电刺激C2C12细胞时活性氧生成的变化

目的:利用电刺激使C2C12细胞产生收缩运动,实时观察细胞内活性氧(ROS)生成的时相变化。方法:利用培养的C2C12细胞,电刺激使其产生收缩运动,测定细胞ROS生成速率、线粒体MDA含量、总SOD活性和胞浆内Na+,K+-ATPase活性。结果:(1)以45V、20ms5、Hz的强度刺激C2C12细胞,细胞内ROS生成迅速增加,在刺激60min时ROS的生成速率呈显著性升高(P<0.01),然后缓慢下降,继续刺激到120min时,ROS生成再次升高(P<0.01),随后迅速下降。(2)线粒体总SOD活性逐渐升高,至150min和180min时都与对照组相比有显著性差异(P<0.05);MDA量在90min时略有升高,随后下降,但无显著性差异。(3)电刺激C2C12细胞引起胞浆内Na+,K+-ATPase活性升高,刺激至180min时与刺激90min时相比酶活性显著下降(P<0.05)。结论:利用电刺激C2C12细胞模型,可实时测定收缩细胞的ROS生成速率变化,为运动性ROS产生的机理提供了直接证据。     

电刺激对C2C12肌管自由基代谢及Nrf2/ARE信号通路的影响

目的:探讨电刺激模拟运动对小鼠骨骼肌肌母细胞(C2C12)肌管自由基及Nrf2信号通路的影响。方法:C2C12细胞分化6天后分为对照组和电刺激组,对照组不进行电刺激,电刺激组采用45V、20ms、5 Hz的刺激强度对C2C12肌管进行电刺激,根据刺激时间为分为30 min、45 min、60 min、75 min、90 min、120 min和150 min组。测定不同刺激时间C2C12肌管内活性氧自由基(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及核因子E2相关因子2(Nrf2)核蛋白含量的变化。结果:(1)与对照组相比,C2C12肌管内ROS生成的量除30 min和150 min组外,其余各刺激时间组都明显增加(P<0.05),其中60 min和120min组极显著增加(P<0.01)。(2)与对照组相比,C2C12肌管中GSH-Px活性在60 min、90 min、120 min组有显著性增加(P<0.05),75 min和150 min组时有极显著增加(P<0.01)。(3)与对照组相比,C2C12肌管Nrf2核蛋白表达在60 min、90 min、120 min组有显著性增加(P<0.05),75 min和150 min组时有极显著增加(P<0.01)。结论:在45V、20 ms、5 Hz的强度下,电刺激C2C12肌管会使肌管发生氧化应激,结合ROS产生量随电刺激时间的变化规律,发现ROS只有达到一定的量才能激活Nrf2信号系统,同时启动相关基因,使GSH-Px发挥抗氧化作用,而且随着刺激时间的增加,肌管内抗氧化能力略有降低,随后则继续保持着较高的活性。     

电刺激引起C2C12肌管IL-6蛋白及IL-6、GLUT4基因表达的变化

目的:研究骨骼肌细胞在不同时间的电刺激下产生的GLUT4基因与肌源性IL-6蛋白含量及其基因表达之间的关系。方法:以小鼠骨骼肌肌母细胞(C2C12)为研究对象,分为电刺激组和对照组。分别测定当刺激时间为45 min、60 min、75 min、90 min及120 min时C2C12肌管内糖原含量、GLUT4和IL-6 mRNA表达以及C2C12肌管上清液IL-6含量。结果:(1)电刺激各组GLUT4 mRNA表达均有所增加,其中60 min、75 min和120 min组显著高于对照组(P<0.05);电刺激75 min和120 min组IL-6 mRNA表达显著高于对照组(P<0.05);电刺激各组上清液IL-6含量均显著高于对照组(P<0.05)。(2)随电刺激时间增加,上述各项指标均先增加,后下降,90 min时达低谷。(3)随电刺激时间延长,C2C12肌管糖原含量逐渐减少,其中,刺激120分钟组糖原含量与对照组相比显著减少(P<0.05)。结论:(1)电刺激C2C12肌管对细胞糖代谢产生了一定影响;(2)电刺激C2C12肌管引起的GLUT4 mRNA表达的增加很可能与肌管收缩产生的IL-6有关。     

