肝癌患者乙型肝炎病毒基因变异的检测

目的了解肝癌患者HBV基因变异、机体免疫功能异常及肿瘤抑制基因P16蛋白失活的情况。方法运用基因芯片和核苷酸序列分析技术，对114份我院住院患者血清中HBVDNA（前C区1814、1896、BCP区1762、1764位）进行分析，流式细胞荧光染色检测患者外周血WBC中P16蛋白，流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群，ELISA法检测IFN-γ、IL-4水平。结果慢性乙型肝炎组（41份）、乙型肝炎肝硬化组（37份）、肝癌组（36份）血清中的HBV总突变率为58．5％、75．6％和88．8％，肝组织中肝硬化、肝癌分别为75．0％和100％；慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、肝癌组患者外周血WBC中P16蛋白阳性率分别为（43．09±8．08）％、（30．54±10．61）％和（16．29±6．86）％，正常人为（76．57±6．07）％；肝癌患者CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞绝对数均明显低于健康对照组（t＇1=8．83、t＇2=6．59、t＇3=9．84，P〈0．05）；肝癌患者IFN-γ、IL-4水平明显低于健康者（t＇1=6．67、t＇2=3．82，P〈0．05）。结论肝癌患者中HBV基因变异普遍存在，机体免疫功能低下，外周血WBC中P16蛋白表达明显低。     

慢性乙型肝炎病毒感染患者血清及肝组织中抗幽门螺杆菌抗体及特异性基因分析

目的 对慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者血清抗幽门螺杆菌(Hp)IgG(抗Hp-IgG)阳性率进行流行病学调查,同时对患者肝组织进行Hp特异性基因检测,探讨Hp在肝病发生、发展中的作用.方法 病例对照研究中共纳入502例HBV感染患者和性别、年龄相匹配的429名健康对照者.应用酶联免疫吸附(ELISA)法进行血清抗Hp-IgG检测.同时用针对螺杆菌菌属特异性16S rRNA基因的通用引物对其中56例肝穿刺活检组织进行基因扩增,并对该基因阳性者进一步应用Hp cagA、vacA和glmM基因特异引物进行扩增.结果 HBV感染患者血清抗Hp-IgG阳性率为63.9%,显著高于健康对照者(43.4%,P<0.05),其中肝癌组的阳性率最高(29/36,80.6%),其次为肝硬化组(64/83,77.1%),两组均显著高于慢性乙型肝炎组(228/383,59.5%,P<0.01).56例行肝穿刺活检患者中,35例肝组织中发现螺杆菌菌属特异性16S rRNA基因,其中肝硬化组17例,肝癌组7例,慢性乙型肝炎组11例.进一步的扩增结果 证实35例中21例为Hp DNA.结论 HBV感染患者血清抗Hp-IgG阳性率显著高于健康对照者.HBV感染患者肝组织中除存在Hp DNA外,可能还存在其他螺杆菌DNA.螺杆菌在慢性乙型肝炎向肝硬化和肝癌的发展过程中可能发挥致病作用.     

乙型肝炎病毒基因变异与免疫调节的关系

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）基本核心启动子（BCP）及前C基因变异与慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平的关系。方法应用基因芯片技术检测HBV BCP及前C基因T1762、A1764、A1896位碱基变化;应用流式细胞仪检测外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达水平。结果急性乙型肝炎、慢性活动性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者血清中HBV DNA T1762、A1764、A1896位碱基突变率分别为0、41.2%、69.4%、100%;急性乙型肝炎、慢性活动性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平高于正常对照;HBeAg阳性感染者高于HBeAg阴性感染者;变异株感染者低于非变异株感染者（P均〈0.05）。结论前C/C基因变异与HBV感染后肝病的慢性化及临床病情加重有关,与CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达水平相关。     

