促红细胞生成素对早期糖尿病大鼠视网膜谷氨酸含量和超微结构的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素(EP0)对于早期糖尿病大鼠视网膜超微结构和谷氨酸的影响.设计实验性研究.研究对象早期糖尿病大鼠.方法 1%链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射建立糖尿病大鼠模型,成模2周后腹腔注射EPO进行干预,每周3次,共2周.大鼠视网膜组织切片透射电子显微镜观察.用柱前衍生高效液相色谱法测定大鼠视网膜内谷氨酸水平.主要指标大鼠视网膜谷氨酸含量和超微结构改变.结果 4周末,STZ诱导糖尿病SD大鼠视网膜出现大量空泡变性,神经节细胞内线粒体肿胀,线粒体嵴断裂、消失.同期用EPO腹腔注射的糖尿病大鼠视网膜未出现明显的空泡变性,神经节细胞形态基本正常.第4周末糖尿病大鼠视网膜的谷氨酸水平已明显高于正常大鼠(P＜0.05);EPO干预的糖尿病大鼠与正常大鼠的视网膜谷氨酸水平无差异.结论 EPO能减轻早期糖尿病大鼠视网膜神经元的损伤;通过降低视网膜谷氨酸水平,减轻其对视网膜神经细胞的毒性作用.(眼科,2008,17:246-249)     

促红细胞生成素对视网膜神经元的保护作用

促红细胞生成素(EPO)是红细胞生成的重要调节蛋白.EPO受体(EPO-R)属于细胞因子受体超家族.近来研究证实,EPO及其受体在神经系统也有表达,具有神经保护和促进神经元再生的双重作用.在眼科,虽然EPO和EPO-R在晶状体、角膜上皮、光感受器的内段、内核层、神经节细胞层均有表达,但近年来的研究重点是其对视神经的保护作用.研究表明,EPO可以通过抑制凋亡保护视网膜神经节细胞.因此,EPO的神经保护作用对治疗青光眼、视网膜色素变性等疾病有一定的实际意义.     

促红细胞生成素与促红细胞生成素受体在大鼠脱离视网膜中的表达

目的 观察促红细胞生成素（EPO）和促红细胞生成素受体（EPOR）在大鼠脱离视网膜中的表达情况。方法48只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、视网膜脱离（RD）后1、3、6、12、24、48、72 h组,每组6只大鼠12只眼。视网膜下腔单次注射1.4%透明质酸钠致上半侧视网膜隆起建立RD模型,采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）测定不同时间点EPO和EPOR的mRNA和蛋白水平的表达情况,同时采用免疫组织化学方法观察EPO和EPOR在视网膜中定位表达的情况。结果 EPO和EPOR的mRNA表达水 平在RD后均上调,均于RD后48 h达到高峰,分别于RD后6、12 h显著高于正常对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;同样,EPO和EPOR的蛋白表达水平也在RD后均增高并在RD后48 h达到高峰,均于RD后3 h显著高于正常对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。免疫组织化学结果显示正常视网膜自神经节细胞层至光感受器细胞的内外节均有EPO弱表达,RD后48 h视网膜相应部位呈强阳性表达;正常视网膜自神经节细胞层至光感受器细胞的内节均有EPOR表达,RD后48 h视网膜相应部位呈强阳性着染。结论 RD后大鼠视网膜EPO和EPOR表达均逐渐增强,48 h达到高峰;大鼠神经视网膜大部分层次能表达EPO和EPOR。     

促红细胞生成素对慢性高眼压下大鼠视网膜Caspase-9表达的影响

目的 探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)在视网膜神经节细胞凋亡途径中的作用机制.方法 选取120只大鼠随机分为12组,每组10只20眼;巩膜烧灼法制作大鼠慢性高眼压模型.用药组每只大鼠腹腔注射EPO.应用RT-PCR法、Western blotting印迹法检测备组视网膜组织甲Caspase-9基因Mrna及蛋白表达情况.检测用药前后ERG-b波波幅和视网膜厚度的变化.结果 EPO用药组视网膜水肿明显减轻,视网膜厚度变薄的趋势明显减弱,与未用药组比较差异有统计学意义.用药组ERG-b波波幅明显恢复,2组差异有统计学意义;Caspase-9 Mrna和蛋白在用药后除高眼压后3 d组外,表达均明显减少,与未用药组比较,差异有统计学意义.结论 EPO对慢性高眼压后的视网膜具有保护作用,其机制之一是通过抑制Caspase-9介导的凋亡信号转导途径来完成的.     

