C反应蛋白对人外周血来源内皮祖细胞Notch信号通路表达影响的实验研究

摘要：目的观察C反应蛋白(CRP)对内皮祖细胞(EPC)中Notch信号通路表达的影响。方法密度梯度离心法获取人外周血单个
核细胞并培养,FITC-荆豆凝集素I、DiI-乙酰化低密度脂蛋白荧光双染进行鉴定。取生长7~14 d EPC,分为对照组、10 和
20 mg/L CRP干预组,培养48 h后分别采用四氮唑溴盐比色法、改良的Boyden小室和黏附能力检测各组EPC增殖、迁移和粘附
能力。采用RT-PCR 检测不同浓度CRP 对EPC 中Notch 信号通路mRNA的影响,Western blot 检测各组Notch-1 及其配体
Jagged-1 的蛋白基因表达。结果外周血分离获取的单个核细胞经体外培养后形成了典型的EPC集落,经荧光双染证实为
EPC。CRP(10、20 mg/L)组EPC数量分别为(61±3)、(54±3)个,对照组EPC数量为(71±4)个。CRP各组EPC在490 nm吸光度值
分别为0.287±0.046、0.211±0.042,对照组为0.386±0.044。与对照组相比,CRP各组EPC黏附数量和迁移数量均显著减少（P<
0.05）。CRP处理48 h 后EPC中Jagged-1 和Notch-1 mRNA含量明显增加,其中10 和20 mg/L组Jagged-1 mRNA分别升高了
3.84 和10.70 倍,Notch-1 mRNA 分别升高了2.97 和3.58 倍;差异均具有统计学意义(P<0.05)。10 和20 mg/L CRP 处理组
Jagged-1和Notch-1蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结论CRP处理后EPC的Notch信号通路表达发生了显著的改变,提示该
通路可能是CRP影响EPC生物学功能的机制之一。
     

Notch信号通路对大鼠肝纤维化作用及药物干预价值

目的 研究Notch信号转导通路受体Notch-1、配体Jagged-1及下游因子Hes-1的表达及在大鼠肝纤维化发生、发展中的作用,并探讨扶正化瘀方干预的价值。方法 雄性Wistar大鼠58只,随机分为对照组、模型组、药物组3组。以四氯化碳(CCL4)制备大鼠肝纤维化模型,自造模始药物组即以扶正化瘀方溶液灌胃给予早期干预,8周实验结束后将大鼠处死,取部分组织行苏木精-伊红染色评价肝纤维化程度,采用实时荧光定量PCR方法监测Notch信号转导通路的受体Notch-1、配体Jagged-1及下游因子Hes-1的mRNA表达。结果 模型组肝组织表面可见颗粒状结节、汇管区假小叶形成及肝实质结构紊乱。药物组大鼠肝纤维化程度较模型组减轻。3组Jagged-1、Notch-1、Hes-1的mRNA表达比较差异有显著性(F=332.398~872.015,P<0.001);与对照组相比,模型组肝组织各因子mRNA表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,药物组大鼠肝组织各因子的表达明显下降(P<0.05)。结论 Notch信号转导通路可能全程参与肝纤维化的发生、发展及转归过程,而扶正化瘀方可通过抑制Notch信号转导通路下调Hes-1基因而抑制肝纤维化进展。     

肾细胞癌组织中Notch信号途径蛋白表达水平的检测及其意义

目的：检测人肾细胞癌（RCC）组织中Notch信号途径相关蛋白的表达水平，探讨Notch信号途径分子与人RCC发生发展的关系。方法：手术方法获得6例经病理检查诊断为RCC组织标本，采用Western blotting法检测RCC组织和癌旁组织中Notch信号通路受体、配体蛋白表达水平。结果：与癌旁组织比较，RCC组织中Notch信号的受体Notch-1以及配体Jagged-1的表达水平均明显降低(P<0.05），受体Notch-2及配体Jagged-2表达水平均明显升高(P<0.05）。结论：RCC中Notch信号途径蛋白表达水平发生了明显的变化，Notch信号途径可能参与了RCC的发生发展过程。     

