大肠杆菌感染对人巨噬细胞系U937凋亡的影响

目的：探讨大肠杆菌（E.coli）感染与人巨噬细胞系U937细胞凋亡的关系.方法：以Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测及Hoechst 33258荧光染色,Giemsa染色等细胞形态学观察为指标,研究E.coli感染对U937细胞凋亡的诱导作用.结果：Giemsa染色：E.coli感染10,20 min（U937：E.coli=1：20）后偶见细胞凋亡,感染30,60及90min时可见许多细胞有典型的凋亡形态学改变,并可见凋亡小体;Annexin V FITC/PI双染可见U937细胞凋亡百分率随E.coli感染时间的延长而增高.感染30,60及90min时,细胞凋亡率与对照组相比明显增高,有显著性差异（P＜0.001）.Hoechst 33258荧光染色结果表明当细胞与细菌浓度比较低时（1：10）即可引起部分U937细胞发生凋亡,U937细胞凋亡百分率随E.coli感染剂量的增加而增加,且Hoechst 33258荧光染色及流式细胞仪二种方法所得结果一致.结论：E.coli以时间和剂量依赖方式诱导U937细胞凋亡.     

大肠埃希菌感染对U937细胞凋亡的影响及机制探讨

目的探讨大肠埃希菌(E.coli)感染对人巨噬细胞系U937细胞的促凋亡作用及其机制。方法调整U937细胞与E.coli浓度比为120时,放入培养基中培养0、10、20、30、60和90 min,获得感染的U937细胞。采用流式细胞仪检测不同感染时间U937细胞的细胞凋亡率,Western blot法检测U937细胞胞浆内第2线粒体激活剂(Smac)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达水平。在E.coli感染前60 min用浓度0、10、20和40μmol.L-1的Em-belin预处理U937细胞,然后在E.coli诱导U937细胞凋亡30 min后收集细胞,用Annexin V FITC/PI双染后用流式细胞仪分析U937细胞的凋亡情况。结果当U937细胞E.coli浓度比为120时,感染0、10、20、30、60和90 min时U937细胞凋亡率分别为(3.02±0.78)%、(6.67±1.34)%、(10.56±1.02)%、(33.92±2.66)%、(46.98±3.12)%和(69.02±4.69)%,呈时间依赖性。U937细胞感染E.coli后发生凋亡,并且凋亡率随着E.coli感染时间的延长而升高。Smac的表达随着E.coli感染时间的延长逐渐升高,XIAP的表达则随着感染时间的延长而逐渐降低,而且不同感染时间组比较差别有统计学意义(P<0.05)。加入XIAP的抑制剂Embelin后,U937细胞的凋亡率随着Embelin的浓度增加而逐渐升高(P<0.05)。结论人巨噬细胞系U937细胞感染E.coli后发生凋亡,其凋亡的发生与影响Smac和XIAP的表达有关。Embelin通过特异性地抑制XIAP表达,增加E.coli诱导的U937细胞凋亡率。     

大肠杆菌致U937细胞凋亡的研究

目的 探讨大肠杆菌感染对人U937细胞凋亡的诱导作用。方法 以细胞形态学观察及Annexin V／PI双染流式细胞仪检测分析大肠杆菌感染U937细胞后，不同作用时间U937细胞的凋亡情况。结果 Hoechst 33258染色荧光显微镜下观察：大肠杆菌感染20min及30min后偶见细胞凋亡，感染60min及90min时可见许多细胞有典型的凋亡形态学改变，并可见凋亡小体；AnnexinV／PI双染可见U937细胞凋亡百分率随大肠杆菌感染时间延长而增高。感染60min及90min时，细胞凋亡率与其它组相比明显增高，差异有显著性（P〈0．001）。结论 大肠杆菌以时间依赖方式诱导人类U937细胞凋亡。     

半胱氨酸蛋白酶-3/-9在大肠埃希菌诱导的人巨噬细胞系U937细胞凋亡中的作用

目的探讨大肠埃希菌(E.coli)感染时人巨噬细胞系U937细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶-3/-9(caspase-3/-9)的关系。方法以流式细胞仪检测为指标,研究E.coli感染对U937细胞凋亡的诱导作用。ELISA方法检测caspase-3/-9蛋白酶活性。结果当U937细胞∶E.coli为1∶20时,E.coli感染U937细胞0,10,20,30,60,90min时细胞凋亡百分率分别为(3.02±0.78)%,(6.67±1.34)%,(10.56±1.02)%,(33.92±2.66)%,(46.98±3.12)%和(69.02±4.69)%,呈时间依赖性。感染30,60,90min时,细胞凋亡率与对照组相比明显增高(P<0.01)。caspase-3/-9蛋白酶活性随着培养时间延长也逐渐增高,与细胞凋亡程度基本一致。caspase-3/-9蛋白酶的抑制剂Z-DEVD-FMK和Z-LEHD-FMK能够抑制E.coli诱导的U937细胞凋亡。结论人巨噬细胞系U937细胞在E.coli感染过程中存在凋亡,caspase-3/-9参与了该凋亡过程并发挥了重要的作用。     

