水通道蛋白4在缺氧缺糖后水肿星形胶质细胞中的作用

目的 探讨水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)在缺氧缺糖培养后水肿星形胶质细胞中的表达变化与作用.方法 星形胶质细胞分为正常组和缺氧缺糖组,缺氧缺糖组细胞经过5 h缺氧缺糖后恢复正常条件培养至0.5、2、8、24 h和48 h 5个时间点时,用光镜观察细胞形态变化,RT-PCR及免疫荧光法测定AQP4的mRNA及蛋白的表达变化.结果 ①在缺氧缺糖后0.5 h,细胞肿胀逐渐形成并继续加重,2 h肿胀达到高峰,至8 h和24 h时肿胀逐渐消退,48 h细胞基本恢复正常形态.②RT-PCR和免疫荧光检测:在缺氧缺糖后0.5 h,AQP4 mRNA和蛋白的表达均较正常组明显下降(P<0.05),2 h回升,8 h明显超过正常水平,达最高值(P<0.05),24 h有所下降,但仍明显高于正常水平(P<0.05),至48 h时mRNA和蛋白的表达均基本恢复正常水平.结论 缺氧缺糖后星形胶质细胞水肿形成及消退期AQP4的不同表达变化可能都是细胞的一种自身保护机制,从而尽量维持细胞的正常形态和功能.     

丁基苯酞对氧糖剥夺/复氧糖诱导的星形胶质细胞中caspase-3表达的影响

目的探讨丁基苯酞对氧糖剥夺/复氧糖诱导的星形胶质细胞中caspase-3表达的影响。方法将原代培养、鉴定的Sprague-Dawley大鼠星形胶质细胞随机分为对照组、模型组和实验组,各组细胞经高糖达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)培养48 h,细胞贴壁并伸出突触后实验组及模型组更换DMEM无糖培养基进行氧糖剥夺,对照组仍使用DMEM高糖培养基培养,3组细胞放入培养箱中孵育6 h后,实验组更换为含100μmol·L~(-1)丁基苯酞的DMEM高糖培养基,模型组更换为DMEM高糖培养基进行氧糖剥夺/复氧糖,对照组更换新的DMEM高糖培养基,继续培养24 h。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞活力,免疫荧光及免疫印迹法检测星形胶质细胞中caspase-3表达,酶联免疫吸附试验检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)表达。结果 MTT法结果显示,对照组星形胶质细胞活力高于实验组和模型组(P<0.05),实验组星形胶质细胞活力显著高于模型组(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,对照组星形胶质细胞内荧光信号最弱;模型组星形胶质细胞内荧光信号最强;实验组星形胶质细胞内荧光信号强度较模型组降低,但高于对照组(P<0.05)。免疫印迹检测结果显示,模型组星形胶质细胞在氧糖剥夺/复氧糖后caspase-3表达相对最高,实验组次之,对照组最低,各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。氧糖剥夺/复氧糖24 h后,实验组细胞培养液中LDH水平高于对照组(P<0.05),模型组细胞培养液中LDH水平显著高于实验组(P<0.05)。结论丁基苯酞可以改善氧糖剥夺/复氧糖引起的星形胶质细胞损伤。     

氧糖剥夺、复氧后损伤星形胶质细胞中MMP-9的表达变化与意义

目的通过观察金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在氧糖剥夺、复氧培养后损伤星形胶质细胞中基质的表达变化并抑制其活性,探讨其在氧糖剥夺、复氧后细胞损伤中的意义。方法将星形胶质细胞分为正常组、模型组和GM6001组。模型组细胞在无糖DMEM培养基,1%O2的培养条件下行3、5、7 h时长的氧糖剥夺后复氧至24 h。GM6001组细胞在5 h氧糖剥夺、复氧的过程中加入外源性基质金属蛋白酶抑制剂(GM6001,10μmol/ml),复氧至24 h。用RT-PCR测定不同时长氧糖剥夺后星形胶质细胞MMP-9 mRNA表达变化,ELISA法测定细胞培养上清液中MMP-9蛋白的浓度变化;用光学显微镜观察各组的细胞形态变化,LDH漏出率、CCK-8法检测细胞的损伤情况及存活率。结果①RT-PCR及ELISA法检测示:与正常组相比,氧糖剥夺、复氧后,模型组细胞MMP-9 mRNA表达量和细胞培养上清液中MMP-9蛋白的浓度均有所增加(P<0.05),随着氧糖剥夺时间的延长,均呈现不断上升趋势;②与正常组相比,氧糖剥夺、复氧后,模型组细胞明显损伤,随着氧糖剥夺时间的延长,细胞损伤加重,光镜下细胞出现明显肿胀,并有部分细胞呈凝固性坏死,LDH漏出率不断增高(P<0.01)、存活率则逐渐下降(P<0.05,P<0.01),且培养上清MMP-9蛋白浓度与细胞LDH漏出率的增高程度呈正相关(r=0.693,P<0.05);与模型组相比,5 h氧糖剥夺、复氧后,GM6001组细胞形态学损伤表现明显减轻,LDH漏出率水平也有明显下降(P<0.01),细胞存活率则显著上升(P<0.05)。结论 MMP-9过表达可能是氧糖剥夺、复氧后引起细胞损伤的重要因素之一。     