γ分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的观察γ分泌酶抑制剂MW167阻断Notch信号对肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法正常氧条件下培养肺腺癌细胞A549,通过Western blotting及RT-PCR方法检测Notch受体各亚型的表达。在正常氧条件下,不同浓度(5、10、20μmol/L)MW167处理肺腺癌细胞A549(加药组),48 h后采用Western blotting方法检测Notch1蛋白表达的变化,采用RT-PCR方法检测Notch信号通路下游基因HES1mRNA表达的变化,应用MTT法检测MW167对细胞增殖的影响;每个浓度设二甲基亚砜对照组。结果 Notch1～4各亚型在A549细胞均有表达。5、10、20μmol/L MW167处理肺腺癌A549细胞48 h后,各加药组与对照组相比,Notch1蛋白表达升高(P<0.05),而HES1 mRNA表达下降(P<0.05),随MW167浓度升高,对HES1 mRNA表达的抑制率逐渐升高(r=0.927,P<0.01)。MTT法检测结果显示各加药组吸光度高于对照组(P<0.05),且随MW167浓度升高,细胞增殖率相应升高(r=0.904,P<0.01)。结论在正常氧条件下,MW167可阻断Notch信号通路,对A549细胞起促增殖作用;Notch1信号通路可能在A549细胞中起一定抑癌作用。     

Notch-1及Jagged-2基因在肛门直肠畸形大鼠直肠发育过程中的表达及意义

目的 检测Notch-1及Jagged-2基因在肛门直肠畸形(ARM)胎鼠直肠肠壁的胚胎发育过程中的表达变化,探讨其与肠壁神经肌肉发育的关系.方法 应用免疫组化和Western blot方法检测正常与乙烯硫脲致畸的ARM胎鼠直肠末端组织Notch-1及Jagged-2蛋白的定位及定量表达,应用RT-PCR方法检测Notch-1及Jagged-2基因mRNA的表达差异.结果 Notch1/Jagged-2在正常大鼠胚胎直肠发育过程中,在肠壁肌间神经丛(MP)、肠壁平滑肌及黏膜层均有表达,随着胚胎发育,表达强度逐渐增强,胚胎晚期主要集中在肠壁平滑肌及神经丛处;ARM组E17～E21表达均较正常组减弱,E19-E21表达与正常组差异更为显著.正常胎鼠直肠末端壁内中Notch-1及Jagged-2总蛋白量及mRNA明显高于畸形组(P＜0.05).结论 Notch-1/Jagged-2基因在肛门直肠畸形的神经肌肉发育过程中表达下调,可能与其发育不良有一定关系.     

伊伐布雷定对心肌梗死大鼠心肌细胞Notch和 NF-κB信号通路的影响

目的:探讨伊伐布雷定(IVA)对心肌梗死大鼠心肌细胞Notch和NF-κB信号通路的影响。方法:采用结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,将存活大鼠随机分为模型组(MI组,n=8)和治疗组(IVA组,n=8)。以相同部位穿线但不结扎冠状动脉左前降支的大鼠作为对照组(CON组,n=8)。IVA给药28 d。检测所有大鼠血流动力学和心功能指标:心率(HR)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MAP)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)和左室内压最大上升和下降速率(±dp/dt);左室重量指数、左室截面直径和心肌梗死面积;RT-PCR检测大鼠心肌细胞Notch信号通路成分mRNA的表达水平(Notch-1、Dll-4、Hes-1);Western-blot检测DICD-1蛋白和P65蛋白表达水平。组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK法。结果:MI组SBP、 DBP、MAP、LASP、LVEDP和±dp/dt均低于对照组(P<0.05);而IVA上述指标均高于MI组(P<0.05)。MI组左室重量指数和左室截面直径明显大于对照组(P<0.05),但小于IVA组(P<0.05)。MI组Notch-1 mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.05),但低于IVA组(P<0.05)。3组Dll-4和Hes-1 mRNA表达水平的比较差异无统计学意义(P>0.05)。MI组心肌细胞NICD-1蛋白和P65蛋白表达水平明显高于CON组(P<0.05),但是低于IVA组(P<0.05)。结论:IVA可能通过Notch和NF-κB信号通路发挥改善心肌梗死大鼠心功能和抑制心室重构的作用。     