视网膜脱离模型中外源性促红细胞生成素对其受体表达的影响

目的探讨外源性促红细胞生成素（EPO）对促红细胞生成素受体（EPOR）在脱离的视网膜中表达的影响。方法通过视网膜下腔注射质量分数1.4%透明质酸钠在60只SD大鼠的右眼建立视网膜脱离（RD）模型,12只正常SD大鼠为正常对照组。不同组RD模型眼（每组12只眼）玻璃体腔内分别注射PBS或100、200、400ng重组大鼠源性EPO。玻璃体注射后3d应用Westernblot法半定量检测各组SD大鼠脱离的视网膜中EPOR蛋白表达水平的变化并进行比较,应用免疫组织化学法定位检测脱离的视网膜中EPOR蛋白的表达。结果 Westernblot检测结果表明大鼠正常视网膜中EPOR表达量少,为0.28±0.02;造模后3d,EPOR在脱离的视网膜中表达量明显增加,为0.41±0.05,差异有统计学意义（P〈0.05）。RD＋PBS组、RD＋EPO100ng组、RD＋EPO200ng组和RD＋EPO400ng组EPOR蛋白的表达量分别为0.39±0.03、0.41±0.03、0.43±0.07、0.44±0.05,明显高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）,但RD＋PBS组、RD＋EPO100ng组、RD＋EPO200ng组和RD＋EPO400ng组间EPOR蛋白的表达差异均无统计学意义（P〉0.05）。RD组与RD＋不同剂量EPO组比较EPOR表达的差异无统计学意义（P〉0.05）。免疫组织化学检测结果证实EPOR蛋白表达于视网膜各层,RD＋不同剂量的EPO处理组EPOR表达均强于正常对照组。结论 RD发生后补充外源性EPO对EPOR的表达并无影响。     

促红细胞生成素对糖尿病大鼠视网膜bcl-2、bax和WTp53表达的影响

目的 研究bel-2,bax和WTp53蛋白在糖尿病大鼠视网膜组织中的表达及促红细胞生成素(EPO)对其表达的影响.方法 48只Wistar大鼠用链脲佐菌素诱导糖尿病(DM),随机分为糖尿病未治疗组和EPO治疗组,分别于1、3、6个月处死大鼠,8只正常Wistar大鼠作为对照组.TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测大鼠视网膜组织中bcl-2、bax和WTp53蛋白的表达及EPO对其表达的影响.结果 DM3和DM6组大鼠视网膜凋亡细胞较正常组和DM1组大鼠增多;与正常组和DMI组大鼠比较,DM3组和DM6组视网膜bcl-2蛋白阳性细胞数减低,bax及wTp53蛋白表达阳性细胞数较多.EP03、EP06组与DM3组和DM6组比较,bcl-2阳性细胞数增多,bax和WTp53蛋白表达明显下降(P<0.05).结论 EPO能减少DM大鼠视网膜神经细胞的凋亡,其机制可能与上调bel-2及下调bax以及wTp53蛋白的表达有关.     

EPO对糖尿病大鼠视网膜caspases-3、NF-κB和TNF-α表达的影响

目的 研究促红细胞生成素(EPO)对糖尿病(DM)大鼠视网膜组织caspases-3、TNF-α和NF-κB表达的影响,探讨糖尿病视网膜病变(DR)的发病机制.方法 采用链脲佐菌素诱导DM,成模后,随机分为DM未治疗组和EPO治疗组,再设亚组.应用SABC法检测EPO对大鼠视网膜组织中caspases-3、NF-κB和TNF-α表达的影响.结果 在正常大鼠和DM 1个月组,三者均无阳性表达或只呈弱阳性表达,3个月组视网膜中可见阳性表达,多位于神经节细胞层,6个月组可见表达向其他层次扩展.EPO治疗组三者的表达均较同期DM未治疗组下降,3个月和6个月组的表达差异有统计学意义(P＜0 05).结论 早期糖尿病视网膜caspases-3、NF-κB和TNF-α的表达上调,三者可能均参与了早期DR的发生,上述结果将为EPO治疗视网膜疾病提供理论基础.     