慢性乙型肝炎患者肝组织中螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因及HP特异性基因分析

目的对慢性乙型肝炎患者肝组织进行螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因及幽门螺杆菌（HP）特异性基因检测,探讨螺杆菌在慢性乙型肝炎发生、发展中的作用。方法对56例行肝穿刺活检的慢性乙型肝炎患者的肝组织应用针对螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因的通用引物进行基因扩增及微需氧分离培养,并对螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因阳性者进一步应用HPcagA、vacA和glmM基因特异引物进行扩增。结果对56例慢性乙型肝炎患者的肝组织DNA应用螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因通用引物进行扩增,共有35例患者的肝组织中发现了螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因,其中肝硬化组（72.7%）和原发性肝癌组（87.5%）的检出率明显高于慢性肝炎组（42.3%,P〈0.05）,而慢性肝炎组中随着炎症评分的增加,检出率亦增加。对这35例螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因阳性的肝组织DNA进一步应用HPcagA、vacA和glmM基因特异性引物进行扩增,结果证实有21例为HPDNA。所有肝组织经微需氧分离培养均未发现可疑菌落生长。结论慢性乙型肝炎患者肝组织中除存在HPDNA外,可能还存在其他螺杆菌DNA。螺杆菌在慢性乙型肝炎向肝硬化和肝癌的发展中可能发挥致病作用。     

核苷类似物抗病毒治疗慢性乙型肝炎患者肝癌发生的因素分析

目的评估长期使用核苷类似物抗病毒治疗慢性乙型肝炎患者肝癌发生的相关危险因素。方法应用核苷类似物抗病毒治疗慢性乙型肝炎患者751例,观察6年肝癌的发生情况及其影响因素。结果在长期接受核苷类似物抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中,肝癌发生率为5.19％;大于60岁患者肝癌发生率为11.64％,显著高于50～60岁组患者的5.36％和小于50岁组患者的1.48％（P〈0.05）;男性患者肝癌发生率为6.54％,显著高于女性患者的2.67％（P〈0.05）;合并肝硬化患者肝癌发生率为8.61％,显著高于慢性乙型肝炎患者的3.55％（P〈0.05）;未使用护肝药物患者的肝癌发生率为7.50％,显著高于使用护肝药物患者的3.82％（P〈0.05）;HBV DNA≤1×104copies/ml患者肝癌发生率为7.00％,明显高于HBV DNA≤1×102copies/ml患者的3.68％（P〈0.05）;ALT反复波动患者肝癌发生率为8.76％,显著高于ALT未反复波动患者的4.40％（P〈0.05）;对治疗依从性好患者的肝癌发生率为3.81％,明显低于依从性差患者的7.55％（P〈0.05）。结论慢性乙型肝炎患者长期进行核苷类似物抗病毒治疗可降低但不能消除肝癌发生的危险,高龄、男性、合并肝硬化、未使用护肝药、HBV DNA低水平复制、ALT反复波动和对治疗依从性差是肝癌发生的危险因素。     

乙型肝炎病毒感染者肝组织IL-12表达及其意义

目的探讨乙型肝炎病毒感染者肝组织白细胞介素12（IL-12）表达与临床表现和肝脏病理学变化的关系。方法应用免疫组化法检测9例正常肝脏组织、183例慢性乙型肝炎（CHB）、41例乙型肝炎肝硬化、37例HBV相关肝癌患者肝组织IL-12表达情况,并与临床特点和病理分级等进行相关性分析。结果 CHB患者肝组织IL-12以弱阳性表达为主,阳性和强阳性表达的比例仅为26.8%,而肝硬化和肝癌患者阳性和强阳性表达的比例分别为36.6%和48.6%,均显著高于CHB患者（P＜0.05）;HBeAg阴转且HBV DNA阴转的CHB患者肝内IL-12阳性表达比例为64.3%,显著高于HBeAg阳性伴肝功能异常者（30.0%）和肝功能正常者（20.4%）（P＜0.05）;未发现IL-12表达与肝脏炎症分级或纤维化分期具有相关性。结论 IL-12可能参与HBV感染后的疾病进展与转归。     