醒脑解郁方对卒中后抑郁大鼠海马组织中Notch/Hes信号通路功能的影响

目的探讨醒脑解郁方对卒中后抑郁(PSD)大鼠海马组织中Notch/Hes信号通路功能的影响。方法将80只健康雄性无特定病原体级Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、百忧解组和醒脑解郁方组,每组20只。模型组、百忧解组和醒脑解郁方组大鼠采用大脑中动脉线栓法制备大鼠脑缺血模型,再给予多种慢性不可预见性刺激制备抑郁症模型;对照组大鼠不予任何干预。PSD模型制备完成后,对照组和模型组大鼠给予生理盐水2.5 m L灌胃,百忧解组大鼠给予百忧解1.8 mg·kg-1溶于2.5 m L生理盐水中灌胃,醒脑解郁方组大鼠给予醒脑解郁方150.0 mg·kg-1溶于2.5 m L生理盐水中灌胃,均为每日1次,连续灌胃28 d。药物干预第19、28天,每组各选择10只大鼠立即处死,分离海马组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应法和Western blot法检测海马组织中Notch和Hes mRNA及蛋白表达水平,采用膜片钳技术检测Notch信号通路开放概率、电流幅度、开放时间和关闭时间。结果药物干预第19、28天,模型组、百忧解组和醒脑解郁方组大鼠海马组织中Notch和Hes蛋白及mRNA表达显著高于对照组(P<0.05),百忧解组和醒脑解郁方组大鼠海马组织中Notch和Hes蛋白及mRNA表达显著高于模型组(P<0.05),醒脑解郁方组大鼠海马组织中Notch和Hes蛋白及mRNA表达显著高于百忧解组(P<0.05)。对照组大鼠第28天海马组织中Notch和Hes蛋白及mRNA表达与第19天比较差异均无统计学意义(P>0.05);模型组、百忧解组和醒脑解郁方组大鼠第28天海马组织中Notch和Hes蛋白及mRNA表达显著高于第19天(P<0.05)。药物干预第19、28天,模型组、百忧解组和醒脑解郁方组大鼠海马组织中Notch信号通路开放概率、电流幅度显著高于对照组,开放时间显著长于对照组,关闭时间显著短于对照组(P<0.05);百忧解组和醒脑解郁方组大鼠海马组织中Notch信号通路开放概率、电流幅度显著高于模型组,开放时间显著长于模型组,关闭时间显著短于模型组(P<0.05);醒脑解郁方组大鼠海马组织中Notch信号通路开放概率、电流幅度显著高于百忧解组,开放时间显著长于百忧解组,关闭时间显著短于百忧解组(P<0.05)。对照组大鼠第19、28天海马组织中Notch信号通路开放概率、电流幅度、开放时间及关闭时间比较差异均无统计学意义(P>0.05);模型组、百忧解组和醒脑解郁方组大鼠第28天海马组织中Notch信号通路开放概率、电流幅度显著高于第19天,开放时间显著长于第19天,关闭时间显著短于第19天(P<0.05)。结论醒脑解郁方能够介导PSD大鼠海马组织中Notch/Hes信号通路活化,从而有效促进神经功能恢复。Notch/Hes信号通路有望成为药物作用的重要靶点。     

芦荟大黄素调控Notch-1/Akt/NF-κB信号通路对胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响

目的:观察芦荟大黄素调控Notch-1/AKT/NF-κB信号通路对胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法:实验分为对照组(正常培养SGC-7901细胞)、芦荟大黄素低剂量组(SGC-7901细胞+芦荟大黄素10 mg·L^-1)、芦荟大黄素中剂量组(SGC-7901细胞+芦荟大黄素30 mg·L^-1)及芦荟大黄素高剂量组(SGC-7901细胞+芦荟大黄素50 mg·L^-1)。噻唑蓝比色法检测各组细胞培养后的增殖抑制率;Transwell小室检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-APC/7-AAD双染法检测细胞凋亡情况;Western blot法检测Notch-1/AKT/NF-κB信号通路蛋白及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达。结果:与对照组比较,芦荟大黄素低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞增殖抑制率升高(P<0.05),细胞穿膜个数和划痕闭合率明显降低(P<0.05),G0/G1期肿瘤细胞比例增加(P<0.05),细胞凋亡AI值升高(P<0.05),Notch-1、p-Akt、P65、Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值降低,Bax表达升高(P<0.05)。结论:芦荟大黄素可能通过阻滞SGC-7901细胞在G0/G1期,抑制其增殖能力,降低迁移和侵袭能力,并通过抑制Notch-1/AKT/NF-κB信号通路起到诱导细胞凋亡作用。     

