心脉通胶囊对急性心肌缺血大鼠心肌cNOS mRNA表达的影响

目的探讨心脉通胶囊对实验性大鼠急性心肌缺血的预防效果及与一氧化氮(NO)的相关机制.方法应用垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血模型,测定其心室肌组织一氧化氮合酶(cNOS)mRNA的表达,结果用积分光密度(IOD)表示.结果急性心肌缺血组大鼠心室肌组织cNOSmRNA的表达为20.8±4.1,明显低于正常对照组56.5±12.0,差异非常显著(P<0.01);心肌缺血前使用心脉通胶囊组的心室肌组织cNOSmRNA的表达为38.2±8.0,高于急性心肌缺血组(P<0.05),但仍低于正常对照组(P<0.05).结论心脉通胶囊可能通过提高心室肌组织表达cNOSmRNA,进而使NO产生增加,达到改善心肌缺血的作用.     

强迫游泳大鼠海马组织5-羟色胺受体mRNA的表达

目的探讨强迫游泳大鼠海马组织中5-羟色胺（5-HT1A）受体激活物抑制因子-1（1mRNA）的表达。方法随机将雄性Wistar大鼠分为对照组、1d应激组、14d应激组和28d应激组,建立强迫游泳应激模型。用化学发光法测定血清皮质醇浓度,用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测海马5-HT1A受体mRNA的变化。结果（1）对照组、1d应激组、14d应激组和28d应激组血清皮质醇浓度分别为（0．64±0．09）μg／dL、（1．14±0．19）μg／dL（1．98±0．40）μg／dL、（0．95±0．14）μg／dL。（2）强迫游泳大鼠海马5HT1A受体mRNA表达相对水平分剐为1．501±0．257、1．141±0．120、0．681±0．056,与对照组相比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论强迫游泳大鼠海马中5-HT1A受体mRNA表达降低。     

麦地参肾消胶囊对实验性糖尿病大鼠肾组织AGEsmRNA表达的影响

目的：通过观察麦地参肾消胶囊对实验性糖尿病大鼠肾组织局部AGEsmKNA影响，探讨麦地参肾消胶囊防治糖尿病肾病的可能作用机制。方法：以STZ60mg／kg腹腔注射复制大鼠糖尿病肾病模型，灌胃8周后，原位杂交法观察各组大鼠肾组织AGEsmKNA表达的变化。结论：麦地参肾消胶囊可显著降低实验性DN大鼠肾组织局部AGEsmKNA的表达。     

p53凋亡刺激蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 研究分析p53遗传背景不同的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株中p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族的表达和调节,以及在NSCLC诊断和化疗监测中的临床意义.方法 用实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR检测NSCLC细胞株A549(野生型)和NCI-H157(突变型)及37例肺癌患者组织与外周血单个核细胞中ASPP1、ASPP2 mRNA表达,免疫印迹技术检测NSCLC细胞株ASPP1、ASPP2蛋白含量.同时,检测2株细胞对顺铂(CDDP)的敏感性以及化疗药物处理后ASPP1、ASPP2mRNA表达变化.此外,还比较NSCLC患者与37名健康对照者ASPP1、ASPP2 mRNA表达情况,并监测NSCLC患者化疗前后ASPP1、ASPP2 mRNA表达变化.结果 FQ-RT-PCR检测ASPP标准品曲线斜率均值分别为-3.249、-3.358,r＞0.98,标准曲线的扩增效率分别为1.156、1.028;CDDP处理后NCI-H157细胞株的IC_(50)值是3.70μg/ml,A549的IC_(50)是10.48μg/ml.NCI-H157细胞株中ASPP1,ASPP2 mRNA平均表达量比A549分别高2.66倍和6.98倍.肺癌患者组织和外周血单个核细胞中ASPP1 mRNA表达分别为(4.27 ±0.57)×10~3和(2.49±0.32)×10~3,ASPP2 mRNA表达分别为(2.34±0.75)×10~3和(7.00±1.17)×10~3,而健康对照组组织和外周血单个核细胞中ASPP1 mRNA 表达分别为(1.32±0.21)×10~4和(1.46±0.31)×10~4,ASPP2 mRNA表达分别为(1.38±0.19)×10~4和(1.28±0.18)×10~4.肺癌组中ASPP1和ASPP2 mRNA明显低于健康对照组(t值分别为2.58、3.94、3.62、3.76,P均＜0.05).NSCLC组中18例患者术后化疗前ASPP1和ASPP2 mRNA分别为(2.34±0.56)×10~3和(6.64±0.72)×10~3,进行2个周期化疗后分别为(3.66±0.64)×10~3和(9.42±0.44)×10~3,基因表达量均明显升高(t值分别为3.02、4.50,P均＜0.05).结论 NSCLC突变型细胞株ASPP1和ASPP2 mRNA的表达均高于野生型细胞株,ASPP1和ASPP2表达升高有可能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.NSCLC患者化疗过程中,ASPP1和ASPP2 mRNA表达的变化可能与化疗药物作用有关,提高ASPP1、ASPP2的表达将有助于肿瘤的治疗.     