异丙酚对氨处理的大鼠脑皮质星形胶质细胞水肿及水通道蛋白-4表达的影响

目的 探讨异丙酚对氨处理的大鼠脑皮质星形胶质细胞水肿及水通道蛋白-4(AQP4)表达的影响.方法 原代培养SD大鼠脑皮质星形胶质细胞.分别用氯化铵(5 mmol/L)共培养细胞6、12、24、48 h;二甲亚砜及异丙酚(10 μmol/L)预处理细胞30 min后与氯化铵共培养24 h,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测星形胶质细胞AQP4蛋白表达,光学显微镜观察细胞形态,3-4,5-二甲基噻唑-2,5-二酚四唑溴化物(MTT)检测各组细胞活性.结果 氯化铵处理星形胶质细胞12 h后AQP4表达开始上调,一直持续到48 h,其中24 h时AQP4表达上调最为明显,异丙酚预处理组AQP4表达较NH4Cl-24 h组明显降低(P<0.05);光学显微镜观察发现NH4Cl-24 h组细胞较正常组和异丙酚预处理组细胞肿胀明显;MTT检测显示异丙酚预处理组细胞活性较NH4Cl-24 h组和二甲亚砜组明显增高(P<0.05).结论 异丙酚预处理能抑制氯化铵引起的大鼠脑皮质星形胶质细胞AQP4表达的上调,减轻细胞肿胀程度,提高星形胶质细胞活性.     

JNK信号传导通路在星形胶质细胞缺氧/复氧后损伤的作用

目的 建立SD大鼠星形胶质细胞（astrocyte,AC）缺氧/复氧损伤模型,探讨JNK信号转导通路与星形胶质细胞损伤的关系.方法 体外培养新生SD大鼠星形胶质细胞,传至第3代,细胞自然纯化,实验设正常对照组（N）、SP600125组（SP组,10 μmol /L）、缺氧/复氧组（H/R组）和缺氧/复氧＋SP600125组（H/R＋SP组）.分别利用MTT法、AnnexinV/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染法、WB法检测缺氧8 h,复氧4、6、12、24 h时细胞存活率、凋亡率、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK（p-JNK）的变化.结果 ①缺氧/复氧后细胞活力出现明显下降,SP600125阻断JNK通路后细胞活力高于H/R组;②缺氧/复氧后细胞凋亡率增加,SP600125阻断JNK通路后能够减轻细胞凋亡.③各组AC的JNK水平无显著变化,缺氧/复氧干预后p-JNK表达上调,用SP600125阻断JNK通路后,H/R＋SP组较H/R组p-JNK水平降低.结论 JNK信号通路参与了星形胶质细胞缺氧/复氧损伤过程.     

