散发性结直肠癌染色体10q23～24区域杂合缺失分析

目的抑癌基因的杂合缺失（LOH）被认为是结直肠癌形成的通路之一,本实验拟通过对染色体10q23～24区的LOH分析,发现高频杂合缺失区域并筛查与结直肠癌相关的抑癌基因。方法7个荧光标记的微卫星引物（围绕D10S185位点）与83例结直肠癌的肿瘤和正常组织进行聚合酶链反应（PCR）反应。产物在ABI Prism377自动荧光测序仪进行电泳,以GeneSean3．1和Genotyper2．1软件进行扫描以及杂合缺失分析LOH。与临床病理因素之间的关系比较采用X^2检验。结果7个位点平均杂合缺失率为36．11％,以D10S583位点最高,达54．84％;最低是D10S205,21．3％。发现两个高频杂合缺失区域：一个在D10S583和D10S185之间,大约0．9cM（10q23．33）的距离;另一个在D10S1709和D10S1265位点之间,大约1．5cM（10q24．2～24．31）的距离。D10S1265位点的杂合缺失与Dukes分期显著相关,其余位点与临床病理因素均无显著相关。结论在散发性结直肠癌10q23-24发现了两个高频LOH区域：10q23．33和10q24．2～24．31。除对磷脂酶同族蛋白（PTEN）基因外,10q上可能存在与散发性结直肠癌相关的其他抑癌基因。     

食管癌APC/MCC基因杂合缺失的研究

目的 研究ＡＰＣ／ＭＣＣ基因杂合性缺失（ＬＯＨ）与食管癌发生发展的关系。方法 多聚酶锭反应技术及限制性片段长度多态现象对４６例食管癌ＡＰＣ和ＭＣＣ基因的ＬＯＨ进行了分析。结果 食管癌ＡＰＣ和ＭＣＣ基因ＬＯＨ阳性表达分别为２９．０％和３３．３％。结论ＡＰＣ、ＭＣＣ基因的ＬＯＨ是食管癌的常见改变,可能参与了食管癌的发生。     

提高抑癌基因杂合性缺失实验分辨力的探讨

目的 建立一个瘤细胞标本纯度参照体系以降低标本不纯对抑癌基因杂合性缺失（ＬＯＨ）研究的影响。方法 根据代表不同纯度的标本中两个等位基因的配比推算纯合子／杂合子ＤＮＡ的构成比及掺入量，进而建立瘤细胞模拟纯度梯度体系，以ＡＰＣ基因的ＬＯＨ分析为例，在优化实验条件基础上构建不同纯度瘤细胞的ＡＰＣ－ＬＯＨ模型。结果 该ＡＰＣ－ＬＯＨ分析系统至少能分析纯度低至６０％的标本，优于其他文献提出的纯度要求。结论     

新疆哈萨克族食管癌APC抑癌基因等位基因杂合缺失和点突变研究

目的：探讨抑癌基因在哈萨克族（简称哈族）食管癌发生、发展中的作用,阐明哈族食管癌高发的机理,从分子水平提供依据。方法：应用ＰＣＲ技术并配合限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析和银染的单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析法对４１ 例新疆地区原发性食管癌及正常组织中家族性结肠腺瘤样息肉易感基因（ＡＰＣ）第１１ 外显子杂合缺失（ＬＯＨ）及点突变进行检测。结果：３１ 例信息个体中１３ 例显示杂合缺失,杂合缺失率为４１．９％ ,其中哈族的杂合缺失率为５０．０％ （７／１４）,而汉族的杂合缺失率为３５．３％ （６／１７）。点突变率为２４．４％ （１０／４１）,其中哈族食管癌的点突变率为３０．０％ （６／２０）,汉族食管癌的点突变率为１９．０％ （４／２１）。结论：ＡＰＣ抑癌基因第１１ 外显子的ＬＯＨ 存在于食管癌的各个临床分期,ＬＯＨ不是癌症发生的结果,可能是癌症发生的早期因素,且与食管癌的恶性程度有关。     