胃肠道肿瘤患者血浆组织因子的含量和mRNA的表达

目的 探讨血浆中组织因子（Tissue factor,TF)的检测对胃肠道肿瘤患者的临床意义。方法 采用ELISA法测定32例胃癌、45例直肠癌患者和30例政治空血浆中TF,并应用逆转录-聚合酶链反应（PT-PCR）检测这些患者和政治空外周血单核细胞中的mRNA。结果 两组消化道肿瘤患者血浆中的TF均远远高于正常组,与病理分级并无相关性。采用RT-PCR法在大部分肿瘤患者单核细胞中可检测到TFmRNA,但在正常组中均不能检测到。结论 肿瘤患者血浆中TF升高可能有是由于单核细胞合成增加所致,检测TF在血浆中的水平和其mRNA的表达将有助于研究肿瘤发生发展的机制。     

实验性急性心肌梗死心肌细胞凋亡与p53和Bcl－2基因mRNA表达的研究

目的　探讨p5 3和Bcl- 2基因在实验性急性心肌梗死 (AMI)心肌细胞凋亡中的作用。方法　用TUNEL法检测 48只兔AMI模型梗死区的心肌细胞凋亡 ,用以cDNA为内参标的逆转录 聚合酶链反应 (RT -PCR)的方法检测其心肌细胞内p5 3和Bcl- 2基因mRNA表达量 ,并探讨它们之间的相互关系。结果　TUNEL法发现兔梗死区心肌细胞凋亡千分率在冠脉结扎前( 0h)和结扎后 1h、 2h、 3h、 4h、 6h、 8h、 12h的改变如下 :0h组和 12h组 <1h组 <2h组和 8h组<3h组 <4h组 (P均 <0 0 5 ) ;p5 3基因mRNA表达量依次为 :冠脉结扎后 4h组 >结扎后 6h组>结扎后 3h组 >结扎后 2h组 >未结扎 ( 0h)组和结扎后 1h组、 8h组、 12h组 (P均 <0 0 5 ) ;且梗死区心肌细胞凋亡数与其内p5 3mRNA表达量对数值之间成明显的正相关性 (r为 0 930 0 ,P<0 0 0 1)。Bcl- 2基因mRNA表达量 :冠脉结扎后 3h组、 4h组和 6h组 <结扎后 2h组、 8h组 <结扎后 1h组和未结扎 ( 0h)组 <结扎后 12h组 (P均 <0 0 5 ) ;且梗死区心肌细胞凋亡数分别与其内Bcl- 2mRNA表达量的对数值成明显的负相关性 (r为 - 0 8732 ,P <0 0 0 1) ;p5 3和Bcl- 2基因mRNA表达量的对数值之间亦呈明显的负相关性 (r=- 0 96 49,P <0 0 0 1)。结论　急性心肌梗死时心肌细胞存在明显的凋     

以cDNA为内参标RT-PCR定量检测心肌细胞内p53和Bcl-2基因mRNA表达量的方法研究

目的 :探讨 p5 3和 Bcl 2基因在急性心肌梗死时心肌细胞中 m RNA表达量的检测方法。方法 :用以c DNA为内参标的逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 p5 3和 Bcl 2基因的 m RNA表达量。结果 :p5 3基因 m RNA表达量〔m RNA/总 RNA(ng/ g)〕依次为 :冠脉结扎后 4小时组 (5 76 4 8.78± 19776 .96 ) ng/ g>结扎后 6小时组 (339.0 6± 10 4 .11) ng/ g>结扎后 3小时组 (16 5 .4 4± 33.36 ) ng/ g>结扎后 2小时组 (88.2 5±16 .6 5 ) ng/ g>未结扎 (0 )组 (3.16± 0 .6 9) ng/ g和结扎后 1小时组 (16 .37± 2 .73) ng/ g、8小时组 (2 3.13±7.0 3) ng/ g、 12小时组 (6 .75± 2 .86 ) ng/ g,P均 <0 .0 5 ;Bcl 2基因 m RNA表达量〔m RNA/ g总 RNA(ng/ g)〕:冠脉结扎后 3小时组 (4.5 3± 1.5 9) ng/ g、 4小时组 (0 .0 2± 0 .0 1) ng/ g和 6小时组 (3.4 6±0 .39) ng/ g<结扎后 2小时组 (5 2 .4 8± 14 .18) ng/ g、8小时组 (5 9.2 4± 2 .91) ng/ g<结扎后 1小时组 (77.2 0±12 .4 8) ng/ g和未结扎 (0小时 )组 (81.77± 9.6 2 ) ng/ g<结扎后 12小时组 (99.6 0± 4 .71) ng/ g,P均 <0 .0 5。该种方法能对不同的样本检出不同量的 m RNA含量 ,其特异性强 ,且能检出 0 .0 2 ng/ g的 m RNA含量 ,敏感性高。结论     