γ分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对肝癌细胞增殖的影响

[目的]探索γ分泌酶抑制剂MW167阻断Notch信号通路对肝癌细胞增殖的影响。[方法]通过Western blotting和RT-PCR方法检测Notch受体各亚型的表达。用不同浓度(5、10、20μmol/L)MW167处理肝癌细胞,48h后用Western blotting法检测Notch各蛋白的表达,采用RT-PCR法检测Notch信号通路下游基因HES1 mRNA表达,MTT法测定细胞增殖。[结果]HepG2细胞中可检测到Notch1~4蛋白和mRNA的表达。不管是与培养基对照还是DMSO对照相比,不同浓度MW167对Notch1~4蛋白的表达没有显著影响。与相应浓度的对照组相比,MW167处理组HES1 mRNA表达下降(P<0.05)。随着MW167处理浓度升高,HES1 mRNA表达抑制率逐渐升高(P<0.05)。MTT法检测结果显示,MW167处理的细胞,其吸光度高于对照组(P<0.05),且随着MW167浓度的升高,细胞增殖率相应升高。[结论]HepG2细胞中可检测到Notch1~4蛋白和mRNA的表达,MW167处理可降低HES1 mRNA表达,MW167处理可促进细胞的增殖。     

血管内皮生长因子促进少突胶质前体细胞增殖及其机制的初步研究

目的观察不同浓度血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对少突胶质前体细胞(oli-godendrocyte precursor cells,OPCs)增殖的影响,探索VEGF促进OPCs体外增殖与Notch信号通道上相关蛋白的关系。方法分离纯化培养OPCs,MTT法检测不同浓度VEGF(50、100、200 ng/ml)促进OPCs增殖的作用以及加入Notch通路γ-分泌酶抑制剂DAPT(VEGF 100 ng/ml+DAPT50μmol/ml)后OPCs增殖变化情况,RT-PCR、Western blot技术检测VEGF处理OPCs后Notch信号通道上Notch-1、Hes-1的基因表达和蛋白表达情况。结果 50、100、200 ng/ml VEGF处理组的细胞增殖率分别为(107±2)%、(124±2)%、(142±7)%,与空白对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);VEGF+DAPT处理组的增殖率下降至(103±4)%(P<0.05)。RT-PCR及Western blot分析显示VEGF处理OPCs后,Notch-1、Hes-1蛋白在基因水平和蛋白水平表达均增加(P<0.05),γ-分泌酶抑制剂DAPT能抑制其表达(P<0.05)。结论 VEGF对OPCs具有促进增殖的作用,其促增殖作用与Nocth信号通路相关蛋白有关。     

Akt-eNOS信号通路介导去甲肾上腺素调节内皮祖细胞动员

目的：探讨去甲肾上腺素（NE）对小鼠内皮祖细胞（EPCs）增殖能力、迁移能力及从骨髓动员的影响,并分析其分子机制。方法取8周大C57小鼠随机分为3组,各5只,分别为：空白对照组（皮下注射生理盐水,无手术）,模型组（皮下注射生理盐水,左下肢肢体缺血）,NE组（皮下注射NE 100μmol／100μL ,左下肢肢体缺血）。采用小鼠左下肢股动脉结扎术制备肢体缺血模型,微渗泵持续泵入NE ,流式细胞仪检测小鼠骨髓、外周血和脾脏中EPCs ;培养人外周血EPCs ,用 NE刺激,检测 EPCs的增殖和迁移能力,以及Akt‐eNOS信号通路的激活情况。结果 NE能够促进肢体缺血小鼠骨髓EPCs的动员,增加外周血和脾脏的EPCs ,NE组与模型组比较,骨髓[（3．271±0．772）％ vs ．（1．320±0．256）％]、外周血[（0．261±0．041）％ vs ．（0．110±0．028）％]和脾脏[（4．671±0．345）％ vs ．（1．880±0．0．381）％]EPCs均增加,差异均有统计学意义（P＜0．01）。NE能促进EPCs的增殖和迁移能力,且能够呈浓度依赖性地激活EPCs内的Akt‐eNOS信号通路。结论 NE通过Akt‐eNOS促进EPCs的迁移和增殖,以及在小鼠骨髓中的动员。     