环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对早期糖尿病大鼠视网膜组织促红细胞生成素的影响

目的：观察塞来昔布环氧合酶-2（ COX-2）选择性抑制剂引起糖尿病大鼠视网膜组织促红细胞生成素的改变,探讨其防治早期糖尿病视网膜的机制。方法40只SD雄性大鼠随机分为4组,即正常组、糖尿病组、对照组、实验组,每组10只。1％链尿佐菌素腹腔注射建立糖尿病模型,饲养3个月后,处死大鼠取视网膜,HE染色观察视网膜形态学变化,SYBR荧光实时定量PCR检测视网膜组织中COX-2、EPO mRNA表达变化。结果3个月后,HE染色糖尿病组和对照组结构出现了改变;COX-2、EPO mRNA在糖尿病组和对照组,组间两两比较,无统计学差异（ P ＜0．05）,其余各组间比较均有显著性差异（ P ＞0．05）。结论塞来昔布能够有效促进EPO的表达,可以用于早期糖尿病视网膜病变防治。     

玻璃体腔注射促红细胞生成素对大鼠视网膜结构和功能的影响

促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）对视网膜光损伤、视网膜缺血-再灌注损伤、高眼压视网膜神经节细胞损伤、视神经损伤诱导的神经节细胞损伤及视神经轴突再生、早期糖尿病视网膜病变视网膜神经元、血-视网膜屏障和变应性视神经脱髓鞘病变均具有保护作用。本研究将重组大鼠EPO注入大鼠玻璃体腔,旨在观察EPO对视网膜的结构和功能的影响以及是否会诱发视网膜新生血管形成。     

促红细胞生成素及其受体与视神经视网膜疾病

促红细胞生成素（EPO）具有促进红系祖细胞增生和分化的作用,其在光诱导性视网膜变性、视网膜缺血一再灌注损伤、急慢性高眼压、视神经损伤、多发性硬化性视神经炎、糖尿病视网膜病变（DR）、早产儿视网膜病变（ROP）等视神经视网膜疾病模型中的神经保护作用也受到了关注。就EPO及其受体在视网膜的分布、其在视神经视网膜病变模型中的表达情况及其对视网膜神经元的保护作用和机制方面的研究进展进行综述。     

Expression pattern of erythropoietin and erythropoietin receptor in experimental model of retinal detachment

PURPOSE: Erythropoietin (EPO), known for its role in erythroid cell differentiation, has been suggested to have a neuroprotective effect on retinal neurons. The aim of the current study was to investigate the expression pattern of EPO and erythropoietin receptor (EPOR) in the detached retina of a rat model of retinal detachment (RD). METHODS: Forty-eight albino Sprague-Dawley rats were randomized into normal control group (n = 6) and RD model group (n = 42). The rat RD model was established by slow injection of 1.4% sodium hyaluronate into the upper half of the subretinal space, in which the upper half of the neurosensory retina was detached from the underlying retinal pigment epithelium (RPE). The expression of EPO and EPOR mRNA/protein was determined at 1, 3, 6, 12, 24, 48, and 72 hr after sodium hyaluronate injection by semiquantitative RT-PCR and Western blot analysis, respectively. Meanwhile, the distributions of EPO and EPOR were examined by immunohistochemistry. RESULTS: EPO and EPOR mRNA levels increased gradually after sodium hyaluronate injection and peaked 48 hr later. EPO mRNA level became significantly higher than that in the normal control group at 12 hr after injection, and EPOR mRNA level became significantly higher at 6 hr (p < 0.05). Moreover, the protein levels of EPO and EPOR presented a similar tendency to the mRNA level and became significantly higher than those in normal control group at 3 hr after injection (p < 0.05). Immunohistochemical results showed that both EPO and EPOR were strongly expressed all over the neurosensory retina 48 hr after injection, but EPOR was not found in the rod outer segment. Only weak expression of EPO and EPOR was noticed in the retina of normal control group. CONCLUSIONS: The levels of EPO and EPOR in detached retina increase with the duration of retinal detachment and reach their peaks at 48 hr; most layers of detached neurosensory retina can express EPO and EPOR. It is indicated that the EPO/EPOR system might play an important role in protection of retinal neurons during RD; supplementation with exogenous EPO might promote the survival of retinal neurons.     