高迁移率族蛋白B1通过调节Bcl-2和Bax蛋白表达促进氧糖剥夺/复氧星形胶质细胞的凋亡

目的：研究高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）在氧糖剥夺/复氧后对星形胶质细胞凋亡的影响,同时通过检测凋亡相关蛋白Bcl 2和Bax表达变化探讨其可能的作用机制。方法：将体外培养新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞分为正常组、模型组、干扰组、对照组,用携带大鼠HMGB1的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）慢病毒载体干扰星形胶质细胞抑制HMGB1表达后进行氧糖剥夺/复氧处理,氧糖剥夺6 h、复氧24 h后检测。通过Western blotting法检测RNA干扰效果,通过MTT细胞存活实验检测细胞损伤,通过TUNEL法检测细胞凋亡,最后通过Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达。结果：与正常组比较,模型组经过氧糖剥夺/复氧处理后星形胶质细胞内HMGB1表达明显升高（P<0.001）, MTT实验检测细胞存活率下降（P<0.001）,TUNEL法检测凋亡细胞数增多（P<0.001）, 凋亡相关蛋白Bcl 2/Bax蛋白比值下降（P<0.001）;与模型组比较,RNA干扰有效抑制HMGB1蛋白表达（P<0.001）, MTT实验检测细胞存活率升高（P<0.001）,TUNEL法标记凋亡细胞数减少（P<0.001）, 凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax蛋白比值升高（P<0.001）。结论：氧糖剥夺/复氧后HMGB1的释放可以导致星形胶质细胞损伤及细胞凋亡,其作用机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达有关。     

P38信号通路在星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧后水通道蛋白4表达及细胞水肿形成中的作用

摘要：目的探讨P38信号通路在星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧后水通道蛋白4表达及细胞水肿形成中发挥的作用。方法原代
培养的星形胶质细胞分为正常组,模型组和P38抑制剂组。模型组：细胞接受5 h氧糖剥夺/复氧处理;P38抑制剂组：细胞在5 h
氧糖剥夺后的复氧过程中加入P38 抑制剂（SB203580,10 μmol/L）处理。在5 h 氧糖剥夺/复氧后的不同时间点,用RT-PCR及
Western blotting法测定P38、磷酸化P38及水通道蛋白4（AQP4）的表达变化,光镜观察细胞形态变化,乳酸脱氢酶测定反应细胞
损伤程度。结果与正常组相比,星形胶质细胞在5 h氧糖剥夺/复氧后,其磷酸化P38的水平明显上升,并在复氧1h时达到峰值
（P<0.01）,AQP4 mRNA和蛋白的表达也明显升高（P<0.01）,同时细胞水肿在氧糖剥夺/复氧后2 h时达到高峰,LDH漏出率也
明显升高（P<0.01）。与模型组相比,加入P38抑制剂可明显降低5 h氧糖剥夺/复氧后P38磷酸化的水平（P<0.01）,以及复氧后
各时间点AQP4增高的水平（P<0.01）,并可明显缓解氧糖剥夺/复氧后细胞水肿及LDH上升的程度（P<0.01）。结论P38信号通
路的激活参与了星形胶质细胞5 h氧糖剥夺/复氧后AQP4上调及细胞水肿形成,抑制p38的激活可降低AQP4表达的上调,减轻
细胞水肿。
     

MAPKs信号通路干预对体外培养大鼠星形胶质细胞划痕损伤后水通道蛋白4表达的影响

目的研究体外培养大鼠星形胶质细胞划痕损伤后水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)表达变化,并观察丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路特异性抑制剂对此变化的影响。方法利用传代培养10d左右的大鼠星形胶质细胞制作划痕损伤模型,部分实验于划痕损伤前1h分别加入ERK抑制剂U0126,p38MAPK抑制剂SB203580及JNK抑制剂SP600125。观察细胞形态变化、GFAP免疫细胞化学染色变化,并用实时荧光定量PCR法检测AQP4mRNA表达变化。结果划痕损伤后12h,细胞形态由扁平形变为不规则形,部分细胞突起向划痕区伸出,划痕区出现GFAP免疫化学染色阳性细胞,AQP4mRNA表达水平明显降低(P<0.05),而U0126,SB203580和SP600125预处理均能阻止此种变化(P<0.05)。结论划痕损伤引起培养星形胶质细胞AQP4mRNA表达下调,MAPKs抑制剂可对抗此作用,提示MAPKs信号通路参与星形胶质细胞损伤后AQP4表达变化的调节。     