食管癌组织p53抑癌基因等位基因杂合缺失及突变的研究

目的：为了探讨ｐ５３抑癌基因在原发性食管癌中的改变以及与食管癌的发生、发展可能存在的关系。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ），配合限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析法，对４８例新疆地区原发性食管癌及正常组织中ｐ５３抑癌基因的等位基因杂合缺失（ＬＯＨ）及突变进行了检测。结果：ＲＦＬＰ分析显示ｐ５３外显子４和内含子６的ＬＯＨ分别为８／１８和４／１３。ＳＳＣＰ分析显示，ｐ５３外显子５～８的突变率为５０％（２４／４８），且突变多出现在食管癌发展的较晚阶段。结论：ｐ５３基因缺失、突变可能在食管癌发生、发展过程中起重要作用     

喉癌患者血浆DNA微卫星等位基因杂合型缺失的监测及意义

目的:分析喉癌患者肿瘤DNA微卫星多态位点等位基因杂合型缺失在肿瘤组织与血浆的表达及关系,探讨血浆肿瘤DNA的动态变化在临床早期诊断、筛查及随访中的意义。方法:2003年9月~2004年12月青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院耳鼻咽喉头颈外科喉癌患者43例,抽取术前、术后防凝血,分离淋巴细胞和血浆,采集肿瘤、癌旁组织标本,分别提取DNA。选取头颈部鳞状细胞癌等位基因杂合型缺失(LOH)表达较高的3个微卫星多态位点D9S162、D9S1782、D17S1665,设计并合成引物,PCR扩增,聚丙烯酰胺电泳,用ID Image Analysis Software凝胶成像分析系统分析电泳结果。结果:D9S162肿瘤、术前血浆、术后血浆LOH表达率分别为51.85%,44.44%,33.33%;D9S1782分别为43.48%,39.13%,34.78%;D17S1665分别为51.43%,42.86%,37.14%。术后血浆3个位点有6位次LOH消失;早期和晚期喉癌血浆DNA的LOH表达无统计学差异(P>0.05)。结论:肿瘤DNA的LOH的表达与血浆肿瘤DNA的表达一致,监测血浆肿瘤DNA的变化有助于喉癌的早期诊断,术后随访过程中动态监测血浆肿瘤DNA可以预测肿瘤有无复发或再发。     

人肝细胞癌4号染色体高频率杂合子丢失的研究

目的 为克了生新的肝细胞（HCC）相关肿瘤抑制基因的供位点依据。方法 使用4号染色体的12个微卫星DNA多态性标志,分析了48例原发性HCC的杂合子丢失（LOH）。结果 44％（21／48）和63％3（30／48）的肿瘤组织中至少有1个位点的LOH分别发生在4p和4q。丢失图排列鉴定了两个独立的共同丢失片段（CDR）。第1个定位在4q22-q25的CDR位于D4S392和D4S1625位点之间;第2个定位在4q27-q31的CDR位于D4S1625和D4S1652位点之间。结论 至少有两个肿瘤抑制位点存在于4q.     

散发性结直肠癌1p36.33-36.31区域等位基因杂合缺失精细定位

目的抑癌基因的杂合缺失（LOH）被认为是结直肠癌形成的通路之一,本实验通过对染色体1p36．33-36．31区域的杂合缺失精细定位分析,发现高频杂合缺失区域并探讨其意义。方法7个荧光标记的微卫星引物（1p36．33-36．31）与83例结直肠癌的肿瘤和正常组织进行聚合酶链反应（PCR）。产物在ABI Prism377自动荧光测序仪进行电泳,以GeneSean3．1和Genotyper2．1软件进行扫描以及杂合缺失分析。杂合缺失结果与临床病理参数之间的关系比较采用χ^2检验。结果1p36．33-36．31区域平均杂合缺失率是31．5％,以D1S243位点最高,47．2％,最低是D1S1347,7．4％。存在两个高频杂合缺失区域：D1S243位点（1p36．33）以及D1S468和D1S2660位点之间约3cM的区域（1p36．32-36．31）。1p36．33—36．31区域各位点的杂合缺失率与性别、年龄、肿瘤大小生长方式以及分级无显著相关。结论1p36．33-36．31区域发现了两个高频LOH区域：1p36．33和1p36．32-36．31,可能存在与结直肠癌发生相关的抑癌基因。     