NF-κB在烧伤脓毒症大鼠肝损伤中的作用

目的　研究NF κB在烧伤脓毒症大鼠急性肝损害中的作用。方法　采用 30 %Ⅲ度烫伤加内毒素攻击大鼠模型模拟临床烧伤脓毒症 ,6 3只Wistar大鼠随机分为正常对照组、烧伤脓毒症组、烧伤脓毒症 +NF κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷 (PDTC)组、单纯PDTC处理组 ,采用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)分析肝脏NF κB活性 ,免疫印迹 (Westernblotting)法检测肝脏IκB α表达 ,酶联免疫吸附试验检测肝脏TNF α含量的变化。结果　NF κB于伤后 1h明显活化并达到高峰 (P <0 0 5 ) ;IκB α表达先减少 (P <0 0 5 )后逐渐恢复 ;NF κB抑制剂PDTC可以降低NF κB的活性和减少TNF α的释放 ,同时明显降低血清ALT、AST含量。结论　抑制NF κB活性有助于减轻烧伤脓毒症时肝脏的急性损害。     

转录因子NF-κB在肝纤维化中的作用

核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)是近年来研究极为广泛的转录调控因子,作为一种转录刺激因子,最初是在1986年由Sen和Baltimore首先报道的.NF-κB可因一些细胞因子、氧化剂、蛋白激酶、脂多糖等的刺激而激活,而活化的NF-κB又可诱导细胞因子、趋化因子、免疫因子受体和转录因子等多种物质的表达,在炎症反应、肿瘤及血液性疾病的病理生理过程中发挥重要作用[1].目前对NF-κB在肝纤维化中的作用报道较少,为此,笔者就转录因子NF-κB在肝纤维化形成过程中的相关作用作一综述.     

NF-κB在放射性损伤中的表达改变及作用机制的研究进展

随着肿瘤发病率的升高,需要接受放射治疗的人数也越来越多;而且由于放射治疗技术的不断发展,患者的长期生存期也在不断延长。因此,在长期生存的患者中防止放射性损伤的发生就尤为重要。NF-κB在各种基因转录的过程中承担着重要作用,并与放射性损伤的发生有着密切关系。笔者就NF-κB的结构、激活、功能作一介绍,并对放射性脑损伤及放射性肺损伤中NF-κB的表达变化、调节机制,以及NF-κB抑制剂的研究进展作一综述。     

He-Ne激光照射对HeLa细胞Fas、bcl-2、NF-κB基因表达的作用

目的探讨He-Ne激光对HeLa细胞Fas、bcl-2、NF-κB基因表达的作用。方法将HeLa细胞接种于小鼠背部脾区皮下,24 h后采用24 mW He-Ne激光器照射小鼠脾区（瘤区）,然后采用免疫组化方法观测Fas、bcl-2、NF-κB的表达。结果激光照射组瘤块重量、bcl-2、NF-κB表达明显低于非激光照射组,而Fas表达明显高于非激光照射组,组间比较,差异有显著意义（P〈0．05）。结论He-Ne激光具有促进HeLa细胞调亡信号形成,从而发挥抗肿瘤免疫效应。     

C2C12细胞收缩模型及其收缩功能测定研究进展

骨骼肌收缩功能的强弱直接影响着动物体的运动和捕食能力。C2C12细胞收缩模型的建立,一方面有利于更为方便有效地研究肌肉损伤和药物作用机理,另一方面也是对在体实验的有益补充。近些年来,通过C2C12细胞收缩模型所进行的研究日益增多,其收缩功能的测定方法也不断涌现。本文概述C2C12细胞收缩模型的建立,着重介绍各种测定收缩功能的方法 ,对各种方法的优缺点进行对比。     