JNK信号通路对胰岛βTc3细胞脂性凋亡的影响及吡格列酮的干预作用

目的：探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路对胰岛βTc3细胞脂性凋亡的影响及吡格列酮（PGZ）的干预作用.方法：采用游离脂肪酸（FFA）诱导小鼠βTc3细胞凋亡;以MTT法观察FFA对细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞化学和Western Blot法检测在FFA、特异性JNK抑制剂SP600125及PGZ作用下磷酸化JNK（p-JNK）、磷酸化c-jun（p-c-jun）的表达.结果：FFA对体外生长的βTc3细胞具有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,JNK阻断剂及PGZ可显著减少这一过程引起的凋亡;且FFA诱导βTc3细胞凋亡伴随着JNK信号通路中p-JNK和p-c-jun的升高;用SP600125预处理细胞后,可明显减少p-JNK和p-c-jun的活化;而PGZ未能抑制FFA引起的JNK活化.结论：JNK信号通路参与了FFA诱导的小鼠βTc3细胞凋亡;PGZ可明显抑制胰岛βTc3细胞凋亡,但这一过程可能没有通过JNK信号通路.     

ABT737通过激活JNK/c-Jun通路上调Bim诱导宫颈癌细胞凋亡

【目的】探讨JNK/c-Jun信号通路激活Bim在ABT737诱导宫颈癌细胞凋亡中的作用。【方法】用MTT法检测ABT-737对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用;用流式细胞术检测细胞凋亡率;用Western blot方法检测JNK、phospho-JNK、c-Jun、phospho-c-Jun以及Bim蛋白的表达;用RT-PCR检测Bim在mRNA水平的变化;用JNK特异性抑制剂SP600125和siRNA瞬时转染抑制JNK及c-Jun的活性。 【结果】ABT-737能抑制Hela细胞的生长,诱导HeLa细胞发生凋亡。ABT737可激活JNK激酶活性其下游靶分子c-Jun,凋亡相关基因Bim在mRNA水平和蛋白水平的表达也随之上调。应用JNK特异性抑制剂SP600125和靶向JNK及c-Jun的siRNA抑制JNK或c-Jun的活性或表达后,ABT737诱导的Bim上调及细胞凋亡亦被有效阻断。【结论】ABT737通过JNK/c-Jun信号通路上调凋亡相关基因Bim的表达,诱导HeLa细胞发生凋亡。     

脑缺血/再灌注损伤细胞凋亡中JNK信号通路及抑制剂SP600125的作用

c-jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路是细胞内作用蛋白网络的重要一环,参与胞外信号从细胞表面转导到细胞内部的过程,可被多种因素激活,在细胞的增殖与分化、形态维持、骨架构建和细胞凋亡等生物反应过程中发挥重要作用。脑缺血/再灌注损伤导致的细胞凋亡与丝裂原活化蛋白激酶家族有密切的关系,其中JNK信号通路是脑缺血/再灌注损伤中神经元凋亡进程的主要机制之一。大量实验提示,JNK信号转导通路及其抑制剂SP600125在脑缺血/再灌注损伤诱导的细胞凋亡中起重要的调控作用,应用JNK阻断剂可起到神经保护作用,通过对这些信号转导通路的组成及调节机制的研究,有望为临床上脑缺血疾病的治疗提供新的分子治疗靶点。     

大肠杆菌感染时U937细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶-3及c-myc的关系

目的 探讨大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)感染时人巨噬细胞系U937细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶-3(caspaseS-3)及c-myc的关系.方法 当U937:E.coli分别为0,1:20,1:40及1:80时用AnnexinVFITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测caspases-3和c-myc的表达.结果 当U937:E.coli分剐为0,1:20,1:40及1:80时,细胞凋亡率分别为(3.05%±0.88%)、(33.34%±4.27%)、(37.67%±5.20%)和(50.18%±4.32%).caspases-3 mRNA和c-mycmRNA随着E.coli浓度增加而表达上调,与细胞凋亡程度基本一致.结论 E.coli可诱导U937细胞凋亡,其机制可能与凋亡调控基因caspases-3和c-myc上调有关.说明多基因调控参与其中.     

