231中CCDC34的表达情况;在MCF-7和MDA-MB-231细胞中瞬时转染CCDC34,使用MTT的方法检测CCDC34对乳腺癌细胞增殖能力的影响。结果 CCDC34在乳腺癌组织的表达显著低于癌旁正常乳腺组织（P<0.01）;CCDC34在乳腺癌中的表达水平与患者的不良预后显著负相关（P<0.01）;CCDC34在乳腺癌细胞中的表达普遍低于人正常乳腺细胞MCF-10A(P<0.01);MTT检测结果显示,转染CCDC34显著抑制了乳腺癌细胞MCF-7(Luminal A)和MDA-MB-231(basal)细胞的增殖能力（P<0.05）。结论 乳腺癌组织及细胞系中CCDC34的表达普遍降低,CCDC34能够抑制乳腺癌细胞的增殖能力,并与乳腺癌患者的良好预后相关。     

ELF5在乳腺癌的表达及意义

目的研究E74-like factor 5 (ELF5)在乳腺癌的表达,探讨ELF5的表达与不同分型乳腺癌预后的关系。方法利用Oncomine数据库挖掘ELF5在乳腺癌组织中的表达;利用Kaplan-Meier Plotter分析ELF5表达水平与雌激素受体阳性/阴性表达乳腺癌生存的关系。结果 Oncomine数据库分析ELF5在乳腺癌中表达降低(P=8.29e~(-10));KM plotter数据库分析结果显示ELF5表达量与雌激素受体阳性表达的乳腺癌无复发生存(RFS)呈正相关,即高表达ELF5的患者无复发生存较高(P=0.008)。结论 ELF5在乳腺癌组织中表达低于癌旁正常组织,其表达水平越高预后越好。     

RNA干扰Notch1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默Notch1基因表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并合成靶向Notch1基因的小分子干扰RNA质粒,在转染试剂Sofast介导下转染人乳腺癌细胞株MCF-7,用RT-PCR和Western blot法检测转染前、后Notch1基因的表达,挑选干扰效率最强的一组表达载体;cck8比色法检测分析各组细胞的存活率;流式细胞术检测细胞凋亡比例;Western blot法检测转染各组MCF-7细胞Notch1、NF-κB及Caspase-3蛋白表达。结果 Notch1-shRNA能有效封闭Notch1基因的表达,Notch1基因和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);Notch1-shRNA能明显抑制细胞增殖(P<0.05);转染48h后细胞凋亡比例增加(P<0.01)。NF-κB蛋白水平表达降低,Caspase-3蛋白表达水平增高。结论利用RNA干扰技术沉默Notch1基因的表达可以明显抑制MCF-7细胞的增殖,促进MCF-7细胞凋亡,其机制可能通过NF-κB信号通路调节相关凋亡蛋白的表达,进而影响细胞的凋亡和增殖,靶向Notch1的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有一定的研究价值。     

敲减Rab1A表达通过抑制AKT的磷酸化抑制乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探究Rab1A基因表达的改变对乳腺癌细胞MDA-MB-231恶性生物学行为的影响。方法:Western blot检测Rab1A在乳腺癌组织及癌旁正常组织的表达和Rab1A在乳腺正常上皮及不同乳腺癌细胞系中的基础表达。设计并构建靶向Rab1A的小干扰RNA(siRNA),Western blot法验证敲减效果;分别采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞术和Western blot观察Rab1A基因表达改变对乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响和相关蛋白表达的改变。结果:Rab1A在乳腺正常组织和细胞中低表达,在癌组织及癌细胞中高表达(P0.05);与对照组相比,干扰Rab1A的表达可以显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的活力(P0.05),诱导凋亡增加(P0.05),G_2/M期细胞比例增加(P0.05),迁移与侵袭能力减弱(P0.05),p53、Bax、cleaved caspase-3和PTEN的蛋白水平升高(P0.05),Bcl-2、cyclin D1、cyclin B1、基质金属蛋白酶2(MMP2)、p-AKT和mTOR的蛋白水平降低(P0.05)。结论:Rab1A具有调控乳腺癌细胞生长、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡的能力,并调控增殖、周期和凋亡相关蛋白的表达。干扰Rab1A可通过抑制AKT通路的磷酸化从而抑制乳腺癌的演进与发展;Rab1A可能是基因治疗乳腺癌的一个潜在靶点。     

