JAM3基因甲基化是食管鳞状细胞癌潜在的分子标志物

目的研究JAM3基因启动子区在食管癌中的甲基化情况及其表达调控机制,探讨JAM3基因启动子区异常甲基化作为食管鳞状细胞癌的潜在诊断标志物和治疗靶标。方法应用半定量RT-PCR、甲基化特异性PCR等技术对7个食管癌细胞系(KYSE140、KYSE150、KYSE410、KYSE450、COLO680N、KYSE520和TE13)、5例正常食管黏膜组织和83例原发性食管鳞状细胞癌组织进行分析。结果JAM3 mRNA在KYSE520、KYSE140、KYSE450细胞中高表达,这些细胞的JAM3基因启动子区呈非甲基化状态。JAM3 mRNA在KYSE410、COLO680N、TE13、KYSE150细胞中表达缺失,且其基因启动子区在这些细胞中呈完全甲基化。经过5-Aza-dc处理后,JAM3基因在KYSE410、COLO680N、TE13、KYSE150细胞中恢复表达。这些结果表明,JAM3在食管癌细胞中的表达受启动子区甲基化的调控。JAM3基因启动子区在5例正常食管黏膜组织中呈非甲基化状态(0/5),而在原发性食管鳞状细胞癌中其甲基化率为50.6%(42/83),且JAM3甲基化与肿瘤的位置相关(P<0.05)。结论JAM3在食管鳞状细胞癌中频繁发生甲基化,JAM3基因的表达受启动子区甲基化的调控,JAM3基因是潜在的食管癌诊断标志物和治疗靶标。     

CHD5基因在食管癌中的表观遗传学改变

目的:研究食管癌发病过程中染色质解旋酶DNA结合蛋白5(Chromodomain helicase DNA-binding protein5,CHD5)基因表观遗传学改变,探讨CHD5基因甲基化作为食管癌诊断标志物的可行性.方法:用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)检测72例食管癌组织及成对癌旁组织,9例正常食管黏膜组织及4株食管癌细胞系中CHD5基因的甲基化状态,并用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测CHD5基因在上述食管癌细胞系的表达.结果:69%(50/72)食管癌组织发生CHD5基因启动子区甲基化,32%(23/72)癌旁组织发生甲基化,差异具有统计学意义(χ2=20.254,P<0.05).9例食管正常组织未发生甲基化,2株食管癌细胞系中由于基因启动子区甲基化导致CHD5基因表达缺失,经5-aza-deoxycytidine处理96h后CHD5重新表达.结论:食管癌中CHD5基因频繁发生甲基化,表观遗传学改变是其基因表达的重要调节机制,CHD5基因甲基化有可能作为食管癌诊断的标志物.     

结肠癌分子治疗的靶：DNA甲基化和组蛋白乙酰化

ＤＮＡ甲基化和组蛋白乙酰化是哺乳类动物最重要的两种基因表达的后生调节方式。甲基化主要是指位于胞嘧啶－鸟嘌呤二核苷（ＣｐＧ）中的胞嘧啶为甲基基团所修饰。基因组中ＣｐＧ积聚的区域谓之“ＣｐＧ岛”。生理情况下，多数基因的ＣｐＧ岛是非甲基化的，而孤立的 ＣｐＧ则多半处于甲基化状态。基因的５’端（启动子区等）含有丰富的ＣｐＧ岛，其甲基化则基因表达受抑制。甲基化是由甲基化酶（ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＤＮＭＴ）１、３ａ和３ｂ催化形成的。 ＤＮＡ和组蛋白共同构成染色质。组蛋白主要有Ｈ３、Ｈ４、…     

表型遗传修饰对人结肠癌细胞周期和抑癌基因表达的调控

目的：分析和探讨同一结肠癌细胞系DNA甲基化和组蛋白乙酰化对抑癌基因表达和细胞周期的影响。方法：培养结肠癌细胞HT－29、SW1116和Colo-320，分别以去甲基化制剂5－氮脱氧胞苷（5－aza-dC）和（或）组蛋白脱乙酰化酶（HDAC）抑制剂trichostatinA(TSA)及丁酸盐干预细胞。提取基因组DNA和RNA，部分行甲基化特异性PCR（MSP）检测p16^INK4A基因启动子区甲基化情况；以RTPCR研究p16^INK4A和p^21WAF1 mRNA表达水平；同时以流式细胞仪分析SW1116和Colo-320细胞周期。结果：干预前，HT－29、SW1116和Colo-320三种结肠癌细胞系中均有较弱的p16^INK4A表达；SW1116和Colo-320细胞的p21^WAF1表达缺如，对于HT－29细胞，1μmol/L的5－aza-dC干预时则无显著改变。在SW1116和Colo-320细胞中，5－aza-dC干预后p16^INK4A表达增强，且以10μmol/L或5μmol/L浓度干预24h者为最明显，相反p21^WAF1仍无明显表达，该两个细胞系经TSA或丁酸盐使细胞阻滞于G1期。结论：三种人结肠癌细胞中，p16^INK4A基因的表达均受甲基化调节。SW1116和Colo-320细胞中p21^WAF1基因表达主要受乙酰化调节，在该两个细胞系中，乙酰化使细胞周期停滞于G1期。     

nm23-H1基因CpG岛甲基化与食管癌的关系

肿瘤细胞普遍存在DNA甲基化模式的改变,DNA甲基化异常包括原癌基因低甲基化和抑癌基因高甲基化。近年来研究结果表明,在食管癌发生过程中同样存在相关抑癌基因启动子区甲基化导致的基因表达的紊乱,其中由DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）和去甲基化酶的活性改变导致的抑癌基因CpG岛超甲基化的研究,已成为食管癌发病机制研究中的热点之一。     