泛素-蛋白酶体途径在烧伤脓毒症大鼠肝脏NF-κB活化中的作用研究

目的　研究泛素 蛋白酶体途径对烧伤脓毒症大鼠肝脏NF κB的活性和IκB α含量以及肝脏TNF α表达的影响。方法　采用 30 %TBSAⅢ度烫伤加内毒素攻击大鼠为模型模拟临床烧伤脓毒症 ,6 0只Wistar大鼠随机分为正常对照组、烧伤脓毒症组、烧伤脓毒症 蛋白酶体抑制剂ALLN处理组、烧伤脓毒症 NF κB抑制剂PDTC处理组 ,采用凝胶电泳迁移率改变分析法 (EMSA)分析肝脏NF κB活性 ,采用免疫印迹方法检测肝脏IκB α表达 ,采用酶联免疫吸附试验检测肝脏TNF α的变化。结果　NF κB于伤后 1h明显活化并达到高峰 (P <0 0 5 ) ,IκB α表达先减少后逐渐恢复 ,应用泛素系统抑制剂可以抑制IκB α在肝脏中的降解 ,而采用蛋白酶体抑制剂和NF κB抑制剂均可降低肝脏NF κB的活性和减少TNF α的释放。结论　表明烫伤脓毒症大鼠肝脏NF κB活性明显增强 ,而干预泛素 蛋白酶体途径可通过抑制IκB α降解实现对肝脏中NF κB活性的调控。     

NF-κB信号通路介导结肠癌多细胞耐药的作用研究

目的 探讨NF-kB信号通路在结肠癌HT-29细胞多细胞耐药中的作用及可能机制.方法 采用液体重叠培养系统和常规贴壁法对HT-29细胞进行三维(3D)和单层(2D)培养.采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察3D培养的HT-29细胞形态,并采用免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.电泳迁移率改变测定法(EMSA)测定3D和2D培养细胞中NF-kB的活性差异.将3D培养细胞分为两组:3D组(培养液中不加干扰因素)和3D SN50组(培养液中加入50μg/ml SN50处理24h),采用EMSA测定两组NF-kB活性差异.TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bcl-2和Bax)的表达并对蛋白条带的光密度值进行半定量分析,外生半径测定法测定3D培养细胞对氟尿嘧啶的敏感性.结果 3D培养的HT-29细胞悬浮生长,细胞相互聚集增殖形成多细胞球,中心为坏死区,周围由多层异型性细胞组成,外围细胞PCNA阳性染色明显.与2D培养细胞相比,3D细胞中NF-kB活性条带颜色较深.EMSA显示3D SNS0组NF-kB活性较3D组低,TUNEL法显示3D组细胞凋亡率(8.71%±0.73%)较3D SN50组(15.75%±1.02%)明显降低(P<0.01).3D SN50组和3D组中,Caspsse-3活化片段光密度值分别为126.79±13.48和87.24±10.68(P<0.01),Pax蛋白为129.73±15.28和89.26±14.31(P<0.01),Bcl-2蛋白为97.27±12.63和131.24±14.53(P<0.01).结论 NF-kB活性升高是导致结肠癌HT-29细胞多细胞耐药的重要原因之一,其机制可能与凋亡相关蛋白的表达调控有关.     

不同剂量辛伐他汀对急性冠状动脉综合征患者NF-κB及IL-6的作用

目的观察不同剂量辛伐他汀对急性冠状动脉综合征患者外周血NF-κB及IL-6水平的影响。方法 40例急性冠状动脉综合征患者随机分为2组：10 mg辛伐他汀组（辛伐他汀10 mg/d＋常规用药）和20 mg辛伐他汀组（辛伐他汀20 mg/d＋常规用药）。分别测定治疗前后外周血NF-κB及IL-6的浓度。同期选取40例健康人作对照。结果急性冠状动脉综合征患者外周血NF-κB及IL-6水平测定值均高于对照组（P〈0.01）;两组治疗后NF-κB及IL-6的测定值均低于治疗前水平（P〈0.05）,20 mg辛伐他汀组与10 mg辛伐他汀组相比,降低外周血NF-κB及IL-6水平效果更加明显,二者差异有统计学意义（P〈0.05）。结论辛伐他汀可明显降低急性冠状动脉综合征患者外周血NF-κB及IL-6水平,且随着剂量加大,效果更加明显。     