高血糖对大鼠肾皮质葡萄糖转运蛋白1 mRNA表达的影响

【摘要】目的探讨葡萄糖转运蛋白1（glucosetransporter1,GLUT1）在糖尿病。肾病（diabeticnephropathy,DN）发病机制中的作用。方法将36只Wistar大鼠随机分为对照组10只、高血糖组及2型糖尿病组各13只,分别采用腹腔内注射链脲佐菌素及高脂饮食加腹腔内注射链脲佐菌素方法制备高血糖及2型糖尿病模型。10W末实验结束后,取大鼠肾皮质,同时检测大鼠体重、肾重、肾重百分比,血清BUN;采用逆转录聚合酶链反应半定量分析肾皮质GLUT1 mRNA的表达。结果高血糖组大鼠的体重显著降低,肾重、肾重百分比、BUN、FPG和ISI水平均高于2型糖尿病组及对照组．差异均有统计学意义（P〈0．05）。而FINS的水平低于2型糖尿病组及对照组,差异亦均有统计学意义（P均〈0．05）。高血糖组和2型糖尿病组GLUTlmRNA在‘肾皮质中的表达均显著高于对照组．且高血糖组GLUT1mR．NA在肾皮质的表达显著高于2型糖尿病组（P均〈0．05）。结论GLUT1在肾皮质中有表达．高血糖可以上调肾皮质GLUT1表达,GLUT1可能与DN的发病相关。     

肺癌组织中MDR1mRNA、P-gp和p53的表达及相关性研究

肿瘤耐药是肿瘤化疗失败的主要原因 ,也是导致肿瘤术后复发、转移、死亡的一个间接因素 ,目前对肿瘤耐药机制的研究主要集中在多药耐药基因 (ＭＤＲ) ,谷胱苷肽转移酶π(ＧＳＴ π) ,拓扑异构酶Ⅱ (Ｔｏｐ Ⅱ )和多药耐药基因相关蛋白(ＭＲＰ) ,ＭＤＲ最具代表性 ,研究最为广泛。本文应用原位杂交ＧｅｎｅＰｏｉｎｔ法和免疫组化ＥｎＶｉｓｉｏｎ法 ,分别从ｍＲＮＡ和蛋白水平定位 6 0例各型肺癌组织 ,并探讨与ｐ5 3蛋白表达的相关性。1　材料与方法1 1　组织标本　 6 0例肺癌组织标本为我校附院 1996～ 1998年胸外科手术切除标本 ,其中 2 0…     

大鼠脊髓横断早期比目鱼肌重量与肌球蛋白重链亚型mRNA表达的变化

目的观察大鼠脊髓横断后早期比目鱼肌重量及肌球蛋白重链（MHC）各亚型mRNA表达的变化规律.方法 40只雌性Wistar大鼠随机分为对照组（10只）与脊髓横断7 d组（ST7）、15 d组（ST15）、30 d组（ST30）,各10只,脊髓横断水平T8～T10.分别于横断后7、15、30 d取后肢比目鱼肌称重,采用半定量RT-PCR方法观察MHC各亚型mRNA表达的变化.结果脊髓横断各组比目鱼肌重量均较对照组下降（P＜0.05）.ST15、ST30组比目鱼肌绝对与相对重量均较ST7组下降（P＜0.05）.对照组比目鱼肌只表达MHC-Ⅰ与MHC-Ⅱa,脊髓横断各组在横断7 d后出现MHC-Ⅱx与MHC-Ⅱb的表达,横断后各时间点MHC-ⅠmRNA的表达持续下调;MHC-Ⅱa与MHC-Ⅱx mRNA的表达持续上调;MHC-Ⅱb mRNA的表达维持在低水平.结论脊髓横断主要在早期影响肌肉的重量;脊髓横断后MHC的表达发生由慢型向快型的转化,MHC随神经肌肉活动的减少表现出可塑性.     