散发性结直肠癌3号染色体等位基因杂合缺失

目的 了解散发性结直肠癌（SCRC）3号染色体等位基因杂合缺失（LOH）发生情况。探讨其与临床病理特征间的关系,并对3号染色体上可能的SCRC相关基因进行初步定位。方法 用覆盖3号染色体的13个微卫星标记对83例散发性结直肠癌进行LOH扫描分析。结果 3号染色体至少有两个位点发生LOH者占39%（29/74）,3p所选4个位点中至少有一个发生LOH者占37%（27/74）,3q所选9个位点中至少有一个发生LOH者占53%（39/74）。整条染色体上以D3S1300（3q14.2)位点LOH率最高,达54%（23/43）。3qLOH在远端结直肠癌较近端高发,3q及D3S1300LOH阳性肿瘤多表现为浸润型生长和局部侵犯,并多发于大于50岁的老年患者。结论 3号染色体存在散在分布及区域性高频等位基因LOH,并与SCRC临床病理资料相关,提示其上SCRC相关基因的存在。高频LOH位点D3S1300的发现,提示3p14.2附近区域的FHIT基因可能作为肿瘤抑制基因在结直肠癌的发生发展中发挥作用。     

胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失的精细定位

目的 精细定位胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失及其常见缺失区域,并初步探讨1q21等位基因杂合性缺失在胃癌发生发展中的作用.方法 采用1q21区域7个高密度微卫星多态性标志结合PCR技术.精细分析了30例配对新鲜胃癌手术标本中胃癌染色体等位基因杂合性缺失的情况,利用X2检验和四格表确切概率法初步探讨了1q21等位基因杂合性缺失与胃癌临床特征的关系.结果 30例胃癌标本中,有18例存在等位基因杂合性缺失,占60%(18/30),7个微卫星位点D1S514、D1S2696、D1S498、D1S305、D1S2624、D1S2635和D1S2707的杂合性缺失频率分别为13.3%、10%、20%、23.3%、33.3%、40%和23.3%.常见高频率杂合性缺失区域位于D1S2624-D1S2707之间,即共同缺失区在D1S2635附近;胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失与病人的年龄、性别、胃癌原发灶的部位、癌细胞分化程度及临床分期比较差异没有湿著性意义(P>0.05);但是,胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失与胃癌有无淋巴结转移比较差异有显著性意义(P<0.05).结论 胃癌细胞染色体1q21存在较高频率的等位基因杂合性缺失,D1S2635附近可能存在与胃癌发生密切相关的肿瘤抑制基因.     

食管鳞状细胞癌染色体13q11-12杂合性丢失

目的分析食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)在13号染色体长臂11-12区(13q11-12)上的等位基因杂合性丢失(LOH),以期寻找13q11-12区上可能存在的与食管鳞状细胞癌有关肿瘤抑制基因的缺失区域。方法用9个位于13q11-12区的微卫星标志物,对56例ESCC患者组织切片激光显微切割后,进行PCR-LOH分析;56例ESCC患者包括34例有上消化道癌家族史,22例无上消化道癌家族史。结果56例ESCC患者中,49例(87.5%)显示一个或更多位点LOH;并发现一个LOH高频率区,位于位点D13S787和D13S221之间,物理距离仅有1.83 Mb;在位点D13S1236有上消化道癌家族史组LOH为89%,明显高于无上消化道癌家族史组53%(P=0.031<0.05),差异有显著性意义。结论研究提示染色体13q11-12的LOH可能在食管癌发生、发展中起重要作用;在染色体13q11-12区上,可能存在一个或多个与ESCC发生发展有关的肿瘤抑制基因(TSG)。     