低浓度凝血酶预处理对星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的影响

目的:研究低浓度凝血酶(TB)预处理对培养的鼠脑星形胶质细胞(As)在氧糖剥夺(OGD)诱导损伤后的影响.方法:原代培养的大鼠大脑皮层AS,预先用不同低浓度(0.005～5.000 kU/L)的TB处理(TB预处理,TPC),观察在缺糖和缺氧(氧糖剥夺)培养状态下细胞的功能状态和损伤情况.以四甲基偶氮唑盐(MTT)还原试验检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标,流式细胞术检测细胞凋亡发生率,[3H]-谷氨酸摄取法测定As对谷氨酸(Glu)摄取能力的变化.结果:OGD引起细胞活力下降,LDH漏出率增高,OGD诱发细胞凋亡,降低As对Glu的摄取,上述指标与正常对照组相比均具有统计学意义(P＜0.01);而经低浓度TB预处理后,OGD损伤造成的LDH漏出率较低,细胞凋亡发生率降低,同时MTT值提高,As对Glu的摄取也增高,与OGD组比较有统计学意义(P＜0.05),其中最佳TB效应剂量为0.10 kU/L.结论:低浓度TB预处理的As,可增强在OGD环境下的损伤耐受能力,具有细胞保护作用.     

水通道蛋白1、4在培养大鼠星形胶质细胞、BT325细胞及人脑胶质瘤组织中的表达

目的 水通道蛋白作为细胞膜特异性水转运蛋白在脑内分布广泛,参与脑内水平衡调节,与脑肿瘤、脑创伤等多种疾病导致的脑水肿有关.本实验主要研究水通道蛋白1、4在培养大鼠星形胶质细胞、人多形性胶质母细胞瘤系BT325细胞及人脑胶质瘤组织中的表达情况.方法 应用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色鉴定培养大鼠星形胶质细胞及BT325细胞.应用反转录PCR法检测GFAP、AQP1及AQP4在不同组织细胞中的表达.结果 实验中培养大鼠星形胶质细胞及BT325细胞GFAP免疫细胞化学染色阳性.体外培养大鼠星形胶质细胞、人胶质母细胞瘤组织及对照组标本均有GFAP表达,同时也有AQP1及AQP4表达.BT325细胞只有GFAP表达,无AQP1及AQP4表达.结论 AQP1、4在培养大鼠星形胶质细胞及胶质瘤组织中均有表达,可能对脑功能的维持及肿瘤性脑水肿的发生、消散有重要影响.     

Ammonia induces upregulation of aquaporin-4 in neocortical astrocytes of rats through the p38 mitogen-activated protein kinase pathway

Background Astrocyte swelling is an important consequence of hepatic encephalopathy, and aquaporin-4 has been reported to play a vital role in this swelling. Ammonia causes astrocyte swelling and is also known to modulate aquaporin-4 expression in the astrocyte foot processes. The purpose of this study was to explore the mechanism of ammonia-induced aquaporin-4 expression, which has been suggested to involve the p38 mitogen-activated protein kinase pathway. Methods We exposed cultured astrocytes to ammonium chloride, an in vitro model of hepatic encephalopathy. The purity of cultured astrocytes was evaluated by fluorescent glial fibrillary acidic protein labeling; cell morphology was assessed by light microscopy; the expression of aquaporin-4, phospho-p38, and p38 were detected by Western blotting analysis. Statistical analysis was performed by one-way factorial analysis of variance, and the relationship between variables was calculated by linear regression using SPSS version 13.0 program for Windows （SPSS, Chicago, IL, USA）. Results The purity of cultured astrocytes was （96.6±1.4）%. Astrocytes swelled significantly when exposed to 5 mmol/L ammonium chloride for 24 hours as compared to non-exposed astrocytes. Co-treatment with 10 μmol/L SB203580 （an inhibitor of p38） attenuated the degree of ammonium chloride induced astrocyte swelling. Western blotting analysis revealed that the expression levels of phospho-p38 and aquaporin-4 in ammonium chloride treated cells were significantly increased relative to the control group （P 〈0.001）; SB203580 co-treatment inhibited the increased expression of phospho-p38 and aquaporin-4 relative to the ammonium chloride treated group （P=0.002 and P=0.015 respectively）. The phosphorylation of p38 and upregulation of aquaporin-4 were highly correlated （r=0.909）. There were no significant differences in total p38 expression among the groups （P=0.341）. Conclusions Ammonium chloride induced upregulation of aquaporin-4 in astrocytes is regulated by the p38 mitogen-activated protein kinase pathway. Inhibiting p38 activation prevented ammonium chloride induced aquaporin-4 protein upregulation.     