系统性硬皮病患者外周血内皮祖细胞数量和功能的研究

目的：测定系统性硬皮病患者外周血中的内皮祖细胞（endothelial progenitors cells,EPCs）数量和增殖、迁移、黏附功能,探讨EPCs在其发病中的作用。方法：系统性硬皮病患者和健康者各20例。密度梯度离心法分离外周血单个核细胞并培养,流式细胞仪检测CD133^＋、CD34^＋或CD133^＋、VEGFR2^＋双荧光标记的EPCs数。MTT比色法、Millicell小室和黏附能力测定实验分别检测EPCs的增殖、迁移和黏附能力。结果：系统性硬皮病患者外周血EPCs数为（0．10±0．09）％,健康对照组为（0．49±0．09）％,P〈0．01,系统性硬皮病患者外周血EPCs数较健康者减少。实验组外周血EPCs增殖、迁移和黏附能力分别为（13．01±4．33）％、（7．20±3．67）个／视野和（15．20±4．40）个／视野,健康对照组分别为（23．28±4．34）％、（14．15±2．98）个／视野和（24．80±3．58）个／视野,两组比较,P值均〈0．01,实验组EPCs增殖、迁移和黏附能力均较对照组有所下降。结论：系统性硬皮病患者外周血EPCs数量减少,增殖、迁移和黏附功能降低,可能参与了系统性硬皮病的发病。     

ERK1/2介导去甲肾上腺素对内皮祖细胞的功能调节

目的：探讨去甲肾上腺素（NE）对内皮祖细胞（EPCs）增殖和迁移能力的调节作用及其分子机制。 方法:将培养的健康成人外周血EPCs用不同浓度的NE、肾上腺受体拮抗剂或者MAPK信号通道阻滞剂干预,检测内皮祖细胞的增殖和迁移能力,以及Erk 1/2信号通路的激活情况。结果:NE浓度依赖性地促进EPCs的增殖能力（相对于对照组,0.01μM组EPCs增加48.3±23.3%,0.1μM组增加了70.5±35.6%、1μM组增加了82.4±14.9%,10μM组增加了100.3±48.1%,100μM组增加了53.6±16.5%）。α受体拮抗剂酚妥拉明（43.1±7.3% VS 48.5±9.0%）、选择性β2肾上腺受体拮抗剂I127（32.9±4.4% VS 29.3±5.8%）和ERK1/2 抑制剂A6355（-14.4±3.2% VS-9.0±11.4%）能够阻断NE的刺激效应,而β1受体拮抗剂美托洛尔（64.0±9.1% VS 109.6±7.0%, p < 0.05）、JNK抑制剂SP600125（-24.3±9.7% VS 48.6±40.7%, p < 0.05）和p38抑制剂PD169318（-1.5±9.8% VS 73.8±21.8%, p < 0.05）不能阻断。NE10μM显著促进EPCs的迁移（124.1±12.2 / 高倍视野 VS 71.7±19.6 / 高倍视野, p < 0.05）,酚妥拉明10μM（57.2±14.3 / 高倍视野）和I127 10μ（61.3±11.5 / 高倍视野）能够阻断这种作用,而美托洛尔10μM（112.8±26.0 / 高倍视野）不能。NE能够浓度依赖性地激活EPCs 内的Erk 1/2,而酚妥拉明和I127能够阻断Erk 1/2激活,而美托洛尔不能。结论：NE通过α和β2肾上腺受体激活Erk 1/2促进EPCs的迁移和增殖。     

C-reactive protein decreases interleukin-8 production in human endothelial progenitor cells by inhibition of p38 MAPK pathway