敲减NEDD1表达抑制肺腺癌细胞增殖与迁移

目的:探讨神经前体细胞表达发育下调蛋白1(NEDD1)在肺癌发生和发展中的作用。方法:采用免疫组化实验检测NEDD1在肺癌组织中的表达情况,结合数据库资料分析NEDD1在肺癌组织与癌旁正常组织中的表达有无差异,并分析NEDD1的表达水平与肺癌预后的相关性;敲减NEDD1在A549细胞的表达后用平板集落形成实验检测集落形成能力的变化,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布的情况,Transwell小室实验检测对细胞的迁移能力的影响,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达,并分析NEDD1与周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)表达的相关性。结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中NEDD1表达水平升高,Kaplan-Meier曲线预后分析显示NEDD1高表达者预后差,NEDD1低表达者预后较好;光镜下观察可见敲减NEDD1表达的A549细胞增殖速度明显减慢,平板集落形成能力降低(P0.05);与对照组相比,敲减NEDD1表达促进A549细胞凋亡,抑制细胞的迁移;与对照组相比,敲减NEDD1表达后G_1期细胞的比例增加,细胞阻滞于G_1/S期,Western blot检测周期相关蛋白水平可见p-Rb和cyclinD1蛋白表达水平降低,p-Chk1、p-Chk2和p-p53蛋白表达水平升高(P0.05);数据库分析结果示NEDD1与CDK2的表达呈正相关。结论:NEDD1具有抑制肺癌细胞凋亡、加速细胞周期进程从而促进细胞增殖的能力,且其在肺腺癌组织中的高表达与患者预后不良相关,因此可以作为肺腺癌诊断和预后新的标志分子。     

苹果多糖抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖并诱导其凋亡

目的探讨苹果多糖(AP)对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法采用水提-醇沉-酸降解的方法获得AP。培养CNE2细胞,采用(0.0、 0.25、 0.5、 1.0)mg/mL AP处理。CCK-8法观察AP对CNE2细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测CNE2细胞KI-67抗原(ki67)的表达,Western blot法检测CNE2细胞凋亡相关蛋白裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、 c-caspase-8、 c-caspase-9、 BAX和Bcl2的蛋白水平。结果提取得到的AP相对分子质量(M_r)为5000～15 000; AP可显著抑制CEN2细胞的增殖、诱导其凋亡; AP处理后,CEN2细胞的c-caspase-3、 c-caspase-9和BAX蛋白水平增加、 Bcl2蛋白水平降低,具有一定的剂量依赖性。结论 AP可明显抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖、诱导其凋亡,可能通过线粒体和死亡受体途径发挥作用。     

敲减HMGB1表达对TNF-α诱导的乳腺癌细胞侵袭能力的影响

 目的：探讨敲减高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的乳腺癌细胞侵袭能力的影响及机制。方法：采用HMGB1小干扰RNA（siRNA）转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,实时荧光定量PCR和Western blot分别测定细胞中HMGB1的mRNA和蛋白表达情况。用TNF-α处理敲减HMGB1表达的MDA-MB-231细胞,流式细胞术测定各组细胞凋亡,Transwell小室法测定各组细胞侵袭能力,细胞划痕实验测定各组细胞的迁移能力,Western blot法测定细胞中上皮钙黏素（E-cadherin）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、神经钙黏素（N-cadherin）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和Bax的表达情况。结果：HMGB1 siRNA转染后MDA-MB-231细胞中HMGB1的mRNA和蛋白表达水平明显低于没有转染的细胞（P<0.05）。与对照组相比,TNF-α处理后的乳腺癌细胞的凋亡水平升高,细胞侵袭和迁移能力也升高,细胞中E-cadherin蛋白水平降低,N-cadherin蛋白水平升高,MMP-2、MMP-9和Bax蛋白水平也升高（P<0.05）。敲减HMGB1表达的MDA-MB-231细胞经TNF-α诱导以后,细胞凋亡率增加,侵袭及迁移能力下调,细胞中E-cadherin蛋白水平升高,N-cadherin蛋白水平下降,MMP-2和MMP-9蛋白水平也下降,Bax蛋白水平升高（P<0.05）。结论：敲减HMGB1表达可以增强TNF-α诱导的乳腺癌细胞凋亡,抑制TNF-α诱导的乳腺癌细胞侵袭、迁移和上皮-间充质转化,其作用机制与MMP-2、MMP-9和Bax蛋白表达有关。     

DEAD盒RNA解旋酶17在乳腺癌细胞中的表达及定位

目的研究DEAD盒RNA解旋酶17 (DDX17)在人乳腺癌细胞和组织中的表达和定位。方法蛋白印迹法检测DDX17在人乳腺癌细胞系中蛋白的表达,激光共聚焦扫描显微镜和Western blot检测DDX17在MCF-7乳腺癌细胞中的定位。结果 DDX17在人乳腺肿瘤细胞系中蛋白表达水平增高,激光共聚焦扫描显微镜和Western blot观察发现DDX17主要定位于MCF-7细胞核中。结论 DDX17在人乳腺癌细胞系中高表达,主要定位于乳腺癌细胞核内,可能是人乳腺癌重要的调节因子。     