乙型肝炎患者外周血B淋巴细胞CD5 mRNA表达水平的研究

目的 建立CD5 mRNA的逆转录聚合酶链反应（RTP－PCR)测定法，探讨外周血B淋巴细胞CD5 mRNA水平与乙型肝炎慢性化和严重化的关系。方法 运用RT－PCR技术，建立了B淋巴细胞中CD5基因mRNA表达水平的半定量测定方法，对急、慢性乙型肝炎和肝炎后肝硬化患者进行了研究。结果 急性乙型肝炎患者组外周血B淋巴细胞中CD5 mRNA的水平与正常对照组无显著性差别，其余各乙型肝炎患者组均显著高于对照组。且肝炎后肝硬化组＞慢性乙型肝炎组＞急性肝炎组（P＜0．01）。结论 外周血B淋巴细胞CD5 mRNA水平与乙型肝炎的发病和慢性化发展密切相关。     

光动力疗法对鼻咽癌细胞Bax mRNA表达和凋亡的影响

目的：探讨光动力疗法（PDT）对鼻咽癌细胞（NPC）Bax mRNA表达和凋亡的影响。方法：体外培养的NPC细胞,分别在PDT作用12、24、36和48h后用电镜动态观察分析细胞凋亡现象和凋亡指数,同时采用逆转录－聚合酶链反应技术（CT－PCR）检测Bax mRNA的表达情况。结果：PDT作用12、24、36和48h后NPC细胞凋亡指数分别为6．7％、71．6％、86．4％和98．3％,同时Bax mRNA表达检测发现。各对照组NPC细胞仅可见Bax mRNA扩增产物,实验组NPC细胞Bax mRNA表达均呈阳性,随PDT作用时间延长而逐渐增强,而者结果呈现一致。结论：PDT体可诱导鼻咽癌细胞凋亡,细胞凋亡指数上升与凋亡相关基因Bax mRNA表达上调有关。     

野生型p53诱导的磷酸酶1在甲状腺滤泡状癌中的表达及意义

目的 探讨野生型p53诱导的磷酸酶1(Wip1)在甲状腺滤泡状癌中的表达及其临床意义.方法 采用蛋白印迹法和逆转录聚合酶链反应,分别检测37例(男22例,女15例;年龄29～ 74岁,中位年龄53岁)甲状腺滤泡状癌组织及距其癌组织边缘5 cm以上的镜下未见癌浸润的正常组织中Wip1蛋白、mRNA的表达情况.结果 Wip1蛋白和mRNA在甲状腺滤泡状癌组织及正常甲状腺组织中的表达量分别为0.763±0.089、0.355±0.047和0.533±0.087、0.286±0.039,较正常甲状腺组织明显升高(t值分别为6.521、4.362,P均＜0.05).结论 甲状腺滤泡状癌组织中Wip1蛋白和mRNA的表达均升高,可能与甲状腺滤泡状癌的发生、发展相关.     

肾癌患者外周血中Pax-2 mRNA检测对控制微转移的意义

目的由于 Pax-2对肾细胞癌具有较高特异性,可以作为肾细胞癌的一种肿瘤标志物,因此探讨 Pax-2在肾细胞癌患者外周血中的表达及其对微转移的意义. 方法用 RT-PCR法检测 25例患者外周血中的 Pax-2 mRNA表达,以 10例其他肿瘤患者和 5例健康人为阴性对照,以β-actin为内对照. 结果 19例患者外周血中有 Pax-2 mRNA的表达(阳性率为 76%),其他肿瘤和正常人中有 1例表达 Pax-2 mRNA(阳性率为 6.7%),差异有显著性(χ 2=18.027,P< 0.01). Pax-2 mRNA的表达与肿瘤分类、临床分期无相关性(χ 2=3.206,3.181,P >0.05). 结论外周血中 Pax-2 mRNA的检测可以较敏感地检测到血液中肾癌细胞 ,有助于早期诊断肾细胞癌及其微转移,从而改善患者的预后,提高生活质量.     

不同强度的耐力运动对糖尿病大鼠骨骼肌 GLUT4 mRNA表达的影响

目的探讨不同强度的耐力运动对糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4 mRNA表达的影响.方法雄性SD大鼠,其中36只大鼠经尾静脉注射链脲霉素,建立糖尿病模型.然后随机分为低强度运动组(EL)、高强度运动组(EH)、低强度运动加胰岛素治疗组(LI)、高强度运动加胰岛素治疗组(HI)、胰岛素治疗非运动组(DI)和非胰岛素治疗非运动组(DM).6只SD大鼠为非运动正常血糖组(CN).耐力训练采用活动平板,胰岛素采用皮下注射,共8周.运用RT-PCR法测定骨骼肌GLUT4 mRNA.结果DM组骨骼肌GLUT4 mRNA表达水平显著低于其它各组(P＜0.05).LI组骨骼肌GLUT4 mRNA表达水平明显增高接近CN组,并且显著高于DI组.DI组GLUT4 mRNA含量与EL、EH、HI各组相当,差异无显著性意义.结论运动可以促进GLUT4 mRNA的表达,而运动强度对GLUT4 mRNA表达量无显著影响;低强度运动加胰岛素所具有最佳的GLUT4 mRNA表达水平是其它单独干预措施所无法替代的.     

载脂蛋白-J mRNA在实验性急性脑出血大鼠脑内的表达

目的:探讨载脂蛋白J(Apo-J)在大鼠脑出血急性期的脑内表达及其可能的作用机制。方法:SD大鼠54只,制备脑出血模型,随机分为对照组、假手术组及脑出血后3h组、6h组、12h组、1d组、3d组、5d组和7d组。检测各组的脑含水量,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测Apo-J mRNA的含量。结果:各组均有Apo-J mRNA表达,但脑出血后各组手术侧表达明显增加(P<0.01),尤其是3d组,与脑含水量呈正相关。结论:大鼠脑出血后Apo-J mRNA表达增加,并与脑水肿程度呈正相关,推测Apo-J起细胞保护作用的可能性大。     

高糖对脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的 观察高糖对脐静脉血管内皮细胞生长因子(VEGF)信使核糖核酸(mRNA)表达的影响.方法 胰酶消化法制备人脐静脉内皮细胞并传代培养,取生长良好的第2、3代细胞进行实验.用不同浓度葡萄糖(0 mmol/L、5.5mmol/L、11 mmol/L、22 mmol/L、44 mmol/L)作用48 h,并选取22 mmol/L葡萄糖分别作用0 h、24 h、48 h、72 h、96 h,观察VEGF mRNA的变化.结果 脐静脉VEGF mRNA的表达随高糖浓度的增加也逐渐增加(P＜0.05),至22 mmol/L达到最高峰,44 mmol/L时下降;在22 mmol/L葡萄糖作用下,随着作用时间的延长,VEGF mRNA水平逐渐增加(P＜0.01),但当作用72 h时VEGF mRNA水平不再升高.结论 高血糖本身可引起脐静脉内皮细胞VEGF mRNA表达的增加,且在一定范围内呈时间和剂量依赖性.     

人外周血心肌肌钙蛋白ⅠmRNA对心肌微小损伤的诊断和监测价值

背景：心肌收缩系统中肌钙蛋白-原肌球蛋白复合物所含的心肌特异蛋白,正在替代肌酸激酶同工酶而作为急性心肌损伤早期诊断的黄金标准.目的：建立分析外周血心肌肌钙蛋白ImRNA的方法,并评价对心肌损伤诊断的临床价值.设计：建立心肌肌钙蛋白ImRNA分析方法,重复观察测量.单位：南通大学附属医院心血管内科.材料：实验于2003-05/2004-05在南通大学附属医院临床分子生物学中心完成.建立了反转录聚合酶链反应分析外周血心肌肌钙蛋白-mRNA方法,并经临床应用证实为心肌损伤诊断及微小损伤监测的灵敏基因标志.方法：以普通病理染色和电镜分别观察心肌损伤时的病理学和超微结构改变,并从外周血中制备总mRNA,经随机引物和反转录酶作用合成心肌肌钙蛋白IcDNA,再分别以巢式PCR扩增心肌肌钙蛋白IcDNA片段,并分析其在心肌损伤中的临床价值.主要观察指标：心肌损伤组织超微结构改变、检测方法灵敏度与诊断价值.结果：心肌损伤组织超微结构表现为心肌线粒体肿胀、嵴断裂、严重空泡样变及细胞核异形变、染色质浓缩边聚.巢式聚合酶链反应扩增心肌和外周血中心肌肌钙蛋白ImRNA片段,检测方法的灵敏度为2μg/L,并经DNA测序分析.心肌肌钙蛋白ImRNA存在于血浆而非有核细胞;在慢性心脏病患者中心肌肌钙蛋白ImRNA阳性率,明显高于酶学检测和心肌肌钙蛋白Ⅰ定性（P＜0.05）.结论：外周血心肌肌钙蛋白ImRNA检测是心肌损伤诊断和监测的敏感标志物.