NF-κB在TNF-α和血管紧张素Ⅱ致内皮细胞凋亡中的作用

目的:了解NF-κB在TNF-α和血管紧张素Ⅱ导致内皮细胞凋亡中的作用。方法:用浓度为10 ng/ml TNF-α和浓度为1μmol/L血管紧张素Ⅱ分别干预内皮细胞,TUNEL法检测细胞的凋亡情况、EMSA检测NF-κB的活性和Western-blot检测IκBα的表达;用浓度检测细胞的凋亡、NF-κB的活性和IκB的表达。结果:TNF-α和血管紧张素Ⅱ显著引起了细胞的凋亡、IκBα蛋白的裂解和NF-κB的激活,用PDTC预处理后,在NF-κB活性减弱的同时抑制了细胞的凋亡。结论:在内皮细胞中,TNF-α和血管紧张素Ⅱ通过裂解胞浆内的IκBα蛋白进而激活NF-κB引起的细胞凋亡。     

阿托伐他汀对2型糖尿病大鼠心肌NF-κB、TNF-α表达的影响

目的探讨NF-κB及TNFα-在2型糖尿病大鼠心肌中的表达及阿托伐他汀的干预作用。方法60只SD大鼠分为对照组、糖尿病组和阿托伐他汀组,每组20只,后两组用小剂量链脲佐菌素(STZ)制备2型糖尿病大鼠模型。阿托伐他汀组给予阿托伐他汀20mg/(kg.d)灌胃12周。用放免法检测各组大鼠血浆及心肌TNFα-,光镜下观察心肌结构。RT-PCR方法检测心肌组织中NFκ-B及TNFα-的mRNA表达水平,免疫组化法检测其蛋白表达。结果光镜下可见对照组大鼠心肌细胞排列整齐、致密,结构清晰,细胞核呈卵圆形,糖尿病组大鼠心肌细胞排列紊乱、扭曲,间质有炎症细胞聚集,阿托伐他汀组心肌细胞排列趋于整齐,结构接近正常。糖尿病组大鼠血浆和心肌中TNFα-浓度较对照组明显升高(P<0.01),且心肌组织中NFκ-B和TNF-αmRNA及蛋白表达较对照组明显增加(P<0.01)。给药12周后,阿托伐他汀组NFκ-B、TNF-αmRNA及蛋白表达较糖尿病组明显降低(P<0.01)。结论阿托伐他汀可抑制2型糖尿病大鼠心肌组织中NFκ-B及TNFα-的表达,对2型糖尿病心肌病具有一定防治作用。     

NF-κB及MMP-9在1型糖尿病模型INS2AKITA小鼠颈动脉中的表达及意义

目的 探讨细胞核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在1型糖尿病模型INS2AKTTA小鼠颈动脉中的表达及意义.方法 取INS2AKTTA雄性小鼠和同窝出生的野生型C57BL/6雄性小鼠各10只,分别作为1型糖尿病模型组和正常对照组.在两组小鼠第16周龄时麻醉处死,处死前检测空腹血糖、测量体重.处...     