Background C-reactive protein （CRP） has been reported to damage the vascular wall by inducing endothelial dysfunction and inflammation, and it is also speculated to have a role in attenuating angiogenic functions of human endothelial progenitor cells （EPCs）. Interleukin-8 （IL-8） is an important mediator of the paracrine mitogenic effect of EPCs which has direct angiogenic effects on mature endothelial cells. We, herein, investigated the direct effect of CRP on IL-8 production and gene expression in cultured human EPCs. Methods EPCs were isolated from the peripheral venous blood of healthy male volunteers. Cells were cultured in EndoCultTM liquid medium in the absence and presence of CRP at clinically relevant concentrations （5 to 25 μg/ml） for different durations （3 to 48 hours）. IL-8 protein and mRNA of cultured EPCs were evaluated using ELISA and real-time PCR. Results The results showed that CRP at a concentration of 10 μg/ml significantly reduced IL-8 secretion of cultured EPCs with a peak at 25 μg/ml, and also decreased mRNA expression in EPCs with a peak at 12 hours. In addition, preincubation of EPCs with SB203580, an inhibitor of p38 mitogen-activated protein kinase （MAPK） decreased CRP inhibition of IL-8 mRNA expression at 12 hours in EPCs. Conclusions Our study, for the first time, demonstrates that CRP directly inhibits EPCs IL-8 secretion, a key cytokine player of angiogenesis induced by EPCs. Inhibition occurred in part via an effect of CRP to active the p38 MAPK signal transduction pathway in EPC. The ability of CRP to inhibit EPCs IL-8 secretion may represent an important mechanism that further links inflammation to cardiovascular disease.     

黄芪甲苷改善人内皮祖细胞生物学功能的实验研究

目的探讨黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对人内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物学功能的影响,为深入研究AS-Ⅳ调节EPCs介导的血管新生的作用机制奠定基础。方法取足月健康新生儿脐带血,采用密度梯度离心法分离得到单个核细胞,经传代培养,采用CD31抗体联合DAPI核染以及FITC-UEA-I和Dil-ac-LDL双荧光染色法鉴定EPCs。将鉴定成功的EPCs随机分为实验组和对照组,实验组采用100 mg/L的AS-Ⅳ干预,对照组用等容量的PBS液处理,两组细胞培养24 h后,通过CCK-8细胞增殖检测试剂盒、黏附能力测定试验、细胞划痕试验及Matrigel体外成血管试验观察AS-Ⅳ对EPCs增殖、黏附、迁移和成管功能的影响。结果与对照组相比,实验组细胞增殖的OD值增大,细胞黏附数增多,细胞迁移宽度增加(即细胞迁移率增大),体外成管数增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪甲苷能改善体外人EPCs的生物学功能,具有调节EPCs介导血管新生的潜能。     

氯吡格雷对人早期内皮祖细胞黏附、迁移及增殖功能的影响

目的探讨氯吡格雷对人早期内皮祖细胞(EPCs)黏附、迁移及增殖功能的影响。方法体外培养人外周血早期EPCs并进行鉴定;将含不同浓度(1×10-3～200×10-3mmol.L-1)氯吡格雷的培养液与EPCs共培养24 h,检测黏附、迁移及增殖功能;应用含浓度为20×10-3mmol.L-1氯吡格雷的培养液与EPCs共培养0.5～72.0 h,检测EPCs上述功能。结果培养EPCs第4天,早期EPCs呈典型长梭形;培养EPCs第7天数目增多,可摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白以及FITC标记的荆豆凝集素。氯吡格雷可使细胞明显增多;不同浓度的氯吡格雷可改善其黏附(F=56.54,P=0.00)、迁移(F=60.23,P=0.00)和增殖(F=1.45,P=0.16)功能;氯吡格雷浓度为20×10-3mmol.L-1时,保护作用最强;当共培养不同时间后,其仍可改善EPCs黏附(F=127.03,P=0.00)、迁移(F=96.03,P=0.00)和增殖(F=10.46,P=0.00)功能;保护作用呈时间依赖性,但于24 h后达到平台期。结论氯吡格雷可改善人外周血早期EPCs的黏附、迁移及增殖功能,且具有浓度依赖性和时间依赖性。     

Carbon Monoxide Releasing Molecule Accelerates Reendothelialization after Carotid Artery Balloon Injury in Rat