TRPM8通过cAMP-PKA/UCP4信号调控氧糖剥夺/复糖复氧诱导的神经元凋亡

目的探究TRPM8在氧糖剥夺/复糖复氧诱导神经元PC12细胞凋亡中的分子机制。方法体外建立氧糖剥夺/复糖复氧模 型模拟脊髓缺血再灌注损伤,流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡,RT-PCR和western blot检测TRPM8、UCP4和cAMP、p-PKA、 Bax、Bcl-2 的表达变化;向PC12 细胞分别加入AMTB（TRPM8 阻断剂）和转染UCP4 质粒,western blot 检测cAMP、p-PKA、 UCP4、Bax、Bcl-2的表达水平;抑制PKA信号,检测UCP4、Bax、Bcl-2的蛋白表达水平。结果氧糖剥夺/复糖复氧导致脊髓神经 元PC12 细胞发生凋亡,TRPM8 过表达,UCP4 表达下降,抑制cAMP-PKA 信号。抑制TRPM8 表达,则细胞凋亡减少, cAMP-PKA信号被激活,且UCP4的表达有所恢复。抑制TRPM8和cAMP-PKA信号,UCP4的表达减少,细胞凋亡增加。结论 在氧糖剥夺/复糖复氧模型中,PC12细胞TRPM8过表达,且通过cAMP-PKA/UCP4诱导神经元PC12细胞凋亡。     

多核糖核苷酸核苷转移酶1在氧糖剥夺诱导心肌细胞凋亡损伤中的作用

目的 探讨多核糖核苷酸核苷转移酶1 (PNPT1)对氧糖剥夺（OGD）诱导心房肌细胞凋亡的影响和作用机制。方法 体外培养HL-1心房肌细胞,PNPT1-siRNA转染HL-1细胞。实验分组为：正常组（Control）、OGD组、NC-siRNA组（转染乱码RNA）、PNPT1- siRNA组、OGD+NC-siRNA组和OGD+PNPT1- siRNA组。通过CCK-8检测细胞存活率,qPCR检测ACTB mRNA和TUBA mRNA的含量,Western blot检测PNPT1蛋白水平,流式细胞术检测HL-1细胞凋亡率,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,透射电镜观察线粒体形态。结果 随OGD诱导时间延长,HL-1细胞质中PNPT1的蛋白表达水平呈上升趋势（P<0.05）。与NCsiRNA相比,PNPT1-siRNA明显减少细胞内PNPT1表达。OGD条件下,ACTB mRNA和TUBA mRNA降解增加（P<0.05）,HL-1心房肌细胞凋亡率增加（P<0.05）;相反地,PNPT1-siRNA则抑制ACTB mRNA和TUBA mRNA降解（P<0.05）,同时降低HL-1心房肌细胞凋亡率（P<0.05）,并且改善线粒体膜电位以及线粒体形态。结论 抑制PNPT1可改善线粒体损伤并减少凋亡相关mRNA的降解,从而减轻OGD诱导的HL-1心房肌细胞凋亡损伤。     

大鼠脑缺血再灌注后水孔蛋白4表达的研究

目的:探讨水孔蛋白4(AQP-4)在脑缺血再灌注后的表达及意义.方法:采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,分别于缺血再灌注后12,24,48,72,120,168 h的6个时相点用免疫组化方法观察大鼠模型缺血区AQP-4的表达,并与假手术组和正常组比较.结果:正常组和假手术组不同时相点均无AQP-4的表达;缺血再灌注组12 h在缺血周边区神经胶质细胞上有较弱表达,24h表达增强,48～120 h达到高峰,168 h后AQP-4持续表达.结论:脑缺血再灌注时缺血区域有AQP-4表达,AQP-4表达可能是脑缺血再灌注损伤的机制之一.     

水通道蛋白-4在大鼠创伤性脑水肿中的表达及其意义

目的探讨水通道蛋白-4(AQP4)在大鼠创伤性脑水肿形成过程中的表达变化及其意义。方法选择健康成年Wistar大鼠随机分为实验组(n=60)和对照组(n=15),实验组采用改进的Feeney氏法,造成大鼠右侧大脑半球局部脑损伤;对照组仅切开头皮,不造成大鼠脑损伤。分别进行脑组织形态学观察、脑含水量检测、免疫组织化学方法检测各组AQP4的表达水平。结果实验组72h病灶区域脑组织含水量百分率[(80.18±0.55)%较对照组(78.10±0.52)%]高(P<0.05)。实验组1、3h AQP4平均吸光度值(0.210 0±0.029 4、0.186 0±0.016 5)较对照组(0.143 3±0.053 8)高(P<0.05)。结论在脑创伤早期,AQP4强烈表达,可能与脑创伤后的应激反应有关。在脑创伤后期,由于AQP4表达呈下调趋势,其活性降低,出现混合性脑水肿。     