力竭运动对大鼠下丘脑室旁核内NF-κB、Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨力竭运动对大鼠下丘脑室旁核内NF-κB、Bcl-2、Bax表达的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组和力竭运动组,对照组10只,不进行游泳运动。力竭运动组30只,每天大鼠尾部负重(2%体重的重物)游泳1次至力竭,连续7 d,分别于最后一次运动后即刻(0 h)、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h等不同时间点取材,采用Western blot技术检测大鼠下丘脑室旁核内NF-κB、Bcl-2、Bax蛋白含量,采用免疫组织化学染色分析NF-κB、Bcl-2、Bax免疫阳性神经元的定位和表达。结果:(1)Western blot结果:对照组与力竭运动0 h组NF-κB表达较低,力竭运动组运动后4 h NF-κB表达显著高于对照组(P<0.05),8 h达到峰值,而后下降,24 h时仍显著高于对照组(P<0.05)。力竭运动后即刻、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h,Bcl-2表达均显著高于对照组(P<0.05),运动后12 h达到峰值。Bax表达与Bcl-2相似,力竭运动后即刻、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h均显著高于对照组(P<0.05),运动后12 h达到峰值。(2)免疫组化染色结果:NF-κB与Bax阳性神经元数目表达与West-ern blot结果一致。对照组可见一定数量Bcl-2阳性神经元,力竭运动后Bcl-2阳性神经元数量有所增加,但各时间点之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:力竭游泳运动中下丘脑室旁核内NF-κB的活化可能参与中枢神经系统的细胞凋亡的诱发,表现为促凋亡蛋白Bax表达增高,而抑凋亡蛋白Bcl-2表达不明显。     

力竭运动对大鼠下丘脑室旁核内NF-κB、Bcl-2、Bax表达的影响北大核心CSCD

目的:探讨力竭运动对大鼠下丘脑室旁核内NF-κB、Bcl-2、Bax表达的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组和力竭运动组,对照组10只,不进行游泳运动。力竭运动组30只,每天大鼠尾部负重(2%体重的重物)游泳1次至力竭,连续7 d,分别于最后一次运动后即刻(0 h)、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h等不同时间点取材,采用Western blot技术检测大鼠下丘脑室旁核内NF-κB、Bcl-2、Bax蛋白含量,采用免疫组织化学染色分析NF-κB、Bcl-2、Bax免疫阳性神经元的定位和表达。结果:(1)Western blot结果:对照组与力竭运动0 h组NF-κB表达较低,力竭运动组运动后4 h NF-κB表达显著高于对照组(P<0.05),8 h达到峰值,而后下降,24 h时仍显著高于对照组(P<0.05)。力竭运动后即刻、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h,Bcl-2表达均显著高于对照组(P<0.05),运动后12 h达到峰值。Bax表达与Bcl-2相似,力竭运动后即刻、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h均显著高于对照组(P<0.05),运动后12 h达到峰值。(2)免疫组化染色结果:NF-κB与Bax阳性神经元数目表达与West-ern blot结果一致。对照组可见一定数量Bcl-2阳性神经元,力竭运动后Bcl-2阳性神经元数量有所增加,但各时间点之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:力竭游泳运动中下丘脑室旁核内NF-κB的活化可能参与中枢神经系统的细胞凋亡的诱发,表现为促凋亡蛋白Bax表达增高,而抑凋亡蛋白Bcl-2表达不明显。     

转染金属蛋白酶抑制剂2基因对损伤血管平滑肌细胞核因子—κB和蛋白激酶C的影响

目的探讨血管平滑肌细胞(VSMC)损伤后金属蛋白酶(MMPs)和蛋白激酶C(PKC)、核因子-κB(NF-κB)表达的变化.方法采用脂质体对VSMC转染金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)基因进行基因转染,并用Western blot加以鉴定,分别用酶谱分析法、凝胶电泳迁移率分析技术(EMSA)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学检测该细胞克隆MMPs、NF-κB的活性变化和PKCα mRNA、蛋白的表达水平.结果体外损伤的VSMC金属蛋白酶显著增加.PKCα、NF-κB在正常VSMC中很少表达,但在损伤的VSMC中这种表达非常显著,对兔VSMC进行lIMP-2转染后,损伤的VSMC MMP-2,9活性受抑制,并且PKCα、NF-κB的表达下调(P＜0.05).结论PKCα和NF-κB在MMPs合成及损伤VSMC迁移中有重要价值,TIMP-2能通过抑制平滑肌细胞PKCα、NF-κB信号途径来防止血管再狭窄.     