Notch1表达下调抑制病理性瘢痕成纤维细胞增殖并诱导其凋亡

目的探讨慢病毒介导的Notch1表达下调对病理瘢痕成纤维细胞(PSF)中caspase-9活化水平及线粒体膜电位的影响。方法分离培养增生性PSFs,感染Notch1 siRNA慢病毒和阴性对照慢病毒。分别采用RT-qPCR和Western blot检测细胞中Notch1mRNA和蛋白表达;MTT法检测细胞增殖;PI单染法检测细胞周期;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、活化的caspase-3(c-caspase-3)和caspase-9(c-caspase-9)蛋白及胞质和线粒体中细胞色素C(cytochrome C)蛋白;JC-1法检测细胞线粒体膜电位。结果Notch1 siRNA慢病毒感染后的PSFs中Notch1表达水平明显低于阴性对照慢病毒和未感染的PSFs的表达水平(P<0.05)。下调Notch1后的PSFs增殖能力降低(P<0.05);细胞G0/G1期比例升高(P<0.05);细胞凋亡率升高(P<0.05);c-caspase-3和c-caspase-9蛋白表达升高(P<0.05);细胞线粒体膜电位明显下降(P<0.05);细胞中cyclin D1和CDK4蛋白水平降低(P<0.05);胞质内的cytochrome C蛋白含量升高(P<0.05)及线粒体中cytochrome C蛋白水平降低(P<0.05)。结论Notch1表达下调抑制PSFs增殖并诱导凋亡。     

基于多种基因数据库分析乳清酸性蛋白4-二硫键核心结构域2(WFDC2)在卵巢癌中表达及意义

目的研究乳清酸性蛋白4-二硫键核心结构域2(WFDC2)在卵巢癌中的表达及临床意义。方法分别利用Bio GPS数据库、Oncomine数据库以及癌症细胞系百科全书(CCLE)和Kaplan-Meier Plotter数据库分析WFDC2基因在正常人体组织中的表达、卵巢癌组织中表达以及卵巢癌细胞系中的表达和卵巢癌患者预后生存分析。结果 Bio GPS数据库分析结果显示WFDC2在正常卵巢组织不表达; Oncomine数据库检索出417例样本,WFDC2表达水平有差异意义的结果 34项,其中WFDC2表达增高19项,WFDC2表达降低15项;对符合设定条件的7项研究进行Meta分析发现,WFDC2在卵巢癌组织中呈高表达状态; CCLE分析结果显示WFDC2在卵巢癌细胞系中也呈高表达状态; Kaplan-Meier Plotter数据库结果显示WFDC2高表达组的卵巢癌患者总生存时间较低表达组显著延长。结论 WFDC2在卵巢癌组织高表达,且与卵巢癌患者预后生存显著相关。     

NUP88 基因变化对乳腺癌细胞系BT鄄20 增殖侵袭生物学行为的影响

目的：探讨NUP88基因表达量升高或降低对乳腺癌细胞系BT-20细胞增殖能力、凋亡能力与侵袭能力的影响。方法：构建NUP88重组腺病毒表达载体以及NUP88 RNA干扰腺病毒载体,分别转染乳腺癌BT-20细胞获得NUP88过表达BT-20细胞以及NUP88低表达BT-20细胞并检测NUP88 mRNA和蛋白表达情况,随后通过CCK-8检测各组BT-20细胞增殖能力,通过流式双染检测各组BT-20细胞凋亡情况及通过Transwell侵袭实验检测各组BT-20细胞侵袭能力,并通过Western blot检测凋亡和侵袭相关蛋白表达变化。结果：成功获得NUP88 mRNA及蛋白高表达和低表达BT-20细胞;NUP88基因过表达导致细胞增殖能力和侵袭细胞数量显著高于正常BT-20细胞水平,而凋亡率则降低(P＜0.05);NUP88基因低表达导致细胞增殖能力和侵袭细胞数量显著低于正常BT-20细胞水平,而凋亡率则升高(P＜0.05); NUP88基因过表达导致抗凋亡蛋白Bcl-2和黏附蛋白β-catenin水平显著高于正常BT-20细胞水平,而促凋亡蛋白Bax和黏附蛋白E-cadherin显著低于正常BT-20细胞水平(P＜0.05);NUP88基因低表达导致Bcl-2和β-catenin水平显著低于正常BT-20细胞水平,而Bax和E-cadherin显著高于正常BT-20细胞水平(P＜0.05)。结论：NUP88基因通过调控凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2和黏附蛋白E-cadherin与β-catenin水平调控BT-20细胞的增殖、凋亡和侵袭能力。     