重组人促红细胞生成素对大鼠视网膜神经节细胞的影响

目的：观察重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对体外培养的大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)存活及其轴突生长的影响,检测作为神经再生标志的生长相关蛋白43(growth associated protein 43, GAP-43)的表达情况,并探讨rhEPO对RGCs可能的作用机制。

方法：RGCs分为实验组(rhEPO组)和对照组(DMEM组)行体外培养,倒置显微镜下观察细胞和轴突生长情况,培养72h测量细胞最长突起长度进行比较,行GAP-43的Western-blot检测,图像分析系统对两组标本进行灰度值测量。

结果：培养72h的RGCs倒置显微镜下观察,形成典型的细胞突起,rhEPO组的细胞比对照组胞体更大,突起更长(P<0.05)。培养72h的RGCs行GAP-43 Western-blot检测,DMEM组GAP-43呈阳性表达,rhEPO组呈强阳性表达,两组差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：rhEPO能够促进体外培养的RGCs轴突生长,能够上调体外培养的RGCs的GAP-43蛋白表达水平,可能是其能够促进RGCs轴突生长的原因。     

Effect of erythropoietin axotomy-induced apoptosis in rat retinal ganglion cells

PURPOSE: Erythropoietin (EPO) modulates erythropoiesis by inhibiting apoptosis in erythrocyte progenitors. Recently, EPO has been shown to be protective in experimental models of mechanical trauma, neuroinflammation, cerebral and retinal ischemia, and even in a human stroke trial. However, little is known about EPO signal transduction in vivo and the usefulness of EPO in the prevention of the chronic, purely apoptotic neuronal cell death that contributes to vision loss in glaucoma and the progression of neurodegenerative diseases. METHODS: EPO's effects and signaling in the retinal ganglion cell axotomy paradigm were studied by Western blot analysis and immunohistochemistry, receptor expression was characterized in the retina before and after lesion. EPO was injected into the vitreous body to investigate neuroprotection of axotomized rat RGCs. Moreover, EPO's effects were studied in cultures of immunopurified retinal ganglion cells. Signal-transduction pathways transmitting neuroprotective EPO effects in vivo were characterized by the use of specific kinase inhibitors, immunohistochemistry, and Western blot analysis. RESULTS: EPO receptors (EPORs) were expressed on RGC somata and dendrites in vivo. EPOR expression did not significantly change after axotomy. Application of EPO prevented death of neurotrophic-factor-deprived immunopurified rat RGCs in vitro, rescued axotomized RGCs in vivo, and prevented caspase-3 activation. EPO-induced Akt phosphorylation and survival-promoting EPO effects were completely abolished by inhibition of PI-3-kinase. EPO neuroprotection followed a bell-shaped dose-response curve in vitro and in vivo, whereas toxic EPO effects were never observed, even at high concentrations. CONCLUSIONS: These data support a potential role for EPO as a therapeutic molecule against predominantly apoptotic neuronal cell death in the context of glaucoma or neurodegenerative diseases and delineate the PI-3-K/Akt pathway as the predominant mediator of EPO neuroprotection in this in vivo paradigm of neuronal cell death.     

外源性可溶性促红细胞生成素受体对正常大鼠视网膜神经元存活的影响

目的观察玻璃体腔注射外源性可溶性促红细胞生成素受体（EPOsR）对视网膜神经元存活的影响。方法30只SD鼠随机分为正常对照组、PBS组、EPOsR 2ng组、EPOsR 20ng组、EPOsR 200ng组，每组6只（12只眼）。后4组玻璃体腔内分别注射5μL PBS，2、20、200ng EPOsR。注射前记录闪光视网膜电图（FERG），注射后3d再次进行FERG检查及视网膜神经元TUNEL凋亡原位检测，注射后7d进行光学显微镜和透射电镜检查。结果注药前后各组a波、b波的潜伏期及振幅差异无统计学意义（P〉0．05），震荡电位（OPs）的P4潜伏期和各子波总振幅差异亦无统计学意义（P〉0．05）；全层视网膜神经元TUNEL凋亡原位检测未见凋亡细胞；光学显微镜和透射电镜检查均未见明显的水肿、空泡状变性等组织病理学改变。结论玻璃体腔注射200ng以下剂量的外源性EPOsR不影响正常状态下视网膜神经元的存活。     