HSP70通过抑制NF-κB信号通路促进大肠杆菌诱导的人巨噬细胞系U937细胞凋亡

目的 探讨大肠杆菌(E.coli)感染与人巨噬细胞系U937细胞凋亡的关系及热休克蛋白70(HSP70)、核因子(nuclear factor kappa B,NF-κB)表达的变化.方法 以Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测为指标,研究E.coli感染对人巨噬细胞系U937细胞凋亡的诱导作用;用Western blot方法检测HSP70和NF-κ B的表达.结果 Annexin V FITC/PI双染结果发现,U937细胞凋亡百分率随E.coli浓度的增加而增加,HSP70的表达随着E.coli浓度的增加逐渐升高,而NF-κ B的表达逐渐降低.结论 E.coli诱导U937细胞凋亡过程可能与HSP70表达的升高和NF-κB表达的降低有关.     

D-氨基葡萄糖衍生物通过JNK信号通路诱导Eca-109细胞凋亡

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在D-氨基葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡中的作用及机制.方法:体外培养Eca-109细胞,用COPADG及特异性JNK抑制剂SP600125对Eca-109细胞进行处理;Western印迹法检测P-JNK蛋白表达的变化;MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率;倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:Western印迹显示随着COPADG作用浓度增加P-JNK蛋白表达逐渐增强,经SP600125预处理后,COPADG诱导Eca-109细胞P-JNK蛋白表达明显减弱(P＜0.01),COPADG诱导的细胞凋亡率明显减低,细胞增殖抑制率显著下降,与COPADG单作用组之间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:JNK信号转导通路在COPADG诱导Eca-109细胞凋亡过程中发挥重要作用,COPADG通过JNK信号通路诱导Eca-109细胞凋亡.     

C-jun N-terminal Kinase-mediated Signaling Is Essential for Staphylococcus Aureus-induced U937 Apoptosis

Objective To investigate the effect of SP600125, a specific c-jun N-terminal protein kinase （JNK） inhibitor, on Staphylococcus aureus （S. aureus）-induced U937 cell death and the underlying mechanism. Methods The human monocytic U937 cells were treated with S. aureus at different time with or without SP600125. Cell apoptosis was analyzed by flow cytometry. JNK, Bax, and caspase-3 activities were detected by Western blotting. Results S. aureus induced apoptosis in cultured U937 cells in a time-dependent manner. Expression of Bax and phospho-JNK significantly increased in S. aureus-treated U937 cells, and the level of activated caspase-3 also increased in a time-dependent manner. Inhibition of JNK with SP600125 significantly inhibited S. aureus-induced apoptosis in U937 cells. Conclusions S. aureus can induce apoptosis in U937 cells by phosphorylation of JNK and activation of Bax and caspase-3. SP600125 protects U937 cells from apoptosis induced by S. aureus via inhibiting the activity of JNK.     

INVOLVEMENT OF p38 MITOGEN-ACTIVATED PROTEIN KINASE IN E.Coli-INDUCED U937 APOPTOSIS

APOPTOSIS is a highly regulated and orderedprocess that plays a central role in elim inatingunnecessary cells in normal development andhomeostasis·1Increasing numbers of pathogens, includingE·coli, have been found to modulate host cell apoptosisand ther…     

丝裂原活化蛋白激酶在力达霉素抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用

目的: 研究力达霉素(LDM)对鼠骨髓瘤细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs) 信号传导通路的影响及MAPKs在LDM抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用,为LDM治疗人多发性骨髓瘤的研究提供依据。方法: 选取处于对数生长期鼠骨髓瘤细胞株SP2/0,随机分为空白对照组、4种不同浓度LDM组,采用Western blotting 方法检测各组细胞48 h后MAPK家族的三个主要成员c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)和p38 MAPK的表达水平。选取处于对数生长期SP2/0,随机分为对照组、LDM组、SP600125组(JNK抑制剂)、SB203580组(p38抑制剂)、U0126组(ERK抑制剂)、LDM+SP600125组、LDM+SB203580组和LDM+U0126组,采用MTS法和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。结果: 细胞培养48 h后,不同浓度LDM组JNK、ERK和p38 MAPK的表达水平高于空白对照组（P<0.05）;各抑制剂组细胞增殖率和细胞凋亡率与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),即对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均不明显;但LDM+SP600125组、LDM +SB203580组LDM对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均降低（P<0.05）,而LDM+U0126组LDM对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用则增强（P<0.05）。结论: LDM能够通过激活JNK、p38 MAPK抑制鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞增殖,诱导其凋亡。     