体外培养大鼠海马神经元糖氧剥夺/复氧轴突损伤模型的建立

目的 建立体外培养大鼠海马神经元糖氧剥夺/复氧轴突损伤模型.方法 取体外培养7 d的海马神经元,分为正常对照组和糖氧剥夺/复氧组.后者分别在糖氧剥夺0.5、1.0、1.5 h再复糖复氧.常氧状态下检测各组复氧后1、5、24、48、72 h培养液中的LDH活性,并观察神经元形态和轴突长度的变化.结果 糖氧剥夺/复氧后的神经元折光性降低,胞体肿胀,并且轴突逐渐变短,同时LDH水平随时间延长增加.其中糖氧剥夺0.5 h再复氧组效果最佳,其轴突缩短明显且神经元存活率较高.结论 成功建立了体外培养SD大鼠海马神经元糖氧剥夺/复氧轴突损伤模型.     

黄芩苷对氧糖剥夺再复氧损伤大鼠海马神经干细胞的保护作用

目的：探讨黄芩苷对氧糖剥夺再复氧(OGD/R)损伤大鼠海马神经干细胞(NSCs)的保护作用。方法：体外悬浮培养新生大鼠海马NSCs,将培养的海马NSCs分为对照组、OGD/R组、黄芩苷组。OGD/R组用无糖Earle’s液于缺氧后正常培养,黄芩苷组在OGD/R基础上加用黄芩苷培养。四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定NSCs细胞的存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,4",6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色检测NSCs细胞的凋亡,巢蛋白(Nestin)/5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)染色检测NSCs细胞的增殖。结果：悬浮培养细胞呈Nestin阳性表达；与对照组相比,OGD/R组细胞的OD值、存活率、Nestin/BrdU阳性表达显著降低,LDH漏出率显著增加(P＜0.01),DAPI核染提示OGD可诱导细胞凋亡。与OGD/R组相比,黄芩苷组细胞的OD值、存活率、Nestin/BrdU阳性表达的面密度及细胞数明显增多,LDH漏出率明显减少(P＜0.01),DAPI核染显示黄芩苷可减轻OGD/R所引起的细胞凋亡。结论：黄芩苷能减轻OGD/R对大鼠海马NSCs的损伤,并促进其增殖。     

Proliferation and differentiation of neural stem cells co-cultured with cerebral microvascular endothelial cells after oxygen-glucose deprivation

Various stem cells, including neural stem cells (NSCs), have been extensively studied in stroke models, but how to increase neuronal differentiation rate of NSCs remains unresolved, particu- larly in a damaged environment. The purpose of this study was to investigate the effects of cerebral mi- crovascular endothelial cells (CMECs) on the neurogenesis of NSCs with or without oxygen-glucose deprivation (OGD). The NSCs acquired from primary culture were immunostained to prove cell purity. Survival and proliferation of NSCs were determined after the co-culture with CMECs for 7 days. After removing the CMECs, NSCs were randomly divided into two groups as follows:OGD and non-OGD groups. Both groups were maintained in differentiation culture for 4 days to evaluate the differentiation rate. Mouse embryo fibroblast (MEF) cells co-cultured with NSCs served as control group. NSCs co-cultured with CMECs had an increase in size (on the 7th day:89.80±26.12μm vs. 73.08±15.01 μm, P<0.001) (n=12) and number [on the 7th day:6.33±5.61/high power objective (HP) vs. 2.23±1.61/HP, P<0.001] (n=12) as compared with those co-cultured with MEF cells. After further differentiation culture for 4 days, NSCs co-cultured with CMECs had an increase in neuronal differentiation rate in OGD and non-OGD groups, but not in the control group (15.16% and 16.07% vs. 8.81%; both P<0.001) (n=6). This study provided evidence that OGD could not alter the effects of CMECs in promoting the neuronal differentiation potential of NSCs. These findings may have important implications for the development of new cell therapies for cerebral vascular diseases.