TAK1赖氨酸158位点发生Lys 63连接多聚泛素化在辐射诱导NF-κB激活过程中的作用

目的 研究转化生长因子激酶1(TAK1)Lys 63连接多聚泛素化在辐射导致的NF-κB激活过程中起到的作用及其作用位点。方法 通过基因瞬时转染技术将FLAG-TAK1和HA-Ub-K63质粒共同转染至HEK-293T细胞,应用免疫沉淀和免疫印迹技术研究辐射对TAK1泛素化的影响;用稳定转染TAK1表达的HeLa细胞,证实辐射对TAK1泛素化的影响。通过免疫印迹技术,比较分析辐射对稳定转染TAK1 K158R的MEF细胞与TAK1野生型MEF细胞比较分析辐射对它表达IKKs、p38及JNK的影响,以证明辐射诱导的TAK1-Lys 63多聚泛素化的位点是否在TAK1赖氨酸158位点。结果 瞬时转染的HEK-293T细胞接受辐射后1 h开始出现明显的TAK1泛素化表现,2 h更明显。在稳定表达FLAG-TAK1的 HeLa细胞系中得到证实。与TAK1野生型MEF细胞相比,TAK1 K158R突变的MEF细胞中辐射诱导的IKKs和 p38 磷酸化作用减低。结论 TAK1多聚泛素化在辐射导致的NF-κB激活过程中起到关键作用,辐射所致TAK1-Lys 63连接多聚泛素化发生在TAK1的赖氨酸158位点。     

低强度激光引起线粒体功能及细胞内游离Ca2+的变化

目的　研究低强度激光对心肌细胞线粒体功能及细胞内游离Ca2 的影响 ,探讨低强度激光提高脂质体介导的心肌细胞基因转染可能的发生机制。方法　对体外培养的Wistar大鼠心肌细胞给予低强度激光照射 ,激光波长 5 10 6nm ,功率密度为 1、5、10mW cm2 ,照射时间为6 0 0、12 0 0s ,使能量密度分别为 0 6、1 2、3、6、12J cm2 。同时设对照组。照射后 4 8h采用四唑盐 (MTT)比色法和激光共聚焦成像技术 ,分别测定细胞线粒体功能及细胞内游离Ca2 。结果　所有照射剂量均能显著提高心肌细胞线粒体功能 ,其中以 1 2J cm2 组的效应最明显 ,其光密度 (opticaldensity ,OD)值较对照组提高了 9 39倍 (1 0 0 6± 0 0 6 9 0 10 7± 0 0 0 7,P <0 0 1) ;其余各组OD值提高了 1 4～ 2 2倍 (P <0 0 5 )。细胞内游离Ca2 测定 ,各实验组均显著降低 (P <0 0 5 )。结论　低强度激光对脂质体介导的心肌细胞基因转染率的提高 ,与其增强细胞线粒体的功能有关 ,也可能与降低了细胞内游离Ca2 的含量 ,继而促进微管的聚合 ,增强细胞骨架的运输功能有关。     

NF-κB和环氧化酶-2在口腔癌中的表达及其与组织分化和淋巴转移的关系

目的：探讨核转录因子κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）和环氧化酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）在口腔癌中的表达及其与分化程度和淋巴转移的关系。方法随机选取重庆市大足区人民医院2013年1月—2014年12月收治的50例经病理诊断为口腔癌的患者为研究对象,分别取50例患者口腔癌癌变组织和正常口腔组织,采用免疫组化法分别检测NF-κB和COX-2的表达情况,并分析其与分化程度与淋巴转移的关系。结果正常口腔组织未见NF-κB和COX-2表达,而口腔癌组织中NF-κB和COX-2呈现高表达（P＜0.05）。中低分化口腔癌中NF-κB和COX-2阳性表达率均明显高于高分化口腔癌（P＜0.05）。有淋巴转移口腔癌中NF-κB和COX-2阳性表达率均明显高于无淋巴转移口腔癌（P＜0.05）。NF-κB和COX-2的表达与口腔癌呈正相关。结论NF-κB和COX-22种蛋白的表达与口腔癌的发生、组织分化和淋巴转移相关。