ALT持续正常的慢性HBV感染者肝组织病理学检查分析

目的了解ALT持续正常的乙型肝炎病毒感染者肝组织变化情况。方法对118例ALT持续正常的乙型肝炎病毒感染者行肝穿活检。结果在118例慢性乙型肝炎病毒感染者中,病理学诊断慢性乙型肝炎60例,肝硬化58例;两组患者血清ALT、白蛋白、胆碱脂酶、有无肝硬化或肝癌家族史及HBV DNA载量之间存在明显差异（P〈0.05）;Logistic多因素回归分析显示白蛋白及A/G比值与肝硬化的发生存在因果关系。结论 ALT正常的HBV感染者其实肝内已存在严重的病变。     

荧光定量检测HBV cccDNA在慢性乙型肝炎患者中的应用

目的:研究慢性乙型肝炎患者HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)在外周血的分布、肝组织中含量及探讨抗病毒治疗对慢性乙型肝炎患者血清HBV cccDNA的影响。方法:随机选取HBV DNA阳性慢性乙型肝炎患者、肝硬化患者、重型肝炎患者共125例。使用实时荧光定量PCR法检测血清中cccDNA。选取36例慢性乙型肝炎患者肝组织和外周血样本,酶切后进行荧光定量PCR检测。60例慢性乙型肝炎患者,按1:1随机分配接受拉米夫定或干扰素治疗,所有患者均治疗24周以上;应用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测慢性乙型肝炎患者0周、8周、12周、24周、HBV cccDNA及HBV DNA含量。结果:125例患者中cccDNA阳性率为71.2%,以肝硬化患者阳性率最低。肝硬化患者HBVcccDNA检出阳性率与慢性乙型肝炎患者及重型肝炎患者比较,差异有显著性意义(P0.05)。肝组织中HBV cccDNA与肝组织总HBV DNA及血清HBV DNA存在相关性(P0.05),HBeAg阳性组与阴性组患者比较差异有显著性意义(P0.05)。患者接受抗病毒治疗后血清HBV DNA及HBV cccDNA下降。结论:乙型肝炎肝硬化患者外周血HBV cccDNA阳性率低,慢性乙型肝炎患者中HBeAg(+)组病毒复制较HBeAg(-)组活跃。抗病毒治疗对血清HBV cccDNA有抑制作用;血清HBV cccDNA可作为抗病毒治疗的重要监测指标。     

HCV p7下调基因p7TP2编码蛋白的亚细胞定位研究

目的进一步研究HCV p7下调基因p7TP2编码蛋白的亚细胞定位。方法构建p7TP2与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的表达载体,转染肝癌细胞系HepG2及绿猴肾细胞系COS-7,通过荧光显微镜观察其亚细胞定位。利用多克隆抗体的免疫组织化学技术,检测p7TP2蛋白在正常肝组织、HBV感染的肝组织、HCV感染的肝组织、肝硬化肝组织、肝癌组织、正常肾脏组织及肾癌组织中的表达。结果蛋白荧光主要集中在细胞浆部分,p7TP2蛋白在阳性组织中同样分布在细胞浆,且在正常组织的表达量显著高于病理组织。结论为进一步p7TP2蛋白的结构和功能的研究奠定了基础。     

不同临床类型HBV感染患者肝组织中单核细胞趋化蛋白-1的表达及意义

目的：研究乙肝病毒（HBV）携带者、慢性乙型肝炎（CHB）、乙型肝炎肝硬化患者肝组织中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达,并探讨其临床病理意义。方法：20例HBV携带者、18例CHB患者、13例乙型肝炎肝硬化患者肝组织经10%中性甲醛固定后制作石蜡包埋切片,并以两份正常人肝组织作为对照,采用免疫组织化学法（SP法）检测肝组织MCP-1的表达水平。结果：正常肝组织MCP-1无表达,HBV携带者、CHB、乙型肝炎肝硬化患者肝组织MCP-1表达阳性率依次为25%、77.78%、84.62%,差异均有显著性意义。结论：MCP-1在肝组织中的表达随肝脏炎症和纤维化的发展而升高,MCP-1可能在病毒性肝炎肝脏炎症和纤维化的病理过程中起重要作用。MCP-1的研究对乙型病毒性肝炎的病情诊断、发病机制探讨及治疗提供新思路。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP