胶质瘤中hsa-miR-20a的表达及对细胞增殖的影响

摘要：目的探讨hsa-miR-20在胶质瘤中的表达情况及对胶质瘤细胞增殖的影响。方法应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反
应方法检测正常脑组织和不同级别脑胶质瘤组织中miR-20a的表达情况;脂质体转染miR-20a模拟物后,通过MTT比色法及流
式细胞术观察胶质瘤U251 细胞增殖的变化。结果（1）与正常脑组织相比,胶质瘤组织miR-20a 的表达水平显著增高（P=
0.035）;（2）胶质瘤组织恶性程度越高,miR-20a表达越高（P<0.001）;（3）U251细胞转染miR-20a模拟物后,增殖能力明显加快,S
期细胞比例明显增多（P<0.001）。结论miR-20a能促进胶质瘤细胞的增殖,其高表达在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用。
     

上调microRNA-34a抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭

目的 探讨microRNA-34a(miR-34a)在胶质瘤组织中的表达情况以及对人脑胶质瘤细胞系U251增殖及侵袭的影响.方法 选取川北医学院附属医院2013年3月至2017年3月胶质瘤组织标本30例和重症脑外伤需行手术者正常脑组织标本10例作为研究对象,采用荧光定量PCR法检测miR-34a在胶质瘤组织表达情况.体外实验,将人工合成的miR-34a模拟物miR-34a mimic转染至U251细胞系,采用荧光定量PCR、MMT、Transwell法检测miR-34a在U251细胞系中表达以及对U251细胞增殖和侵袭能力的影响.依据细胞转染情况,分为Control组(不转染任何基因)、Mock组(转染miRNA-neg序列)和miRNA-34 a mimic组(转染miRNA-34a mimic序列).结果 miRNA-34a在人脑胶质瘤组织中相对表达水平为(0.35±0.07),低于正常人脑组织的(1.00±0.13),差异有统计学意义(P<0.05);转染后,荧光定量PCR结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组miRNA-34a相对表达水平分别为(1.00±0.08)、(0.98±0.11)和(6.19±0.34),miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义(P<0.05);MMT结果显示,在不同时间点,miRNA-34a mimic组U251细胞增殖抑制率高于Control组、Mock组,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组侵袭细胞数分别为(90.53±5.84)个、(88.21±5.04)个和(27.46±2.76)个,miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论miR-34a在胶质瘤组织中表达下调,上调miR-34a表达可抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭.     

miR-638通过靶向调控Notch 4促进神经胶质瘤细胞的侵袭能力

目的 研究微小RNA-638(miR-638)在恶性胶质瘤中的表达,探讨miR-638在胶质瘤细胞侵袭过程中的作用及可能机制.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测正常神经组织、胶质瘤组织、正常胶质细胞株、胶质瘤细胞株中miR-638的表达水平;Transwell实验检测分别转染miR-638模拟物和miR-638抑制物后U251细胞侵袭水平的改变;生物信息学预测和验证miR-638对Notch 4的靶向调控关系;构建Notch 4真核表达重组质粒(pCMV-Notch 4 cDNA)过表达U251细胞中的Notch 4表达水平,并检测U251细胞侵袭水平的改变.结果 miR-638在胶质瘤组织和细胞株中表达上调,而Notch 4在胶质瘤细胞中表达下调,两者表达呈负相关性;过表达miR-638使U251细胞的侵袭细胞数上升(P<0.01),而抑制miR-638表达后U251细胞的侵袭细胞数减少(P<0.01);miR-638在U251细胞中能直接靶向抑制Notch 4的表达,提升Notch 4在U251细胞中的表达能使侵袭细胞数减少(P<0.01).结论 miR-638在胶质瘤中高表达,其可能通过靶向抑制Notch 4的表达促进胶质瘤细胞的侵袭能力.     

MiR-586对胶质瘤细胞增殖及周期的影响

目的探讨miR-586对胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测miR-586在非肿瘤脑组织（NBT）及胶质母细胞瘤组织中的表达。同时检测miR-586在人正常星形胶质细胞（NHA）及4株胶质瘤细胞株（U87、U251、T98、LN229）中的表达。在胶质瘤细胞株中通过转染miR-586 inhibitor下调miR-586的表达后,采用CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞术检测胶质瘤细胞周期阶段。结果 miR-586在胶质母细胞瘤组织中表达显著比非肿瘤脑组织中高（P<0.001）;在胶质瘤细胞系中,U87中的表达显著升高（P<0.01）。CCK-8实验结果显示:U87细胞转染miR-586 inhibitor后细胞增殖能力显著下降（P<0.01）。此外,miR-586 inhibitor转染U87后诱导细胞周期阻滞在G0/G1期（P<0.01）。结论 miR-586在胶质瘤组织和细胞中高表达,抑制miR-586的表达可以抑制胶质瘤细胞增殖并诱导细胞周期阻滞。     

miR-105联合MMP-2预测脑胶质瘤术后复发的临床价值分析

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与微小RNA (miR)-105对胶质瘤细胞侵袭、迁移和凋亡的影响,及二者预测术后复发的价值。方法:选取2018年7月至2021年7月我院手术切除的89例脑胶质瘤组织及配对的瘤旁组织,RT-PCR检测miR-105表达水平;免疫组化法检测MMP-2表达。用Logistic和受试者工作特征(ROC)曲线分析MMP-2、miR-105预测脑胶质瘤术后复发的价值。选取脑胶质瘤细胞株U251,分别转染空白质粒、miR-105质粒、MMP-2质粒、miR-105和MMP-2质粒。CCK-8法检测细胞增殖;Transwell法检测U251细胞侵袭;划痕实验检测细胞迁移;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:胶质瘤组织中miR-105表达水平低于瘤旁组织,而MMP-2高于瘤旁组织(P<0.05)。MMP-2与miR-105均是脑胶质瘤术后复发的独立影响因素(P<0.05)。miR-105、MMP-2单一及联合检测预测术后复发的ROC曲线下面积(AUC)依次为0.735、0.797、0.894。miR-105可以抑制U251细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进凋...     

miRNA-210在人脑胶质瘤中表达的临床意义及其生物学效应的探究

目的:探究微小核糖核酸-210(miRNA-210)在脑胶质瘤患者组织中表达特征和其临床意义,以及其对胶质瘤细胞增殖侵袭能力的影响。方法:收集我院神经外科收治的42例脑胶质瘤及20例良性脑膜瘤患者病变组织,实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测患者组织中miRNA-210表达水平并采用Kaplan-Meier生存分析比较其与患者预后的关系。利用体外转染小干扰RNA(siRNA)技术干扰人脑胶质瘤细胞U251的miRNA-210表达,MTT法检测细胞增殖能力变化,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力变化。结果:miRNA-210在29例高级别脑胶质瘤中的表达高于13例低级别脑胶质瘤及20例良性脑膜瘤的表达(P<0.05);Kaplan-Meier生存曲线示高表达miRNA-210的患者预后较低表达的患者不良(P<0.05);成功转染siRNA至U251细胞中,干扰组U251细胞(U251simiR-210)miR-210表达相比对照细胞(U251control)显著下降,U251simiR-210细胞在72h时MTT溶液相对吸光度显著低于U251control细胞,U251simiR-210细胞穿透基质膜细胞数也显著少于U251control细胞。结论:miRNA-210的表达与脑胶质瘤恶性程度及患者预后密切相关,其可促进胶质瘤细胞的增殖侵袭能力,是脑胶质瘤中重要的促癌基因。     

沉默lncRNA RNF185-AS1通过靶向miR-637/HMGA1抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)RNF185-AS1调控微小RNA-637(miR-637)对胶质瘤细胞增殖、侵袭的作用机制。方法 通过GEPIA数据库在线分析胶质瘤组织和癌旁组织中RNF185-AS1的表达水平。qRT-PCR检测胶质瘤细胞系(SNB-19、LN382、U87MG、U251)和脑星型胶质正常细胞HEB中RNF185-AS1的表达水平。以U251细胞为研究对象,分别转染sh-Con对照质粒(sh-Con组)和sh-RNF185-AS1质粒(sh-RNF185-AS1组)。qRT-PCR验证RNF185-AS1的沉默效率。MTT实验和Transwell侵袭实验检测沉默RNF185-AS1后U251细胞增殖活力和侵袭情况。qRT-PCR与双荧光素酶报告基因实验检测RNF185-AS1和miR-637的靶向关系。qRT-PCR和Western blot检测高迁移率族蛋白A1(HMGA1)基因的表达。结果 胶质瘤组织中RNF185-AS1的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01)。胶质瘤细胞系中RNF185-AS1的表达水平明显高于脑星型胶质正常细胞(P<...     

miR-105-5p调控CDC5L表达对胶质瘤细胞增殖迁移的影响

目的:分析微小RNA-105-5p(miR-105-5p)通过调控细胞分裂周期蛋白5样蛋白抗体(CDC5L)对胶质瘤细胞增殖、迁移的影响。方法:收集本院35例经手术治疗的人脑胶质瘤组织及因脑外伤行减压术的正常脑组织样本。取对数生长期U251细胞,分为对照(control)组、转染miR-105-5p阴性对照(miR-NC)组、转染miR-105-5p模拟物(miR-105-5p mimics)组、转染沉默CDC5L阴性对照(si-NC)组、转染沉默CDC5L(si-CDC5L)组、共转染miR-105-5p mimics及pcDNA(pcDNA)组以及共转染miR-105-5p mimics及pcDNA-CDC5L(miR-105-5p mimics+pcDNA-CDC5L)组。qRT-PCR检测胶质瘤组织、正常脑组织及各组U251细胞中miR-105-5p及CDC5L mRNA的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移;Western blot法检测CDC5L、细胞周期蛋白(CyclinDl)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9及细胞周期蛋白依赖性激...     

miR-106a对胶质瘤增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨微小RNA（miR）-106a对人胶质瘤细胞中腺瘤样息肉（APC）基因的靶向调控作用以及对细胞增殖和凋亡的影响。方法 收集2020年1月至2021年12月浙江省立同德医院减压切除的10例胶质瘤组织和10例对照组织。采用实时荧光定量PCR法检测miR-106a在胶质瘤组织和对照脑组织中、在胶质瘤LN229、U251和U87等细胞系中的表达水平并作比较。使用miR-106a抑制物转染LN229和U251细胞,采用克隆形成实验检测细胞增殖能力,通过流式细胞术检测细胞凋亡水平。通过TOP/FOP荧光素酶实验检测荧光素酶活性,采用Western blot法检测Wnt通路相关蛋白和核内β-连环蛋白（β-catenin）的表达。采用qRT-PCR和Western blot法检测APC的mRNA和蛋白表达水平。利用双荧光素酶报告基因实验确认miR-106a和APC的靶向关系。通过表型拯救实验检测miR-106a靶向APC对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。结果 miR-106a在胶质瘤组织和细胞系中高表达。抑制miR-106a表达降低胶质瘤细胞的增殖水平,提高胶质瘤细胞的凋亡水平,并抑制了Wnt/...     

干扰miR-21表达抑制胶质瘤U251细胞增殖迁移与侵袭

目的 探讨干扰miR-21表达对胶质瘤细胞U251增殖、迁移和侵袭的影响。方法使用脂质体将miR-21抑制物(人工合成干扰miR-21表达的核苷酸片段,miR-21处理组)以及对照组转染于U251细胞,利用qRT-PCR验证miR-21处理组转染的细胞中miR-21表达水平;通过MTT法、细胞划痕、transwell等实验观察miR-21处理组和对照组对U251细胞增殖迁移和侵袭的影响。结果miR-21 处理组中miR-21的表达量明显下调。即转染miR-21 抑制剂能有效降低U251细胞中miR-21的表达。miR-21 处理组的 U251细胞与对照细胞相比,增殖速度明显下降,差异具有显著性。细胞划痕实验显示干扰miR-21抑制U251细胞迁移能力。Transwell侵袭实验结果显示,miR-21 处理组的U251细胞的侵袭能力较对照组细胞明显下降。结论miR-21能促进胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力,它可能在胶质瘤的发生和进展中发挥重要作用。     

MicroRNA-34a inhibits human brain glioma cell growth by down-regulation of notch1

The effects of microRNA-34a (miR-34a)-regulated Notch1 gene on the proliferation and apoptosis of the human glioma cell line U87 were investigated in this study. The U87 cells were divided into miR-34a mimics, negative control, mock transfection and blank control groups in terms of different treatments. In miR-34a mimics group, human U87 glioma cells were transfected with miR-34a mimics by using lipofectamine 2000. The cells transfected with nonsense microRNA were set up as negative control group. Those treated with lipofectamine 2000 only were designated to the mock tranfection group. In the blank control group, the cells were cultured routinely and no treatment was given. The expression of miR-34a and Notch1 was detected by using real-time RT-PCR. Western blotting was employed to monitor the change in Notch1 protein. Cell proliferation and apoptosis were measured by CCK-8 and flow cytometry. The results showed that the proliferative ability of U87 cells was significantly reduced and the apoptotic cells increased in miR-34a mimics group relative to control groups. The expression of miR-34a was significantly up-regulated in mimics group as compared with control groups (P<0.05). Furthermore, Notch1 protein levels were significantly decreased in miR-34a mimics group when compared with control groups (P<0.05), but the mRNA expression of Notch1 showed no significant difference among these groups. It was concluded that miR-34a may suppress the proliferation and induce apoptosis of U87 cells by decreasing the expression of target gene Notch1, suggesting that miR-34a may become a promising gene therapeutic target for brain glioma.     

miR-18b-5p调控WWOX对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的研究miR-18b-5p对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测癌旁组织和胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达,MTT法和流式细胞术检测胶质瘤U251细胞增殖和凋亡率,Western blotting检测包含WW域的氧化还原酶基因（WWOX）、Cyclin D1、p21、Bax和Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-18b-5p和WWOX的调控关系。结果与癌旁组织相比,胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达量升高（P < 0.01）。抑制miR-18b-5p表达可以抑制胶质瘤U251细胞增殖并促进细胞凋亡;miR-18b-5p靶向负调控WWOX的表达;过表达WWOX可抑制U251细胞增殖并诱导细胞凋亡;抑制WWOX表达逆转了抑制miR-18b-5p表达对U251细胞增殖、凋亡的影响（P < 0.01）。结论miR-18b-5p可能通过靶向调控WWOX表达抑制胶质瘤U251细胞增殖并诱导细胞凋亡,miR-18b-5p是胶质瘤潜在的分子靶点。     

MiR-9在人神经胶质瘤中调节CBX7的表达

目的检测CBX7在人神经胶质瘤中的表达,研究人神经胶质瘤中异常表达的microRNA对CBX7的可能调控作用。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测2例正常脑组织、9例胶质瘤组织和3株胶质瘤细胞系中CBX7mRNA和蛋白水平的表达变化。结合Miranda和改良的机器学习法预测调控CBX7的miRNA。采用real-time PCR检测上述组织和细胞系中miR-9的表达,然后在细胞中过表达或敲低miR-9,结合荧光素酶实验和Western blot检测miR-9对CBX7表达的影响。采用MTT实验和流式细胞术分析miR-9敲低后对T98G细胞生长的影响。结果在胶质瘤组织和细胞系中,CBX7的mRNA水平改变不明显,而蛋白水平却明显下调。生物信息学预测CBX7可能受包括miR-9在内的多个miRNAs调控。与正常组织相比,miR-9在胶质瘤中表达明显增高。在293ET细胞中,过表达miR-9能抑制CBX7-3UTR报告基因活性。在T98G细胞中,敲低miR-9可增加CBX7-3UTR报告基因活性,对内源性CBX7的mRNA水平无明显影响,但使CBX7蛋白表达增加。敲低miR-9后,T98G存活细胞数增加,而且G1期细胞数比对照组明显减少。结论由于受到miR-9转录后水平的抑制,CBX7在人神经胶质瘤中表达下调甚至缺失。     

阿托伐他汀抑制脑胶质瘤细胞的增殖和促进凋亡：基于上调miR-146a表达与抑制PI3K/Akt信号通路

目的 探究阿托伐他汀（AVT）对人脑胶质瘤细胞生物学行为的影响及其对miR-146a/PI3K/Akt信号通路的作用。方法 将人脑胶质瘤细胞U251分为4组：对照组（Conrtrol）、AVT组、AVT+转染miR-146a无关片段组（AVT+miR-146a NC）、AVT+转染miR-146a干扰组（AVT+miR-146a inhibitor）。Control组不加任何药物,AVT组加入8.0 μmol/L 的AVT,AVT+miR-146a NC组转染miR-146a NC后加入8.0 μmol/L 的AVT,AVT+miR-146a inhibitor组转染miR-146a inhibitor后加入8.0 μmol/L 的AVT。RT-PCR检测miR-146a表达,MTT检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移情况,Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果 药物干预48 h,与Control组相比,AVT组细胞miR-146a表达、细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）,细胞增殖率、侵袭指数、迁移指数、p-PI3K和p-Akt蛋白表达均明显降低（P<0.01）。与AVT组相比,AVT+miR-146a inhibitor组细胞miR-146a表达、细胞凋亡率均明显降低（P<0.01）,细胞增殖率、侵袭指数、迁移指数、p-PI3K 和p-Akt蛋白表达均明显升高（P<0.01）,AVT+miR-146a NC组上述指标无显著性差异（P>0.05）。结论 AVT能够抑制人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡,其机制与上调miR-146a表达,抑制PI3K/Akt信号通路相关。     

lncRNA SNHG30基因敲除通过抑制PHF5A表达影响胶质瘤U251细胞增殖

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)SNHG30基因敲除对胶质瘤U251细胞增殖能力的影响及可能的机制。 方法根据人源SNHG30基因序列特征构建px330-sgRNA质粒并转染U251细胞。采用PCR方法和测序鉴定筛选敲除SNHG30基因的U251细胞株。通过GEPIA2网站分析SNHG30在胶质瘤中的表达情况,CCK-8检测SNHG30敲除对U251细胞增殖的影响,使用CYTOSCAPE软件进行关键基因PHF5A分析并进行qRT-PCR验证。 结果成功获得一株SNHG30基因完全敲除的U251细胞株。SNHG30在胶质瘤组织中高表达,而SNHG30基因敲除U251细胞株的增殖能力和PHF5A的表达量降低。 结论lncRNA SNHG30基因敲除的U251细胞株增殖能力下降,可能与其抑制PHF5A的表达有关。     

siRNA沉默肿瘤坏死因子α诱导蛋白2表达对胶质瘤细胞侵袭及增殖的影响*

目的 探讨沉默肿瘤坏死因子α诱导蛋白2（TNFAIP2）表达对胶质瘤细胞侵袭及增殖的影响。方法 使用Lipofectamine 2000介导siRNA转染胶质瘤细胞U87和U251下调TNFAIP2 mRNA的表达;运用细胞划痕及Transwell实验检测沉默TNFAIP2表达对U87及U251细胞迁移、侵袭的影响;通过CCK-8实验检测沉默TNFAIP2表达对胶质瘤细胞U87及U251增殖的影响。结果 Lipofectamine 2000介导si-TNFAIP2转染U87及U251细胞可下调TNFAIP2 mRNA的表达;沉默TNFAIP2表达可降低胶质瘤细胞U87和U251迁移侵袭的能力;沉默TNFAIP2表达可抑制U87及U251细胞的增殖。结论 siRNA沉默TNFAIP2表达可抑制胶质瘤细胞的侵袭和增殖。     