凹陷蛋白-1基因在乙型肝炎相关性肝癌中的表达及其意义

目的 探讨候选抑癌基因凹陷蛋白(Caveolin)-1在肝细胞癌(HCC)中的表达及其与HCC侵袭、转移的关系.方法 对123例HCC标本以及MHCC-97L和MHCC-97H肝癌细胞株进行实时荧光PCR法、免疫组化法及Western印迹法检测Caveolin-1 mRNA及蛋白表达,分析其表达与肿瘤侵袭、转移性间的关系.结果 Caveolin-1在肝癌组织中较癌旁组织表达明显下调(P<0.05);HCC 中的表达水平与大/小肝癌(≥5 em或<5 cm)、AFP表达水平、有无大血管侵袭、肿瘤单发或多发及pTNM分期5个因素均呈显著负相关(P<0.05),其在MHCC-97H细胞株中的表达显著低于MHCC-97L(P=0.000);Caveolin-1与HBx表达显著负相关(P=0.044).结论 Caveolin-1表达与HCC侵袭转移密切相关,其表达下调,预示HCC的预后不良;有可能存在HBx蛋白下调Caveolin-1表达的机制.     

FGFR4基因单核苷酸多态性和杂合性丢失在胃癌发病中的作用

目的 研究成纤维细胞生长因子受体4（FGFR4）基因在胃癌患者中的单核苷酸多态性（SNP）情况和杂合性丢失（LOH）的发生频率,探讨其在肿瘤发生发展和患者预后判断中的意义。方法 检测50例胃癌标本中FGFR4基因5个外显子区域6、9、13、16、18的SNP情况,并以SNP技术检测FGFR4基因外显子9区域内密码子388位点rs351855的LOH,分析FGFR4基因SNP和LOH与胃癌临床病理特征及患者生存率的关系。结果 FGFR4基因的外显子9区域第401密码子发生1例体细胞突变（R401C,C>T）,34例胃癌发生编码区非同义SNP,GG、AG、AA三种基因型比例分别为32%、52%和16%。26例AG型杂合子胃癌患者中,rs351855位置LOH的发生频率为92.31%。LOH发生频率和Arg388等位基因的表达在不同肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、pTNM分期及患者生存率中的差异均无统计学意义（P>005）。结论 胃癌患者FGFR4第388密码子rs351855位点发生高频LOH,提示在其附近存在抑癌基因的缺失或失活。Arg388等位基因的表达和FGFR4基因rs351855位点LOH不直接影响胃癌的发展及患者的预后。     

乳腺浸润性导管癌染色体8p22、11p15、17p13区杂合性缺失的研究

目的：观察乳腺浸润性导管癌中8p22、11p15、17p13三个染色体区的杂合性缺失(LOH)及其与临床病理参数之间的关系。方法：从石蜡包埋的存档标本中选取34例肿瘤组织和其对应的自身正常对照组织，用PCR方法扩增位于此三个染色体区域的三个微卫星位点D8S136、D11S988、TP53，扩增产物用6％聚丙稀酰胺凝胶电泳，银染显色后进行LOH的判定。用免疫组化方法观察ER、PR、P53和c-erBb-2在乳腺癌中的表达情况。结果：34例乳腺癌中有12例(35．29％)D8S136位点发生LOH，D11S988和TP53两个位点分别发现5例(14．71％)LOH。D11S988和TP53两个位点的LOH与临床病理参数之间无明显相关性，而D8S136发生LOH的肿瘤平均直径明显高于LOH阴性的肿瘤(P=0．0049)。结论：染色体8p22区域有较高的LOH发生率，位于此区域的肿瘤抑制基因的失活可能与乳腺癌的迅速生长有关。     

B细胞淋巴瘤微卫星不稳定性及杂合性缺失的研究

目的:探讨微卫星不稳定性及杂合性缺失在B细胞淋巴瘤发生学上的意义。方法:选取6号染色体上7对多态微卫星标记,结合PCR及银染技术,采用凝胶成像图像分析系统进行分析,分别检测53例B细胞淋巴瘤染色体微卫星不稳定性及杂合性缺失。结果:在位点D6S275MSI的发生率为7.5%(4/53),其中包括2例DLBCL,FL和B-CLL/SLL各1例,LOH总的发生率达66%(35/53),其中包括DLBCL19例(19/21,90.5%),FL8例(8/13,61.5%),B-CLL/SLL8例(8/19,42.1%),DLBCL的LOH率同B-CLL/SLL、FL相比,差异具有统计学意义。结论:位点D6S275可能存在一个抑癌基因,该基因的缺失对B细胞淋巴瘤的发生是否有重要意义有待进一步研究。