Objective This study was aimed to investigate the effects of carbon monoxide releasing molecule (CORM-2), a novel carbon monoxide carrier, on the reendothelialization of carotid artery in rat endothelial denudation model.
Methods Male rats subjected to carotid artery balloon injury were treated with CORM-2, inactive CORM-2 (iCORM-2) or dimethyl sulfoxide (DMSO). The reendothelialization capacity was evaluated by Evans Blue dye and the immunostaining with anti-CD31 antibody. The number of circulating endothelial progenitor cells (EPCs) was detected by flow cytometry. The proliferation, migration, and adhesion of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were assessed by using [3H]thymidine, Boyden chamber and human fibronectin respectively. The expressions of protein were detected by using western blot analysis.
Results CORM-2 remarkably accelerated the re-endothelialization 5 d later and inhibited neointima formation 28 d later. In addition, the number of peripheral EPCs significantly increased in CORM-2-treated rats than that in iCORM-2 or DMSO-treated rats after 5 d later. In vitro experiments, CORM-2 significantly enhanced the proliferation, migration and adhesion of HUVECs. The levels of Akt, eNOS phosphorylation, and NO generation in HUVECs were also much higher in CORM-2 treated group. Blocking of PI3K/Akt/eNOS signaling pathway markedly suppressed the enhanced migration and adhesion of HUVECs induced by CORM-2.
Conclusion CORM-2 could promote endothelial repair, and inhibit neointima formation after carotid artery balloon injury, which might be associated with the function changes of HUVECs regulated by PI3K/Akt/eNOS pathway.     

降血糖药对内皮祖细胞作用的研究进展

内皮祖细胞（EPC）在糖尿病血管并发症中发挥重要作用。大量研究证明，临床部分降血糖药可通过调节EPC功能进而发挥改善糖尿病并发症的作用。其中二甲双胍可通过多效性调节机体氧化应激水平或AMP活化蛋白激酶下游信号通路改善糖尿病患者的EPC功能；吡格列酮可通过调节端粒酶活性延缓EPC衰老；阿卡波糖、西格列汀和胰岛素在临床研究中均显示出提高EPC活性的作用，其机制主要表现为促进EPC增殖、迁移、黏附等。降血糖药的这种降血糖之外的药理作用可能是改善糖尿病并发症的机制之一。本文在分析EPC对糖尿病并发症血管修复影响的基础上，对降血糖药调控EPC数量和功能的研究进展作一综述。     

冠心病患者外周血内皮祖细胞的数量和功能变化

目的:观察冠心病患者外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)数量和功能的改变.方法:选择冠心病患者和非冠心病患者各20例,用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白(fibronectin)包被培养板,培养7d后贴壁细胞进行细胞化学分析.激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPC.采用MTT比色法、改良的Boyden 小室和粘附能力测定实验,观察EPC的增殖能力和迁移能力及粘附能力.结果:冠心病患者外周血EPC数量明显减少(31.8±7.7 vs 59.5±10.6 EPCs/×200视野,P<0.05),且冠心病患者外周血EPC的粘附能力和迁移能力及增殖能力也明显受损.结论:冠心病患者外周血内皮祖细胞数量减少、功能减退.     

miR-130a对2型糖尿病患者外周血EPCs黏附、迁移及IL-18、TGF-β1表达的影响

目的 研究miR-130a对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞(EPCs)黏附、迁移能力及白细胞介素18(IL-18)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。 方法 采集2018年4—8月在温州市中医院就诊的60例2型糖尿病患者外周血,分离培养EPCs,采用荧光染色法鉴定EPCs。将EPCs分成3组:对照组、mimics NC组和miR-130a mimics组,对照组细胞正常培养不做任何处理,mimics NC组细胞转染mimics NC,miR-130a mimics组细胞转染miR-130a mimics。采用qRT-PCR法检测各组细胞中miR-130a表达,观察过表达miR-130a对EPCs黏附和迁移能力的影响,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-18和TGF-β1表达。 结果 培养48 h时,可见细胞贴壁生长,呈圆形,体积较小;培养至第4天,细胞体积增大呈椭圆形;培养至第7天,细胞贴壁形成团簇状,细胞呈类圆形或不规则形,细胞Dil-acLDL、FITC-UEA-I、DAPI染色为阳性,证实为EPCs;对照组和mimics NC组EPCs中miR-130a相对表达量、EPCs黏附和迁移数目及IL-18和TGF-β1表达水平比较差异均无统计学意义(均P>0.05);与对照组和mimics NC组相比,miR-130a mimics组EPCs中miR-130a相对表达量明显升高(均P<0.05),EPCs黏附数目和迁移数目增多(均P<0.05),IL-18和TGF-β1表达水平降低(均P<0.05)。 结论 miR-130a过表达可改善2型糖尿病患者外周血EPCs黏附和迁移功能,抑制IL-18和TGF-β1表达。