MiR-26b通过下调COX-2表达抑制神经胶质瘤的增殖、侵袭和迁移

目的：观察不同级别神经胶质瘤中miR-26b和环氧化酶(COX)-2的表达情况,研究miR-26b对于神经胶质瘤 细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：运用Western印迹和实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测不同级别神经胶质瘤中 miR-26b和COX-2的表达情况;使用miR-26b mimic转染人神经胶质瘤细胞U87,上调miR-26b的表达;qRT-PCR检测miR- 26b mimic转染后miR-26b和COX-2 mRNA的表达变化情况;双荧光素酶报告基因系统检测miR-26b对COX-2转录活性的 影响;使用Transwell侵袭实验检测miR-26b对人神经胶质瘤细胞U87侵袭能力的影响;使用划痕实验检测miR-26b对人 神经胶质瘤细胞U87迁移能力的影响;使用CCK-8(cell counting kit-8)检测miR-26对人神经胶质瘤细胞U87增殖能力的影 响;裸鼠体内成瘤实验检测过表达miR-26b后胶质瘤细胞成瘤能力的变化。结果：随着神经胶质瘤肿瘤级别的增加, miR-26b表达明显降低(P<0.05),而COX-2明显增加,差异有统计学意义(P<0.001);双荧光素酶实验证实miR-26b可以 直接靶向调控COX-2的蛋白表达水平;使用miR-26b mimic明显上调miR-26b的表达(P<0.05);上调miR-26b可以显著降 低COX-2的表达(P<0.05);上调miR-26b可以抑制神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力(P<0.05)。实验组和对照组相 比肿瘤的质量和体积都变小。结论：随着神经胶质瘤肿瘤级别的增加,miR-26b表达逐渐降低,而COX-2表达逐渐增 加。miR-26b可通过抑制COX-2表达从而抑制神经胶质瘤的增殖、侵袭和迁移。     

双氢青蒿素通过下调NICD-1抑制胶质瘤生长

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinine,DHA)对人神经胶质瘤生长的影响及机制.方法 人胶质瘤U251细胞株传代培养,设置空白对照组、二甲基亚砜(DMSO)组、DAPT组和DHA(10、20、40、80 μmol/L)实验组,应用CCK-8和FCM检测细胞增殖、周期及凋亡,Western blot检测Notch1的胞内区域(NICD-1)及其下游靶蛋白Hes1的表达水平.建立裸鼠皮下胶质瘤模型(n=20),按随机数字表法分为DMSO组、DAPT组、DHA(50、100 mg/kg)治疗组,每组5只,根据时间体积曲线计算各组抑瘤率,免疫组化法检测裸鼠皮下移植瘤组织中NICD-1表达水平变化.结果 与空白对照组和DMSO组相比,实验组U251细胞增殖率显著下降,G1期细胞所占百分比显著上升,S期细胞所占百分比显著下降,早期凋亡率显著上升(P＜0.05),NICD-1及Hes1蛋白表达水平显著低于空白对照组(P＜0.05),均呈浓度依赖关系;DHA各治疗组的裸鼠皮下移植瘤生长速率及移植瘤组织内NICD-1表达显著低于DMSO对照组(P＜0.05).结论 DHA有效抑制人神经胶质瘤的生长,其作用机制可能与通过下调NICD-1表达抑制Notch信号通路有关.