重组人促红细胞生成素对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 制作Sprague-Dawley (SD)大鼠视网膜缺血-再灌注(RIR)损伤模型,探讨腹腔内注射重组人促红细胞生成素(rHuEPO)对急性RIR损伤所致的大鼠视网膜神经元损伤的保护作用及其对热休克蛋白72(HSP72)表达的影响.方法 采用前房灌注的方式建立RIR损伤模型,灌注压110 mm Hg(1 mm Hg=0.133kPa),缺血时间1h;腹腔注射rHuEPO.78只SD大鼠随机分组:正常组6只,EPO组、EPO+槲皮黄酮组、RIR组各24只,均以右眼为实验眼.采用免疫组织化学法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)分别测定正常对照组和各实验组大鼠再灌注24h、48 h、72 h和1周视网膜中HSP72及凋亡细胞的表达,观察各组大鼠视网膜病理学改变.结果 ①正常组大鼠视网膜中HSP72表达微弱,各实验组大鼠视网膜中HSP72表达自再灌注12 h开始增强,24h达到高峰,随后逐渐减弱,72 h时表达稍高于正常.再灌注后各时间段,EPO组大鼠视网膜中HSP72表达均高于RIR组、EPO+槲皮黄酮组(P＜0.05).②正常大鼠视网膜中几乎没有凋亡细胞.再灌注后12 h,各实验组大鼠视网膜中可见凋亡细胞,24 h达高峰,48 h后凋亡细胞数逐渐减少;再灌注后各组大鼠视网膜中凋亡细胞数比正常组多(P＜0.05).③再灌注后,RIR组,EPO+槲皮黄酮组大鼠内层视网膜明显水肿,炎性细胞侵入,膜结构逐渐破坏;EPO组大鼠视网膜结构保持相对完整,炎性细胞相对较少.结论 ①HSP72在正常大鼠视网膜中表达微弱,RIR损伤后表达增多.腹腔注射EPO可以明显诱导大鼠视网膜中HSP72的表达增多.②EPO可以减少大鼠RIR损伤后视网膜细胞凋亡,减少视网膜内炎性细胞的浸润,保护视网膜结构,对视网膜具有明显的保护作用.其机制可能与使HSP72表达上调有关.(中国眼耳鼻喉科杂志,2012,12:30-35)     

促红细胞生成素受体抗体抑制小鼠视网膜新生血管形成

目的:观察促红细胞生成素受体抗体(erythropoietin recep-tor antibody,EpoRA)对视网膜新生血管形成的抑制作用。方法:将鼠龄为7d的C57BL/6J幼鼠置于750±20mL/L氧仓中连续饲养5d,建立高氧诱导的血管增生性视网膜病变模型。幼鼠20只右眼在建模前1d予以玻璃体内注射EpoRA 2μL作为治疗眼,左眼不注射作为对照眼。在H.E.染色的组织学切片上观察并计数突破视网膜内界膜进入玻璃体的新生血管内皮细胞核数目;用ADP酶组织化学法行视网膜铺片,观察视网膜血管改变。饲养在正常条件下的幼鼠作为正常对照组;模型幼鼠8只仅在玻璃体内注射生理盐水,作为阴性对照组。结果:在组织切片上,可见突破视网膜内界膜进入玻璃体腔内的新生血管内皮细胞核,在用EpoRA注射的右眼,明显少于未经EpoRA注射的左眼(17.20±5.42个vs23.47±8.43个;P<0.01)。ADP酶组织化学法视网膜铺片中,可见视网膜新生血管的密度和异常程度,在用EpoRA注射的右眼,明显轻于未经EpoRA注射的左眼以及阴性对照组。正常对照组未见明显异常。结论:EpoRA可抑制小鼠模型中的视网膜新生血管形成。     

促红细胞生成素对中枢神经系统及视网膜神经元的保护作用

传统认为促红细胞生成素是调节红细胞生成重要激素。近来研究表明促红细胞生成素同时具备非常重要的促进神经元生长和神经元保护作用。我们就促红细胞生成素对中枢神经系统及视网膜神经元的保护作用作一综述