敲减SATB2抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和血管生成

目的：探讨特异AT富含序列结合蛋白2(SATB2)在乳腺癌中的作用，并分析敲减SATB2对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响和潜在机制。方法：用GEPIA数据库分析SATB2在乳腺癌中的表达，用Kaplan-Meier Plotter数据库分析其对乳腺癌患者总生存期（OS）的影响。免疫组化检测乳腺癌组织中SATB2的蛋白表达。将人乳腺癌细胞株MDA-MB-231与MCF-7分为si-Con组（转染si-Con）和si-SATB2组（转染si-SATB2）。用EdU染色和集落形成实验评估细胞增殖能力，用Transwell方法检测乳腺癌细胞的迁移、侵袭能力及其对内皮细胞的招募能力，用小管形成实验检测其诱导内皮细胞血管生成能力，Western blot检测血管内皮生长因子A(VEGFA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、激活STAT蛋白抑制因子1(PIAS1)和组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC1)的表达。结果：与正常乳腺组织比较，乳腺癌中SATB2的基因和蛋白水平均升高（P<0.05）。与SATB2低表达组比较，SATB2高表达组的乳腺癌患者的OS显著缩短（P<0.05）。与...     

一种新的乳腺癌预后标志物——着丝粒蛋白M

目的 着丝粒蛋白M（CENP-M）是组成型着丝粒相关网络（CCAN）蛋白家族的一名重要成员,它可以保证着丝粒、动粒的正确形成和功能行使,在细胞正常分裂中发挥重要作用。但是目前有关CENP-M与癌症的研究很少。因此,本实验旨在探讨CENP-M的表达水平与乳腺癌预后之间的关系。方法 利用Oncomine 数据库、COSMIC数据库、bc-GenExMiner、Kaplan-Meier plotter、cBioPortal、GEPIA和Timer数据库系统,分析CENP-M 的表达和乳腺癌预后情况。结果 与正常组织相比,CENP-M在乳腺癌组织（尤其在侵袭性导管乳腺癌、侵袭性筛状乳腺癌和黏液性乳腺癌）中表达上调;基因突变分析表明,CENP-M表达增加不是由基因序列或拷贝数的改变引起的;CENP-M的表达和乳腺癌不同分型以及Scarff-Bloom-Richarolsn(SBR)分级相关;CENP-M高表达的乳腺癌患者预后较差;乳腺癌中CENP-M的表达和CDC45的表达相关。结论 CENP-M可以作为乳腺癌患者的预后标志物。     

NUP88基因变化对乳腺癌细胞系BT-20增殖侵袭生物学行为的影响

目的:探讨NUP88基因表达量升高或降低对乳腺癌细胞系BT-20细胞增殖能力、凋亡能力与侵袭能力的影响。方法:构建NUP88重组腺病毒表达载体以及NUP88 RNA干扰腺病毒载体,分别转染乳腺癌BT-20细胞获得NUP88过表达BT-20细胞以及NUP88低表达BT-20细胞并检测NUP88 mRNA和蛋白表达情况,随后通过CCK-8检测各组BT-20细胞增殖能力,通过流式双染检测各组BT-20细胞凋亡情况及通过Transwell侵袭实验检测各组BT-20细胞侵袭能力,并通过Western blot检测凋亡和侵袭相关蛋白表达变化。结果:成功获得NUP88 mRNA及蛋白高表达和低表达BT-20细胞;NUP88基因过表达导致细胞增殖能力和侵袭细胞数量显著高于正常BT-20细胞水平,而凋亡率则降低(P0.05);NUP88基因低表达导致细胞增殖能力和侵袭细胞数量显著低于正常BT-20细胞水平,而凋亡率则升高(P0.05);NUP88基因过表达导致抗凋亡蛋白Bcl-2和黏附蛋白β-catenin水平显著高于正常BT-20细胞水平,而促凋亡蛋白Bax和黏附蛋白E-cadherin显著低于正常BT-20细胞水平(P0.05);NUP88基因低表达导致Bcl-2和β-catenin水平显著低于正常BT-20细胞水平,而Bax和E-cadherin显著高于正常BT-20细胞水平(P0.05)。结论:NUP88基因通过调控凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2和黏附蛋白E-cadherin与β-catenin水平调控BT-20细胞的增殖、凋亡和侵袭能力。     

FOXO1去磷酸化对非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡和化疗敏感性的影响

目的:研究FOXO1蛋白磷酸化水平对非霍奇金淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响,并进一步探讨FOXO1在淋巴瘤细胞凋亡中的可能作用机制.方法:用不同浓度的Wortmannin和足叶乙甙单药或联合作用于非霍奇金淋巴瘤细胞株Jurkat和Namalwa 24、48小时,XTT法检测细胞的增殖抑制率;流式细胞术观察细胞的凋亡率;Western blot法检测细胞内凋亡相关蛋白p-Akt、p-FOXO1、FOXO1、Bim的变化.结果:Wortmannin明显抑制Jurkat细胞和Namalwa细胞增殖,并促进其凋亡,具有时间浓度依赖性.Wortmannin与足叶乙甙联合作用时Jurkat细胞和Namalwa细胞的增殖抑制率和凋亡率均较足叶乙甙单药明显增加.Western blot结果显示,经Wortmannin作用后,FOXO1的磷酸化水平明显下降,而Bim蛋白的表达相应增加.结论:FOXO1的去磷酸化抑制非霍奇金淋巴瘤细胞增殖,促进其凋亡;并增强淋巴瘤细胞对足叶乙甙的敏感性.FOXO1通过激活Bim蛋白促进非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡.     

miR-17-5p通过靶向调控PTEN表达抑制乳腺癌的增殖、侵袭及迁移

目的 探讨miR-17-5p在乳腺癌中的表达和对乳腺癌细胞的调控作用及其作用机制。方法 采用RT-qPCR和Western blot方法检测乳腺癌组织和细胞中miR-17-5p和PTEN的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测凋亡,Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和转移。Western blot检测PTEN蛋白表达变化;采用荧光素酶活性检测miR-17-5p与PTEN的相互作用。结果 与对照组相比,乳腺癌组织和细胞中miR-17-5p表达升高,同时PTEN水平降低。体外实验发现,miR-17-5p的敲减能够抑制乳腺癌细胞增殖和转移。荧光素酶报告基因实验发现PTEN是miR-17-5p的靶点。miR-17-5p下调促进乳腺癌细胞PTEN蛋白的表达。结论 miR-17-5p与乳腺癌患者预后相关,同时miR-17-5p下调能显著抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭转移。     

长链非编码RNA GASL1在乳腺癌组织及细胞系中的表达及作用

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) GASL1在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌癌细胞增殖和凋亡的影响。方法RT-qPCR检测癌组织、癌旁组织、多个乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-468和SK-BR-3)及正常乳腺细胞HBL-100中lncRNA GASL1的表达水平。MCF-7细胞经pc DNA3. 1质粒过表达lncRNA GASL1,或siRNA干扰lncRNA GASL1表达后,运用MTT法检测细胞增殖; caspase-3活力检测试剂盒检测caspase-3活力; Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果 LncRNA GASL1在乳腺癌组织和乳腺癌细胞中表达水平降低(P 0. 05);过表达lncRNA GASL1可抑制MCF-7的增殖,促进其凋亡(P0. 05);干扰lncRNA GASL1表达可促进MCF-7的增殖,抑制其凋亡(P0. 05)。结论 lncRNA GASL1在乳腺癌中表达水平降低,通过调节乳腺癌细胞增殖和凋亡参与乳腺癌的发生发展。     

敲低富含亮氨酸的三角状五肽重复结构蛋白(LRPPRC)促进激素抵抗性前列腺癌细胞凋亡

目的研究富含亮氨酸的三角状五肽重复结构蛋白(LRPPRC)对激素抵抗性前列腺癌细胞凋亡的影响。方法Western blot法检测前列腺癌DU145细胞和LNCaP细胞LRPPRC和雄激素受体(AR)蛋白水平;在DU145细胞中瞬转LRPPRC小干涉RNA(siLRPPRC);反转录PCR检测转染细胞LRPPRC mRNA水平; Western blot法检测LRPPRC蛋白水平;噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率; Hoechst33258法和流式细胞术检测细胞凋亡率;荧光素酶法检测细胞ATP水平;Western blot法检测Bcl2、 BAX和胱天蛋白酶3(caspase-3)蛋白水平。结果 LRPPRC在DU145细胞和LNCaP细胞均高表达,但DU145细胞不表达AR。敲低DU145细胞LRPPRC水平后,细胞存活率显著降低、细胞凋亡增加、 ATP水平下降、活化的caspase-3蛋白水平增高、 Bcl2蛋白水平降低。结论敲低激素抵抗性前列腺癌DU145细胞LRPPRC促进细胞凋亡。