金葡菌对人巨噬细胞系U937细胞Fas/FasL表达的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡时Fas/FasL蛋白的表达及意义。方法当细胞∶细菌为1∶20时分别培养0,15,30,60和90min,采用Western blotting检测Fas/FasL蛋白的表达情况,应用SPSS10.0软件包对结果进行统计学分析。结果Fas/FasL蛋白的表达随着金葡菌感染时间的延长而增高。结论金葡菌能够上调Fas/FasL蛋白的表达,从而可以诱导U937细胞的凋亡。     

和厚朴酚对人白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响

 【目的】 探讨和厚朴酚(HNK)对白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响&#65377;【方法】 将U937细胞和正常外周血单核细胞分别与HNK共培养,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡形态,用噻唑蓝比色法(MTT)检测HNK对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测凋亡;罗丹明123检测线粒体膜电位;Caspase3/7活性检测试剂盒检测Caspase3/7活性;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Caspase-3&#65380;Caspase-7 mRNA水平变化&#65377;【结果】 HNK对U937的体外增殖有显著抑制作用,48 h半数抑制浓度(IC50)为11.8 μg/mL,而对正常外周血单核细胞的IC50为40.3 μg/mL,Annexin V/PI双标染色显示,细胞凋亡与和厚朴酚呈浓度和时间依赖相关&#65377;HNK明显降低U937细胞线粒体膜电位,增加Caspase3/7活性及mRNA表达水平,但对正常外周血单核细胞的增殖抑制和凋亡作用不明显&#65377;【结论】 HNK可能通过激活caspase-3/7抑制U937细胞增殖&#65380;诱导U937细胞凋亡&#65377;     

p38丝裂原活化蛋白激酶与c-Jun-N末端激酶信号通路反向调控血管紧张素Ⅱ诱导的人足细胞凋亡

目的:研究不同亚型的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),即p38MAPK、细胞外信号调节激酶(ERK)和cJun-N末端激酶(JNK)在血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)诱导的培养人体足细胞凋亡中的作用.方法:体外培养条件下,分别用ANGⅡ(10-8mol/L)或ANGⅡ与不同的MAPK抑制剂(SB02190、Pl98059、SP600125)处理人体足细胞;应用H-33342和碘化丙啶双染色形态学方法和DNA片段测定法检测细胞凋亡;应用Western印迹检测ANCⅡ刺激的MAPK活性改变.结果:ANGⅡ诱导足细胞凋亡呈时间和剂量依赖性;ANGⅡ刺激p38MAPK,而抑制JNK活性;p38MAPK抑制剂(SB202190)抑制ANGⅡ诱导的足细胞凋亡和p38MAPK活性;SP600125抑制JNK活性而促进了ANGⅡ诱导的足细胞凋亡.结论:ANGⅡ通过激活p38MAPK和抑制JNK活性诱导人体足细胞凋亡.     

JNK信号传导通路在星形胶质细胞缺氧/复氧后损伤的作用

目的 建立SD大鼠星形胶质细胞（astrocyte,AC）缺氧/复氧损伤模型,探讨JNK信号转导通路与星形胶质细胞损伤的关系.方法 体外培养新生SD大鼠星形胶质细胞,传至第3代,细胞自然纯化,实验设正常对照组（N）、SP600125组（SP组,10 μmol /L）、缺氧/复氧组（H/R组）和缺氧/复氧＋SP600125组（H/R＋SP组）.分别利用MTT法、AnnexinV/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染法、WB法检测缺氧8 h,复氧4、6、12、24 h时细胞存活率、凋亡率、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK（p-JNK）的变化.结果 ①缺氧/复氧后细胞活力出现明显下降,SP600125阻断JNK通路后细胞活力高于H/R组;②缺氧/复氧后细胞凋亡率增加,SP600125阻断JNK通路后能够减轻细胞凋亡.③各组AC的JNK水平无显著变化,缺氧/复氧干预后p-JNK表达上调,用SP600125阻断JNK通路后,H/R＋SP组较H/R组p-JNK水平降低.结论 JNK信号通路参与了星形胶质细胞缺氧/复氧损伤过程.