DNA甲基化与组蛋白去乙酰化对人类白细胞抗原-B27基因表达调控的研究

目的 研究DNA甲基化酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂对人类白细胞抗原(HLA)-B27基因表达的调控作用.方法 构建表达Hela-B27启动子的Hela稳定转染细胞株,使用荧光素酶检测DNA甲基化酶抑制剂(5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)[丁酸钠(NaB),曲古霉素(TSA).丙戊酸(VPA)和Hydralazine]对HLA-B27启动子活性的影响,及其各种被抗炎症细胞因子抗体[抗肿瘤坏死因子(TNF)-α,抗干扰素(IFN)-β,抗IFN-γ,Infiximab]对其调节作用.然后使用5-Aza-CdR和HDACI培养表达HLA-B27基因组DNA的CCL6稳定细胞株,使用实时定量聚合酶链反应(PCR)技术检测HLA-B27 mRNA表达水平.结果 NaB和VPA可使HLA-B27启动子活性明显增高(24.0+1.7)倍和(17.4±2.2)倍(P＜0.05),且VPA和TNF-α,IFN-α,IFN-β,IFN-γ和佛波酯(PMA)对HLA-B27启动子活性有协同诱导作用.实时定量PCR结果显示NaB,TSA,VPA和5-Aza-CdR均可使HLA-B27 mRNA水平明显增加.结论 DNA甲基化与组蛋白去乙酰化可明显上调HLA-B27基因表达水平.     

叶酸对胃癌细胞生物学特征以及alkB基因表达的影响

背景:抑癌基因启动子区DNA超甲基化是胃癌发生的重要机制之一。alkB基因可修复甲基化损伤,而叶酸对胃癌的发生起有预防作用;但叶酸的作用是否与alkB基因表达相关尚不清楚。目的:探讨叶酸对胃癌细胞生物学特征以及alkB基因表达的影响。方法:培养人胃癌细胞株SGC7901,分别以0mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L和2.0mg/L浓度叶酸进行干预。以CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞术分析细胞周期,实时定量RT-PCR法检测alkB基因mRNA表达。结果:与空白对照组相比,0.2mg/L、0.4mg/L浓度叶酸能明显抑制胃癌细胞增殖活力,G0/G1期细胞百分比显著减少;alkB基因mRNA表达明显上调。结论:叶酸干预可抑制胃癌细胞增殖,同时上调alkB基因表达,推测alkB基因表达改变或许参与叶酸抑制胃癌细胞增殖的作用机制。     

食管鳞癌组织p16基因调控区甲基化及其蛋白表达研究

目的探讨p16基因在食管癌变过程中表达缺失与其启动子区甲基化的关系。方法采用MSP免疫组化方法,检测环太行山地区45例食管鳞癌患者癌组织p16基因启动子区甲基化状态及蛋白表达情况。结果p16基因在癌组织中表达异常41例（91．1％）,间变组织中表达异常38例（84．4％）,发生纯合型甲基化的组织分别为33例（73．3％）（癌组织）和32例（71．1％）（间变组织）,而其周围正常组织26例（57．8％）均发生了p16启动子区的杂合型甲基化。p16基因纯合型甲基化与癌组织、间变组织、p16蛋白表达缺失相关（P〈0．05）。结论该地区食管癌组织p16基因在癌前病变中p16启动子区即发生了纯合型甲基化、食管癌变的早期事件。p16基因启动子区甲基化可单独影响p16蛋白的正常表达。     

新疆哈萨克族食管癌中Cdc42基因启动子区甲基化与其mRNA表达改变的研究

目的研究新疆哈萨克族食管癌中Cdc42基因启动子区甲基化状态与其mRNA表达改变的关系。方法用RT—PCR方法测定mRNA表达,甲基化特异PCR方法检测DNA启动子区甲基化状态。结果在20例癌组织中,有16例表达阳性,占80％,20例癌旁组织中有13例表达,占65％,其中癌组织表达量明显高于癌旁组织的有10例,占50％,癌旁组织表达量高于癌组织的有5例,占25％。肿瘤组织和正常组织该基因启动子区见甲基化条带,未见非甲基化条带。结论Cdc42基因在肿瘤组织和正常组织均表现为高甲基化状态,新疆哈萨克族食管癌中Cdc42基因mRNA表达增强可能与该基因的甲基化状态没有直接关系,另存在其他机制,有待进一步研究。     

启动子区域甲基化对肺腺癌GPC5表达的调控作用及意义

目的 研究启动子区域CpG岛的甲基化对肺腺癌细胞GPC5表达的调节作用.方法 在线预测GPC5启动子区域CpG岛的分布,合成甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation specific polymerase chain reaction,MSP)引物,甲基化酶特异性抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞嘧啶核苷(5-AZA)处理肺腺癌细胞系A549、SPC-A1及永生化支气管上皮细胞HBE,检测处理前后GPC5表达的变化.同时用MSP方法检测肺腺癌组织标本中GPC5基因启动子区域CpG岛甲基化情况,以探讨其可能的临床意义.结果 GPC5在正常的支气管上皮中不表达,而在肺腺癌细胞系中均有明显表达.5-AZA处理后,GPC5在A549及SPC-A1中的表达均上调,提示启动子区域CpG岛的甲基化参与了GPC5基因表达的调节.但肺腺癌组织标本中GPC5基因启动子区域CpG岛呈现低甲基化状态,提示这种低甲基化状态参与了肺腺癌细胞中GPC5表达的上调.结论 GPC5基因启动子区域的甲基化参与了其表达的调控,可能是导致肺腺癌中GPC5上调的一个重要因素.